附 件 : 杀 菌 杀 虫 剂 对 作 物 安 全 性 室 内 试 验 准 则 ( 试 行 ) 1 适 用 范 围 本 准 则 规 定 了 杀 菌 杀 虫 剂 使 用 后 可 能 对 作 物 产 生 药 害 风 险 的 室 内 试 验 及 安 全 性 评 价 的 基 本 原 则 和 方 法 适 用 于 评 价 拟 申 请 登 记 杀 菌 杀 虫 剂 对 作 物 的 直 接 药 害 风 险, 为 其 登 记 和 合 理 使 用 提 供 科 学 依 据 2 术 语 和 定 义 2.1 安 全 性 : 杀 菌 杀 虫 剂 在 推 荐 使 用 剂 量 范 围 内 及 高 于 推 荐 剂 量 一 定 范 围 内 使 用, 对 处 理 作 物 不 会 造 成 严 重 不 可 逆 伤 害, 不 影 响 作 物 产 量 和 品 质 一 般 安 全 性 越 高, 药 害 风 险 越 低 2.2 药 害 : 杀 菌 杀 虫 剂 使 用 后 对 作 物 产 生 的 可 视 性 伤 害 2.3 苗 前 处 理 : 药 剂 种 子 处 理 ( 包 衣 拌 种 浸 种 等 ) 和 播 种 前 后 的 苗 前 土 壤 处 理 ( 撒 施 浇 灌 注 射 熏 蒸 等 ) 2.4 生 长 期 处 理 : 指 在 作 物 出 苗 以 后 至 收 获 之 前 的 药 剂 处 理 其 中 在 出 苗 以 后 至 孕 穗 或 花 蕾 形 成 之 前 的 药 剂 处 理, 称 为 营 养 生 长 期 处 理 ; 在 孕 穗 或 花 蕾 形 成 后 的 处 理 称 为 生 殖 生 长 期 处 理 2.5 采 后 处 理 : 指 在 采 收 以 后 对 作 物 的 果 实 ( 或 种 子 等 ) 进 行 的 药 剂 处 理 3 基 本 原 则 与 要 求 3.1 试 验 药 剂 3.1.1 药 剂 试 验 药 剂 采 用 与 拟 申 请 登 记 药 剂 组 分 或 配 方 一 致 的 样 品,
即 配 方 及 加 工 工 艺 相 同 的 制 剂 注 明 通 用 名 含 量 和 剂 型 3.1.2 剂 量 设 臵 杀 菌 杀 虫 剂 对 作 物 安 全 性 室 内 试 验 中, 试 验 药 剂 的 剂 量 以 生 产 企 业 推 荐 的 田 间 药 效 试 验 最 高 剂 量 为 最 低 试 验 剂 量, 按 1 倍 2 倍 4 倍 剂 量 的 梯 度 设 计 试 验 处 理 剂 量, 并 设 不 含 药 处 理 的 对 照 3.2 供 试 作 物 3.2.1 适 用 靶 标 作 物 本 准 则 主 要 适 用 于 杀 菌 杀 虫 剂 对 粮 食 作 物 瓜 菜 类 作 物 经 济 作 物 等 作 物 的 室 内 安 全 性 评 价, 及 对 果 树 类 种 苗 或 组 培 苗 的 安 全 性 评 价 杀 菌 杀 虫 剂 对 果 树 成 株 生 长 期 的 安 全 性 评 价 及 其 他 特 殊 作 物 的 安 全 性 评 价, 可 以 参 考 本 准 则 有 关 规 定 在 田 间 进 行 试 验 3.2.2 供 试 作 物 的 品 种 由 于 不 同 品 种 或 生 物 类 型 的 作 物 对 杀 菌 杀 虫 剂 的 敏 感 性 存 在 很 大 差 异, 杀 菌 杀 虫 剂 对 作 物 安 全 性 试 验, 须 选 用 拟 申 请 登 记 作 物 的 3 个 以 上 不 同 常 规 品 种 ( 如 : 水 稻 的 粳 稻 籼 稻 糯 稻, 白 皮 小 麦 