696 注 射 用 芪 红 脉 通 配 液 除 杂 工 艺 研 究 祝 倩 倩 1, 萧 伟 2*, 孙 永 成 2, 徐 连 明 2, 王 伟 1. 南 京 中 医 药 大 学, 江 苏 南 京 210000 2. 江 苏 康 缘 药 业 股 份 有 限 公 司, 江 苏 连 云 港 222001 2 摘 要 : 目 的 以 注 射 用 芪 红 脉 通 为 研 究 对 象, 确 定 制 剂 工 艺 超 滤 前 最 佳 除 杂 技 术 方 法 考 察 冷 藏 离 心 活 性 炭 吸 附 组 合 工 艺 对 药 液 中 杂 质 及 有 关 物 质 的 去 除 情 况 以 黄 芪 总 皂 苷 黄 芪 甲 苷 羟 基 红 花 黄 色 素 A 的 质 量 浓 度 固 含 物 减 少 率 蛋 白 质 质 量 浓 度 有 关 物 质 检 查 结 果 等 为 评 价 指 标, 确 定 除 杂 方 法 的 可 行 性 并 优 化 工 艺 参 数 结 果 最 佳 工 艺 参 数 为 冷 藏 24 h, 离 心 时 间 15 min 转 速 5 000 r/min, 活 性 炭 用 量 0.3% 温 度 40 吸 附 时 间 30 min 原 药 液 ph 值 结 论 冷 藏 离 心 和 活 性 炭 吸 附 组 合 工 艺 除 杂 效 果 显 著, 可 有 效 去 除 树 脂 蛋 白 质 等 杂 质 关 键 词 : 芪 红 脉 通 ; 中 药 注 射 剂 ; 除 杂 技 术 ; 树 脂 ; 蛋 白 质 中 图 分 类 号 :R284.2 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 :0253-2670(2013)06-0696 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.06.012 Impurity removal technology of Qihong Maitong Injection mixing liquid ZHU Qian-qian 1, XIAO Wei 2, SUN Yong-cheng 2, XU Lian-ming 2, WANG Wei 2 1. Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210000, China 2. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China Abstract: Objective To optimize the impurity removal technology before ultrafiltration, taking Qihong Maitong Injection (QMI) as the research object. Methods The removal of impurities and related substances by the combined process of refrigeration, centrifugation, and activated carbon adsorption was investigated. Taking the contents of total saponins of astragalus, astragaloside, and hydroxy safflower yellow pigment A, solids reduction efficiency, protein concentration, and related substances inspection as the evaluation indexes, the feasibility of the impurity removal method was definited and the process parameters were optimized. Results The optimized process parameters were as follows: refrigerated for 24 h, centrifugated for 15 min, at 