TripleTOF 5600 和 PeakView 及 XIC 管理者软件联用, 让未知物筛查和确证更简单 更快捷 更方便 拥有准确质量数的高分辨 MS/MS 二级质谱图为您带来更多的未知物信息 André Schreiber and David Cox AB SCIEX, Concord, Ontario, Canada 概述本文主要讲述利用 AB Sciex 公司 TripleTOF 5600 LC / MS/ MS 的高分辨率和精确质量数, 来筛选的水果提取物和蔬菜农药残留的样品 一次进样可同时取得精确质量数的一级和二级质谱图, 而自动取得 MS / MS 图谱可进行谱库检索, 用于检测化合物的鉴定 PeakView 软件中的 XIC 管理者功能特别适合用于多目标化合物筛查和完全未知物筛查的数据处理 XIC 管理者主要功能是可根据一个定义了精确质量数或者分子式的表格, 自动生成多个化合物的提取离子流色谱图, 并有能力对于检测到的化合物进行鉴定确认, 同时对未知物的鉴定确认涵盖了保留时间, 准确质量, 同位素模式和 MS / MS 库检索 四大关 因素, 因而鉴定结果的高度可信性 简介液相色谱串联质谱法 (LC-MS/MS) 被广泛应用于食物中药物和有机污染物的残留分析 基于三重四极杆的多反应监测 (MRM) 模式, 提供高选择性和高灵敏度的定量结果, 但只限于有目标化合物的筛选 随着对数据可溯源性和未知物的分析需求不断增加, 全扫描质量分析器得到普及 AB 公司 Sciex 公司 TripleTOF 5600 系统同时采集高灵敏度的全扫描质谱谱图, 并同时达到高分辨率和高质量准确度 此外, 信息触发采集模式 (IDA) 可用于同时采集 MS / MS 谱图, 无以伦比的 MS / MS 谱图采集速度让基于 MS/MS 谱库基础上的化合物匹配检索成为可能 TripleTOF 5600 一次进样可同时取得精确质量数的一级和二级质谱图, 带来了大量的数据, 因而需要强大的数据处理工具 XIC 管理者非常胜任这样的工作, 管理者功能特别适合用于多目标化合物筛查和完全未知物筛查的数据处理, 对未知物的鉴定确认涵盖了保留时间, 准确质量, 同位素模式和 MS / MS 库检索四大因素, 让您对筛查结果更加自信 下面是我们使用 AB Sciex 公司 TripleTOF 5600 系统来进行筛选和鉴定水果和蔬菜中农药残留的一个实例, 充分展示了 XIC 管理者是多目标化合物筛查和完全未知物筛查的强有力的工具
方法 通过 289 农药的标准溶液来确定保留时间, 岛津 UFLC XR 液相色谱系统,Restek 亲水性 C18 色谱柱 (3um,100x2.1 mm), 分析时间 :15 分钟, 一个水和甲醇甲酸铵缓冲液的简单梯度, 流速为 0.5mL/min 样品前处理方法 : 不同的水果和蔬菜样品经过一改良的 QuEChERS 方法, 并通过水流动相进行 5 倍稀释, 优化色谱峰形状的同时, 尽量减少离子抑制效果 进样量设定为 10 微升 AB Sciex 公司 TripleTOF 5600 系统 Turbo V 离子源和电喷雾电离 (ESI) 探针 采用信息触发采集模式 (IDA), 用于含 100 毫秒飞行时间质谱检测和 10 个相关的 TOF-MS/MS 扫描, 碰撞能量 (CE) 为 10V, 以及碰撞能量范围 (CES) 为 15V 结果与讨论 如何设定 XIC 管理者的 XIC 列表和数据处理选项 首先, 在 Peakview 软件里的 XIC 管理者中, 通过 show 菜单可以直接打开数据文件 如 Fig1 所示,XIC 管理者中的表格包含名称, 分子式, 加成物 / 修饰, 保留时间, 峰宽, 等等, 这张表格可直接编辑, 例如 : 要添加一个新的化合物, 