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动物学杂志 $ ) $+ - $ $ 0 +$ $ $) $$ 白鹤冷冻精液人工授精实验 $ 张 敬 周军英 赵锡森 刘玉平 北京动物园北京$ $ 中国动物园协会北京$) ) ) / +$) 的冷冻 摘要$ 为了探索鹤类精液冷冻保存和使用技术 ) 0 年 进 行 了 白 鹤 O 家 禽 精 液 稀 释 液 作 为 白 鹤 精 液 稀 释 液 $k 的 二 甲 基 亚 砜 精液保存及人工授精 实 验 使 用 Y +e\ 为冷冻液 精液样本冷冻 经 过 三 个 阶 段 的 降 温 最 后 保 存 在 液 氮 中 成 功 保 存 了 编 号 )$ 解 冻 后 白 鹤 精 液 精 子 活 率 雄性白鹤精液 ) 支h < 支 冷冻精液在 i冰水中解 冻 ) 0 < 为 h)k p$0h0k $ n$ 和 0 年分别为 $$ 号雌鹤产的两窝卵进行人工授 精 实 验 年 共产卵 0 枚 其中 $ 枚卵受精并成功孵化 实验发现 在 雌 鹤 产 卵 前 一 周 和 产 卵 期 间 每 天 输 精 并 增 加 每次输精量 同时在每产完 $ 枚卵后 内完成一次输精 效果最佳 关键词冷冻精液 稀释液 冷冻液 精子活率 白鹤 ))$ 0 0 中图分类号P文献标识码Q文章编号0 : $ O / / /< R )D = / / / - 0 ) R / 0 RSQ5V[ RS][ G Z $ RSQX \ W]ZG b $/ $/$ $ $ + $ - / +O+ 9 $ $/$) $+ : $ $ : < G G < < J J A E J J J J < < \ E : O ) ) / +$) A JG J Y R <) 0T < \ E : A J J J E J < A G J GE ^G < 9 < < h < < A 9 < A A J Q- < TY b G \ < = J A G J U J G J S h/ J < G ) < < W ) Bb A J J A J G J G < < J < JG $k J < G J +e\ \ < A J G J )h p$h$ < G< J A J$k G< J G J G J +e\ J J G J G A < +e\a JJ J < G gi A A < JT G A ^G E J A +e\ $0 < gi T < A G h < GE 9 < A B ^G J A < G $ g gi g g g/i g/ g g$i9 < A A J gi A ) g0 < J < A G J < << J A T < A A h)k p$0h0k $ n$ < \ E : A < A JG J J JG J A < $ /D$ < 第一作者介绍张敬女高级畜牧师研究方向$鸟类饲养繁殖和保护教育 = $ $0 修回日期$ $ $ 收稿日期$ $

) $ ) $+ - 动物学杂志 卷 G G G ^G A G G < BG < JG Q < E < A JG J A G J 0 A J < J A J B A G G E J < < ) < = $ 9 < = J 9 G f < \ E : O ) ) / +$) $ 年第一次对鹤进行了人工授精 作为 的 只白鹤 雌鹤 与 雄 鹤 隔 笼 单 独 饲 养 雌 鹤 一门实用的繁殖技术 人工授精已经应用于鹤 产卵规律 雄 鹤 编 号 )$ $$ 年 出 生 雌 $ $$ 类繁殖和提高受精率 = 鹤编号 $$ $ 年 出 生 雄 鹤 和 输 精 的 雌 )/+ )9 : ) 的精 年首次成 功将鸡 O+ 鹤均身体健康 处于繁殖年龄 北京 动物 园 的 $$ 从 液进行 了 低 温 保 存 \ 笼养白鹤每年 月开 始 繁 殖 白 鹤 窝 卵 数 为 