和 红 皮 小 麦 等 ) 作 为 供 试 作 物 3.2.3 供 试 作 物 的 栽 培 用 于 评 价 杀 菌 杀 虫 剂 安 全 性 的 每 个 作 物 品 种, 种 质 或 生 长 势 需 要 一 致 选 用 干 净 饱 满 的 种 子, 采 用 营 养 一 致 的 土 壤 在 气 候 条 件 可 控 的 培 养 箱 或 温 室 内 培 养, 保 持 良 好 的 水 肥 管 理 4 试 验 方 法 根 据 生 产 企 业 推 荐 的 田 间 药 效 试 验 施 药 时 期 和 施 药 方 法 选 择 4.1 苗 前 处 理 4.1.1 仪 器 设 备 人 工 气 候 培 养 箱 或 光 照 培 养 箱 或 人 工 气 候 室 电 子
天 平 ( 精 确 度 到 0.1mg) 移 液 器 培 养 皿 种 子 或 土 壤 处 理 的 容 器 直 径 150~200mm 的 盆 钵 等 4.1.2 试 材 种 子 : 种 质 一 致, 去 除 空 瘪 粒, 冲 洗 干 净 并 晾 干, 对 照 发 芽 率 应 在 90% 以 上 土 壤 : 试 验 用 土 壤 经 风 干 过 筛, 装 入 金 属 容 器, 烘 箱 中 65 下 烘 8 小 时, 晾 凉 后 备 用 4.1.3 药 剂 处 理 选 用 种 质 一 致 的 3 个 品 种 的 供 试 作 物 种 子 按 照 拟 申 请 登 记 的 施 药 方 法 ( 种 子 处 理 或 土 壤 处 理 ) 设 计 剂 量 和 进 行 药 剂 处 理, 药 剂 处 理 时 保 证 均 匀 一 致 其 中 以 浸 种 方 法 处 理 种 子 的 药 剂, 应 该 具 有 水 溶 性, 避 免 兑 水 稀 释 后 沉 淀 或 析 出 而 处 理 不 均 匀 浸 种 法 : 将 种 子 浸 泡 在 药 液 中, 浸 泡 时 间 与 生 产 常 规 一 致 处 理 后 捞 出 直 接 或 经 清 洗 后 晾 干, 编 号 备 用 拌 种 和 种 子 包 衣 法 : 按 推 荐 方 法 将 药 剂 与 少 量 细 土 或 少 量 水 稀 释 后, 在 适 当 大 小 的 容 器 内 按 无 药 对 照 和 从 低 剂 量 至 高 剂 量 顺 序 将 种 子 和 药 剂 搅 拌 均 匀, 晾 干 后 编 号 备 用 土 壤 处 理 : 按 推 荐 土 壤 处 理 的 使 用 方 法 和 剂 量 进 行 药 剂 土 壤 处 理 如 按 处 理 剂 量 将 药 剂 与 土 壤 混 合 制 成 毒 土 备 用 将 无 药 的 营 养 土 装 盆 钵 4/5, 播 种 后 撒 药 土 覆 盖 10mm, 或 撒 药 土 10mm 厚 后 播 种, 再 覆 盖 无 药 或 含 药 土 壤 经 种 子 或 土 壤 处 理 播 种 后, 每 天 喷 水 保 持 土 壤 湿 润, 利 于 种 子 发 芽 出 苗 4.1.4 药 剂 对 作 物 发 芽 或 出 苗 的 安 全 性 试 验 方 法
