第 卷 第 期 年 月 环 境 科 学 学 报! "#$%&#% '% 何 秀 婷 程 章 聂 湘 平 等 %% 诺 氟 沙 星 对 阿 部 鲻 相 相 酶 活 性 及 3. 和.1-' 4& 表 达 影 响 5 % 环 境 科 学 学 报 1 6 ( -7 &. %%0+!#+&#+$# # ( '(! * 8 /! * 4& '!! #!#+ 3. *.1-' #+ 5 %! 1 诺 氟 沙 星 对 阿 部 鲻 相 相 酶 活 性 及!"# 和 "$ %&'# 表 达 影 响 何 秀 婷 程 章 聂 湘 平 李 凯 彬 赵 晓 艳 陈 菊 芳 % 暨 南 大 学 水 生 物 研 究 所 广 州 % 华 南 理 工 大 学 轻 工 与 食 品 学 院 广 州 % 中 国 水 产 科 学 研 究 院 珠 江 水 产 研 究 所 广 州 % 暨 南 大 学 环 境 工 程 系 广 州 收 稿 日 期 1 1 修 回 日 期 1 1 录 用 日 期 1 1 摘 要 通 过 饲 料 暴 露 的 方 式 研 究 了 抗 生 素 诺 氟 沙 星 &#+$# &)9 对 阿 部 鲻 相 相 代 谢 酶 活 性 以 及 3. 和.1 糖 蛋 白.1-' 4& 表 达 的 影 响 % 结 果 表 明 随 着 暴 露 时 间 的 延 长 &)9 对 阿 部 鲻 肝 脏 相 代 谢 酶.&2 04&2 均 表 现 出 先 诱 导 后 抑 制 的 作 用 % ( 时 &)9 的 暴 露 浓 度 为 - - : 对 代 谢 酶.&2 和 04&2 的 诱 导 达 到 最 大 值 % 当 暴 露 时 间 达 到 (.&2 和 04&2 均 受 到 显 著 抑 制 % 相 代 谢 酶, 6 和 ;2 在 ( 受 到 最 大 诱 导 经 过 ( 暴 露 后, 6 活 性 逐 渐 恢 复 到 正 常 水 平 而 ;2 含 量 在 - - : 浓 度 组 仍 然 维 持 较 高 水 平 % 3. 和.1-' 4& 表 达 量 随 着 暴 露 时 间 的 延 长 而 增 加 ( 达 到 最 大 %.&2 04&2, 6 ;2 3. 4& 和.1-' 4& 响 应 敏 感 适 合 作 为 &)9 暴 露 的 生 物 标 记 物 % 关 键 词 诺 氟 沙 星 阿 部 鲻 肝 脏 酶 活 3..1-' 文 章 编 号 1 1 1 中 图 分 类 号 % 文 献 标 识 码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基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 &#% 国 家 自 然 科 学 基 金 与 广 东 省 联 合 基 金 项 目 &#% 广 东 省 自 然 基 金 项 目 &#% ( & # $& $ )# * # #+ ( &#% ( # )# * # #+&) *, -*# -.#/ &#% * ( & $ )# * # #+, -*# - ( &#% 作 者 简 介 何 秀 婷 女 博 士 研 究 生 01 $ $#* (# %# 通 讯 作 者 责 任 作 者 01 $ ' % *% 0 - + $.(%2% * * 01 $ $#* (# %# 01 $ ' % *%
期 何 秀 婷 等 诺 氟 沙 星 对 阿 部 鲻 相 相 酶 活 性 及 3. 和.1-' 4& 表 达 影 响 ), 引 言 #* # 氟 喹 诺 酮 类 药 物 )$##< #$#!)=! 具 有 广 谱 高 效 毒 副 作 用 小 以 及 与 其 它 抗 菌 药 物 无 交 叉 耐 药 性 等 特 点 在 农 业 生 产 中 被 广 泛 使 用 以 防 治 各 类 疾 病 % 诺 氟 沙 星 &)9 是 喹 诺 酮 类 抗 菌 药 物 的 代 表 之 一 其 对 很 多 革 兰 氏 阴 性 杆 菌 和 部 分 革 兰 氏 阳 性 球 菌 有 抑 菌 或 杀 菌 作 用 张 致 平 在 水 产 养 殖 中 常 用 于 鱼 类 细 菌 性 暴 发 病 的 治 疗 % 养 殖 环 境 中 残 留 的 抗 生 素 会 随 着 废 水 的 排 放 进 入 水 环 境 % 河 流 湖 泊 和 海 洋 环 境 样 品 中 都 有 &)9 被 检 出 ' 其 中 在 珠 江 河 水 中 枯 季 诺 氟 沙 星 的 含 量 在 > - 9 : 是 目 前 世 界 上 已 报 道 的 水 体 中 &)9 含 量 较 高 的 区 域 之 一 叶 计 鹏 等 % 在 珠 江 三 角 洲 几 个 典 型 养 殖 区 沉 积 物 中 &)9 的 检 出 范 围 在 % >% - - : 在 养 殖 鱼 体 组 织 中 也 普 遍 能 检 出 其 残 留 量 均 比 其 它 喹 诺 酮 类 药 物 高 聂 湘 平 等 杨 永 涛 等 % 虽 然 &)9 对 藻 类 和 浮 游 动 物 的 毒 性 较 低 对 鱼 类 也 不 产 生 急 性 毒 性 & % 梁 惜 梅 等 但 在 水 体 沉 积 相 中 蓄 积 也 能 在 生 物 体 内 积 累 并 