此 在多种鸟类中利用低温保存精液进行人工 枚 产卵间隔 一般 为 ) J 如果 雌鹤产 的第 $ 冷 冻 保 存 授精获得了成功 V 一窝卵被拿出 间 隔 $ J 后 一 般 还 会 产 的鸟类精液 可以 在 需 要 时 随 时 解 冻 使 用 还 下第二窝卵 卵孵化期为 J 可在国内和 国 际 间 交 换 用 以 防 止 近 亲 繁 殖 A 精 液 稀 释 液 的 配 置 低 温 保 存 鹤 类 精 液 保持笼养个体的基因多样性 所以精液的冷冻 家禽精液稀 释 液 只 要 将 稀 时 使用 Y 保存对于开展远距离的人工授精和保存优质基 释液的 S与渗 透 压 做 相 应 的 调 整 就 可 以 用 因有重要的意义 张雁云 于 不 同 种 鹤 精 液 的 冷 冻 保 存 = 鹤类精 液 冷 冻 时 需 要 使 用 鹤 类 精 液 稀 释 $ 使用冰点 渗 透 压 仪 测 得 白 鹤 精 液 渗 透 液冷冻液 精 液 按 照 一 定 的 步 骤 经 过 低 温 处 < W) Bb 将 Y 家禽 压为) < 理后 长久保存在液氮中 使用冷冻精 液人 工 $ 精液稀释液 S调整为 h/ V 授精时 需要将精液解冻后尽快 完成 输精 由 < W) Bb 作 为 冷 渗透压调整为 ) < 于在冷冻过程中有 0k k的精子损失 所 冻保存白鹤精液的稀释液 以 用 冷 冻 精 液 输 精 时 与 使 用 鲜 精 液 输 精 不 同 E 精 液 采 集 和 短 期 保 存 使 用 按 摩 法 采 集 为了提高卵 的 受 精 率 一 般 输 入 相 当 于 )$ 号雄性白鹤 精 液 采 集 到 的 精 液 用 白 鹤 $ 虽然解 冻 倍鲜精液输精量 = 精液稀 释 液 进 行 h h 倍 稀 释 移 到 冻 存 后精子活率是评估冷冻精液质量的指标 但与 管内密 封 记 录 于 i 冰 水 中 暂 时 保 存 鲜精输精一样 检验冷冻精液人工授精成功与 ) < 之内在实验室进行活率和密度检测 否的最 可 靠 依 据 还 是 卵 的 受 精 率 $ 年 国 J 精 液 的 冷 冻 保 存 白 鹤 精 液 冷 冻 保 存 参 )A 的 冷 冻 精 液 内首次将 笼 养 白 枕 鹤 O 考了鹤类基金会使用的鹤类精液冷冻保存方法 用于人工授精 获得成功 张玲等 $ = $ 将 需 冷 冻 保 存 的 精 液 于 为了探索鹤 类 精 液 冷 冻 保 存 和 使 用 技 术 i 加 入 稀 释 后 精 液 量 一 半 体 积 的 冷 冻 液 ) 0 年 采 集 了 白 鹤 O ) / +$) - $k 的 二 甲 基 亚 砜 J < G J 精液进行冷 冻 保 存 筛 选 了 合 适 的 稀 释 液 冷 +e\ i 平 衡 $0 < 平 衡 后 检 测 活 冻液和冷冻仪器 用白鹤冷冻精液进行人工授 力并记 录 之 后 分 装 在 冻 存 管 中 进 行 冷 冻 保 精得到 $ 枚受精卵 成功繁殖白鹤 $ 只 存 h < 支 研究对象和方法 研 究 对 象 研 究 对 象 为 北 京 动 物 园 饲 养 冷冻 过 程 需 要 三 步$ 使 用 程 序 降 温 盒 5QWV=5= : $i 9 : : 5 0$ g$ 和一 台索 尼 g i 低温 冰 箱

期 张敬等$白鹤冷冻精液人工授精实验 ) 完成 gi 的 降 温 过 程 将 装 有 待 冻 精 液 / < 后加入 $ 0k 苯 胺 黑 溶 液 的冻存管放入程序降 温 盒中 一 同 放 入 gi 用盖玻片拉成薄 层 用 吹 风 机 吹 干 在 显 微 镜 低 温 冰 箱 中 用 探 头 式 电 子 温 湿 度 计 下观察计数 透明 的 为 活 精 子 染 红 的 为 死 精 =TS0 监测盒中温 度 下降过 程 $i < 匀 子 精 子 活 率 n 活 精 子 总 数 精 子 总 数 速降温 