Kurzanleitung

Vitamin B2 (Riboflavin) 维 生 素 B2( 核 黄 素 ) 微 孔 板 形 式 的 微 生 物 法 定 量 检 测 维 生 素 B2( 核 黄 素 ) 订 货 号 : P1007 体 外 检 测 试 剂 储 存 温 度 2-8 C 全 球 总 经 销 : R-Biopharm AG 拜 发 集 团,Darmstadt, 德 国 电 话 : +49 (0) 6151-81 02-0 传 真 : +49 (0) 6151-81 02-20 制 造 商 : ifp Institut für Produktqualität GmbH, Berlin, 德 国 电 话 : +49 (0) 30-76 68 60-0 传 真 : +49 (0) 30-76 68 60-50

VitaFast 是 ifp Institut für Produktqualität GmbH. 的 注 册 商 标 Ifp 同 时 承 担 相 应 的 责 任 和 义 务 制 造 商 : ifp Institut für Produktqualität GmbH Teltowkanalstr. 2, 12247 Berlin GERMANY www.produktqualitaet.com VitaFast is a registered trademark of the ifp Institut für Produktqualität GmbH. ifp also carries out contract analysis. Manufacturer: 2 ifp Institut für Produktqualität GmbH Teltowkanalstr. 2, 12247 Berlin GERMANY www.produktqualitaet.com

产 品 简 介 VitaFast Vitamin B2 ( 核 黄 素 ) 试 剂 盒 简 单 易 用, 采 用 微 生 物 方 法, 在 微 孔 板 中 定 量 检 测 食 品 药 品 和 动 物 饲 料 中 的 维 生 素 B2 总 量 ( 包 括 添 加 和 原 生 维 生 素 B2) 所 有 所 需 的 试 剂 和 标 准 品 均 包 含 在 试 剂 盒 中 本 试 剂 盒 共 能 提 供 96 次 检 测 ( 包 括 标 准 品 ) 使 用 微 孔 板 酶 标 仪 (610-630 nm 或 者 540-550 nm) 进 行 读 数 VitaFast Vitamin B2 ( 核 黄 素 ) 试 剂 盒 已 经 获 得 了 AOAC 认 证, 证 书 号 No.100902 样 品 处 理 液 态 样 品 ( 含 添 加 维 生 素 B2): 酶 化 处 理, 提 取, 无 菌 过 滤 和 稀 释 固 态 样 品 ( 含 添 加 维 生 素 B2): 均 质, 酶 化 处 理, 提 取, 离 心 和 稀 释 液 态 和 固 态 样 品 ( 含 添 加 和 原 生 维 生 素 B2): 均 质, 酶 化 处 理, 提 取, 离 心 和 稀 释 所 需 时 间 : 孵 育 : 标 准 范 围 : 定 量 限 : 检 测 限 : 实 验 过 程... 约 60 分 钟 计 算......2 分 钟 37 C 条 件 下 在 暗 处 孵 育 44-48 小 时 0.04-0.24 mg / 100 g (ml) 0.04 mg / 100 g (ml) 0.0018 mg / 100 g (ml) 回 收 率 : 90-105 % 标 准 品 板 内 CV 值 : < 10 % 标 准 品 板 间 CV 值 : < 10 % 3

