Frequently Asked Questions. Corning Matrigel Matrix 康 宁 Matrigel matrix 的 组 成 康 宁 Matrigel matrix 是 从 富 含 胞 外 基 质 蛋 白 的 EHS 小 鼠 肿 瘤 中 提 取 的 基 底 膜 基 质, 其 中 含 有 约 60% 层 粘 连 蛋 白 30% IV 胶 原 和 8% 的 巢 蛋 白 康 宁 Matrigel matrix 还 含 有 基 底 膜 聚 糖 TGF-ß 表 皮 生 长 因 子 类 胰 岛 素 生 长 因 子 组 织 纤 溶 酶 原 及 其 他 生 长 因 子 融 化 康 宁 Matrigel matrix 需 要 多 长 时 间? 产 品 需 要 放 置 于 冰 上, 并 在 2ºC-6ºC 的 冰 箱 中 或 者 冷 室 中 过 夜 融 化, 蛋 白 浓 度 高 时 可 能 需 要 更 多 时 间 使 用 康 宁 Matrigel matrix 时 需 要 预 冷 移 液 管 和 管 子 吗? 是 的 因 为 康 宁 Matrigel matrix 在 10ºC 以 上 时 会 成 胶, 操 作 康 宁 Matrigel matrix 时, 我 们 建 议 使 用 预 冷 的 移 液 管 吸 头 和 管 子 康 宁 高 浓 度 Matrigel matrix 用 于 哪 些 实 验? 康 宁 高 浓 度 的 Matrigel matrix matrix 可 适 用 于 体 内 应 用 研 究, 如 高 浓 度 蛋 白 可 促 进 肿 瘤 生 长 高 蛋 白 浓 度 同 时 可 使 康 宁 Matrigel matrix 注 射 入 小 鼠 皮 下 后 保 持 完 整, 有 利 于 注 射 的 肿 瘤 细 胞 和 / 或 血 管 生 成 因 子 保 持 原 位, 便 于 用 于 原 位 分 析 和 / 或 以 后 的 切 除 如 何 将 康 宁 Matrigel matrix 用 于 3D 培 养? 怎 样 制 作 3D 胶? 需 要 将 细 胞 嵌 入 到 康 宁 Matrigel matrix 中 吗? 康 宁 高 浓 度 的 Matrigel matrix 可 适 用 于 体 内 应 用 研 究, 如 制 备 厚 层 包 被 用 于 3D 细 胞 培 养 细 胞 可 以 嵌 在 康 宁 Matrigel matrix 中 或 者 接 种 在 康 宁 Matrigel matrix 表 面 ( 覆 盖 法 ) 使 用 Corning Matrigel matrix 时, 需 要 将 移 液 器 吸 头 和 离 心 管 预 冷 吗? 是 的 因 为 Corning Matrigel matrix 在 高 于 10 的 条 件 下 即 会 开 始 成 胶, 我 们 推 荐 操 作 Matrigel matrix 时 使 用 预 冷 的 移 液 管 吸 头 和 离 心 管 Corning Matrigel matrix 会 快 速 聚 合 吗?
Corning Matrigel matrix 在 22 至 35 时 会 快 速 聚 合 成 胶 什 么 情 况 下, 需 要 使 用 无 酚 红 Corning Matrigel matrix? 对 于 涉 及 颜 色 检 测 的 实 验, 推 荐 使 用 无 酚 红 Corning Matrigel matrix, 如 使 用 荧 光 染 料 或 Drabkins 法 计 数 内 皮 细 胞 成 管 实 验 对 于 子 宫 内 膜 细 胞 培 养, 也 需 使 用 无 酚 红 Corning Matrigel matrix 此 外, 酚 红 和 非 甾 体 雌 激 素 结 构 类 似, 有 类 雌 激 素 效 应 在 实 验 动 物 体 内 可 能 具 有 干 扰 内 分 泌 和 荷 尔 蒙 代 谢 的 能 力 如 何 从 Corning Matrigel matrix 中 收 获 细 胞? 推 荐 使 用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 来 收 获 培 养 在 Matrigel matrix 中 的 细 胞 Corning Dispase 相 比 胰 酶 胶 原 酶 或 其 他 蛋 白 水 解 酶 能 够 更 温 和 有 效 地 获 得 单 细 胞 悬 液, 不 会 损 伤 细 胞 或 细 胞 表 面 蛋 白 对 于 需 要 继 续 接 种 培 养 或 进 行 检 测 的 细 胞, 使 用 Corning Dispase 不 会 产 生 损 伤 此 外,Corning Dispase 也 可 以 用 于 组 织 分 离 对 于 代 谢 研 究 和 RNA 抽 提, 建 议 在 4 使 用 