通 过 食 物 链 传 递 对 高 营 养 级 生 物 构 成 威 胁 从 而 影 响 生 态 系 统 和 人 类 健 康 % 阿 部 鲻 属 鲈 形 目 虎 鱼 科 是 我 国 常 见 的 河 口 鱼 类 栖 息 于 河 口 咸 淡 水 交 界 水 域 及 近 海 岸 浅 水 滩 涂 处 % 阿 部 鲻 是 底 栖 穴 居 鱼 类 有 领 域 感 生 活 于 沉 积 相 间 隙 水 环 境 是 沉 积 相 污 染 检 测 的 理 想 生 物 材 料 % 目 前 关 于 对 &)9 的 研 究 大 多 集 中 在 药 代 动 力 学 和 其 在 生 物 体 内 的 残 留 检 测 方 面 % 梁 惜 梅 等 通 过 水 体 暴 露 研 究 了 &)9 对 剑 尾 鱼 的 毒 性 效 应 结 果 表 明 对 其 肝 脏 组 织 中 的 相 相 有 不 同 程 度 的 响 应 % 有 文 献 报 道 鱼 类 在 代 谢 喹 诺 酮 类 药 物 的 过 程 中 产 生 一 些 具 有 亲 电 子 活 性 的 中 间 产 物 可 能 诱 导 生 物 体 内. 酶 活 性 的 变 化 " # % % 但 关 于 &)9 通 过 摄 食 暴 露 对 阿 部 鲻 生 长 代 谢 的 影 响 尚 未 见 报 道 在 现 代 水 产 养 殖 生 产 中 抗 生 素 药 物 的 使 用 大 多 是 通 过 饵 料 途 径 施 用 的 所 以 探 讨 鱼 体 药 物 的 食 物 暴 露 途 径 比 水 体 暴 露 途 径 更 接 近 于 水 产 养 殖 实 际 状 况 % 本 试 验 参 照 渔 业 上 药 饵 投 喂 的 浓 度 通 过 &)9 饵 料 梯 度 浓 度 暴 露 研 究 其 肝 脏 组 织 内 氨 基 比 林 1&1 脱 甲 基 酶.&2 红 霉 素 1&1 脱 甲 基 酶 04&2 谷 胱 甘 肽 硫 转 移 酶, 6 丙 二 醛 ;2 的 响 应 以 及 3. 和.1 糖 蛋 白.1-' 分 子 水 平 表 达 量 以 评 价 &)9 对 鱼 类 相 相 代 谢 酶 活 性 以 及 3. 和.1 糖 蛋 白.1-' 4& 表 达 的 影 响 并 筛 选 出 合 适 的 生 物 标 记 物 以 指 示 &)9 类 抗 生 素 药 物 污 染 的 暴 露 % -, 材 料 与 方 法 ; $! * (#*! % 试 验 药 品 与 试 剂 试 验 抗 生 素 诺 氟 沙 星 - 公 司 纯 度? @ 氨 基 比 林 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 红 霉 素 北 京 鼎 国 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司, / 分 装 还 原 辅 酶 &2. 上 海 前 尘 生 物 科 技 有 限 公 司 4#( 分 装 1 硫 代 巴 比 妥 酸 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 纯 度 % @ 1 羟 基 1 异 吩 唑 酮 4!#+ 4) 1 乙 氧 基 1 异 吩 唑 酮 0(#!#+ 04) 购 自 - 公 司 蛋 白 测 定 试 剂 盒 和 谷 光 苷 肽 1 转 移 酶 测 定 试 剂 盒, 6 购 自 中 国 南 京 建 成 生 物 有 限 公 司 %4& 抽 提 试 剂 盒 和 461. 4 试 剂 盒 购 自 宝 生 物 工 程 大 连 有 限 公 司 6 < 2& 聚 合 酶 2& 分 子 ; 购 自 广 州 合 达 生 物 公 司 低 溶 点 琼 脂 糖 为 西 班 牙 原 装 2 公 司 产 品 其 它 试 剂 均 为 国 产 分 析 纯 % % 主 要 仪 器 与 设 备 6( #+# 超 低 温 冰 箱 - > 冷 冻 高 速 离 心 机 6( # $ #! 紫 外 可 见 分 光 度 6 )1 荧 光 分 光 度 计 6( #' 计 A #. 4 扩 增 仪 器!( 水 平 电 泳 仪 A #14 * 凝 胶 成 像 系 统 % % 试 验 生 物 野 外 河 口 区 采 集 的 成 年 阿 部 鲻 平 均 体 长 % B% C 平 均 质 量 % B D - C % 试 验 用 水 是 曝 气 ( 以 上 的 自 来 水 ' C % 保 持 B E 总 硬 度 以 碳 酸 钙 计 为 % - 9 : 实 验 鱼 种 在 药 物 暴 露 前 先 在 实 验 条 件 下 驯 养 一 周 % % 试 验 方 法 试 验 在 体 积 为 9 的 水 族 箱 中 进 行 每 个 水 族 箱 放 尾 鱼 采 用 饲 料 暴 露 设 置 个 浓 度 梯 度 组 和 空 白 对 照 组 实 验 期 间 不 充 气 定 期 观 测 水 温 ' 值 和 溶 解 氧 % 分 别 准 确 称 取 &)9 - 按 比 例 搅 拌 混 入 空 白 饲 料 中 饲 料 由 中 国 水 产 科 学 研 究 院 珠 江 水 产 研 究 所 提 供 制 成 药 物 浓 度 分 别 为 - - : 的 人 工 配 合 饲 料 饵 料 重