可直接输入分子式, 软件能自动计算出精确分子量, 同位素值, 加成离子等等, 或者直接从其它 excel 表格中粘贴过来 而编辑过的 XIC 表格可被保存, 用于以后的数据处理 如 Fig2 所示, 可通过 选项 对话框来优化或者调整显示的设置, 包括设置强度, 信噪比的阈值, 以及质量数偏离, 保留时间, 同位素匹配, 谱库匹配的阈值 ( 图 2) 要开始数据处理, 只需点击该表右下方的按钮 取离子流的过程, 并同时开展化合物的 四大关 鉴定, 最终显示结果 XIC 管理者将自动进行提 图 1. XIC 管理者软件中的 XIC 表用于目标农药 ( 可适用于 2000 种以上 ) 的筛查和鉴定
XIC 管理者结果展示如 Fig3 所示, 数据处理后, 结果同时显示在色谱图和 XIC 管理者表中 包括所有质量数吻合的化合物, 同时给出质量数误差 (ppm 或 mda), 保留时间, 以及谱库搜索到的结果 定义强度阈值以上的 XICs 以绿色突出显示, 同时化合物鉴定的可信度用 红绿灯 指示灯的形式给出, 使结果一目了然 Fig2. 化合物确证的可信度设置 Fig3. XIC 管理者中的结果显示, 目标农药的 XICs 即提取离子流谱图 (5ng/mL 289 种农药 )( 上 ) 以及所有确证合物的相关信息, 包括质量数误差 (ppm 或 mda), 保留时间, 以及谱库搜索的结果, 以及用 红绿灯 指示灯形式给出的可信度, 结果一目了然 ( 下 )
目标未知物筛查的实例 ( 图 4-6) 不同的水果和蔬菜样品通过 XIC 管理者软件进行处理,XIC 的既定表格包含了 289 种目标农药, 并同时进行 MS/MS 谱库检索 图 6 芥菜样本,Flonicamid, 使用精确质量数和 MS / MS 库同时进行确证 图 4 中国西兰花样品, 检出吡虫啉, 甲霜灵,Spirotetramat, 和嘧菌环胺, 使用精确质量数和 MS / MS 库同时进行确证 非目标化合物的筛查通过 MS/MS 谱库检索进行确证 实际样品谱图通过内置在 XIC 管理者里的非目标化合物筛查程序进行数据处理 自动采集的 TOF-MS/MS 谱图通过 MS/MS 谱库进行搜索 ( 图 7 和 8) 图 5 番茄样本, 检出噻虫嗪, Mandipropamid, 和恶醚唑, 使用精确质量数和 MS / MS 库同时进行确证 图 7 大头菜实际样品谱图通过内置在 XIC 管理者里的非目标化合物筛查程序进行数据处理, 发现了吡虫啉, 咯菌腈, 嘧菌环胺以及 Spinosyn A 和 D 并通过 MS/MS 谱库匹配进行了确证
致谢作者在此感谢美国 FDA 食品安全中心和应用营养 (CFSAN)Jon Wong 和 Zhang Kai, 提供标准和样品. 参考文献 1. M. Anastassiades, et al. J. AOAC Int. 86 (2003) 412-431 2. XIC Manager User Manual: AB SCIEX (2011) 图 8 番茄实际样品谱图通过内置在 XIC 管理者里的非目标化合物筛查程序进行数据处理, 发现了噻虫嗪, 多菌灵, 并通过 MS/MS 谱库匹配进行了确证 结论采用高分辨率和精确质量数的 LC- MS/MS 来对水果和蔬菜提取物进行农药残留的筛选 内嵌在 Peakview 软件里的 XIC 管理者非常适合用于目标和非目标化合物的筛查 AB Sciex 公司 TripleTOF 5600 系统可通过在飞行时间质谱 (TOF-MS) 扫描中, 同时 IDA 触发多达 10 个相关 TOF-MS / MS 分析扫描, 在 XIC 管理者软件里, 根据分子式和保留时间等信息得到目标农药的提取离子色谱图, 并通过精确质量数, 同位素信息和 MS / MS 库进行进一步确证