720004750enCORTECS care and use manual(1)中文

目 录 I. 入 门 a. 色 谱 柱 接 头 b. 色 谱 柱 安 装 c. 色 谱 柱 平 衡 d. ecord 安 装 e. 初 始 柱 效 测 定 f. VanGuard 预 柱 II. 色 谱 柱 的 使 用 a. 样 品 制 备 b. ph 范 围 c. 溶 剂 d. 压 力 e. 温 度 非 常 感 谢 您 选 择 沃 特 世 CORTECS 色 谱 柱 CORTECS 填 料 专 为 用 于 沃 特 世 ACQUITY UPLC 系 统 而 设 计, 并 且 在 通 过 cgmp 和 ISO 9001 认 证 的 工 厂 采 用 超 纯 试 剂 制 造 而 成 每 批 CORTECS 填 料 均 采 用 酸 性 碱 性 和 中 性 分 析 物 进 行 色 谱 测 试, 并 按 允 许 偏 差 范 围 窄 的 技 术 指 标 进 行 质 量 控 制, 确 保 色 谱 柱 具 有 卓 越 的 可 重 现 性 每 一 根 色 谱 柱 都 进 行 了 单 独 的 测 试, 性 能 色 谱 图 和 批 检 验 报 告 随 附 于 ecord 智 能 芯 片 中 专 门 针 对 应 用 于 ACQUITY UPLC 系 统 而 进 行 了 设 计 和 测 试 而 正 因 为 如 此, 所 以, 当 它 在 全 面 设 计 的 ACQUITY UPLC 系 统 上 运 行 时 将 会 展 现 出 最 佳 的 色 谱 柱 性 能 和 优 势 III. 色 谱 柱 清 洗 再 生 和, 储 存 a. 清 洗 和 再 生 b. 储 存 IV. ecord 智 能 芯 片 技 术 介 绍 a. 介 绍 b. 安 装 c. 生 产 信 息 d. 色 谱 柱 使 用 信 息 V. 其 它 信 息 a. 延 长 使 用 寿 命 的 技 巧 b. CORTECS HILIC 色 谱 柱 使 用 入 门

I. 入 门 每 根 都 随 附 有 分 析 证 书 和 性 能 测 试 色 谱 图, 保 存 于 ecord 智 能 芯 片 中 分 析 证 书 专 门 依 据 这 根 所 用 的 填 料 批 次, 包 括 硅 胶 批 号 未 键 合 颗 粒 的 分 析 报 告 键 合 填 料 的 分 析 报 告, 以 及 色 谱 性 能 测 试 结 果 和 检 测 条 件 性 能 测 试 色 谱 图 为 每 根 色 谱 柱 特 有, 其 中 包 含 如 下 信 息 : 硅 胶 批 号 色 谱 柱 序 列 号 USP 理 论 塔 板 数 USP 拖 尾 因 子 容 量 因 子 和 色 谱 条 件 这 些 数 据 应 当 保 存 以 备 将 来 参 考 a. 色 谱 柱 接 头 ACQUITY UPLC 系 统 所 采 用 的 管 路 和 镀 金 压 紧 螺 母 专 门 设 计 用 于 满 足 严 格 的 压 力 承 受 水 平 并 最 大 程 度 减 少 柱 外 体 积 ACQUITY UPLC 系 统 配 有 经 优 化 的 色 谱 柱 入 口 管 路 ( 部 件 号 430001084) 在 管 路 的 进 样 阀 端 明 确 标 识 了 蓝 色 热 缩 管 标 记 将 管 路 的 另 一 端 插 入, 并 用 两 个 5/16 英 寸 的 扳 手 拧 紧 压 紧 接 头 有 关 合 适 的 色 谱 柱 出 口 管 路 的 详 细 信 息, 请 参 阅 ACQUITY UPLC 系 统 操 作 员 指 南 ( 文 献 编 号 71500082502) 的 相 关 检 测 器 部 分 b. 色 谱 柱 安 装 注 : 下 述 步 骤 中 给 出 的 流 速 适 用 于 典 型 的 1.6 µm,2.1 mm ( 内 径 ) 50 mm( 长 ) 色 谱 柱 根 据 色 谱 柱 压 力 和 系 统 限 值, 可 相 应 地 升 高 或 降 低 流 速 1. 清 除 泵 系 统 中 所 含 的 任 何 缓 冲 液 流 动 相, 然 后 将 色 谱 柱 的 入 口 端 连 接 至 进 样 器 出 口 2. 将 泵 流 速 设 置 为 0.1 ml/min, 并 且 在 5 min 内 增 加 至 0.5 ml/min, 用 100% 有 机 流 动 相 ( 甲 醇 或 乙 腈 ) 冲 洗 色 谱 柱 3. 