新 成 型 保 持 一 定 的 固 体 形 状 日 投 喂 量 按 鱼 总 体 重 的 @ 计 算 即 相 当 于 平 均 每 天 每 克 鱼 约 投 喂 - 6 6 诺 氟 沙 星 恩 诺 沙 星 水 产 养 殖 使 用 规 范 推 荐 的 &)9 用 量 为 每 天 每 克 鱼 体 重 > - 剂 量 给 药 对 照 组 投 喂 未 经 &)9 处 理 的 空 白 饲 料 试 验 期 间 每 日 定 时 投 喂 次 投 喂 后 内 试 验 鱼 摄 食 @ 以 上 的 饵 料 % 试 验 开 始 后 ( ( 和 ( 从 不 同 浓 度 暴 露 的 水 族 箱 中 取 鱼 各 尾 尾 用 于 酶 活 性 测 定 尾 用 于 4& 半 定 量 试 验 取 出 肝 脏 后 立 即 置 于 : E 超 低 温 冰 箱 内 保 存 备 测 用 于 半 定 量 试 验 的 肝 脏 样 品 在 提 取 总 4& 后 也 置 于 : E 超 低 温 冰 箱 内 保 存 备 测 % % 样 品 的 处 理 及 酶 活 性 的 测 定 将 保 存 的 肝 脏 样 品 取 出 在 预 冷 的 研 钵 中 加 入 少 许 石 英 砂 和 % 96!1 蔗 糖 % #$ 9 : 6!1 $ D #$ 9 蔗 糖 : % #$ 9 : 026' C % 缓 冲 液 研 碎 后 转 入 离 心 管 离 : 心 上 清 液 为 粗 酶 液 蛋 白 测 定 采 用 考 马 斯 亮 兰 法 用 小 牛 血 清 蛋 白 作 标 准 曲 线 % % % 氨 基 比 林 1&1 脱 甲 基 酶.&2 活 性 测 定 氨 基 比 林 1&1 脱 甲 基 酶 活 性 测 定 依 据 8!( 原 理 采 用 &!( 比 色 法 进 行 &!( % 酶 活 单 位 #$ : - : '# 以 每 毫 克 蛋 白 单 位 时 间 内 的 甲 醛 生 成 量 表 示 % % % 红 霉 素 脱 甲 基 酶 04&2 活 性 除 去 底 物 应 用 #$ 9 的 红 霉 素 外 : 其 余 测 定 步 骤 同 氨 基 比 林 1&1 脱 甲 基 酶 活 性 测 定 % % % 谷 胱 甘 肽 硫 转 移 酶, 6 测 定 参 照 - 方 法 进 行 -% % 一 个, 6 活 力 单 位 定 义 为 每 - 蛋 白 质 扣 除 非 酶 反 应 以 1 氯 1 1 二 硝 基 苯 2&A 为 底 物 每 使, 浓 度 下 降 #$ 9 : % % % 丙 二 醛 ;2 含 量 的 测 定 测 定 采 用 硫 代 巴 比 妥 酸 6A 法 参 照 (# *! 稍 作 改 动 % 吸 取 粗 酶 液 9 对 照 加 9 蒸 馏 水 加 入 9 质 量 分 数 为 % @ 的 6A 溶 液 混 匀 将 混 合 物 于 沸 水 浴 上 反 应 迅 速 冷 却 后 再 离 心 % 取 上 清 液 测 定 波 长 下 的 吸 光 度 %;2 的 含 量 均 以 每 毫 克 蛋 白 含 量 计 算 % % 半 定 量 461. 4 取 等 量 肝 脏 组 织 总 4& 利 用 461. 4 试 剂 盒 6 合 成 第 一 链 2&% 因 1 基 因 在 各 个 环 境 科 学 学 报 卷 物 种 及 组 织 内 的 高 度 保 守 性 所 以 将 1 基 因 在 组 织 内 的. 4 扩 增 产 物 作 为 参 照 物 % 参 照 已 发 表 的 鱼 类 管 家 基 因 1 的 序 列 设 计 了 一 对 特 异 性 引 物 上 游 引 物 - ----- - 下 游 引 物 --- - - % 根 据 已 发 表 的 阿 部 鲻 3. 和.1-' 设 计 特 异 性 引 物 程 章 等 程 章 等 3. 上 游 引 物 -- - 下 游 引 物 %.1-' 上 游 引 物 - - -- - --- 下 游 引 物 ---- -- -- % 加 入 等 量 的 2& 9 模 板 倍 的. 4 缓 冲 液 采 用 严 格 一 致 的 9. 4 反 应 体 系 分 别 对 1 3. 和.1-' 基 因 进 行 扩 增 %1 扩 增 反 应 条 件 为 E 下 预 变 性 E! E! E 个 循 环 循 环 结 束 后 E 再 延 伸 % 3. 扩 增 反 应 条 件 为 E 下 预 变 性 E! E! E! 个 循 环 循 环 结 束 后 E 再 延 伸 %.1-' 扩 增 反 应 条 件 为 E 下 预 变 性 E! E! E! 个 循 环 循 环 结 束 后 E 再 延 伸 % 反 应 完 成 后 从 各 反 应 体 系 准 确 吸 取 9. 4 产 物 在 % @ 琼 脂 糖 凝 胶 进 行 电 泳 分 离 溴 化 乙 锭 染 色 后 用 凝 胶 成 像 系 统 及 = 软 件 进 行 分 析 结 果 以 3..1 -' 与 1 4& 的 461. 4 产 物 亮 度 之 比 表 示 % % 数 据 处 理 实 验 结 果 均 为 尾 鱼 数 据 的 平 均 值 数 据 误 差 线 为 标 准 误 差 采 用. % 统 计 软 件 对 数 据 进 行 单 因 素 方 差 分 析 # 1 & " % % 表 示 处 理 组 与 对 照 组 差 异 显 著 %., 结 果 4!