5 000 r/min, activated carbon dosage of 0.3%, temperature 40, adsorption time 30 min, and the original solution ph value. Conclusion The impurity removal effect of refrigeration, centrifugation, and activated carbon adsorption is significant, which could effectively remove the resin, protein, and other impurities. Key words: Qihong Maitong Injection;injection of Chinese materia medica; impurity removal technology; resin; protein 近 年 来, 膜 分 离 作 为 一 项 高 效 分 离 技 术, 被 广 泛 应 用 于 中 药 注 射 剂 的 研 究 和 生 产 实 践 然 而 在 实 际 操 作 过 程 中, 由 于 中 药 煎 煮 液 组 分 复 杂, 往 往 含 有 较 多 的 可 溶 性 杂 质 成 分 和 相 对 分 子 质 量 较 高 的 胶 体, 且 药 液 黏 滞 性 大, 直 接 应 用 超 滤 技 术 会 导 致 膜 污 染 加 剧, 降 低 膜 的 使 用 寿 命 [1-3] 完 善 有 效 的 除 杂 技 术 可 有 效 改 善 药 液 环 境, 减 轻 膜 污 染, 提 高 中 药 注 射 剂 的 安 全 性 和 质 量 注 射 用 芪 红 脉 通 为 冻 干 粉 针 剂, 由 黄 芪 红 花 两 味 药 物 组 成, 临 床 上 用 于 治 疗 冠 心 病 心 绞 痛 本 实 验 以 注 射 用 芪 红 脉 中 间 体 配 液 为 研 究 对 象, 考 察 冷 藏 离 心 活 性 炭 吸 附 3 种 工 艺 组 合 对 该 中 间 体 配 液 杂 质 的 去 除 情 况 以 及 对 中 药 注 射 剂 中 有 关 物 质 的 去 除 效 果 以 指 标 成 分 黄 芪 总 皂 苷 黄 芪 甲 苷 收 稿 日 期 :2012-09-18 基 金 项 目 : 科 技 部 重 大 新 药 创 制 项 目 中 药 治 疗 心 脑 血 管 疾 病 有 效 成 分 组 ( 群 ) 的 创 新 药 物 孵 化 基 地 (2011ZX09401-097) 作 者 简 介 : 祝 倩 倩 (1985 ), 女, 河 北 石 家 庄 市 人, 南 京 中 医 药 大 学 2010 级 研 究 生, 研 究 方 向 为 中 药 新 型 制 剂 的 研 究 与 开 发 Tel: 15189025771 E-mail: nzyzqq@gmail.com * 通 信 作 者 萧 伟, 研 究 员 级 高 级 工 程 师, 博 士, 研 究 方 向 为 中 药 新 剂 型 的 研 究 与 开 发 E-mail: wzhzh-nj@tom.com 网 络 出 版 时 间 :2013-01-09 网 络 出 版 地 址 :http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.r.20130109.1533.012.html
697 羟 基 红 花 黄 色 素 A(hydroxy safflower yellow A, HSYA) 质 量 浓 度 以 及 固 含 物 减 少 率 为 评 价 指 标, 对 各 除 杂 方 法 进 行 评 价, 优 选 最 佳 工 艺 参 数 ; 对 该 注 射 剂 各 制 备 环 节 进 行 有 关 物 质 检 查, 检 测 树 脂 的 去 除 情 况 此 外, 在 注 射 剂 有 关 物 质 检 查 项 中 蛋 白 质 定 性 检 查 合 格 的 前 提 下, 采 用 定 量 检 测 的 方 法, 考 察 各 除 杂 工 序 前 后 蛋 白 质 质 量 浓 度 的 变 化, 为 植 物 大 分 子 杂 质 的 去 除 提 供 数 据 支 持 以 上 研 究 将 为 后 期 超 滤 过 程 