首 先 通 过 发 芽 试 验 检 测 药 剂 对 作 物 种 子 发 芽 的 安 全 性, 如 检 测 结 果 为 严 重 抑 制 发 芽, 则 不 需 再 做 出 苗 试 验 ; 如 发 芽 试 验 无 明 显 抑 制, 则 需 通 过 出 苗 试 验 进 一 步 验 证 药 剂 对 作 物 的 安 全 性 A: 发 芽 试 验 : 将 各 药 剂 处 理 的 100 粒 种 子, 放 臵 于 培 养 皿 内 保 持 湿 润 的 滤 纸 上, 根 据 不 同 作 物 种 子 的 特 性, 放 臵 于 适 宜 条 件 下 培 养, 逐 日 观 察 发 芽 情 况 记 录 并 计 算 对 照 发 芽 50% 对 照 完 全 发 芽 及 对 照 完 全 发 芽 3~5 天 后 的 各 处 理 发 芽 率 及 根 长 和 根 数 种 子 发 芽 的 标 准 : (1) 禾 谷 类 作 物 种 子, 正 常 发 育 主 根 长 度 超 过 种 子 长 度, 幼 芽 长 度 超 过 种 子 长 度 1/2 (2) 园 粒 种 子 幼 根 和 幼 芽 长 度 超 过 种 子 直 径 (3) 小 粒 豆 类 植 物 种 子 有 正 常 幼 根, 并 有 一 个 幼 根 与 子 叶 相 连 (4) 林 木 种 子 的 幼 根 正 常, 并 长 于 种 子 长 度 1/2, 小 粒 种 子 幼 根 长 度 超 过 种 子 长 度 的, 均 定 为 发 芽 B: 出 苗 试 验 : 将 营 养 一 致 的 土 壤 装 于 盆 钵 内, 孔 隙 度 相 似, 土 壤 含 水 量 大 约 60% 将 各 处 理 的 100 粒 种 子 分 别 播 种 于 盆 钵 内 平 整 的 土 壤 表 面, 再 覆 土 3~10mm( 因 种 质 而 异 ),25 光 照 培 养 箱 中 分 别 培 养, 于 出 苗 后 7 14 21 天 定 期 观 察 记 录 出 苗 情 况 记 载 作 物 的 生 长 状 况 和 描 述 药 害 症 状, 检 查 和 计 算 不 同 处 理 间 的 出 苗 率 出 苗 势 ( 整 齐 度 以 株 高 标 准 差 表 示 ) 苗 高 根 长 根 数 鲜 重 干 重 根 茎 重 量 和 长 度 比 4.2 生 长 期 处 理
4.2.1 仪 器 设 备 人 工 气 候 培 养 箱 人 工 气 候 室 或 可 控 日 光 温 室 ( 光 照 温 度 湿 度 ), 可 控 定 量 喷 雾 设 备, 电 子 天 平 ( 精 确 度 0.1mg), 移 液 器 等 4.2.2 试 材 生 长 一 致 的 同 一 种 作 物 3 个 品 种 4.2.3 药 剂 处 理 4.2.3.1 土 壤 处 理 包 括 颗 粒 剂 撒 施 毒 土 撒 施 浇 灌 土 壤 注 射 等 按 药 剂 各 处 理 剂 量 将 颗 粒 剂 均 匀 撒 施, 或 按 剂 量 将 药 剂 与 225 公 斤 / 公 顷 细 土 混 合 后 撒 施 于 作 物 根 围, 或 与 水 稀 释 后 均 匀 浇 灌 或 灌 注 于 作 物 根 围 4.2.3.2 喷 施 包 括 喷 雾 喷 洒 喷 粉 等 方 法 按 药 剂 处 理 剂 量, 以 无 药 对 照 低 剂 量 / 浓 度 至 高 剂 量 / 浓 度 进 行 处 理 4.2.3.3 熏 蒸 将 生 长 一 致 的 作 物 放 臵 在 塑 料 薄 膜 搭 建 的 密 闭 空 间 内, 按 不 同 处 理 剂 量 将 药 剂 放 臵 在 密 闭 空 间 内 自 由 挥 发 或 加 热 挥 发, 对 作 物 进 行 熏 蒸 4.2.3.4 茎 杆 涂 抹 注 射 按 处 理 剂 量 将 药 剂 与 水 稀 释 调 和 后 进 行 茎 杆 涂 抹 或 注 射 4.2.3.5 重 复 每 处 理 不 少 于 4 盆 (4 次 重 复 ), 并 根 据 植 株 苗 大 小 每 处 理 不 少 于 4~8 株 处 理 后 移 入 温 室 培 养, 各 处 理 生 长 管 理 条 件 一 致 对 于 果 树 成 株 生 长 期 的 安 全 性 评 价 及 其 他 特 殊 作 物 的 安 全 性 评 价, 如 在 田 间 进 行 试 验, 每 处 理 不 少 于 1 株, 至 少 3 次 重 复 5 安 全 性 评 价 内 容 根 据 药 剂 处 理 时 期 确 定 作 物 安 全 性 试 验 具 体 评 价 内 容