$! % 不 同 浓 度 &)9 对 阿 部 鲻 相 代 谢 酶.&2 和 04&2 活 性 的 影 响 &)9 对 阿 部 鲻.&2 的 活 性 影 响 见 图 ( 时.&2 在 &)9 浓 度 为 和 - - : 受 到 抑 制 - - : 与 对 照 组 存 在 显 著 差 异 D 和 - - :.&2 受 到 显 著 性 诱 导 % % ( 时.&2 除 在 - - 仍 然 是 受 抑 制 : 外 其 它 浓 度 均 有 不 同 程 度 的 诱 导 其 中 - - :.&2 的 活 性 比 ( 时 要 低 % ( 时 各 浓 度.&2 的 活 性 均 受 到 抑 制 - - 均 受 到 : 显 著 性 抑 制 % %
期 何 秀 婷 等 诺 氟 沙 星 对 阿 部 鲻 相 相 酶 活 性 及 3. 和.1-' 4& 表 达 影 响 &)9 对 阿 部 鲻 04&2 的 活 性 影 响 见 图 随 着 暴 露 时 间 的 延 长 在 低 浓 度 范 围 - - : 04&2 的 活 性 逐 渐 受 到 抑 制 在 高 浓 度 范 围 - - : 04&2 的 活 性 先 受 到 不 同 程 度 的 诱 导 后 逐 渐 受 到 抑 制 % ( 时 和 - - : 04&2 的 活 性 均 和 对 照 组 存 在 显 著 性 差 异 D 分 别 是 对 照 组 的 % 和 % 倍 ( 时 各 浓 度 组 04&2 活 性 都 受 到 不 同 程 度 的 显 著 性 抑 制 作 用 D ( 时 各 浓 度 的 抑 制 作 用 大 于 ( 其 中 - - : 对 04&2 的 抑 制 作 用 最 大 比 对 照 组 降 低 了 % @% 图 ),'/01 对 阿 部 鲻 肝 脏 相 代 谢 酶 #"' 和 &' 活 性 的 影 响 % % 表 示 与 对 照 组 比 较 有 显 著 性 差 异 ) -%0+!#+* + '#! # #!#+&)9 # ( '(! 8!.&2 * 04&2 % D $! - + $ * +!! * ( # #$-#' +#( # #$-#' % 不 同 浓 度 &)9 对 阿 部 鲻 相 代 谢 酶, 6 活 性 和 ;2 含 量 的 影 响 不 同 浓 度 &)9 对 阿 部 鲻, 6 的 影 响 见 图 随 着 暴 露 时 间 的 延 长 各 浓 度 组 的, 6 活 性 受 到 诱 导 后 又 受 到 抑 制 ( 时, 6 在 - - : 都 受 到 显 著 性 诱 导 % ( 的 诱 导 程 度 最 大 均 与 对 照 组 存 在 显 著 差 异 % 其 中 - - : - - : 分 别 比 对 照 组 升 高 了 % 和 D 倍 (, 6 活 性 出 现 下 降 的 趋 势 当 &)9 的 浓 度 为 - - : - - : 其 活 性 被 抑 制 % &)9 对 阿 部 鲻 ;2 含 量 的 影 响 见 图 在 各 个 暴 露 时 间 段 随 着 暴 露 的 增 加 ;2 的 含 量 成 增 加 趋 势 % ( 时 在 各 浓 度 组 间 ;2 都 有 不 同 程 度 的 增 加 其 中 - - : ;2 的 含 量 和 对 照 组 存 在 显 著 性 差 异 % % ( 时 随 着 浓 度 的 增 加 ;2 的 含 量 达 到 最 高 浓 度 组 - - : ;2 的 含 量 最 高 与 对 照 组 存 在 显 著 性 差 异 % 是 对 照 组 的 % 倍 % ( 时 除 了 浓 度 为 - - : ;2 含 量 比 对 照 组 少 外 其 它 都 比 对 照 组 高 - - 组 : ;2 含 量 最 高 与 对 照 组 含 量 存 在 显 著 性 差 异 % % 图 -,'/01 对 阿 部 鲻 相 代 谢 酶 活 性 和 # 含 量 的 影 响 % % 表 示 与 对 照 组 比 较 有 显 著 性 差 异 ) -%0+!#+* + '#! # #!#+ #+$# # ( '(! 8!, 6 * ;2 % % $! - + $ * +!! * ( # #$-#' +# ( # #$-#'
% 不 同 浓 度 &)9 对 阿 部 鲻 3. 和.1 -' 4& 表 达 量 的 影 响 图 所 示 3. 4& 的 表 达 量 随 暴 露 时 间 的 延 长 而 增 加 % 在 不 同 浓 度 的 &)9 暴 露 下 - - : 的 3. 4& 表 达 量 在 ( ( 和 ( 取 样 中 都 高 于 同 次 取 样 的 其 它 浓 度 与 对 照 组 存 在 显 著 性 差 异 % % 在 各 个 暴 露 时 间 段 3. 4& 的 表 达 量 总 体 受 到 诱 导 并 且 呈 现 出 钟 型 曲 线 的 变 化 趋 势 % 随 着 暴 露 浓 度 的 增 加 3. 