的 优 化 设 计 提 供 实 验 依 据 1 仪 器 与 材 料 Agilent 1100 高 效 液 相 色 谱 仪 ( 美 国 Agilent 公 司 );Waters 2695/2487 HPLC 色 谱 系 统 ( 美 国 Waters 公 司 );Alltech ELSD 2000 蒸 发 光 散 射 检 测 器 ; UV 2550 PC 紫 外 可 见 分 光 光 度 仪 ( 日 本 岛 津 公 司 );Mettler Toledo AB204 S 精 密 电 子 分 析 天 平 ( 梅 特 勒 - 托 利 多 仪 器 有 限 公 司 );Mettler Toledo 实 验 室 ph 计 ( 深 圳 市 怡 华 新 电 子 有 限 公 司 ); 高 速 冷 冻 离 心 机 Z36HK( 德 国 哈 默 实 验 技 术 有 限 公 司 ); 针 用 活 性 炭 ( 批 号 F1205039, 上 海 活 性 炭 厂 有 限 公 司 );SHZ III 循 环 水 式 真 空 泵 ( 南 京 科 尔 仪 器 有 限 公 司 ) 黄 芪 中 间 体 ( 批 号 110501) 红 花 中 间 体 ( 批 号 110601) 购 于 江 苏 康 缘 药 业 股 份 有 限 公 司, 黄 芪 甲 苷 ( 批 号 110781-200613) HSYA(111637-200905) 对 照 品 购 于 中 国 食 品 药 品 鉴 定 研 究 院 ; 牛 血 清 白 蛋 白 ( 批 号 100151, 中 国 计 量 科 学 研 究 院 ); 考 马 斯 亮 蓝 G250( 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 ); 乙 腈 为 色 谱 纯, 其 他 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯 2 方 法 与 结 果 2.1 指 标 成 分 的 测 定 [4] 2.1.1 HSYA 的 测 定 (1) 对 照 品 溶 液 的 制 备 : 精 密 称 取 60 真 空 干 燥 3 h 的 HSYA 对 照 品 适 量, 加 水 溶 解 并 制 成 0.2 mg/ml 的 溶 液, 即 得 (2) 供 试 品 溶 液 的 制 备 : 精 密 量 取 各 除 杂 工 序 前 后 样 品 溶 液 0.5 ml, 置 50 ml 量 瓶 中, 加 水 溶 解 并 稀 释 至 刻 度, 用 0.45 μm 的 微 孔 滤 膜 滤 过, 即 得 (3) 色 谱 条 件 与 系 统 适 应 性 试 验 : 色 谱 柱 为 Phenomenex ODS(250 mm 4.6 mm,5 μm); 流 动 相 为 乙 腈 -0.1% 磷 酸 水 溶 液 (13 87); 检 测 波 长 为 400 nm, 柱 温 30 ; 体 积 流 量 1.0 ml/min 理 论 塔 板 数 按 HSYA 峰 计 不 低 于 1 000 (4) 线 性 关 系 考 察 : 取 HSYA 对 照 品 适 量, 精 密 称 定, 加 水 制 成 0.204 mg/ml 的 溶 液 按 上 述 色 谱 条 件 分 别 进 样 5 10 15 20 25 μl, 测 定 峰 面 积, 将 峰 面 积 为 纵 坐 标 (Y),HSYA 的 进 样 质 量 为 横 坐 标 (X), 进 行 线 性 回 归, 得 回 归 方 程 为 Y= 514 109.325 X-206 547.7,r=0.999 1; 线 性 范 围 为 1.02~5.10 μg (5) 样 品 测 定 : 分 别 精 密 吸 取 HSYA 对 照 品 和 供 试 品 溶 液 各 10 μl, 注 入 液 相 色 谱 仪, 测 定 峰 面 积, 按 外 标 法 计 算, 即 得 [5] 2.1.2 黄 芪 总 皂 苷 的 测 定 (1) 对 照 品 溶 液 的 制 备 : 取 黄 芪 甲 苷 对 照 品 10.0 mg, 置 25 ml 量 瓶 中, 加 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度, 摇 匀, 即 得 (2) 供 试 品 溶 液 的 制 备 : 精 密 吸 