1. 检 测 原 理 VitaFast Vitamin B2( 核 黄 素 ) 检 测 试 剂 盒 是 利 用 微 生 物 方 法, 用 于 定 量 检 测 食 品 药 品 和 动 物 饲 料 中 的 维 生 素 B2 总 量 ( 包 括 添 加 和 原 生 维 生 素 B2) 本 微 生 物 检 测 系 统 符 合 国 际 标 准 维 生 素 B2 是 从 样 品 稀 释 提 取 所 获 得 的 将 稀 释 了 的 提 取 物 和 维 生 素 B2 检 测 培 养 基 加 入 包 被 有 Lactobacillus rhamnosus 的 微 孔 中 Lactobacillus rhamnosus 的 生 长 状 况 取 决 于 维 生 素 B2 的 含 量 添 加 维 生 素 B2 作 为 标 准 或 者 作 为 样 品 混 合 物, 细 菌 会 一 直 生 长 直 至 维 生 素 B2 被 消 耗 殆 尽 孵 育 条 件 应 为 37 C 条 件 下 暗 处 孵 育 44-48 小 时 细 菌 生 长 时 新 陈 代 谢 的 强 度 和 维 生 素 B2 的 含 量 形 成 关 系 并 可 以 绘 制 称 标 准 曲 线, 最 后 通 过 微 孔 板 酶 标 仪 在 610-630 nm ( 或 者 540-550 nm) 读 取 结 果 2. 提 供 试 剂 每 一 个 盒 中 的 试 剂 足 够 进 行 96 次 检 测 ( 包 括 标 准 测 定 ) 盒 中 的 组 份 如 下 : 1 96 孔 微 孔 板, 包 被 有 Lactobacillus rhamnosus 3 无 菌 蒸 馏 水 (30 ml), 用 于 准 备 培 养 基 标 准 品 和 样 品 提 取 稀 释 液 3 维 生 素 B2 培 养 基 ( 固 态 ) 3 维 生 素 B2( 核 黄 素 ) 标 准 品 ( 固 态 ) 3 粘 合 箔 ( 一 个 整 块 加 两 个 半 块, 足 够 用 于 三 批 实 验 ) 1 微 孔 板 框 提 示 : 对 过 了 有 效 期 ( 见 试 剂 盒 标 签 ) 的 试 剂 盒 不 再 提 供 任 何 质 量 保 证 3. 需 要 试 剂 但 试 剂 盒 中 不 提 供 无 菌 工 作 台 ( 在 无 菌 操 作 时 推 荐 ) 微 孔 板 酶 标 仪 610-630 nm (540-550 nm) 黑 暗 条 件 下 的 培 养 箱,37 C (98.6 F) 95 C (203 F) 水 浴 锅 ph 测 量 仪 高 压 蒸 汽 灭 菌 器 离 心 机,> 8000 g ( 如 果 样 品 未 被 过 滤 ) 无 菌 微 量 移 液 器 20-200 µl 和 100-1000 µl 无 菌 旋 盖 离 心 管 (15 和 50 ml), 无 菌 反 应 瓶 1.5 或 2.0 ml 500 ml 玻 瓶 和 容 量 瓶 (100 和 1000 ml), 100 ml 烧 杯 带 无 菌 注 射 器 的 0.2 µm 无 菌 滤 膜 4

蒸 馏 水 用 于 样 品 提 取 HCl 1.0 mol / l 和 0.1 mol / l NaOH 2 mol / l (8 g NaOH 溶 解 于 100 ml 蒸 馏 水 ) NaOH 1.0 mol / l 和 0.1 mol / l 检 测 维 生 素 B2 总 量 所 需 试 剂 高 峰 淀 粉 酶, 米 曲 霉 ( 如 Fluka 86250) 磷 酸 ( 酯 ) 酶, 酸 性,Ⅱ 型 : 从 马 铃 薯 提 取 ( 如 Sigma P3752) H 2 SO 4 0.1 mol / l 醋 酸 钠 溶 液 2.5 mol / l(34 g 三 水 合 醋 酸 钠 溶 于 100 ml 蒸 馏 水 中 ) ph 为 4.5 的 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 : 称 取 1.5 g 一 水 合 柠 檬 酸 ( 如 :Roth 5110.3) 至 一 个 100 ml 带 磁 力 搅 拌 器 的 烧 杯 中, 加 入 约 50 ml 蒸 馏 水 至 溶 解, 再 加 入 12 ml 1 mol / l 的 NaOH( 或 0.48 g NaOH), 调 整 ph 值 至 4.5( 用 0.1 mol / l HCl), 将 溶 液 转 入 100 ml 容 量 瓶 中, 并 用 蒸 馏 水 定 容 该 缓 冲 液 可 在 2-8 C 储 存 3 天 4. 