Corning Cell Recovery Solution 进 行 非 酶 反 应 的 细 胞 收 获 因 为 Corning Matrigel matrix 中 含 有 痕 量 的 RNA, 进 行 RNA 分 析 时, 应 设 一 个 Corning Matrigel matrix( 不 接 种 细 胞 ) 的 对 照 组 其 它 从 Corning Matrigel matrix 中 收 获 细 胞 的 方 法 : 降 低 温 度 至 4-6 使 Matrigel matrix 解 聚, 需 要 一 定 的 时 间 并 且 仅 适 合 一 部 分 应 用 离 心 以 破 坏 Corning Matrigel matrix 结 构 1. Corning Matrigel matrix 包 被 过 的 培 养 皿 可 以 储 存 多 长 时 间 呢? 包 被 过 的 培 养 皿 最 好 当 天 使 用, 具 体 情 况 取 决 于 实 验 目 的 需 要 保 存 的 情 况 下, 可 在 37 C 培 养 箱 中 最 多 存 放 7 天 保 存 时 Matrigel 表 面 需 要 使 用 无 血 清 培 养 基 均 匀 覆 盖, 保 持 湿 润 2. 如 何 确 定 Corning Matrigel matrix 的 包 被 用 量? 单 位 培 养 面 积 Corning Matrigel matrix 用 量 (ul/cm 2 ) 薄 胶 (Thin Gel) 厚 胶 (Thick Gel) 50 150-200 培 养 器 皿 细 胞 有 效 培 养 面 积 (cm 2 ) * 6 孔 板 9.6
24 孔 板 2.0 96 孔 板 0.32 35mm 10mm 培 养 皿 11.78 100mm 20mm 培 养 皿 58.95 * 其 他 常 用 培 养 器 皿 的 有 效 培 养 面 积 可 查 看 www.corning.com/lifesciences 3. 哪 些 情 况 下 应 该 选 用 薄 胶? 什 么 时 候 用 厚 胶 呢? 3D 培 养 有 哪 些 应 用? 薄 胶 主 要 用 于 辅 助 细 胞 贴 壁, 有 利 于 细 胞 增 殖 如 原 代 细 胞 培 养, 需 要 一 层 薄 薄 的 蛋 白 层 辅 助, 就 可 以 选 用 薄 胶 ; 厚 胶 主 要 用 于 3D 细 胞 培 养, 如 大 鼠 主 动 脉 组 织 分 化 为 毛 细 血 管 样 结 构 (Ring Assay), 以 及 进 行 细 胞 侵 袭 实 验 等 ;3D 细 胞 培 养 实 验, 主 要 是 用 于 研 究 细 胞 与 细 胞 间 的 相 互 作 用 以 及 复 杂 结 构, 如 生 物 组 织 等 详 细 信 息 请 参 阅 Corning Matrigel matrix 使 用 指 导 手 册 4. 进 行 内 皮 管 形 成 实 验, 应 该 选 用 多 大 浓 度 的 Matrigel 呢? 进 行 该 实 验,Matrigel 最 低 浓 度 应 不 低 于 10mg/mL 5. 所 有 的 Corning Matrigel matrix 都 可 以 用 于 人 胚 胎 干 细 胞 (hesc) 培 养 吗? 不 是 的 Corning 提 供 专 门 用 于 人 胚 胎 干 细 胞 (hesc) 培 养 的 Corning Matrigel matrix ( 货 号 为 354277) 该 产 品 生 产 过 程 中 经 过 严 格 的 质 量 监 控, 可 以 保 证 hesc 培 养 的 一 致 性 可 重 复 性 和 高 度 可 靠 性 在 干 细 胞 培 养 领 域 知 名 的 STEMCELL Technologies 公 司, 也 正 是 选 用 此 产 品 包 被 的 培 养 板, 用 于 生 产 其 mtesr 1 产 品 hesc 在 mtesr1 培 养 体 系 中 可 以 维 持 未 分 化 状 态, 保 持 标 准 形 态 并 正 常 表 达 表 面 标 志 物 此 外,Corning BioCoat Matrigel matrix 提 供 预 包 被 产 品, 如 预 包 被 的 6 孔 板 ( 货 号 354671) 该 系 列 产 品 不 同 批 次 间 的 Matrigel 包 被 浓 度 一 致, 方 便 用 户 使 用 ; 用 于 hesc 培 养, 可 以 维 持 干 细 胞 应 有 的 自 我 更 新 能 力 和 多 能 性 如 果 使 用 非 专 门 用 于 hesc 培 养 的 Corning Matrigel matrix 培 养 hesc, 细 胞 培 养 效 果 可 能 不 理 想, 不 推 荐 用 户 使 用 6. 