5.1 苗 前 处 理 种 子 处 理 的 药 剂 安 全 性 需 要 调 查 对 种 子 发 芽 和 出 苗 的 影 响, 土 壤 处 理 的 药 剂 只 需 调 查 对 出 苗 的 影 响 主 要 评 价 药 剂 对 种 子 发 芽 率 发 芽 势 出 苗 率 出 苗 势 苗 高 / 长 根 系 数 量 和 主 根 长 度 根 / 茎 鲜 重 比 及 植 株 形 态 和 叶 色 的 伤 害 等 5.2 营 养 生 长 期 处 理 包 括 苗 后 孕 穗 前 或 果 蔬 花 蕾 形 成 前 药 剂 处 理 ( 喷 施 和 熏 蒸 等 茎 叶 处 理 撒 施 和 浇 灌 等 根 部 土 壤 处 理 ) 按 照 拟 申 请 登 记 药 剂 推 荐 使 用 类 似 方 法 在 温 室 对 盆 / 钵 栽 3~5 叶 期 作 物 苗 进 行 药 剂 处 理 主 要 评 价 药 剂 对 作 物 株 高 ( 茎 长 ) 生 长 速 率 植 株 形 态 和 叶 色 的 伤 害 等 5.3 生 殖 生 长 期 处 理 包 括 作 物 孕 穗 期 和 花 蕾 形 成 以 后 幼 果 期 至 收 获 前 的 药 剂 处 理 ( 喷 施 和 熏 蒸 等 茎 叶 处 理 撒 施 和 浇 灌 等 根 部 土 壤 处 理 ) 在 温 室 或 田 间 按 照 拟 申 请 登 记 药 剂 的 推 荐 使 用 方 法 进 行 药 剂 处 理 主 要 评 价 药 剂 对 作 物 株 高 ( 茎 长 ) 生 长 速 率 植 株 形 态 叶 / 果 色 结 实 率 的 伤 害 等 6 药 害 症 状 观 察 6.1 变 色 包 括 褪 绿 黄 化 白 化 花 叶 锈 斑 褐 化 绿 化 等 6.2 坏 死 斑 点 枯 斑 叶 缘 坏 死 生 长 点 或 攀 缘 茎 枯 死 落 叶 落 花 落 果 空 秕 粒 等 6.3 生 长 发 育 延 缓 矮 化 节 间 缩 短 叶 片 伸 展 受 抑 出 苗 不 齐 成 熟 期 改 变 生 长 发 育 停 滞 6.4 萎 蔫 植 株 失 水 萎 蔫 青 枯 6.5 畸 形 分 蘖 异 常 生 长 不 定 根 侧 向 生 长 徒 长 叶 片 卷 曲 或 扭
曲 变 形 茎 缢 缩 花 穗 变 形 7 药 害 程 度 观 察 记 录 7.1 抑 制 发 芽 或 出 苗 观 察 药 剂 处 理 后 对 作 物 种 子 发 芽 和 出 苗 的 影 响, 记 录 作 物 种 子 发 芽 或 出 苗 受 抑 制 的 比 率, 或 延 缓 出 苗 的 天 数 等 信 息 7.2 变 色 观 察 施 药 后 作 物 叶 片 等 部 位 变 色 情 况, 记 录 变 色 程 度 和 变 色 叶 片 占 供 试 作 物 全 部 叶 片 的 比 率, 以 及 变 色 是 否 可 恢 复 和 恢 复 所 需 的 天 数 等 信 息 7.3 坏 死 观 察 施 药 后 作 物 不 同 部 位 器 官 坏 死 情 况, 记 