当 流 动 相 可 从 色 谱 柱 出 口 自 由 流 出 时, 停 泵 并 将 色 谱 柱 出 口 连 接 至 检 测 器 这 样 可 以 防 止 空 气 进 入 检 测 器 系 统, 更 快 速 地 达 到 基 线 平 衡 注 : 如 果 流 动 相 中 的 添 加 剂 浓 度 较 低 ( 如, 离 子 对 试 剂 ), 那 么 完 成 平 衡 可 能 需 要 100-200 倍 柱 体 积 的 流 动 相 此 外, 当 流 动 相 中 含 有 甲 酸 盐 ( 如, 甲 酸 铵 甲 酸 等 ) 时, 可 能 需 要 较 长 的 初 始 柱 平 衡 时 间 c. 色 谱 柱 平 衡 出 厂 时 保 存 于 100% 乙 腈 中 在 将 色 谱 柱 更 换 至 其 它 流 动 相 系 统 之 前, 务 必 要 确 保 流 动 相 的 相 容 性 至 少 用 10 倍 柱 体 积 的 流 动 相 平 衡 色 谱 柱 ( 参 见 表 1 中 的 色 谱 柱 体 积 ) 当 色 谱 柱 达 到 恒 定 背 压 时, 可 认 为 该 柱 达 到 热 平 衡 表 1. 色 谱 柱 体 积 (ml) 柱 长 (mm) 内 径 2.1 mm 3.0 mm 30 0.1 0.2 50 0.2 0.4 75 0.3 0.5 100 0.4 0.8 150 0.5 1.0 为 了 避 免 流 动 相 缓 冲 液 在 色 谱 柱 或 系 统 中 发 生 沉 淀, 使 用 五 倍 柱 体 积 的 水 / 有 机 溶 剂 混 合 溶 液 冲 洗 色 谱 柱, 其 中 溶 剂 含 量 与 所 需 相 同 缓 冲 流 动 相 中 的 溶 剂 含 量 相 同 或 更 低 ( 例 如, 使 用 60% 的 甲 醇 水 溶 液 冲 洗 色 谱 柱 和 系 统, 然 后 再 引 入 60% 甲 醇 /40% 缓 冲 液 的 流 动 相 ) 对 于 CORTECS HILIC 色 谱 柱, 用 50 倍 柱 体 积 的 50:50 乙 腈 / 水 溶 液 ( 含 最 终 分 析 条 件 所 需 的 缓 冲 盐 浓 度 10 mm) 进 行 冲 洗 在 首 次 进 样 之 前, 用 20 倍 柱 体 积 的 流 动 相 ( 初 始 条 件 ) 平 衡 色 谱 柱 ( 参 见 表 1 中 的 色 谱 柱 体 积 ) 有 关 详 细 信 息, 请 参 阅 CORTECS HILIC 色 谱 柱 入 门 指 南 d. ecord 安 装 ecord 按 钮 应 当 安 装 于 柱 温 箱 模 块 的 侧 面 ecord 按 钮 经 过 磁 化 处 理, 无 需 专 门 定 向 4. 按 照 步 骤 2 所 述 逐 渐 增 加 流 速 5. 一 旦 反 压 和 基 线 达 到 稳 定 状 态, 即 可 继 续 进 行 下 一 部 分 操 作 2

e. 初 始 柱 效 测 定 1. 在 使 用 色 谱 柱 之 前 执 行 柱 效 测 试 这 项 测 试 可 包 括 : VanGuard 预 柱 a. 您 所 在 实 验 室 常 用 的 分 析 测 试 混 合 物, 和 / 或 b. 色 谱 柱 随 附 的 性 能 测 试 色 谱 图 中 所 用 的 分 析 混 合 物 注 : 如 果 采 用 b 项 的 分 析 物 进 行 柱 效 测 试, 那 么 您 所 在 实 验 室 在 等 度 条 件 下 测 得 的 柱 效 可 能 低 于 沃 特 世 性 能 测 试 色 谱 图 中 所 示 的 柱 效 这 种 情 况 是 正 常 的 利 用 ACQUITY UPLC I-Class 系 统 对 进 行 QC 测 试, 该 系 统 具 备 极 低 的 系 统 体 积 这 对 于 色 谱 柱 填 充 质 量 的 更 具 有 挑 战 性, 从 而 确 保 最 高 品 质 的 填 充 柱 产 品 安 装 说 明 将 扳 手 置 于 此 处 锥 箍 箍 环 液 流 流 向 将 扳 手 置 于 此 处 2. 测 定 理 论 塔 板 数 (N), 并 定 期 对 比 该 数 值 3. 