做 细 胞 侵 袭 实 验, 需 要 使 用 多 少 Corning Matrigel matrix 进 行 包 被? 包 被 24 孔 通 透 性 支 持 物, 推 荐 每 孔 使 用 0.1 ml ( 浓 度 200-300 μg/ml),corning Matrigel matrix 货 号 为 354234, 354230 7. Corning Matrigel matrix 的 最 低 成 胶 浓 度 是 多 少? 不 同 的 实 验 目 的 需 要 不 同 的 Matrigel 浓 度, 用 户 应 该 根 据 具 体 的 实 验 需 求 确 定 Corning Matrigel matrix 最 低 成 胶 浓 度 为 3 mg/ml 稀 释 时 不 要 简 单 进 行 体 积 倍 比 稀 释, 不 同 批 次 间 的 Matrigel 浓 度 有 差 异, 应 该 根 据 最 终 工 作 浓 度 (mg/ml) 算 出 需 要 加 入 的 稀 释 液 体 ( 如 PBS 或 无 血 清 培 养 基 ) 的 量 用 于 体 内 研 究 的 Matrigel, 为 了 避 免 成 胶 不 完 全, 最 终 工 作 浓 度 不 应 低 于 4 mg/ml
8. Corning Matrigel matrix 胶 块 在 体 内 可 以 维 持 多 长 时 间? 基 质 胶 胶 块 可 以 在 体 内 维 持 至 少 一 周 的 时 间 9. 怎 样 稀 释 Corning Matrigel matrix? 使 用 冰 上 预 冷 的 无 血 清 培 养 基 或 者 PH 7.4 的 PBS 10. 应 该 如 何 对 Corning Matrigel matrix 移 液 操 作? 推 荐 使 用 预 冷 的 移 液 器 或 者 注 射 器 操 作, 移 液 管 枪 头 同 样 需 要 预 冷 吸 液 时 不 要 触 及 瓶 子 底 部 ; 分 液 时 切 忌 过 快 用 力 过 猛 如 果 使 用 移 液 管 (Pipets), 需 要 分 液 5mL 时, 应 该 吸 取 6mL, 分 液 到 移 液 管 内 仍 有 1mL 时 即 停 止 ; 如 果 使 用 自 动 移 液 器 (Pipetman), 按 压 到 第 二 档 位 吸 液, 然 后 按 压 到 第 一 档 位 进 行 分 液 11. 为 什 么 我 的 Corning Matrigel matrix 很 粘 稠? 基 质 胶 的 蛋 白 浓 度 越 高, 胶 体 越 粘 稠 如 果 浓 度 高 于 13.0 mg/ml, 基 质 胶 会 显 得 非 常 厚 重 Corning Matrigel matrix 基 质 胶 产 品 在 未 稀 释 前 都 会 比 较 粘 稠 粘 稠 的 高 浓 度 Corning Matrigel matrix(corning Matrigel matrix HC) 不 稀 释 也 可 以 直 接 使 用, 如 用 于 培 养 肿 瘤 细 胞 和 / 或 血 管 生 成 因 子, 注 射 于 小 鼠 体 内 后, 细 胞 可 以 保 持 原 位, 便 于 原 位 分 析 和 / 或 以 后 的 切 除 ; 或 者 稀 释 后, 按 照 标 准 浓 度 的 Corning Matrigel matrix 产 品 使 用 方 法 使 用, 具 体 稀 释 浓 度 根 据 实 验 需 求 确 定 除 因 为 产 品 本 身 浓 度 高 而 粘 稠 外, 基 质 胶 的 状 态 还 与 运 输 过 程 中 温 度 的 变 化 和 储 藏 条 件 有 关 整 个 运 输 过 程 中 必 须 使 用 干 冰 冷 藏 如 果 储 藏 Corning Matrigel matrix 的 冰 箱 带 有 自 动 除 霜 功 能, 冰 箱 除 霜 过 程 中 升 温, 可 能 使 基 质 胶 成 胶 所 以, 切 忌 将 Corning Matrigel matrix 储 藏 于 此 类 冰 箱 中 为 保 证 Corning Matrigel matrix 的 使 用 效 果, 冻 融 次 数 应 该 尽 可 能 减 少 拿 到 新 的 Corning Matrigel matrix 后, 请 按 照 单 次 用 量 进 行 分 装 每 次 融 化 操 作,Matrigel 基 质 胶 都 应 该 放 置 于 冰 上 如 果 Matrigel 基 质 胶 在 成 胶 状 态 被 冻 住, 再 次 融 化 时 将 不 能 成 恢 复 液 体 12. Corning Matrigel matrix 可 以 诱 导 ES/iPS 细 胞 分 化 吗? 可 以 的, 已 经 有 相 关 文 章 表 明 Corning Matrigel matrix 可 以 用 于 ES/iPS 细 胞 的 分 化 研 究 13. 