用 户 须 知 检 测 培 养 基 有 可 能 刺 激 眼 睛 皮 肤 和 隔 膜 完 成 试 验 后 须 根 据 规 章 处 理 检 测 仪 器 ( 如 使 用 高 压 灭 菌 锅 ) 5. 贮 藏 条 件 试 剂 盒 应 存 放 在 2-8 C (35.6-46.4 F) 处 理 过 的 试 剂 ( 标 准 品 培 养 基 ) 应 马 上 使 用, 并 在 检 测 后 丢 弃 6. 样 品 处 理 检 测 添 加 维 生 素 B2 和 维 生 素 B2 总 量 时, 样 品 须 酶 化 处 理 后 热 提 取 样 品 必 须 储 存 在 4 C (39.2 F) 避 光 条 件 下 标 准 品 和 样 品 推 荐 分 别 进 行 三 次 检 测 未 知 样 品 应 该 用 两 种 稀 释 浓 度 的 样 品 提 取 液 进 行 分 析 样 品 提 取 液 必 须 当 天 使 用, 并 在 黑 暗 中 保 存 样 品 提 取 时 需 要 1 g (ml) 均 质 样 品 溶 解 于 40 ml 蒸 馏 水 或 提 取 溶 液 中 这 相 当 于 样 品 的 提 取 稀 释 倍 数 为 40 这 个 稀 释 倍 数 已 经 包 括 在 标 准 曲 线 中 ( 详 见 质 量 保 证 书 ) 在 低 浓 度 的 维 生 素 B2 溶 液 中, 样 品 使 用 量 可 高 达 5 g(ml) ( 在 计 算 结 果 时 应 该 考 虑 进 去 ) 5

注 意 : 需 要 酶 化 处 理 时, 建 议 做 试 剂 空 白 以 确 保 试 剂 ( 酶 ) 中 不 含 有 维 生 素 B2 进 行 加 标 实 验 以 确 认 抑 制 剂 是 否 存 在, 它 可 能 对 结 果 产 生 负 面 影 响 提 取 前, 加 入 部 分 已 知 维 生 素 B2 含 量 的 加 标 溶 液 到 样 品 中 为 了 得 到 准 确 结 果, 加 标 水 平 通 常 应 100 % 达 到 预 期 维 生 素 含 量 得 到 低 加 标 回 收 率 时, 说 明 抑 制 剂 存 在, 样 品 应 该 进 一 步 稀 释 以 可 能 消 除 抑 制 剂 拜 发 公 司 可 提 供 加 标 实 验 的 标 准 品 微 孔 板 操 作 时 使 用 的 必 须 是 无 菌 样 品 提 取 液 或 稀 释 液, 并 且 样 品 稀 释 时 需 要 使 用 盒 中 提 供 的 无 菌 水 所 以, 样 品 提 取 和 稀 释 必 须 在 无 菌 条 件 下 进 行 以 下 样 品 或 提 取 液 通 常 需 要 无 菌 过 滤 : 样 品 提 取 时 未 加 热 的 果 汁 和 健 康 饮 品 ( 已 在 95 C(203 F) 水 浴 中 加 热 30 分 钟 的 样 品 除 外 ); 蜂 蜜 茶 及 含 草 药 香 料 的 样 品 ; 混 合 维 生 素, 维 生 素 预 混 料, 药 片 ( 高 浓 缩 样 品, 见 6.3)( 已 在 95 C (203 F) 水 浴 中 加 热 30 分 钟 的 样 品 除 外 ); 颜 色 较 深 的 低 浓 度 样 品 ( 过 滤 以 除 掉 颜 色 ); 如 果 过 滤 不 能 除 掉 固 体 小 颗 粒 或 使 颜 色 变 浅, 需 要 在 过 滤 前 先 离 心 ( 大 于 8000 g 条 件 下 5 分 钟 ) 如 果 样 品 已 经 在 95 C(203 F) 水 浴 中 提 取 了 30 分 钟, 不 再 需 要 进 行 无 菌 过 滤 不 过, 提 取 的 样 品 必 须 用 盒 中 提 供 的 无 菌 水 稀 释 ( 培 养 基 也 需 要 无 菌 过 滤 ) 样 品 提 取 液 的 稀 释 倍 数 计 算 示 例 : 固 体 样 品, 标 注 活 性 维 生 素 B2 浓 度 为 3 mg / 100 g( 由 生 产 商 在 标 签 上 标 注 ) 提 取 液 稀 释 应 在 标 准 曲 线 中 间 区 域 因 此, 预 期 浓 度 应 除 以 标 准 2 的 浓 度 计 算 : 3 mg 0.08 mg = 37.5 稀 释 倍 数 40 (1 : 40 稀 释 ) 稀 释 步 骤 : a) 1 : 10 0.1 ml 样 品 提 取 液 + 0.9 ml 试 剂 盒 中 的 无 菌 水 b) 1 : 4 0.25 ml a) 液 + 0.75 ml 试 剂 盒 中 的 无 菌 水 6