以 预 定 的 时 间 间 隔 进 行 重 复 测 试, 以 跟 踪 色 谱 柱 性 能 随 时 间 的 变 化 情 况 采 用 2 台 不 同 的 UPLC 系 统 进 行 测 试, 所 得 柱 效 结 果 可 能 会 有 微 小 差 异, 这 可 能 是 由 于 连 接 质 量 运 行 环 境 系 统 电 子 设 备 试 剂 质 量 色 谱 柱 条 件 和 操 作 员 技 术 等 因 素 所 致 f. VanGuard 预 柱 VanGuard 预 柱 是 2.1 mm( 内 径 ) 5 mm( 长 ) 的 保 护 柱, 专 为 应 用 于 ACQUITY UPLC 系 统 而 设 计 VanGuard 预 柱 使 用 与 2.1 mm 内 径 相 同 的 CORTECS 化 学 填 料 和 滤 头, 并 设 计 为 可 直 接 连 接 至 的 入 口 端 注 : 为 了 确 保 VanGuard 预 柱 的 连 接 无 空 隙 且 无 渗 漏, 在 出 厂 时 并 未 将 预 柱 的 锥 箍 与 箍 环 进 行 永 久 性 固 定 当 移 除 用 于 固 定 这 两 个 部 件 的 O 形 圈 时, 需 格 外 小 心 1. 将 VanGuard 预 柱 从 外 盒 和 包 装 套 管 中 取 出, 除 去 塑 料 塞 2. 固 定 预 柱, 使 其 阳 式 接 头 朝 上, 小 心 地 移 除 用 于 在 运 输 期 间 固 定 锥 箍 和 箍 环 的 橡 胶 O 形 圈 ( 锥 箍 和 箍 环 并 未 进 行 永 久 性 固 定 ) 3. 将 垂 直 于 工 作 台 表 面, 使 色 谱 柱 入 口 朝 下 ( 色 谱 柱 出 口 朝 上 ) 4. 从 下 方 将 VanGuard 预 柱 插 入 入 口, 并 用 手 拧 紧 ( 锥 箍 和 箍 环 尚 未 永 久 固 定 ) 5. 在 将 VanGuard 预 柱 尽 量 推 进 色 谱 柱 入 口 端 并 用 手 拧 紧 后, 将 色 谱 柱 和 预 柱 翻 转 180, 使 预 柱 位 于 上 方 6. 如 上 图 所 示, 将 两 个 5/16 英 寸 扳 手 分 别 置 于 CORTECS 色 谱 柱 的 平 坦 部 分 和 VanGuard 预 柱 六 角 螺 母 ( 阳 式 接 头 ) 处, 然 后 拧 紧 7. 拧 紧 1/4 圈, 固 定 锥 箍 和 箍 环 8. 松 开 接 口 并 检 查 锥 箍 深 度, 确 定 锥 箍 已 完 全 固 定 一 个 正 确 设 定 的 锥 箍 深 度 能 够 匹 配 链 接 ACQUITY UPLC 系 统 中 的 其 它 连 接 处 9. 重 新 连 接 预 柱, 使 流 动 相 流 经 预 柱, 检 查 是 否 渗 漏 3

表 2 推 荐 用 于 的 缓 冲 液 添 加 剂 / 缓 冲 液 pka 缓 冲 范 围 挥 发 性 用 于 (±1 个 ph 单 位 ) 质 谱 仪 TFA 0.30 挥 发 性 是 乙 酸 甲 酸 醋 酸 盐 (NH 4 CH 2 COOH) 甲 酸 盐 (NH 4 COOH) 4.76 挥 发 性 是 3.75 挥 发 性 是 4.76 3.76 5.76 挥 发 性 是 3.75 2.75 4.75 挥 发 性 是 注 释 离 子 对 添 加 剂, 能 抑 制 MS 信 号, 在 0.02-0.10% 范 围 内 使 用 与 醋 酸 铵 盐 一 起 使 用 时 缓 冲 作 用 最 强 在 0.1-1.0% 范 围 内 使 用 与 甲 酸 铵 盐 一 起 使 用 时 缓 冲 作 用 最 强 在 0.1-1.0% 范 围 内 使 用 在 1-10 mm 范 围 内 使 用 请 注 意, 其 钠 盐 或 钾 盐 无 挥 发 性 1-10 mm 范 围 内 使 用 请 注 意, 其 钠 盐 或 钾 盐 无 挥 发 性 磷 酸 盐 1 2.15 1.15 3.15 非 挥 发 性 否 常 用 的 低 ph 值 缓 冲 液, 具 有 良 好 的 UV 透 光 率 磷 酸 盐 2 7.20 6.20 8.20 非 挥 发 性 否 ph 值 大 于 7 降 低 温 度 / 浓 度 并 使 用 保 护 柱 以 延 长 柱 使 用 寿 命 II. 色 谱 柱 的 使 用 为 了 确 保 持 续 保 持 高 性 能, 请 遵 循 以 下 原 则 : a. 样 品 制 备 1. 2. 3. 4. 5. 