4& 的 表 达 先 是 受 到 诱 导 当 暴 露 浓 度 环 境 科 学 学 报 卷 达 到 - - : 受 到 最 大 程 度 诱 导 随 着 暴 露 浓 度 的 增 加 诱 导 程 度 有 所 下 降 %.1-' 4& 的 表 达 量 总 体 上 也 呈 现 随 时 间 增 加 表 达 量 增 长 的 趋 势 见 图 % 在 不 同 浓 度 的 &)9 暴 露 下 各 浓 度 组 的 表 达 量 总 体 在 第 七 天 出 现 峰 值 并 且 均 与 对 照 组 存 在 显 著 性 差 异 D - - : 的.1-' 4& 表 达 量 最 高 受 到 显 著 诱 导 % % ( 和 ( 时 各 暴 露 浓 度 组.1-' 4& 表 达 受 到 轻 微 诱 导 但 各 浓 度 之 间 的 差 异 不 明 显 % 图.,'/01 对 阿 部 鲻!")#) 和 "$ %&'# 表 达 的 影 响 % % 表 示 与 对 照 组 比 较 有 显 著 性 差 异 ) -%0+!#+* + '#! # #!#+ #+$# # 3. *.1-' 4& '!! #! % %! - + $ * +!! * ( # #$-#', 讨 论 2!! # 氨 基 比 林 1&1 脱 甲 基 酶.&2 和 红 霉 素 1&1 脱 甲 基 酶 04&2 分 别 是. 家 族 中 3.A 和 3. 活 性 的 标 志 酶 是 生 物 体 内 参 与 外 源 污 染 物 相 反 应 代 谢 过 程 中 重 要 的 两 个 解 毒 酶 % 3.A 主 要 代 谢 各 种 亲 脂 性 药 物 和 固 醇 类 药 物 陈 大 健 8 #+ 使 其 转 化 为 易 于 排 泄 的 代 谢 产 物 从 而 起 到 解 毒 作 用 3. 是 肝 3. 中 最 重 要 的 成 分 约 占 3. 总 量 的 @ >@ # % 参 与 约 @ 临 床 药 物 的 生 物 转 化 在 鱼 类 中 3. 是 大 部 分 亲 脂 性 或 弱 中 性 有 机 化 合 物 的 主 要 代 谢 酶 * % % 本 实 验 中 诺 氟 沙 星 短 时 间 ( 暴 露 后.&2 表 现 为 低 浓 度 诱 导 高 浓 度 抑 制 04&2 在 高 浓 度 组 被 显 著 诱 导 % 这 与 多 数 文 献 报 道 氟 喹 诺 酮 )=! 中 的 多 种 药 物 对 人 体 内 肝 脏. 代 谢 酶 的 主 要 表 现 为 抑 制 作 用 不 太 一 致 张 沂 等 刘 荔 等 这 是 否 与 生 物 的 毒 性 兴 奋 效 应 有 关 (#!! 还 有 待 进 一 步 的 试 验 确 证 % 但 随 暴 露 时 间 延 长 特 别 是 暴 露 时 间 达 ( 时.&2 和 04&2 两 种 酶 的 活 性 都 受 到 显 著 性 抑 制 作 用 D % 可 能 是 由 于 随 着 药 物 在 组 织 内 的 积 累 与 代 谢 的 速 度 加 快 其 中 间 产 物 含 量 增 加 进 而 可 能 抑 制.&2 和 04&2 活 性 降 低 % 有 种 假 说 认 为 氟 喹 诺 酮 )=! 药 物 位 1 氧 化 代 谢 中 间 产 物 量 的 积 累 对. 酶 活 性 有 抑 制 作 用 *!% % 氟 喹 诺 酮 )=! 中 的 多 种 药 物 如 左 氧 氟 沙 星 张 沂 等 环 丙 沙 星 " $ #% 等 对 3. 酶 有 选 择 性 抑 制 作 用 %" # 等 研 究 表 明 恩 诺 沙 星 对 舌 齿 鲈! 肝 脏 04&2 的 活 性 存 在 抑 制 作 用 % 韩 华 等 探 讨 了 喹 诺 酮 类 药 物 牙 鲆 肝 药 物 代 谢. 酶 活 性 的 影 响 结 果 表 明 &)9 对.&2 和 04&2 酶 活 性 均 具 有 显 著 性 抑 制 作 用 % %)( 等 研 究 表 明 喹 诺 酮 类 对. 酶 活 性 抑 制 能 力 跟 底 物 分 子 中 位 上 没 有 取 代 基 或 者 位 哌 嗪 基 和 无 甲 基 等 取 代 基 有 关 %. 酶 的 活 性 可 受 到 一 些 药 物 诱 导 或 抑 制 其 抑 制 作 用 可 通 过 多 种 途 径 实 现 如 抑 制 蛋 白 的 合 成 降 低 细 胞 色 素. 含 量 影 响 药 物 氧 化 过 程 中
期 何 秀 婷 等 诺 氟 沙 星 对 阿 部 鲻 相 相 酶 活 性 及 3. 和.1-' 4& 表 达 影 响 电 子 传 递 及 辅 酶 的 合 成 9! % %, 6 是 一 类 催 化 谷 胱 甘 肽 与 多 种 疏 水 性 化 合 物 的 亲 电 子 基 团 相 连 接 的 相 代 谢 酶 这 种 连 接 作 用 是 生 物 体 进 行 脱 毒 和 排 毒 的 重 要 方 式 4 %, 6 具 有 消 除 体 内 自 由 基 和 解 毒 双 重 功 能 % 丙 二 醛 ;2 是 自 由 基 攻 击 膜 不 饱 和 脂 肪 酸 的 产 物 可 以 与 蛋 白 质 的 游 离 氨 基 作 用 引 起 蛋 白 质 分 子 内 和 分 子 间 交 联 导 致 细 胞 损 伤. ' * 9# #*! % 本 研 究 中, 6 的 活 性 在 ( 达 到 最 大 值 ( 时 其 活 性 又 