6.1. 含 添 加 维 生 素 B2 的 液 体 样 品 ( 富 含 维 生 素 的 果 汁 健 康 饮 品 ) 加 入 1 ml 样 品 至 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 准 确 加 入 蒸 馏 水 至 20 ml, 调 整 ph 值 至 4.5 或 者 : 可 以 用 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 代 替 水 ( 无 需 调 整 ph), 即 :1 ml 均 质 样 品, 加 入 20 ml ph 为 4.5 的 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液, 摇 匀 加 入 10 mg 马 铃 薯 酸 性 磷 酸 酶, 摇 匀 37 C(98.6 F)( 孵 育 箱 或 水 浴 锅 ) 暗 处 孵 育 1 小 时, 其 间 不 时 振 荡 加 入 蒸 馏 水 至 40 ml, 摇 匀 然 后 95 C (203 F) 水 浴 提 取 30 分 钟, 提 取 时 振 荡 至 少 5 次, 并 确 保 离 心 管 紧 闭 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 6.2. 含 添 加 维 生 素 B2 的 果 味 口 香 糖 和 糖 果 称 取 15-20 g 果 味 口 香 糖 或 糖 果 至 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 加 入 约 40 ml 蒸 馏 水, 摇 匀 95 C (203 F) 水 浴 溶 解 样 品, 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 将 样 品 溶 液 转 入 100 ml 容 量 瓶 中 并 定 容 移 取 相 当 于 1 g 样 品 的 溶 液 体 积 至 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 加 入 蒸 馏 水 至 20 ml, 调 整 ph 至 4.5 或 者 : 可 以 用 20 ml ph 为 4.5 的 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 代 替 无 菌 水 ( 无 需 调 整 ph 值 ) 加 入 10 mg 马 铃 薯 酸 性 磷 酸 酶, 摇 匀 37 C(98.6 F)( 孵 育 箱 或 水 浴 锅 ) 暗 处 孵 育 1 小 时, 其 间 不 时 振 荡 加 入 蒸 馏 水 至 40 ml, 摇 匀 然 后 95 C (203 F) 水 浴 提 取 30 分 钟, 提 取 时 振 荡 至 少 5 次, 并 确 保 离 心 管 紧 闭 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 例 如 : 果 味 口 香 糖 样 品 质 量 17 g 计 算 : 100 ml / 17 g 样 品 质 量 = 5.88 ml / g 相 当 于 1 g 样 品 的 体 积 为 5.88 ml 因 此 需 要 移 取 5.88 ml 溶 液 至 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 按 照 上 述 步 骤 继 续 7