样 品 中 的 杂 质 通 常 会 造 成 色 谱 柱 污 染 避 免 这 种 污 染 的 方 式 之 一 是, 在 进 样 分 析 之 前 使 用 适 合 的 沃 特 世 Oasis 固 相 萃 取 小 柱 / 色 谱 柱 或 Sep-Pak 小 柱 对 样 品 进 行 净 化 处 理 有 关 详 细 信 息, 请 访 问 www.waters.com/sampleprep 最 好 使 用 操 作 流 动 相 配 制 样 品 溶 液, 或 者 使 用 比 流 动 相 洗 脱 强 度 更 弱 的 溶 液 来 配 置 样 品 溶 液, 以 获 得 最 佳 峰 形 和 灵 敏 度 如 果 样 品 不 是 溶 解 在 流 动 相 中, 请 确 保 样 品 溶 剂 和 流 动 相 可 以 混 溶, 以 避 免 样 品 和 / 或 缓 冲 液 产 生 沉 淀 用 0.2 µm 滤 膜 过 滤 样 品, 去 除 颗 粒 物 质 如 果 用 于 溶 解 样 品 的 溶 剂 中 包 含 有 机 改 性 剂 ( 如, 乙 腈 甲 醇 等 ), 请 确 保 滤 膜 材 料 不 溶 于 该 溶 剂 请 联 系 滤 膜 生 产 商, 了 解 有 关 滤 膜 的 溶 剂 相 容 性 问 题 或 者, 可 以 考 虑 将 样 品 溶 液 在 8000 rpm 下 离 心 20 min, 然 后 将 上 清 液 转 移 至 适 当 的 样 品 瓶 中 对 于 亲 水 作 用 色 谱 (HILIC) 分 离, 样 品 必 须 用 高 比 例 的 有 机 溶 剂 制 备 ( 如 :95% 乙 腈 ) 请 参 阅 CORTECS HIlIC 色 谱 柱 入 门 指 南 b. ph 范 围 T 采 用 C18+ 和 C18 填 料 的 的 推 荐 ph 操 作 范 围 为 2-8, 采 用 HILIC 填 料 时 为 1-5 有 关 CORTECS 填 料 特 性 的 详 细 信 息, 请 参 见 表 2 4

常 用 缓 冲 液 和 添 加 剂 列 于 表 2 中 此 外, 色 谱 柱 的 使 用 寿 命 会 根 据 操 作 温 度 所 用 缓 冲 液 的 类 型 和 浓 度 而 有 所 不 同 注 : 在 ph 温 度 和 / 或 压 力 的 极 限 值 条 件 下 运 行 会 导 致 色 谱 柱 使 用 寿 命 缩 短 表 3CORTECS 填 料 特 性 C 18 C 18 + HILIC 色 谱 柱 填 料 目 标 用 途 通 用 型 高 效 反 相 色 谱 柱 在 低 中 ph 范 围 内 可 对 酸 碱 和 中 性 化 合 物 实 现 均 衡 的 保 留 性 能 通 用 型 高 效 反 相 色 谱 柱 表 面 带 正 电 荷, 在 低 ph 条 件 下 用 于 碱 性 化 合 物 分 析 时 可 获 得 出 色 的 峰 形 专 为 保 留 强 极 性 分 析 物 而 设 计 的 高 效 色 谱 柱 提 供 与 C18 色 谱 柱 互 为 补 充 的 正 交 选 择 性 配 体 类 型 三 键 键 合 C 18 三 键 键 合 C 18 无 表 面 电 荷 修 饰 无 + 无 封 端 类 型 独 有 独 有 无 载 碳 量 6.6% 5.7% 未 键 合 配 体 密 度 2.7 µmol/m 2 2.4 µmol/m 2 N/A ph 范 围 2-8 2-8 1-5 温 度 限 值 1 ph 下 限 = 45 C ph 上 限 = 45 C ph 下 限 = 45 C ph 上 限 = 45 C ph 下 限 = 45 C ph 上 限 = 45 C c. 溶 剂 为 了 保 持 最 佳 的 色 谱 柱 性 能, 请 使 用 优 质 的 色 谱 级 溶 剂 所 有 含 水 缓 冲 液 在 使 用 前 都 需 要 用 0.2 µm 过 滤 膜 过 滤 含 有 悬 浮 颗 粒 物 的 溶 剂 常 常 会 堵 塞 色 谱 柱 入 口 分 配 筛 板 的 外 表 面 这 会 导 致 操 作 压 力 增 大, 性 能 变 差 有 关 详 细 信 息, 请 参 见 第 V 节 d. 压 力 能 够 承 受 高 达 18000 psi(1241 bar 或 124 MPa) 的 操 作 压 力 注 : 在 压 力 ph 和 / 或 温 度 的 极 限 值 条 件 下 运 行 会 导 致 色 谱 柱 使 用 寿 命 缩 短 e. 温 度 为 了 增 强 选 择 性 降 低 溶 剂 粘 度 和 提 高 传 质 速 率, 的 推 荐 操 作 温 度 范 围 为 20 45 在 高 ph 条 件 下 操 作 时, 建 议 使 用 较 低 的 操 作 温 度 以 延 长 色 谱 柱 使 用 寿 命 在 较 高 温 度 ( 如, 高 于 40 ) 下 运 行 时 也 可 能 会 导 致 色 谱 柱 使 用 寿 命 缩 短 注 : 在 温 度 压 力 和 / 或 ph 的 极 限 值 条 件 下 运 行 会 导 致 色 谱 柱 使 用 寿 命 缩 短 5