取 按 2.1.1 项 下 方 法 制 备 的 各 供 试 品 溶 液 10 ml, 以 水 饱 和 的 正 丁 醇 萃 取 4 次, 每 次 20 ml, 合 并 正 丁 醇 萃 取 液, 用 氨 试 液 洗 涤 2 次, 每 次 20 ml, 正 丁 醇 液 蒸 干, 以 50% 甲 醇 溶 解 并 定 容 至 10 ml (3) 线 性 关 系 考 察 : 精 密 量 取 对 照 品 溶 液 0 0.15 0.30 0.45 0.60 0.75 ml, 依 次 分 别 加 入 50% 甲 醇 0.75 0.60 0.45 0.30 0.15 0 ml, 再 分 别 加 入 8% 香 草 醛 无 水 乙 醇 溶 液 0.75 ml, 置 冰 水 浴 中, 加 体 积 分 数 为 72% 硫 酸 溶 液 7.5 ml, 摇 匀, 放 入 62 水 浴 中, 保 温 20 min, 置 冷 水 浴 中 立 即 冷 却, 在 540 nm 波 长 处 测 定 吸 光 度 (A) 值, 同 时 以 随 行 试 剂 作 空 白 以 对 照 品 进 样 质 量 浓 度 为 横 坐 标 (X),A 值 为 纵 坐 标 (Y) 进 行 线 性 回 归, 得 回 归 方 程 Y=2.785 93 X-0.009 26,r=0.999 9, 表 明 黄 芪 甲 苷 在 0.08~0.40 mg/ml 呈 良 好 的 线 性 关 系 (4) 样 品 测 定 : 精 密 量 取 供 试 品 溶 液 0.75 ml, 照 标 准 曲 线 制 备 项 下 的 方 法 自 再 加 入 8% 香 草 醛 无 水 乙 醇 溶 液 0.75 ml 起, 依 法 操 作, 测 定 A 值 [6] 2.1.3 黄 芪 甲 苷 的 测 定 (1) 对 照 品 溶 液 的 制 备 : 取 黄 芪 甲 苷 对 照 品 10.0 mg, 置 25 ml 量 瓶 中, 加 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度, 摇 匀, 即 得 (2) 供 试 品 溶 液 的 制 备 精 密 量 取 各 除 杂 工 序 前 后 样 品 溶 液 1 ml, 加 25% 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 5 ml, 用 0.45 μm 的 微 孔 滤 膜 滤 过, 即 得 (3) 色 谱 条 件 与 系 统 适 应 性 试 验 : 采 用 HPLC 与 蒸 发 光 散 射 监 测 器, 色 谱 柱 为 Alltima C 18 (150 mm 4.6 mm,5 um); 流 动 相 为 乙 腈 - 水 (34 66); 体 积 流 量 1.0 ml/min; 漂 移 管 温 度 105 ; 载 气 体
698 积 流 量 2.5 L/min (4) 线 性 关 系 考 察 : 精 密 称 取 黄 芪 甲 苷 对 照 品 10.0 mg, 加 入 甲 醇 使 溶 解 并 定 容 于 25 ml 量 瓶 中, 摇 匀 即 得 用 0.45 μm 微 孔 滤 膜 滤 过 后, 按 上 述 色 谱 条 件 分 别 进 样, 进 样 量 依 次 为 10 20 30 40 50 μl, 每 个 质 量 浓 度 重 复 3 次, 测 定 峰 面 积 以 黄 芪 甲 苷 质 量 浓 度 对 数 平 均 值 与 峰 面 积 对 数 平 均 值 进 行 线 性 回 归, 得 回 归 方 程 Y=0.646 5 X-3.701 2, r=0.999 9, 表 明 黄 芪 甲 苷 在 4.0~20.0 μg 与 峰 面 积 呈 良 好 线 性 相 关 (5) 样 品 测 定 : 分 别 精 密 吸 黄 芪 甲 苷 对 照 品 溶 液 10 15 μl, 供 试 品 溶 液 10 μl, 注 入 液 相 色 谱 仪 测 定, 用 外 标 两 点 法 对 数 方 程 计 算, 即 得 2.2 固 含 物 的 测 定 按 中 国 药 典 2010 年 版 附 录 X A 规 定 的 浸 出 物 测 定 方 法 进 行 测 定, 称 定 质 量 并 计 算 2.3 有 关 物 质 检 查 按 中 国 药 典 2010 年 版 附 录 IX S 规 