6.3. 含 添 加 维 生 素 B2 的 胶 囊, 药 片 和 混 合 维 生 素 首 先 胶 囊 或 药 片 的 重 量 必 须 确 定 ( 平 均 5-10 个 胶 囊 或 药 片 ) 药 片 用 研 钵 或 搅 拌 机 均 质, 胶 囊 须 切 开 并 取 出 其 中 的 颗 粒 进 行 试 验 6.3.1 1 g 样 品 量 的 样 品 处 理 称 取 1 g 药 片 混 合 维 生 素 预 混 料 或 切 开 的 胶 囊 到 500 ml 离 心 管 中, 加 入 约 400 ml 蒸 馏 水, 摇 匀, 用 HCl 调 整 ph 值 至 4.5 加 入 50 mg 马 铃 薯 酸 性 磷 酸 酶, 摇 匀,37 C (98.6 F)( 孵 育 箱 或 水 浴 锅 ) 暗 处 孵 育 1 小 时, 其 间 不 时 振 荡 然 后,95 C (203 F) 水 浴 提 取 30 分 钟, 其 间 振 荡 至 少 5 次, 迅 速 冷 却 到 30 C (86 F) 以 下 将 提 取 溶 液 全 部 加 入 到 1000 ml 容 量 瓶 中, 用 无 菌 水 准 确 定 容 至 刻 度, 摇 匀 取 1 ml 溶 液 至 一 个 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 加 无 菌 水 精 确 至 40 ml 然 后 摇 匀, 无 菌 过 滤 ( 或 者 : 在 95 C 水 浴 中 加 热 30 分 钟, 然 后 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 ), 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 注 意 : 计 算 结 果 必 须 考 虑 到 稀 释 倍 数 1000(1 g 样 品 定 容 到 1000 ml) 1 g 样 品 稀 释 到 40 ml 的 稀 释 倍 数 已 经 包 含 在 标 准 曲 线 中 6.3.2 0.2 g 样 品 量 的 样 品 处 理 称 取 0.2 g 药 片 混 合 维 生 素 预 混 料 或 切 开 的 胶 囊 到 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 加 入 约 20 ml 蒸 馏 水, 摇 匀, 调 整 ph 至 4-5 或 者 : 提 取 时 可 以 用 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 代 替 无 菌 水 ( 无 需 调 整 ph 值 ), 即 :0.2 g 均 质 样 品, 加 入 20 ml ph 为 4.5 的 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液, 摇 匀 加 入 10 mg 马 铃 薯 酸 性 磷 酸 酶, 摇 匀 37 C(98.6 F)( 孵 育 箱 或 水 浴 锅 ) 暗 处 孵 育 1 小 时, 其 间 不 时 振 荡 加 入 蒸 馏 水 至 40 ml, 摇 匀 然 后 95 C (203 F) 水 浴 提 取 30 分 钟, 提 取 时 振 荡 至 少 5 次, 并 确 保 离 心 管 紧 闭 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 然 后 离 心 ( 大 于 8000 g 条 件 下 离 心 5 分 钟 ), 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 上 清 液 注 意 : 计 算 结 果 必 须 考 虑 样 品 重 量 8

6.4. 含 添 加 维 生 素 B2 的 谷 物, 婴 儿 食 品, 面 包, 面 粉 和 肉 制 品 称 量 1 g(ml) 均 质 样 品 至 一 个 50 ml 离 心 管 中, 加 入 无 菌 蒸 馏 水 至 20 ml, 摇 匀, 用 HCl 调 整 ph 至 4.5 或 者 : 提 取 时 可 以 用 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 代 替 无 菌 水 ( 无 需 调 整 ph 值 ), 即 :1 g (ml) 均 质 样 品, 加 入 20 ml ph 为 4.5 的 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液, 摇 匀 加 入 10 mg 马 铃 薯 酸 性 磷 酸 酶, 摇 匀 37 C(98.6 