III. 色 谱 柱 清 洗 再 生 和 储 存 a. 清 洗 和 再 生 如 果 发 生 峰 形 改 变 谱 峰 分 叉 出 现 肩 峰 保 留 时 间 改 变 分 离 度 变 化 或 反 压 升 高, 可 能 提 示 色 谱 柱 受 到 污 染 通 常 情 况 下, 用 纯 的 有 机 溶 剂 进 行 冲 洗 ( 小 心 避 免 缓 冲 液 出 现 沉 淀 ) 就 足 以 去 除 污 染 物 如 果 冲 洗 操 作 不 能 解 决 问 题, 可 采 用 以 下 清 洗 和 再 生 步 骤 对 色 谱 柱 进 行 清 除 使 用 常 规 清 洗 方 法, 该 方 法 应 与 样 品 和 / 或 您 认 为 的 色 谱 柱 污 染 物 的 性 质 相 匹 配 ( 见 表 4) 用 20 倍 柱 体 积 的 溶 剂 冲 洗 色 谱 柱 升 高 柱 温 可 提 升 清 洗 效 率 如 果 色 谱 柱 性 能 在 清 洗 和 再 生 后 仍 然 很 差, 请 致 电 当 地 的 沃 特 世 办 事 处 获 得 更 多 支 持 用 50:50 乙 腈 / 水 冲 洗 CORTECS HILIC 色 谱 柱, 去 除 极 性 污 染 物 如 果 此 冲 洗 操 作 不 能 解 决 问 题, 可 用 5:95 乙 腈 / 水 清 除 色 谱 柱 表 4. 反 相 色 谱 柱 清 洗 顺 序 b. 储 存 如 果 需 要 将 CORTECS 反 相 色 谱 柱 在 室 温 下 放 置 超 过 四 天, 则 应 将 其 保 存 于 100% 乙 腈 中 在 高 温 条 件 下 使 用 后, 立 即 将 色 谱 柱 保 存 于 100% 乙 腈 中 以 延 长 色 谱 柱 使 用 寿 命 切 勿 将 色 谱 柱 保 存 于 缓 冲 液 中 如 果 流 动 相 中 含 有 缓 冲 盐, 则 先 用 10 倍 柱 体 积 ( 有 关 常 规 色 谱 柱 体 积, 请 参 见 表 1) 的 HPLC 级 水 冲 洗 色 谱 柱, 再 用 100% 乙 腈 冲 洗 并 储 存 如 果 未 执 行 这 一 中 间 步 骤, 在 引 入 100% 乙 腈 时 色 谱 柱 中 可 能 会 出 现 缓 冲 盐 沉 淀 将 色 谱 柱 完 全 密 封, 防 止 溶 剂 挥 发 而 导 致 柱 床 变 干 当 需 要 将 CORTECS HILIC 色 谱 柱 放 置 超 过 四 天 时, 应 将 其 保 存 于 95:5 乙 腈 / 水 中 切 勿 将 色 谱 柱 保 存 于 缓 冲 溶 液 中 如 果 流 动 相 中 含 有 缓 冲 盐, 则 用 10 倍 柱 体 积 的 95:5 乙 腈 / 水 冲 洗 色 谱 柱 ( 有 关 常 规 色 谱 柱 体 积, 请 参 见 表 1) 注 : 如 果 色 谱 柱 运 行 了 含 甲 酸 盐 ( 如, 甲 酸 铵 甲 酸 等 ) 的 流 动 相, 并 且 之 后 使 用 100% 乙 腈 进 行 冲 洗, 那 么 在 重 新 安 装 色 谱 柱 并 再 次 运 行 含 甲 酸 盐 的 流 动 相 时, 可 能 需 要 花 费 略 长 的 柱 平 衡 时 间 极 性 样 品 非 极 性 样 品 ** 蛋 白 质 样 品 1. 水 1. 异 丙 醇 ( 或 适 当 的 异 丙 醇 / 水 混 合 物 *) 选 项 1: 重 复 注 入 等 量 的 二 甲 基 亚 砜 (DMSO) 2. 甲 醇 3. 四 氢 呋 喃 (THF) 2. 四 氢 呋 喃 (THF) 3. 二 氯 甲 烷 4. 甲 醇 4. 己 烷 选 项 2:10%-90% B 的 梯 度 洗 脱, 其 中 : A = 0.1% 三 氟 乙 酸 (TFA) 水 溶 液 B = 0.1% 三 氟 乙 酸 (TFA) 乙 腈 溶 液 (CH3CN) 5. 水 5. 