定 的 注 射 剂 有 关 物 质 检 查 法 进 行 测 定 2.4 蛋 白 质 的 测 定 [7-8] 2.4.1 选 用 考 马 斯 亮 蓝 法 测 定 蛋 白 质 的 量 配 制 质 量 浓 度 为 100 μg/ml 的 牛 血 清 白 蛋 白 溶 液 作 为 对 照 品 溶 液 分 别 精 密 移 取 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 ml 对 照 液 至 试 管 中, 加 蒸 馏 水 稀 释 至 1.0 ml 后 摇 匀 加 入 5 ml 考 马 斯 亮 蓝 G-250, 混 匀 ( 轻 轻 摇 匀, 防 止 产 生 泡 沫 ), 静 置 2 min, 于 波 长 595 nm 处 测 定 样 本 的 A 值, 以 蛋 白 质 质 量 浓 度 C(μg/mL) 为 横 坐 标,A 值 为 纵 坐 标, 进 行 线 性 回 归, 得 回 归 方 程 A=0.842 801 C+0.038 58,r=0.998 43 2.4.2 样 品 的 测 定 精 密 移 取 待 测 样 品 0.1 ml, 加 入 5 ml 考 马 斯 亮 蓝 G-250 溶 液, 混 匀, 静 置 2 min 后 测 其 A 值, 计 算 蛋 白 质 的 量 2.5 注 射 用 芪 红 脉 通 配 液 除 杂 工 艺 流 程 取 黄 芪 红 花 中 间 体 适 量, 加 注 射 用 水 使 溶 解, 静 置 至 室 温, 冷 藏 一 定 时 间, 滤 过, 随 后 将 滤 液 进 行 离 心, 取 上 清 液, 加 入 适 量 针 用 活 性 炭, 加 热 搅 拌 一 定 时 间, 双 层 滤 纸 抽 滤 分 别 对 冷 藏 离 心 活 性 炭 吸 附 3 个 工 艺 过 程 对 应 的 评 价 指 标 进 行 测 定, 优 化 各 工 艺 参 数 2.5.1 冷 藏 工 艺 称 取 适 量 黄 芪 红 花 中 间 体 适 量, 平 均 分 成 3 组, 加 注 射 用 水, 加 热 溶 解 每 组 再 平 均 分 成 5 份, 每 份 50 ml, 分 别 冷 藏 0 12 24 36 48 h 后 滤 过, 测 定 滤 液 中 HSYA 黄 芪 总 皂 苷 黄 芪 甲 苷 的 量 以 及 固 含 物 减 少 率, 对 有 关 物 质 进 行 定 性 检 查 结 果 表 明, 随 冷 藏 时 间 增 加 指 标 成 分 的 量 均 无 明 显 变 化, 但 固 含 物 减 少 率 逐 渐 增 加, 表 明 冷 藏 对 杂 质 的 去 除 有 效, 且 冷 藏 24 h 后, 固 含 物 的 减 少 率 趋 于 平 缓, 因 此, 确 定 药 液 冷 藏 时 间 为 24 h; 在 有 关 物 质 检 查 中, 仅 树 脂 项 检 查 不 合 格, 即 溶 液 有 乳 光 且 随 冷 藏 时 间 的 增 加 溶 液 乳 光 现 象 无 明 显 降 低, 结 果 见 表 1 固 含 物 减 少 率 =( 未 冷 藏 固 含 物 质 量 - 冷 藏 特 定 时 间 固 含 物 质 量 ) / 未 冷 藏 固 含 物 质 量 [9] 2.5.2 离 心 工 艺 另 取 黄 芪 红 花 中 间 体 适 量, 表 1 冷 藏 工 艺 各 指 标 比 较 (n=3) Table 1 Comparison on indexes in refrigeration process (n=3) 冷 藏 时 间 / h HSYA / (mg ml 1 ) 黄 芪 总 皂 苷 / (mg ml 1 ) 黄 芪 甲 苷 / (mg ml 1 ) 固 含 物 减 少 率 / % 树 脂 检 查 0 18.30 21.28 1.96 0 溶 液 有 乳 光 12 18.32 21.39 1.97 0.54 溶 液 有 乳 光 24 18.30 21.73 1.96 1.04 溶 液 有 乳 光 36 18.22 21.71 1.98 1.07 溶 液 有 乳 光 48 18.10 21.80 1.96 1.19 溶 液 有 乳 光 加 注 射 用 水, 加 热 使 溶 解, 冷 藏 24 h, 滤 过, 待 用 冷 藏 滤 过 后 药 液 平 行 2 组, 每 组 平 均 