降 低 到 与 对 照 组 相 当 % 这 可 能 是 由 于 随 着 暴 露 时 间 的 延 长 鱼 体 体 内 积 累 了 较 多 的 氧 化 产 物 如 ;2 含 量 增 加 导 致 肝 脏 内, 6 酶 活 性 受 到 抑 制 甚 至 蛋 白 质 受 到 较 大 程 度 的 损 伤 % 鱼 体 在 药 物 中 暴 露 ( 已 超 过 了 最 大 诱 导 的 时 间 使 其 活 性 受 诱 导 程 度 将 逐 渐 下 降 或 是 稳 定 不 变 % 吴 伟 等 对 溴 氰 菊 酯 对 罗 非 鱼 谷 胱 甘 肽 及 转 移 酶 的 影 响 研 究 中 有 类 似 的 规 律 以 不 同 浓 度 的 溴 氰 菊 酯 处 理 罗 非 鱼 * 体 内, 6 的 活 性 是 先 受 到 诱 导 后 抑 制 % 但 也 有 研 究 表 明, 6 随 着 暴 露 时 间 的 增 加 其 活 性 增 加 ( 时 达 到 最 大 聂 湘 平 等 这 可 能 与 污 染 物 的 暴 露 浓 度 和 暴 露 方 式 有 关 % 随 着 &)9 暴 露 浓 度 的 增 加, 6 的 活 性 有 减 少 的 趋 势 而 ;2 的 含 量 逐 渐 增 加 % 由 于 低 浓 度 暴 露 时, 6 活 性 增 加 以 降 低 暴 露 物 对 机 体 产 生 的 危 害 % 随 着 暴 露 浓 度 的 升 高 超 出 了, 6 的 承 载 力 ;2 含 量 逐 渐 升 高 肝 脏 逐 渐 受 到 损 伤 %;2 是 细 胞 氧 化 代 谢 产 物 其 含 量 高 低 反 应 了 机 体 细 胞 受 到 自 由 基 攻 击 的 程 度 % 本 试 验 中 ( 时 ;2 的 含 量 比 ( 时 有 所 降 低 可 能 是 由 于 机 体 存 在 自 我 修 复 自 由 基 造 成 氧 化 损 伤 的 机 制 % 3. 是 一 种 微 粒 体 加 单 氧 酶 催 化 多 种 有 机 异 生 物 质 如.!. A! 硝 基 芳 烃 化 合 物 等 发 生 生 物 转 化 的 第 相 反 应,#! )F$ % 而.1-' 是 一 种 膜 转 运 糖 蛋 白 是 一 种 6. 依 赖 性 膜 转 运 体 外 排 进 入 细 胞 的 异 源 性 物 质 从 而 防 止 异 物 或 有 害 物 质 对 机 体 的 侵 害!. / %.1-' 被 普 遍 认 为 主 要 参 与 相 代 谢 反 映 % 有 研 究 报 道 细 胞 色 素. 某 些 亚 科 和.1-' 有 着 相 似 的 组 织 分 布 及 相 似 的 底 物 此 外.1-' 的 调 节 子 也 常 是 某 些 细 胞 色 素. 的 调 节 子 $ -( 0* *! % 两 个 系 统 共 同 防 止 细 胞 内 异 生 物 及 毒 物 的 积 聚 % 本 研 究 实 验 结 果 表 明 喂 食 含 &)9 饲 料 组 3. 和.1-' 基 因 的 表 达 水 平 均 比 空 白 组 高 % 3. 和.1-' 4& 的 相 对 表 达 量 与 &)9 暴 露 浓 度 间 存 在 一 定 的 浓 度 1 效 应 关 系 中 浓 度 组 和 - - : 的 平 均 表 达 量 较 低 浓 度 组 和 高 浓 度 组 高 出 现 这 种 适 应 性 诱 导 的 原 因 可 能 是 由 于 随 着 机 体 内 污 染 物 蓄 积 浓 度 的 升 高 肝 细 胞 中 的 酶 蛋 白 受 毒 性 的 影 响 而 导 致 相 应 的 基 因 表 达 量 减 少 % 在 相 同 浓 度 &)9 暴 露 下 3. 4& 的 表 达 量 有 随 暴 露 时 间 的 延 长 而 增 长 的 趋 势 有 许 多 相 关 的 研 究 报 道 在 一 定 浓 度 毒 物 的 胁 迫 下 由 3. 编 码 的 04 2 活 性 被 诱 导 硝 基 苯 苯 并 芘 多 氯 联 苯 等 多 环 芳 烃 物 质 对 鱼 肝 微 粒 体 04 2 的 活 性 均 有 诱 导 作 用 王 咏 等 徐 镜 波 等 王 菊 英 等 李 康 等 %.1-' 4& 的 表 达 量 有 随 暴 露 时 间 的 延 长 而 增 加.1-' 解 毒 的 作 用 跟 肿 瘤 细 胞 中 的 抗 药 性 机 理 ;241$ *-!! 相 类 似.1-' 可 将 药 物 从 细 胞 内 外 排 而 使 胞 内 药 物 浓 度 降 低 从 而 降 低 药 效 % 因 此.1-' 与 底 物 及 调 节 子 之 间 的 相 互 作 用 能 影 响 药 物 的 吸 收 分 布 代 谢 和 排 泄 A * % %, 结 论 # $! #! 在 不 同 浓 度 &)9 对 阿 部 鲻 的 饵 料 暴 露 中 随 着 暴 露 时 间 的 增 加.&2 和 04&2 的 活 性 逐 渐 被 抑 制 ( 时 达 到 极 显 著 性 抑 制, 6 的 活 性 和 ;2 的 含 量 先 增 加 后 降 低 3. 