利用液氮完成 g g/i的降温过 q$k <的塑 程 将冻存管 迅 速 放 在 距 液 氮 面 约 0 卵的 孵 化 和 受 精 卵 的 确 定 $$ 号 雌 降 温 速 度 平 均 料 架 子 上 保 持 $ < 鹤产卵后 尽快取 出 将 卵 换 入 自 然 孵 卵 的 其 0i < 此过程用探头式低温 温 度 计 检 测 温 他雌鹤腹下 孵卵 $0 J 后 再将卵 取出放 入 孵 度 此处的温度 约 为 ghi 将 冻 存 管 直 接 卵机内 孵 育 直 到 出 雏 孵 卵 过 程 中 的 第 $ 浸入液氮进 行 g/ g$i 的 降 温 最 终 在 天和第 天进行验卵 可以 确定 卵是 否 受 精 液 氮 中 将 冻 存 管 放 在 事 先 做 好 标 记 的 套 管 中 受精卵在孵育 ) J 以 后 照 卵 时 透 过 卵 壳 隐 约 转移到盛有液氮的储存罐中保存 可见蛛网状血管网从中心点辐射开来 随着胚 冷 冻 精 液 的 解 冻 和 输 精 进 行 人 工 授 精 胎的发育 血管 增 大 延 卵 黄 周 围 蔓 延 白 鹤 时 将存放精液的 冻 存 管 从 液 氮 罐 中 取 出 浸 卵壳较厚 照卵时 无 法 看 到 卵 中 的 胚 胎 在 孵 待 精 液 融 化 后 取 出 冻 存 入冰水中 ) 0 < 卵过程中的第 $ 天和第 天通过观察卵 的 晃 管 将精液吸入 $ <注射器中立即进行人工输 动验卵 在孵育 $ J 以后平放在桌面上 可以 $ 年 $$ 号雌鹤产 精 = 观察到卵微微晃动 孵育 J 后 可以观 察到 卵期间 每天解冻 冷 冻 精 液 输 精 $ 次 如 果 雌 卵明显晃动 孵卵时间超过白鹤 孵卵 期 ) J 鹤产卵 则在产卵 后 内 完 成 $ 次 输 精 每 未见晃动的卵 打开卵壳也可以确定卵是否受 次输入 $ 支 冷 冻 精 液 0 年 雌 鹤 产 卵 期 精 雏鹤孵化出壳后进行人工养育 间 每两天输精 $ 次 若 雌 鹤 产 卵 则 在 产 卵 后 内完成 $ 次 输 精 每 次 输 入 $ 支 冷 冻 精 A 结 果 液 在每次输精之前操作 人员 先 捕捉 雌 鹤 用 A 白 鹤 精 液 品 质 ) 年 和 年 共 采 手触摸雌鹤腹部 检 查 当 天 是 否 即 将 产 卵 若 集 )$ 号雄性白鹤精 液 $0 次 精 液 质 量 好 通过触摸判断雌鹤很快产卵 则等这枚卵产下 呈乳白色黏稠状 平均采精量h$ ph < 以后再做冷冻输精 / < 精子活率 精子密 度 h$ ph q$ 个 用按摩 法 给 雌 鹤 输 精 将 已 吸 入 $ <解 //k p )hk $ n $0 精 液 渗 透 压 冻后精液的玻璃注射器轻轻地插入雌鹤泄殖 ) < < W) Bb 腔 在左侧壁探寻 找 到 一 个 较 松 软 的 开 口 部 AA精液解 冻 和 输 精 冷 冻 保 存 了 )$ 号 位 即 为 输 卵 管 开 口 将 注 射 器 轻 轻 插 入 开 雄性白鹤精液 ) 支h < 支 解冻输 精 $ 口 推入注射器内的精液 次 表 $ 解 冻 后 精 液 中 精 子 活 率 h)k p Q精子的密度及活率检测方法实验 室中 $0h0k $ n$ 年 $$ 号 雌鹤产 卵 用 盐 水 杀 死 精 子 取稀释后的 白 鹤 精 液 枚 产 卵 期 间 每 天 解 冻 输 精 $ 次 输 精 量 在 倍显微镜观察计数 记录结果 计算出精 h$ ph$ < 次 $ n 其 中 $ 枚 卵 受 < n 稀 释 后 精 子密度 精 子 密 度 个 精 0 年 $$ 号雌鹤产卵 ) 枚 产卵期 间 h q稀 释 倍 数 稀 释 倍 数 液中的精 子 数 每 J 解 冻 输 精 $ 次 输 精 量 h p n鹤类精液稀释液量 精液量 h$ < 次 $ n ) 枚卵均未受精 染色法检 使用伊红 苯胺黑 雌鹤 $$ 产 卵 比 较 规 律 每 窝 产 枚 $ $ 载 玻 片 上 放 测精 子 活 力 = 卵 两窝卵 之 间 间 隔 $ J 年 雌 鹤 溶 液 混 合 精 液 与 的 0k 伊 红 月 日和 0 日产一窝卵 在此之前一周到产