录 出 现 斑 点 或 坏 死 的 器 官 占 供 试 作 物 全 部 器 官 的 比 率, 以 及 斑 点 或 坏 死 面 积 占 作 物 器 官 面 积 的 比 例, 或 落 叶 落 花 落 果 或 空 秕 粒 的 比 率 等 信 息 7.4 生 长 停 滞 观 察 施 药 后 对 作 物 生 长 的 影 响, 记 录 施 药 后 21 天 左 右 作 物 生 长 ( 植 株 或 枝 条 或 根 系 新 生 高 度 或 长 度 ) 受 抑 制 情 况 等 信 息 7.5 萎 蔫 观 察 施 药 后 作 物 叶 片 出 现 萎 蔫 症 状 情 况, 记 录 出 现 萎 蔫 症 状 时 间 及 萎 蔫 持 续 时 间, 是 否 可 恢 复 以 及 恢 复 所 需 时 间 等 信 息 7.6 畸 形 观 察 记 录 施 药 后 21 天 左 右 作 物 植 株 分 蘖 异 常 生 长 不 定 根 侧 向 生 长 徒 长 叶 片 卷 曲 或 扭 曲 变 形 茎 缢 缩 花 穗 变 形 等 情 况, 记
录 产 生 畸 形 的 植 株 数 量 及 占 全 部 植 株 的 比 例 等 信 息 8 有 关 药 害 程 度 系 数 的 计 算 8.1 发 芽 率 和 出 苗 率 的 抑 制 率 发 芽 率 或 出 苗 率 (%): G==N 1 /N 2 100 G 为 发 芽 率 或 出 苗 率,N 1 为 发 芽 或 出 苗 数,N 2 为 测 试 种 子 数 或 苗 数 发 芽 率 和 出 苗 率 的 抑 制 率 (%): I=(C-T)/C 100 I 为 发 芽 率 或 出 苗 率 的 抑 制 率 (%);C 为 空 白 对 照 发 芽 率 或 出 苗 率 (%); T 为 药 剂 处 理 的 发 芽 率 或 出 苗 率 (%) 8.2 落 花 ( 果 叶 ) 率 或 空 秕 粒 率 增 加 率 落 花 ( 果 叶 ) 率 或 空 秕 粒 率 (%): P=n 1 /n 2 100 P 为 落 花 ( 果 叶 ) 率 (%), n 1 为 药 剂 处 理 后 落 花 ( 果 叶 ) 数, n 2 为 处 理 前 花 ( 果 叶 ) 总 数 落 花 ( 果 叶 ) 率 或 空 秕 粒 率 增 加 率 (%): I=(T-C)/T 100 I 为 落 花 ( 果 叶 ) 率 或 空 秕 粒 率 增 加 率 (%); T 为 药 剂 处 理 的 落 花 ( 果 叶 ) 率 或 空 秕 粒 率 (%); C 为 空 白 对 照 落 花 ( 果 叶 ) 率 或 空 秕 粒 率 (%) 8.3 生 长 速 率 抑 制 率 生 长 速 率 :R=L/D R 为 生 长 速 率 (mm/d),l 为 植 株 或 枝 条 或 根 系 新 生 高 度 或 长 度 (mm), D 为 时 间 天 (d) 生 长 速 率 抑 制 率 (%): I=(R ck -R t )/ R ck 100 I 为 生 长 速 率 抑 制 率 (%), R ck 为 空 白 对 照 生 长 速 率,R t 为 药 剂 处
理 的 生 长 速 率 9 安 全 性 评 价 结 果 根 据 测 试 靶 标 作 物 的 经 济 价 值 和 药 害 症 状 及 伤 害 程 度, 评 价 药 剂 对 作 物 的 安 全 性 根 据 统 计 结 果 进 行 分 析 评 价, 写 出 正 式 试 验 报 告, 并 列 出 原 始 数 据 和 附 药 害 症 状 照 片