异 丙 醇 ( 然 后 使 用 适 当 的 异 丙 醇 / 水 混 合 物 *) 选 项 3: 用 7M 盐 酸 胍 或 7M 尿 素 冲 洗 色 谱 柱 6. 流 动 相 6. 流 动 相 * 使 用 低 比 例 的 有 机 溶 剂 水 溶 液, 以 避 免 出 现 缓 冲 液 沉 淀 ** 除 非 安 装 了 己 烷 / 四 氢 呋 喃 兼 容 性 套 件 ( 部 件 号 205000464), 否 则 只 有 在 利 用 纯 反 相 有 机 溶 剂 ( 如 乙 腈 ) 无 法 清 洗 色 谱 柱 时, 方 可 考 虑 采 用 诸 如 THF 或 己 烷 之 类 的 溶 剂 降 低 流 速, 使 用 较 低 的 操 作 温 度 并 限 制 系 统 与 THF 和 / 或 己 烷 的 接 触 6

IV. ecord 智 能 芯 片 技 术 介 绍 a. 介 绍 ecord 智 能 芯 片 可 记 录 色 谱 柱 在 整 个 使 用 寿 命 期 间 的 性 能 历 史 ecord 永 久 性 地 连 接 在 色 谱 柱 上, 确 保 色 谱 柱 在 从 一 台 仪 器 转 移 到 另 一 台 仪 器 时, 其 性 能 记 录 能 够 得 到 完 整 保 存 图 1. 沃 特 世 ecord 智 能 芯 片 沃 特 世 ecord - 智 能 芯 片 在 生 产 时, 跟 踪 和 质 量 控 制 信 息 将 被 下 载 到 ecord 中 将 这 些 信 息 存 储 于 芯 片 中 消 除 了 对 纸 质 分 析 报 告 的 需 求 用 户 安 装 色 谱 柱 后, 软 件 会 自 动 将 重 要 参 数 下 载 到 保 存 于 芯 片 的 色 谱 柱 历 史 文 档 中 在 本 手 册 中, 我 们 将 会 讲 解 ecord 如 何 轻 松 地 跟 踪 色 谱 柱 的 历 史 信 息, 减 少 繁 琐 的 文 书 工 作, 确 保 仪 器 中 安 装 的 色 谱 柱 性 能 良 好, 从 而 为 用 户 消 除 顾 虑 插 入 柱 温 箱 侧 面 的 ecord 图 2. 插 入 柱 温 箱 侧 面 的 ecord b. 安 装 将 色 谱 柱 安 装 到 柱 温 箱 中 将 ecord 插 入 柱 温 箱 的 侧 面 当 ecord 插 入 柱 温 箱 后, 用 户 即 可 通 过 计 算 机 查 看 色 谱 柱 相 关 的 识 别 信 息 和 总 体 使 用 信 息 c. 生 产 信 息 ecord 芯 片 可 提 供 生 产 商 进 行 色 谱 柱 QC 测 试 的 条 件 和 结 果 具 体 信 息 包 括 色 谱 柱 测 试 所 采 用 的 流 动 相 运 行 条 件 和 分 析 物 此 外, QC 结 果 和 合 格 证 已 附 于 色 谱 柱 上 ecord 芯 片 为 用 户 提 供 对 填 料 批 次 的 QC 测 试 结 果 的 概 述 d. 色 谱 柱 使 用 信 息 ecord 芯 片 可 为 用 户 提 供 色 谱 柱 的 使 用 数 据 屏 幕 上 方 标 识 了 色 谱 柱 的 填 料 类 型 尺 寸 和 序 列 号 色 谱 柱 总 体 使 用 信 息 包 括 样 品 总 数 进 样 总 数 样 品 组 总 数 首 次 进 样 日 期 末 次 进 样 日 期 最 大 压 力 和 最 高 温 度 还 将 按 样 品 组 详 细 记 录 色 谱 柱 历 史, 包 括 开 始 使 用 日 期 样 品 组 名 称 用 户 名 称 系 统 名 称 该 样 品 组 的 进 样 次 数 该 样 品 组 的 样 品 个 数 该 样 品 组 和 色 谱 柱 的 最 大 压 力 和 最 高 温 度 7

V. 其 它 信 息 a. 延 长 使 用 寿 命 的 技 巧 1. 为 了 尽 可 能 延 长 的 使 用 寿 命, 请 密 切 关 注 以 下 方 面 : 水 的 质 量 ( 包 括 纯 化 水 系 统 ) 溶 剂 质 量 流 动 相 的 制 备 储 存 和 期 限 样 品 缓 冲 液 和 流 动 相 的 溶 解 性 样 品 的 质 量 和 制 备 2. 当 出 现 问 题 时, 通 常 只 需 要 改 变 一 个 不 当 的 操 作 3. 