分 成 9 份, 每 份 100 ml, 按 表 2 条 件 进 行 离 心 处 理, 离 心 后 取 上 清 液, 测 定 滤 液 中 HSYA 黄 芪 总 皂 苷 黄 芪 甲 苷 的 量, 固 体 物 去 除 率, 对 有 关 物 质 进 行 检 查 结 果 表 明, 在 离 心 15 min 转 速 10 000 r/min 时 固 含 物 最 低, 但 离 心 条 件 为 15 min 转 速 5 000 r/min 时, 固 含 物 较 低 且 指 标 成 分 占 总 固 体 量 百 分 比 最 高, 故 最 佳 离 心 条 件 为 15 min 转 速 5 000 r/min 有 关 物 质 检 查 中, 离 心 后 药 液 与 离 心 前 药 液 比 较, 树 脂 检 查 时 溶 液 乳 光 现 象 略 有 改 善, 结 果 见 表 2 固 含 物 减 少 率 =( 离 心 前 固 含 物 质 量 - 离 心 后 固 含 物 质 量 ) / 离 心 前 固 含 物 质 量 2.5.3 活 性 炭 吸 附 工 艺 活 性 炭 吸 附 在 注 射 剂 中 的
699 表 2 离 心 工 艺 各 指 标 比 较 (n=2) Table 2 Comparison on indexes in centrifugation process (n=2) 试 验 号 离 心 速 度 / 处 理 时 HSYA / 黄 芪 总 皂 苷 / 黄 芪 甲 苷 / 指 标 成 分 占 总 固 固 含 物 减 (r min 1 ) 间 / min (mg ml 1 ) (mg ml 1 ) (mg ml 1 ) 含 物 百 分 比 / % 少 率 / % 树 脂 检 查 未 离 心 液 0 0 16.90 21.96 1.86 41.77 0 溶 液 有 乳 光 1 3 000 10 16.03 20.35 1.79 39.39 0.58 乳 光 现 象 减 轻 2 5 000 10 15.96 20.55 1.82 39.68 0.91 乳 光 现 象 减 轻 3 8 000 10 16.11 20.23 1.86 39.60 1.05 乳 光 现 象 减 轻 4 10 000 10 16.02 20.77 1.86 40.09 1.09 乳 光 现 象 减 轻 5 3 000 15 16.16 20.61 1.86 40.02 0.98 乳 光 现 象 减 轻 6 5 000 15 16.70 21.61 1.86 41.81 1.44 乳 光 现 象 减 轻 7 8 000 15 16.68 21.13 1.84 41.41 1.76 乳 光 现 象 减 轻 8 10 000 15 16.51 21.42 1.85 41.67 2.07 乳 光 现 象 减 轻 应 用 非 常 广 泛, 具 有 脱 色 除 热 原 助 滤 提 高 药 液 澄 明 度 等 效 果 因 此, 在 超 滤 前 对 活 性 炭 吸 附 工 艺 进 行 考 察, 有 助 于 进 一 步 提 高 中 药 注 射 剂 的 质 量 和 安 全 性 (1) 正 交 试 验 优 化 活 性 炭 吸 附 工 艺 : 活 性 炭 吸 附 工 艺 优 化 选 取 了 活 性 炭 用 量 (A) 温 度 (B) 时 间 (C) ph 值 (D)4 个 主 要 影 响 因 素, 以 3 种 ( 类 ) 指 标 成 分 质 量 分 数 的 综 合 评 分 为 评 价 指 标, 设 计 L 9 (3 4 ) 正 交 试 验, 试 验 设 计 与 结 果 见 表 3, 方 差 分 析 见 表 4 通 过 计 算 HSYA 转 移 率 黄 芪 总 皂 苷 转 移 率 黄 芪 甲 苷 转 移 率, 判 断 各 指 标 成 分 受 活 性 炭 吸 附 影 响 程 度 大 小, 据 此 设 定 3 种 成 分 权 重 系 数 分 别 为 0.4 0.5 和 0.1 表 3 L 9 (3 4 ) 正 交 试 验 设 计 与 结 果 Table 3 Design and results of L 9 (3 4 ) orthogonal test 试 验 号 A / % B / C / min D 综 合 评 分 1 0.1 40 15 原 药 液 664.57 2 0.1 