为 什 么 Corning Matrigel matrix 在 37 C 成 胶, 而 在 4 C 时 却 呈 液 体 状 态? Corning Matrigel matrix 是 一 种 从 小 鼠 骨 肉 瘤 中 提 取 的 重 组 基 底 膜, 新 鲜 提 取 的 原 料 中 主 要 包 括 以 下 成 分 : 层 粘 连 蛋 白,IV 型 胶 原, 巢 蛋 白, 基 底 膜 聚 糖 表 皮 生 长 因 子 类 胰 岛 素 生 长 因 子 及 其 他 生 长 因 子 这 些 蛋 白 构 成 了 Matrigel 的 基 本 结 构 在 22-37 温 度 条 件 下, 大 分 子 间 的 共 价 键 可 以 结 合, 促 使 Matrigel 形 成 凝 胶 而 在 低 温 条 件 ( 如 4 ) 下, 由 于 没 有 足 够 的 能 量 促 使 共 价 键 结 合, 所 以 Matrigel 呈 现 液 体 状 态 14. Corning Matrigel matrix 可 以 反 复 冻 融 吗?
建 议 用 户 第 一 次 融 化 后 按 照 单 次 用 量 进 行 分 装, 保 存 15. 为 什 么 细 胞 没 有 贴 壁?Matrigel 也 脱 落 了? 康 宁 生 命 科 学 ( 吴 江 ) 有 限 公 司 首 先 需 要 检 查 细 胞 的 接 种 浓 度 是 否 过 高,Corning Matrigel 的 用 量 应 等 同 于 细 胞 培 养 体 系 中 培 养 基 的 用 量 如 果 Corning Matrigel matrix 被 稀 释 到 过 低 的 浓 度, 形 成 的 胶 体 容 易 从 组 织 培 养 器 皿 表 面 分 离 16. 未 稀 释 的 Corning Matrigel matrix 中 出 现 的 沉 淀 应 该 怎 么 样 处 理? 4 C 下 低 速 离 心, 去 除 沉 淀 物 17. 未 使 用 完 的 Corning Matrigel matrix 应 该 怎 样 保 存 的? 与 细 胞 培 养 基 或 缓 冲 液 混 合 过 但 未 使 用 完 的 Corning Matrigel matrix, 不 建 议 保 留 再 用 18. Corning Matrigel matrix 中 含 有 DNA 和 / 或 RNA 吗? 是 的 Corning Matrigel matrix 没 有 经 过 DNA 酶 或 RNA 酶 消 化 处 理, 可 能 会 含 有 痕 量 的 DNA RNA 19. Corning Matrigel matrix 中 有 血 管 内 皮 生 长 因 子 (VEGF) 和 金 属 蛋 白 酶 (MMPs) 吗? 在 标 准 浓 度 的 Corning Matrigel matrix 中 含 有 5.0-7.5 ng/ml 的 血 管 内 皮 生 长 因 子 ( VEGF),GFR Corning Matrigel matrix 中 VEGF 含 量 为 1.0-1.5 ng/ml 另 外, 可 能 含 有 老 鼠 肿 瘤 细 胞 来 源 的 痕 量 金 属 蛋 白 酶 (MMPs) 20. Corning Matrigel matrix 中 有 LDEV 吗? 没 有 的 Corning Matrigel matrix 经 免 疫 方 法 及 PCR 方 法 检 测, 并 不 含 有 乳 酸 脱 氢 酶 增 高 病 毒 (LDEV) 或 者 乳 酸 脫 氫 脢 增 生 病 毒 (LDHV) 此 外, 我 们 还 针 对 小 鼠 群 体 及 肿 瘤 来 源 筛 查 了 其 他 种 类 的 病 毒 详 细 信 息 请 参 见 产 品 说 明 书 21. Corning Matrigel matrix 中 有 尿 素 吗? 没 有 的 在 Corning Matrigel matrix 生 产 准 备 过 程 中 使 用 过 尿 素, 后 续 流 程 中 经 过 透 析 方 法 已 经 去 除 了 22. Corning Matrigel matrix 中 使 用 的 什 么 缓 冲 液? 低 葡 聚 糖 DMEM (1g/L), 其 中 包 含 50 µg/ml 庆 大 霉 素 23. Corning Matrigel matrix 中 含 有 纤 维 连 接 蛋 白 (Fibronectin) 吗? 是 的, 通 过 使 用 Western Blot 检 验, 我 们 在 Matrigel matrix 中 发 现 了 微 量 的 纤 维 连 接 蛋 白 (Fibronectin) 24. Corning Matrigel matrix 中 含 有 玻 璃 体 结 合 蛋 白 ( vitronectin) 吗?