请 务 必 记 住 : 使 用 在 线 过 滤 器 单 元, 或 者 最 好 使 用 VanGuard 预 柱 尽 可 能 避 免 使 用 100% 水 相 流 动 相, 以 阻 止 细 菌 滋 生 每 24 48 小 时 更 换 一 次 水 相 流 动 相 ( 如 果 必 须 使 用 100% 水 相 流 动 相 ) 每 24 48 小 时 需 将 旧 的 100% 水 相 流 动 相 丢 弃 以 阻 止 细 菌 滋 生 向 流 动 相 A 添 加 5% - 10% 有 机 改 性 剂, 调 整 梯 度 设 置 用 0.2 µm 过 滤 膜 过 滤 流 动 相 的 水 溶 液 部 分 对 纯 化 水 系 统 进 行 维 护, 使 其 具 有 良 好 的 工 作 状 态 尽 可 能 只 使 用 超 纯 水 (18 M.cm) 和 优 质 溶 剂 HPLC 级 水 并 非 UPLC 级 水 考 虑 样 品 制 备 ( 如, 固 相 萃 取, 过 滤 等 ) 4. 避 免 事 项 ( 在 可 能 的 情 况 下 ): 100% 水 相 流 动 相 ( 如 果 可 能 ) HPLC 级 瓶 装 水 流 动 相 敞 口 放 置 旧 的 水 相 流 动 相 切 记 每 24-48 小 时 彻 底 清 洗 流 动 相 瓶, 并 制 备 新 鲜 流 动 相 磷 酸 盐 缓 冲 液 与 高 浓 度 乙 腈 ( 如,> 70%) 结 合 使 用, 可 能 会 出 现 沉 淀 5. 切 勿 : 在 观 察 到 反 压 过 高 或 谱 峰 分 叉 时 便 认 定 是 色 谱 柱 失 效 所 引 起 的 : 调 查 色 谱 柱 出 现 故 障 的 原 因 反 压 流 动 相 细 菌 沉 淀 和 / 或 样 品 谱 峰 分 叉 样 品 质 量 样 品 溶 剂 的 强 度 6. 切 记 : 通 常 的 直 径 (2.1 和 3.0 mm 内 径 ) 比 传 统 的 HPLC 色 谱 柱 小, 因 此 流 动 相 的 可 持 续 消 耗 时 间 较 长 为 了 降 低 流 动 相 发 生 污 染 或 降 解 的 可 能 性, 每 次 仅 制 备 分 析 所 需 的 流 动 相 并 将 多 余 的 流 动 相 保 存 在 冷 藏 环 境 下 7. 问 问 自 己 关 于 流 动 相 的 问 题 : 我 是 不 是 在 用 100% 水 相 流 动 相? 能 否 在 流 动 相 A 中 加 入 少 量 有 机 改 性 剂? 我 有 没 有 用 0.2 µm 滤 膜 过 滤 过 水 相 流 动 相? 我 的 流 动 相 已 经 放 了 多 久 了? 我 有 没 有 在 流 动 相 瓶 上 注 明 制 备 日 期? 每 24 48 小 时 我 是 直 接 添 加 流 动 相 还 是 完 全 准 备 新 鲜 流 动 相? 我 用 的 水 的 质 量 如 何? 质 量 近 期 有 无 发 生 问 题? 我 的 纯 化 水 系 统 工 作 状 态 如 何? 上 一 次 维 护 是 在 多 久 前 进 行 的? 我 是 不 是 在 用 ph 7 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( 在 此 条 件 下 非 常 容 易 滋 生 细 菌 )? 8. 问 问 自 己 关 于 样 品 的 问 题 : 如 果 我 进 样 的 是 用 流 动 相 溶 液 配 制 的 纯 标 样, 我 还 会 观 察 到 这 些 问 题 吗? 如 果 我 用 水 溶 解 标 准 品, 并 按 照 样 品 制 备 方 法 ( 如,SPE 过 滤 等 ) 制 备, 我 还 会 观 察 到 这 些 问 题 吗? 我 的 样 品 的 质 量 会 随 时 间 变 化 吗? b. CORTECS HIlIC 色 谱 柱 入 门 1. 由 于 CORTECS HILIC 色 谱 柱 无 键 合 相, 使 得 ph 操 作 范 围 为 1-5, 操 作 温 度 可 达 45 2. 与 其 它 液 相 色 谱 柱 一 样,CORTECS HILIC 色 谱 柱 在 ph 压 力 和 温 度 的 极 限 值 条 件 下 操 作 时 将 导 致 色 谱 柱 使 用 寿 命 缩 短 色 谱 柱 平 衡 1. 初 次 使 用 本 色 谱 柱 时, 用 50 倍 柱 体 积 的 50% 乙 腈 /50% 水 溶 液 ( 含 最 终 浓 度 为 10 mm 的 缓 冲 液 ) 冲 洗 色 谱 柱 2. 在 首 次 进 样 之 前, 用 20 倍 柱 体 积 的 初 始 流 动 相 条 件 平 衡 色 谱 柱 3. 如 果 采 用 梯 度 条 件, 在 进 样 之 前 用 8-10 倍 柱 体 积 的 流 动 相 平 衡 色 谱 柱 4. 色 谱 柱 平 衡 不 当 会 导 致 保 留 时 间 发 生 漂 移 8