F)( 孵 育 箱 或 水 浴 锅 ) 暗 处 孵 育 1 小 时, 其 间 不 时 振 荡 加 入 蒸 馏 水 至 40 ml, 摇 匀 然 后 95 C (203 F) 水 浴 提 取 30 分 钟, 提 取 时 振 荡 至 少 5 次, 并 确 保 离 心 管 紧 闭 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 然 后 离 心 ( 大 于 8000 g 条 件 下 离 心 5 分 钟 ), 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 上 清 液 6.5. 奶 制 品, 婴 儿 食 品, 肉 及 肉 制 品 的 维 生 素 B2 总 量 ( 包 括 原 生 和 添 加 维 生 素 B2) 提 取 复 合 物 时, 检 测 含 原 生 维 生 素 B2 的 样 品 必 须 先 经 过 酶 化 处 理 使 用 酶 的 其 他 处 理 过 程 参 考 文 献 提 取 过 程 如 下 : 准 确 称 取 1 g (ml) 均 质 样 品 至 一 个 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 加 入 20 ml 蒸 馏 水, 摇 匀, 用 HCl 调 整 ph 至 4.5 或 者 : 在 提 取 时 可 以 用 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 代 替 无 菌 水 ( 不 需 要 调 整 ph), 即 :1 g (ml) 样 品 溶 解 到 20 ml ph 值 为 4.5 的 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 中, 摇 匀 加 入 300 mg 的 高 峰 淀 粉 酶 和 10 mg 马 铃 薯 酸 性 磷 酸 酶, 摇 匀,37 C (98.6 F) 暗 处 孵 育 1 小 时 ( 孵 育 箱 或 水 浴, 其 间 不 时 振 荡 ) 加 入 蒸 馏 水 至 40 ml 95 C (203 F) 水 浴 加 热 提 取 30 分 钟, 其 间 振 荡 至 少 5 次, 确 保 离 心 管 塞 紧 闭 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 然 后 离 心 ( 大 于 8000 g 条 件 下 离 心 5 分 钟 ), 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 上 清 液 6.6. 谷 物 的 维 生 素 B2 总 量 ( 含 原 生 和 添 加 维 生 素 B2) 谷 物 样 品 需 要 高 压 灭 菌 处 理, 有 效 地 提 取 复 合 物 和 原 生 维 生 素 B2 9

称 量 1 g 样 品 至 一 个 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 加 入 约 20 ml 蒸 馏 水, 摇 匀, 调 整 ph 值 在 5-6 之 间 121 C (249.8 F) 高 压 灭 菌 30 分 钟 ( 不 要 完 全 紧 闭 盖 子 ) 冷 却, 加 入 蒸 馏 水 至 40 ml 然 后 摇 匀, 无 菌 过 滤 最 后, 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 滤 液 或 者 上 清 液 6.7. 