和.1-' 的 表 达 量 逐 渐 增 加 % 阿 部 鲻 肝 脏 微 粒 体 相 相 代 谢 酶 的 诱 导 抑 制 和 暴 露 时 间 密 切 相 关 不 同 酶 的 诱 导 或 抑 制 时 间 不 同 %, 6 和 ;2 都 在 ( 内 受 到 显 著 性 诱 导 适 合 作 为 离 投 药 期 时 间 较 短 的 &)9 的 生 物 标 记 物 3. 和.1-' 在 ( 是 受 到 显 著 性 诱 导 适 合 作 为 离 投 药 期 时 间 为 一 周 或 以 上 的 &)9 的 生 物 标 记 物 随 着 暴 露 时 间 的 延 长 &)9 对 阿 部 鲻.&2 和 04&2 的 活 性 具 有 较 强 的 抑 制 作 用 而 且 这 两 种 酶 对 不 同 药 物 引 起 的 反 应 有 一 定 选 择 性 因 此 可 以 作 为 专 一 性 较 高 的 生 物 标 记 物 结 合 其 它 指 标 共 同 指 示 污 染 物 在 环 境 中 的 残 留 % 责 任 作 者 简 介 聂 湘 平 男 博 士 研 究 员 主 要 研 究 方 向 为 环 境 生 物 学 %01 $ ' % *% % 参 考 文 献 & *,; 6#/ 4 ( $9 %%.( $#- $!! #+( #(#. 3. - + $ 5 %;#$ $
0/#$ # 1 A * ; A $# ; ( ; 0 %%0 '!! # #+.1-$ #1 '#! $+!( " # '#! * # / # $ # #! 5 %< 6# #$#- 1 ( #5!56%%0/ * #+# * /!!! $ - $! +!( $ % % $ / #!#!! $ #!$ '#! * #!#$ $ / #$ * # * ( 5 % 0 / # $ 6# #$#- * (! 1 陈 大 健 % % 鲫 鱼 肝 微 粒 体 细 胞 色 素. 酶 系 的 初 步 研 究 2 % 南 京 南 京 农 业 大 学 动 物 医 学 院 % 1 ( 25% % ' $!* # ( ' #!# $ #(#. & ' 2 %& - #$ - #+" ; * #+& -- $ $ /! % 1 (! 程 章 聂 湘 平 王 芳 等 % % 阿 部 鲻. 克 隆 与 分 析 5 % 水 生 生 物 学 报 1 ( -7 &. -) % % $# - *! < $!! #+. ' 5 % 6 *# #$#- 1 (! 程 章 聂 湘 平 王 芳 等 % % 阿 部 鲻.1-' 蛋 白 编 码 区 基 因 克 隆 与 分 析 5 % 安 全 与 环 境 学 报 1 ( -7 &. -) % % $# - *! < $ $!!#+.1-' ' 5 %5# $#+ + * 0 / # 1 (! )( # $, ; ) % %= #$# $ -! $ #!( '! * / # ( # #+( ( #(#.!#+# 3. 5 %;#$ $.( #$#- 1,#! )F$ 9% %6( #(#.!! +!( < # #$#- * / # $ # # - 5 %< 6# #$#- 1 -.!; 5 5 # A% %,$ ( 1 1!+!! ( +! 8! ' ( ' * +# # 5 % 5# $#+A #$#- (! 1 韩 华 李 健 李 吉 涛 等 % % 喹 诺 酮 类 药 物 对 牙 鲆 肝 药 物 代 谢 酶 活 性 的 影 响 5 % 海 洋 科 学 1 9 5 9 56 % %0+ #+< #$#!# / #+ ( ' *-1 #$ 8-8! 5 % ;! 1 (! ' &% %" #! ( < *! $ / # 5 %0#$#- $ * #! 1 9!. 9 #. #$ % % * # #+ ( ' # #1# -!! $ ' +# # #+ #(# '1 % *# $ # / 5 % # '!4 *! *# *!*!!G!* $ *G *!!% G 2!& $! 1 梁 惜 梅 鹿 金 雁 聂 湘 平 等 %% 饲 料 添 加 剂 叔 丁 基 对 羟 基 茴 香 醚 和 抗 生 素 诺 氟 沙 星 对 剑 尾 鱼 的 毒 性 效 应 5 % 环 境 科 学 学 报 1 9 - ; 9 53 &. %%6# #+( +##* ** / A $ * ( *#!#$ * # &)9 #+$# #! #* $ +!( 5 %! 1 (! 环 境 科 学 学 报 卷 李 康 周 忠 良 陈 立 侨 等 % % 苯 并 芘 对 鲫 鱼 生 物 标 志 物 的 影 响 研 究 5 % 环 境 科 学 研 究 1 9 7(# 7 9 ( 9 = % %!!! #+/ #! #! & '#! * # 8# ' 5 % 4! ( #+0 / # $! 1 (! 刘 荔 刘 嵘 吴 畅?% % 乳 酸 卡 德 沙 星 对 大 鼠 肝. 酶 活 性 的 影 响 5 % 中 国 药 科 大 学 学 报 1 9 9 9 4 % %0+ #+ * #+$# $ # 3. / $ / % 5 %5# $#+ (.( $ /! 1 (! # 3 * 6 # 6 % %;$ '$ +#!#+(. '! * ( #! /! %! ( 8 # * # '!# ( (#! #+ ( 5 % A #( $.( #$#- 1 &!