60 30 6.5 627.34 3 0.1 80 45 7.5 558.35 4 0.3 40 30 7.5 647.42 5 0.3 60 45 原 药 液 633.35 6 0.3 80 15 6.5 582.45 7 0.5 40 45 6.5 611.84 8 0.5 60 15 7.5 592.88 9 0.5 80 30 原 药 液 582.20 K 1 1 850.26 1 923.83 1 839.90 1 880.12 K 2 1 863.22 1 853.57 1 856.96 1 821.63 K 3 1 786.92 1 723.00 1 803.54 1 798.65 R 76.30 200.83 53.42 81.47 表 4 方 差 分 析 Table 4 Analysis of variance 方 差 来 源 离 差 平 方 和 自 由 度 F 值 显 著 性 A 1 111.290 2 2.239 - B 6 924.187 2 13.951 - D 1 176.280 2 2.370 - C ( 误 差 ) 496.310 2 - F 0.05 (2, 2)=19.00 综 合 评 分 =HSYA 转 移 率 0.4+ 黄 芪 总 皂 苷 转 移 率 0.5+ 黄 芪 甲 苷 转 移 率 0.1 由 直 观 分 析 可 知, 各 因 素 对 综 合 评 分 的 影 响 顺 序 依 次 为 B>D>A>C; 方 差 分 析 结 果 表 明 各 因 素 对 综 合 评 分 的 影 响 均 不 具 有 显 著 性, 最 佳 工 艺 为 A 2 B 1 C 2 D 1, 即 活 性 炭 用 量 0.3% 温 度 40 吸 附 时 间 30 min 原 药 液 的 ph 值 (2) 验 证 试 验 : 称 取 适 量 中 间 体 进 行 配 液, 按 最 佳 提 取 工 艺 条 件 平 行 进 行 3 组 试 验, 结 果 表 明, 指 标 成 分 转 移 率 较 高, 且 具 有 良 好 的 稳 定 性 和 重 复 性, 其 中 黄 芪 甲 苷 转 移 率 大 于 100%, 初 步 分 析 原 因 可 能 为 药 液 本 身 偏 弱 酸 性, 经 加 热 后, 少 量 黄 芪 皂 苷 水 解 转 化 为 黄 芪 甲 苷 所 导 致 对 药 液 进 行 有 关 物 质 检 查, 结 果 显 示, 仅 树 脂 检 查 项 不 合 格, 但 经 活 性 炭 吸 附 后, 溶 液 乳 光 现 象 减 轻, 同 时 药 液 澄 明 度 提 高, 药 液 颜 色 变 浅, 结 果 见 表 5 2.6 各 工 艺 过 程 中 蛋 白 质 去 除 情 况 中 药 注 射 剂 大 多 为 植 物 提 取 物, 其 浸 提 物 中 往 往 含 有 多 种 植 物 大 分 子 杂 质 [10], 如 蛋 白 质 鞣 质 树 脂 等, 均 是 导 致 中 药 注 射 剂 临 床 不 良 反 应 最 敏 感 的 一 类 物 质, 因 此, 在 中 药 注 射 剂 制 备 过 程, 蛋 白
700 表 5 验 证 试 验 Table 5 Test of verification 试 验 号 HSYA 转 移 率 / % 黄 芪 总 皂 苷 转 移 率 / % 黄 芪 甲 苷 转 移 率 / % 树 脂 检 查 药 液 性 状 1 84.80 90.74 103.28 乳 光 现 象 减 轻 澄 明 度 显 著 提 高, 颜 色 变 浅 2 85.06 90.63 103.07 乳 光 现 象 减 轻 澄 明 度 显 著 提 高, 颜 色 变 浅 3 84.95 90.71 103.44 乳 光 现 象 减 轻 澄 明 度 显 著 提 高, 颜 色 变 浅 质 的 定 量 检 测 对 提 高 中 药 注 射 剂 的 安 全 性 具 有 重 要 意 义 采 用 考 马 斯 亮 蓝 法 对 冷 藏 活 性 炭 吸 附 工 艺 前 后 蛋 白 质 进 行 测 定, 结 果 显 示, 冷 藏 活 性 炭 吸 附 工 艺 对 蛋 白 质 的 去 除 均 有 效, 冷 藏 对 蛋 白 质 的 去 除 率 更 高, 结 果 见 表 6 表 6 各 工 艺 过 程 蛋 白 质 去 除 效 果 的 比 较 