酵 母 粉 和 酵 母 制 品 的 维 生 素 B2 总 量 ( 包 括 原 生 和 添 加 维 生 素 B2) 称 量 1 g(ml) 均 质 样 品 至 一 个 50 ml 无 菌 离 心 管 中, 加 入 约 10 ml 0.1 mol / l H 2 SO 4 溶 液, 摇 匀,121 C (249.8 F) 高 压 灭 菌 30 分 钟 ( 不 要 完 全 紧 闭 盖 子 ) 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下, 加 入 3 ml 2.5 mol / l 的 醋 酸 钠 溶 液, 摇 匀 加 入 300 mg 高 峰 淀 粉 酶 和 10 mg 马 铃 薯 酸 性 磷 酸 酶, 再 次 摇 匀 37 C 暗 处 孵 育 过 夜 12-16 小 时 然 后 加 入 蒸 馏 水 至 40 ml,95 C (203 F) 水 浴 提 取 30 分 钟, 其 间 振 荡 至 少 5 次, 确 保 离 心 管 塞 紧 闭 迅 速 冷 却 至 30 C (86 F) 以 下 离 心 ( 大 于 8000 g 条 件 下 离 心 5 分 钟 ), 根 据 浓 度 范 围, 确 定 是 否 在 1.5 ml( 或 2.0 ml) 无 菌 试 管 中 进 一 步 稀 释 上 清 液 7. 检 测 过 程 7.1. 实 验 准 备 装 有 无 菌 水 的 瓶 子 : 推 开 有 色 盖, 沿 着 玻 璃 边 缘 垂 直 向 上 拉 开, 丢 弃 每 个 维 生 素 B2 标 准 品 都 足 够 进 行 至 少 3 个 孔 的 试 验 标 准 品 必 须 在 试 验 之 前 新 鲜 制 备 打 开 维 生 素 B2 标 准 品 瓶, 盖 子 朝 上 放 置 添 加 x ml (x = 详 见 质 量 保 证 书 和 标 准 品 瓶 ) 无 菌 水 ( 取 自 试 剂 盒 ) 至 标 准 品 瓶 中 盖 上 标 准 品 瓶 盖, 摇 匀 稀 释 = 标 准 品 浓 缩 液 取 6 个 无 菌 管 (1.5 或 2.0 ml), 并 按 照 下 列 表 格 准 备 标 准 品 溶 液 : 标 准 曲 线 * mg / 100 g (ml) 无 菌 水 µl 标 准 品 浓 缩 液 µl 总 体 积 µl 空 白 : 0 900 + 0 = 900 标 准 品 1: 0.04 900 + 100 = 1000 标 准 品 2: 0.08 400 + 100 = 500 标 准 品 3: 0.12 350 + 150 = 500 标 准 品 4: 0.16 300 + 200 = 500 标 准 品 5: 0.24 200 + 300 = 500 * 样 品 提 取 稀 释 倍 数 1:40 已 经 包 含 在 标 准 曲 线 中 10

维 生 素 B2 培 养 基 : 足 够 进 行 至 少 6 条 微 孔 板 条 试 验 打 开 瓶 盖 用 镊 子 取 出 干 燥 剂 ( 丢 掉 干 燥 剂 ) 加 入 10 ml 无 菌 水 ( 取 自 试 剂 盒 ) 至 维 生 素 B2 培 养 基 瓶 中 盖 好 培 养 基 瓶, 摇 匀 95 C (203 F) 水 浴 加 热 5 分 钟, 其 间 振 荡 至 少 2 次, 并 确 保 瓶 子 封 闭 迅 速 冷 却 至 室 温 (30 C (86 F) 以 下 ) 使 用 0.2 μm 无 菌 滤 膜 过 滤 培 养 基 至 15 ml 无 菌 离 心 管 中 7.2. 检 测 过 程 微 孔 板 实 验 中 必 须 使 用 无 菌 水 稀 释 的 无 菌 样 品, 无 菌 水 取 自 试 剂 盒 取 出 需 要 数 量 的 微 孔 板 条 并 在 板 上 固 定, 未 使 用 的 微 孔 板 条 立 即 放 回 原 来 的 箔 袋 中, 并 与 干 燥 剂 一 起 重 新 封 好, 储 存 在 2-8 C (35.6-46.4 F) 条 件 下 移 液 器 先 移 取 培 养 基, 之 后 标 准 品 或 稀 释 的 样 品, 如 下 : 移 取 150 µl 维 生 素 B2 培 养 基 至 微 孔 中 移 取 150 µl 标 准 品 或 稀 释 的 样 品 至 指 定 的 微 孔 中 ( 用 标 准 品 或 样 品 溶 液 冲 洗 移 液 器 尖 ) 用 粘 合 箔 盖 住 板 条 或 微 孔 : 除 去 粘 合 箔 上 的 保 护 层, 将 其 平 放 在 微 孔 条 上, 用 手 将 粘 合 箔 平 压, 使 其 充 分 封 闭 微 孔 板 条 注 意 : 保 证 粘 合 箔 和 微 孔 的 封 闭 性, 特 别 注 意 微 孔 的 边 缘 部 分 在 37 C (98.6 F) 黑 暗 条 件 下 孵 育 44-48 小 时 7.3. 