某 些 EHS 组 织 中 可 能 含 有 微 量 的 血 液, 因 此 Corning Matrigel matrix 中 可 能 会 有 痕 量 的 玻 璃 体 结 合 蛋 白 (Vitronectin) 25. Corning Matrigel matrix 中 还 有 什 么 别 的 物 质? Corning Matrigel matrix 中 还 可 能 含 有 浓 度 小 于 0.02% 的 三 氯 甲 烷, 以 及 肿 瘤 细 胞 的 产 生 的 其 他 未 知 蛋 白 或 分 子 26. 提 取 过 程 会 引 起 层 粘 连 蛋 白 变 性 吗? 不 会 的, 不 会 引 起 层 粘 连 蛋 白 变 性 27. Corning Matrigel matrix 可 以 储 存 在 -70 吗? 是 的 Matrigel matrix 可 以 储 存 在 -70 建 议 客 户 将 整 瓶 的 Matrigel matrix 进 行 分 装, 储 存 于 聚 丙 烯 或 其 他 可 以 耐 受 超 低 温 条 件 材 质 的 小 管 中, 方 便 保 存 和 使 用 28. Corning Matrigel matrix 的 折 射 率 是 多 少? 20 C 条 件 下,Corning Matrigel matrix 的 折 射 率 是 1.3406 到 1.3407, 相 对 折 射 率 为 1.0056( 同 等 条 件 下, 水 的 折 射 率 为 1.333) 29. Corning Matrigel matrix 会 有 自 发 荧 光 吗? Corning Matrigel matrix 是 一 种 蛋 白 混 合 物, 经 过 透 析 处 理 后 溶 解 在 DMEM 培 养 基 中 为 防 止 微 生 物 污 染, 培 养 基 中 添 加 了 庆 大 霉 素 所 以 Corning Matrigel matrix 可 能 引 发 荧 光 的 组 分 包 括 其 中 的 蛋 白 质 成 分, 维 生 素 成 分 以 及 庆 大 霉 素 ( 氨 基 糖 苷 类 抗 生 素 ) 如 果 需 要 使 用 荧 光 检 测 细 胞 生 长 状 态, 建 议 使 用 者 建 立 对 照 实 验, 在 所 需 要 的 波 长 条 件 下 进 行 对 比, 以 便 排 除 背 景 荧 光 30. 使 用 Matrigel 培 养 的 细 胞, 如 果 需 要 进 行 切 片 或 者 免 疫 组 织 化 学 及 免 疫 荧 光 检 验, 该 怎 样 固 定 呢? 如 何 避 免 解 聚? 可 以 使 用 2% 浓 度 的 多 聚 甲 醛 进 行 固 定 为 避 免 固 定 后 出 现 解 聚 的 情 况, 可 以 加 入 1% 浓 度 的 戊 二 醛 戊 二 醛 作 为 固 定 剂, 常 用 于 电 镜 观 察 如 果 用 户 需 要 进 行 免 疫 荧 光 检 验, 加 入 戊 二 醛 后, 会 出 现 明 显 的 背 景 荧 光 为 了 解 决 这 一 问 题, 我 们 建 议 用 户 在 固 定 之 后, 使 用 NaBH 4 进 行 淬 灭 NaBH 4 极 易 气 泡, 进 行 该 步 骤 时, 必 须 在 水 平 操 作 台 上 小 心 操 作, 避 免 晃 动, 尽 量 减 少 气 泡 的 形 成 另 外, 用 户 也 可 以 尝 试 使 用 较 低 浓 度 的 戊 二 醛 进 行 固 定, 如 0.1% 到 0.5%, 浓 度 越 低, 背 景 荧 光 信 号 越 少