)/ $ ) $+ - 动物学杂志 卷 表 bax 号雌性白鹤冷冻精液输精统计表 + : $ / / /) T / / /$ / 卵 期 间 使 用 冷 冻 精 液 输 精 每 天 解 冻 输 精 $ O$ / 的 $ 枚受精卵是在最后一次鲜 次 且在雌鹤每产 完 $ 枚 卵 后 内 完 成 一 次 精稀释输精 后 的 第 $ 天 产 下 的 这 说 明 黑 颈 输精 同时增加每 次 输 精 量 输 入 支 或 支 鹤精子在雌鹤输卵管中至少可以存活 $ J 以上的冷冻精液量 枚卵中 月 0 日所产的 经实验证明 鸟类精液 经冷冻 后 精子 活 率 第 枚卵受精 此枚卵经孵化后 顺利出 雏 雏 下降 存活时间也缩短 家 鸡精 液解冻 后 平 均 鹤 0$ 号经过人工养育成活 就开始下 活率为 0k 解冻后精子 活率 0 < 0 年雌鹤产卵 之 前 一 周 到 月 $ 日 下降明显 $ $h0 精 子 全 部 死 亡 降 < 月 日和 0 月 日所产的 ) 枚卵期间 每 天 李世英等 $0 V 等 $ 认 为 使 用 鹤 输精 $ 次 雌鹤每产完 $ 枚卵后 内完成 $ 类解冻精液进行人工授精时 要得到理想的受 次输精 每 次 输 入 $ 支 冷 冻 精 液 结 果 0 精率 每次授精 至 少 要 输 入 $0 年产的 ) 枚卵 均未受精 个精子 白枕鹤精液冷冻后 精子活率 )k左 E 讨 论 右 为提高卵受精 率 研 究 人 员 建 议 在 产 完 第 $ 枚卵后可进行早晚两次输精 张玲等 $ E 冷 冻 精 液 与 鹤 卵 的 受 精 精 子 被 输 入 到 我们进行白鹤冷冻精液实验解冻后精子平 雌鹤输卵管后 在那里能够存活 一段 时间 通 均活率为 h)k 从实验结果 看 产卵期 间 每 过实验发现家鸡一次交配后 个体单独饲养观 天输精 增加每次 输 精 量 弥 补 精 液 冷 冻 过 程 +/ 察 最 长 受 精 日 期 为 )0 J 火 鸡 中精子的损失 同 时 在 最 佳 时 机 输 精 即 在 雌 在一次交配后的第 天 尚 可 产 出 受 /+ +A 鹤产完一枚卵后 内 尽 早 完 成 输 精 是 今 后 精卵 郑光 美 $0 鹤 类 精 子 在 雌 鹤 输 卵 管 白鹤冷冻精液输精的首选方法 中也能存活较长时间 年我们得到黑颈鹤 致谢 感 谢 北 京 师 范 大 学 张 雁 云 教 授北 京 动

期 张敬等$白鹤冷冻精液人工授精实验 ) 物园张金国副园长张恩权副科长刘斌副队长 \ : \ S J = U : J : V$$M E 以及杨 明 海 刘 赫 王 志 坚 对 本 研 究 的 支 持 与 < B GJ G < J b G \ ) $ 0 g0 帮助 李世英 李焕 玲 胡 松 庭 等$0鸡 精 液 冷 冻 技 术 研 究 山东农业科学 $ 0 g0 参考文献 张玲 刘大军 宋 艳 珠 等$白 枕 鹤 精 液 冷 冻 技 术 的 研 = + S V V 9 e J: e$ :fq5=\$ T Y SG E J J : U +:$ + < 5 Y \ Y E U$ : 9 GJ $0 $ B e f \ T[ $: V V9 Y < < V \ J : T [ G $ / g/ U J e < 究黑龙江动物繁殖 $ $ g/ 张 雁云鸟类的人工授精中国鸟类学会 台北市鸟类 学会 中国野保护学会中国鸟类学研究$ 第四届海峡两 岸鸟 类 学 术 研 讨 会 文 集北 京$ 北 京 林 业 出 版 社 ) g))) 郑 光美$0鸟类学北京$ 北京师范大学出版社 ) g