Table 6 Comparison on removal results of protein content in each process 蛋 白 质 / 试 验 组 预 处 理 方 法 蛋 白 质 去 除 率 / % (mg ml 1 ) 1 冷 藏 前 3.390 3.16 冷 藏 后 3.283 2 活 性 炭 吸 附 前 3.136 2.30 活 性 炭 吸 附 后 3.064 3 讨 论 冷 藏 和 离 心 工 艺 可 有 效 去 除 中 药 水 提 液 中 的 不 溶 性 杂 质 ; 冷 藏 和 活 性 炭 吸 附 可 去 除 药 液 中 的 蛋 白 质, 且 冷 藏 工 艺 蛋 白 质 的 去 除 率 较 活 性 炭 高 在 树 脂 检 测 有 乳 光 的 情 况 下, 采 用 冷 藏 离 心 和 活 性 炭 吸 附 组 合, 可 有 效 去 除 树 脂, 提 高 中 药 制 剂 的 安 全 性 活 性 炭 吸 附 对 有 关 物 质 的 去 除 和 药 液 澄 明 度 的 提 高 有 明 显 效 果, 但 由 于 本 处 方 中 指 标 成 分 受 高 温 影 响 较 为 明 显, 加 上 活 性 炭 吸 附 本 身 对 药 物 成 分 的 吸 附 作 用, 使 得 本 实 验 中 活 性 炭 吸 附 优 选 的 最 佳 温 度 为 40 本 实 验 超 滤 前 预 处 理 工 艺 采 用 冷 藏 离 心 和 活 性 炭 吸 附 组 合 除 杂, 除 杂 效 果 明 显 指 标 成 分 损 失 小, 且 操 作 简 单 经 济 可 行, 也 进 一 步 验 证 了 药 液 预 处 理 工 艺 的 必 要 性, 并 为 下 一 步 的 超 滤 工 艺 奠 定 了 良 好 的 基 础 参 考 文 献 [1] 樊 文 玲, 郭 立 玮, 李 磊, 等. 超 滤 精 制 热 毒 宁 处 方 水 提 液 的 预 处 理 方 法 及 其 工 艺 研 究 [J]. 中 草 药, 2010, 41(11): 1793-1796. [2] 郭 立 玮. 中 药 制 药 工 业 对 膜 科 学 技 术 的 重 大 需 求 与 关 键 问 题 [J]. 中 草 药, 2009, 40(12): 1849-1855. [3] 朱 才 庆, 余 华, 魏 东 芝, 等. 金 钱 通 淋 口 服 液 不 同 预 处 理 方 法 及 对 膜 分 离 效 果 的 影 响 [J]. 中 成 药, 2005, 27(9): 1011-1015. [4] 孙 永 成, 郭 传 宝, 王 伟, 等. 大 孔 树 脂 使 用 次 数 对 羟 基 红 花 黄 色 素 A 吸 附 率 的 影 响 [J]. 世 界 科 学 技 术 中 医 药 现 代 化, 2011, 13(4): 697-699. [5] 王 培 培, 许 杜 娟, 夏 泉. 黄 芪 皂 苷 的 提 取 及 含 量 测 定 [J]. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志, 2010, 16(4): 27-29. [6] 张 金 红, 周 晶, 吴 志 丽, 等. HPLC-ELSD 法 测 定 黄 芪 及 金 芪 降 糖 片 中 黄 芪 甲 苷 的 含 量 [J]. 天 津 医 科 大 学 学 报, 2010, 16(1): 26-29. [7] 董 洁, 郭 立 玮, 文 红 梅, 等. 中 药 水 提 液 中 蛋 白 质 含 量 测 定 方 法 研 究 [J]. 现 代 中 药 研 究 与 实 践, 2009, 22(6): 40-43. [8] 王 孝 平, 邢 树 礼. 考 马 斯 亮 蓝 法 测 定 蛋 白 含 量 的 研 究 [J]. 天 津 化 工, 2009, 23(3): 40-41. [9] 魏 舒 畅, 袁 文 郡, 余 琰, 等. 红 芪 提 取 液 的 超 滤 纯 化 工 艺 研 究 [J]. 中 成 药, 2011, 33(4): 599-603. [10] 郭 青, 吴 晓 燕, 史 清 水, 等. 中 药 注 射 剂 质 量 评 价 的 有 关 研 究 思 路 方 法 和 建 议 [J]. 药 物 评 价 研 究, 2010, 33(5): 351-359.