关 于 流 动 相 的 注 意 事 项 1. 在 流 动 相 或 梯 度 中 应 始 终 保 持 至 少 含 有 3% 极 性 溶 剂 ( 例 如,3% 水 /3% 甲 醇 或 2% 水 /1% 甲 醇 等 ) 这 样 可 以 确 保 CORTECS 颗 粒 始 终 保 持 水 合 状 态 2. 在 流 动 相 或 梯 度 中 始 终 保 持 至 少 含 有 40% 的 有 机 溶 剂 ( 如, 乙 腈 ) 3. 避 免 在 HILIC 流 动 相 中 使 用 磷 酸 盐 缓 冲 液 以 防 止 出 现 沉 淀 但 可 以 使 用 磷 酸 4. 与 甲 酸 或 醋 酸 等 添 加 剂 相 比, 诸 如 甲 酸 铵 或 醋 酸 铵 的 缓 冲 液 可 获 得 更 好 的 重 现 性 结 果 如 果 必 须 用 添 加 剂 ( 如, 甲 酸 等 ) 代 替 缓 冲 液, 则 用 0.2% (v:v) 的 浓 度 代 替 0.1% 5. 为 了 获 得 最 佳 峰 形, 应 始 终 将 流 动 相 / 梯 度 中 的 缓 冲 液 浓 度 保 持 为 10 mm 进 样 溶 剂 1. 如 果 可 能, 进 样 溶 剂 应 使 用 95% 乙 腈 极 性 溶 剂 ( 如, 水 甲 醇 和 异 丙 醇 ) 应 减 少 至 样 品 溶 液 总 体 积 的 25% 其 它 技 巧 1. CORTECS HILIC 色 谱 柱 专 用 于 保 留 极 性 极 强 的 碱 性 化 合 物 而 对 于 酸 性 中 性 和 / 或 非 极 性 化 合 物 的 保 留 性 能 有 限 2. 对 于 小 分 子 (<200 道 尔 顿 ) 强 极 性 碱 性 化 合 物 来 说, CORTECS HILIC 色 谱 柱 的 最 佳 流 速 范 围 为 0.4-0.8 ml/min 3. 在 HILIC 中, 切 记 水 是 最 强 的 溶 剂 因 此, 在 进 样 溶 剂 中 必 须 去 除 水 或 尽 可 能 减 少 水 4. 开 始 初 步 探 索 色 谱 条 件 时, 可 运 行 95% 乙 腈 至 50% 乙 腈 的 梯 度 条 件 若 无 保 留, 可 运 行 95:3:2 乙 腈 / 甲 醇 / 水 相 缓 冲 液 的 等 度 条 件 5. 可 用 诸 如 甲 醇 丙 酮 或 异 丙 醇 的 极 性 溶 剂 代 替 水 以 增 强 保 留 性 能 6. 如 果 使 用 ACQUITY UPLC 系 统, 弱 洗 针 液 应 严 格 按 照 初 始 流 动 相 条 件 中 的 % 有 机 相 配 制, 否 则 分 析 物 峰 形 或 保 留 性 能 可 能 会 受 到 影 响 2. 通 用 的 进 样 溶 剂 为 75:25 乙 腈 / 甲 醇 这 样 可 在 分 析 物 溶 解 性 和 峰 形 之 间 实 现 好 的 折 衷 3. 避 免 以 水 和 二 甲 基 亚 砜 (DMSO) 作 为 进 样 溶 剂 这 些 溶 剂 将 导 致 产 生 极 差 的 峰 形 4. 利 用 反 相 固 相 萃 取 (SPE) 将 水 或 DMSO 与 乙 腈 互 换 如 果 无 法 实 现, 则 用 有 机 溶 剂 稀 释 水 或 DMSO 2013 年 沃 特 世 公 司 Waters ACQUITY UPLC UPLC Oasis SepPak 和 The Science of What s Possible 是 沃 特 世 公 司 的 注 册 商 标 CORTECS VanGuard 和 ecord 是 沃 特 世 公 司 的 商 标 其 他 所 有 商 标 均 归 各 自 的 拥 有 者 所 有 2013 年 6 月 720004750ZH 修 订 版 A VW-PDF 010-5209 3866 021-6156 2666 020-2829 6555 028-6554 5999 852-2964 1800 800 (400) 820 2676 www.waters.com