测 量 再 次 压 紧 粘 合 箔, 将 微 孔 板 翻 置 在 桌 面 上, 在 桌 面 平 面 上 振 荡, 使 微 生 物 溶 解 在 培 养 基 中 将 微 孔 板 翻 回 如 前 置 于 桌 面 上, 从 右 上 角 开 始 以 对 角 线 方 向 180 角 轻 扯 下 粘 合 箔, 与 此 同 时 务 必 用 另 一 只 手 按 住 放 置 在 桌 面 上 的 微 孔 板, 以 防 止 因 粘 合 箔 与 微 孔 板 粘 合 过 紧 而 在 撕 扯 时 带 起 微 孔 板 破 坏 微 孔 中 液 体 表 面 的 所 有 泡 沫 ( 可 以 用 移 液 管 尖 或 针 状 物 ) 用 酶 标 仪 610-630 nm( 或 540-550 nm) 条 件 下 读 取 混 浊 度 注 意 : 孵 育 44-48 小 时 后, 微 孔 板 在 冰 箱 里 最 多 能 储 存 48 小 时, 因 此 必 须 在 这 个 时 间 段 内 测 量 混 浊 度 为 了 避 免 由 于 假 期 或 周 末 所 产 生 的 时 间 上 的 损 失, 微 孔 板 也 可 以 在 60 小 时 之 后 进 行 评 估 计 算 推 荐 使 用 定 时 器 在 44-48 小 时 之 后 关 闭 孵 育 器 11

8. 计 算 推 荐 在 计 算 结 果 时 使 用 拜 发 公 司 提 供 的 配 套 的 RIDA SOFT Win 软 件 判 定 检 测 结 果 有 效 : OD 空 白 值 < OD 标 准 1 OD 标 准 5 > 0.6 OD 样 品 稀 释 倍 数 40 已 经 包 括 在 标 准 曲 线 中 ( 详 见 质 量 保 证 书 ) 在 下 面 的 公 式 中, 只 需 要 考 虑 提 取 的 进 一 步 稀 释 倍 数 和 不 同 的 样 品 重 量 维 生 素 B2 = (mg / 100 g) (mg / 100 ml) 标 准 曲 线 读 取 的 浓 度 稀 释 倍 数 样 品 重 量 g (ml) 例 如 : 样 品 重 量 : 1 g 样 品 提 取 稀 释 : 1 : 40( 不 需 要 考 虑 ) 样 品 提 取 液 的 稀 释 : 1 : 40 ( 必 须 考 虑 ) 标 准 曲 线 读 取 浓 度 : 0.08 mg 维 生 素 B2 / 100 g 0.08 40 / 1 = 3.2 mg 维 生 素 B2 ( 核 黄 素 ) / 100 g 胶 囊, 药 片, 混 合 维 生 素 的 计 算 : 维 生 素 B2 mg / 药 片 或 胶 囊 = 标 准 曲 线 读 取 的 浓 度 稀 释 倍 数 药 片 或 胶 囊 重 量 g 样 品 重 量 g 100 以 上 信 息 是 基 于 我 们 现 有 知 识 的 基 础 上 对 我 们 的 产 品 及 其 相 关 应 用 的 说 明 而 并 非 对 产 品 的 任 何 特 定 性 能 或 特 定 使 用 目 的 进 行 担 保 R-Biopharm 德 国 拜 发 公 司 不 承 担 除 试 剂 基 本 品 质 之 外 的 任 何 责 任 除 因 产 品 使 用 而 造 成 的 直 接 或 间 接 损 坏 及 损 失 外, 其 他 有 缺 陷 的 试 剂 盒 可 退 换 12

12. 文 献 Official Methods of Analysis (AOAC) 960.46 AOAC 940.33 Riboflavin (Vitamin B2) in Vitamin Preparations Schweizer Lebensmittelbuch SLMB Kapitel 62 / 7.2.1 Vitamin-Bestimmungen, Verlag Chemie GmbH Weinheim/Bergstr.; Strohecker und Henning The Vitamins, 2. Auflage, Vol. VII. Academic Press, New York/London (1967): V. Herbert und J. R. Bertino 13