( 6% %6( #$#! # #++# $* ( *!#+ ( 8!( # 5 %A #( $5# $ 1 聂 湘 平 王 翔 李 凯 彬 等 % % 抗 生 素 药 物 环 丙 沙 星 对 剑 尾 鱼 的 毒 性 效 应 5 % 中 山 大 学 学 报 自 然 科 学 版 1 &. - 9 A % %6# +!#+ '#+$# ( *#($# * #! #* $+!( 5 % & $ /!!! 1 (! &., 5, 9 53 % %0+ #+ #+$# * $ * ( *#!#$ # ( +!( # $- # % 5 %0## #$#- 1 聂 湘 平 何 秀 婷 杨 永 涛 等 % % 珠 江 三 角 洲 养 殖 水 体 中 喹 诺 酮 类 药 物 残 留 分 析 5 % 环 境 科 学 1 &. 6 3-36 % % /! - # #+< #$#! < $ / # #+(. $2 $ 5 %0 / # $ 1 (! 农 业 部 % % 6 % 诺 氟 沙 星 恩 诺 沙 星 水 产 养 殖 使 用 规 范 % 北 京 中 华 人 民 共 和 国 农 业 部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
期 何 秀 婷 等 诺 氟 沙 星 对 阿 部 鲻 相 相 酶 活 性 及 3. 和.1-' 4& 表 达 影 响. 8! #+$# (! 5 %< 6# #$#- 1 25 8 #+9% %.( # $ * # #+ #(# 1 - '! # 5 %A #( $5# $ 1! ;. / %% 1 / $ #!( '!#+ $ *-!! /!! 5 % ; * $ (! 1 *! 5 " 6A / * 9% %6( +$ #+ < #$# * / /!# ( #'( $ $ 5 %A!( 5# $ #+ $ $.( #$#- 1 王 菊 英 霍 传 林 韩 庚 辰 等 %% 多 氯 联 苯 A1 对 牙 鲆 肝 脏 中 04 2 活 性 的 诱 导 作 用 研 究 5 % 海 洋 学 报 1-53 # 9, %% * # #+04 2 / '#$ ($# * '( $ A1 5 % #$#- 1 (! 王 咏 王 春 霞 徐 静 波 %% 多 环 芳 烃 化 合 物 对 鲤 鱼 肝 微 粒 体 04 2 的 体 外 诱 导 5 % 环 境 科 学 学 报 1-3 - 5A%%04 2 * # #+ ' $ / #!#.! 1/ # 5 %! 1 (! 吴 伟 陈 家 长 冷 春 梅 等 % % 溴 氰 菊 酯 对 罗 非 鱼 谷 胱 甘 肽 及 转 移 酶 的 影 响 5 % 中 国 环 境 科 学 1 ( 57 9 - ; % %6( + #+* $ ( # -$ ( # * -$ ( # 1 1!+! ( #* #+ $ ' 5 % ( 0 / # $ 1 (! 杨 永 涛 何 秀 婷 聂 湘 平 等 % % 广 州 地 区 淡 水 鱼 体 内 喹 诺 酮 类 药 物 残 留 调 查 5 % 环 境 与 健 康 杂 志 1 3-36 6 &. % %. $ /! - # #+ ( < #$#! (!$!!!#++#+!(!#$ * +# (!, -8(# 5 %5# $#+0 / # * $( 1 (! 叶 计 朋 邹 世 春 张 干 等 % % 典 型 抗 生 素 类 药 物 在 珠 江 三 角 洲 水 体 中 的 污 染 特 征 5 % 生 态 环 境 1 3 5. 7# 7( -, % % (!!#+! $ * #! ( < / # #+(. $4 / 2 $ #( ( 5 %0#$#- * 0 / # 1 (! 徐 镜 波 王 咏 张 蕾 等 %% 种 硝 基 苯 对 鱼 肝 微 粒 体 04 2 活 性 的 影 响 5 % 环 境 科 学 研 究 1 5A -3 7( -9 %%0+ #+ # 8!# 8 / #+04 2 ' ( ' #!# $!! 5 % 4! ( #+0 / # $! 1 (! 张 沂 翟 淮 敏 鲍 燕 燕 等 %% 左 旋 氧 氟 沙 星 对 大 鼠 肝 重 肝 微 粒 体 蛋 白 质 及 细 胞 色 素. 的 影 响 5 % 解 放 军 药 学 学 报 1 7( -3 7( ; A #3 3 %%0+!#+$ /#+$# # $ / -(# #+ #!# $'# * #(#. #+! 5 %.( $5# $#+ (!. #'$!9 # 1 (! 张 沂 邸 秀 珍 任 婷 麟 等 % % 甲 磺 酸 加 替 沙 星 对 大 鼠 肝 微 粒 体 细 胞 色 素. 酶 系 的 影 响 5 % 解 放 军 药 学 学 报 1 7( -3 2 7 4 69 % %6( (!! +!#+ - +$# # $ / #!# #(#.! 5 %.( $5# $#+ (!. #'$!9 # 1 (! 张 致 平 % % 喹 诺 酮 类 抗 菌 药 物 研 究 的 新 进 展 5 % 中 国 抗 生 素 杂 志 1 7( -7.% %& '#-!!+#! ( < #$#! 5 % (! 5# $#+ #! 1 (!