中国实验动物学会 团体标准 实验动物 SPF 猪微生物学监测总则 编制说明 联系人 : 韩凌霞联系电话 :13903601380 编制单位 : 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所时间 :2017 年 1 月 2 日
中国实验动物学会团体标准 实验动物则 编制说明 SPF 猪微生物学监测总 ( 一 ) 工作简况, 包括任务来源 协作单位根据中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会有关文件及 GB/T 16733 国家标准制定程序的阶段划分及代码 和 采用快速程序制定国家标准的管理规定 的要求, 结合实验动物领域具体情况, 由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草本标准 起草单位为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 主要起草人陈洪岩 高彩霞 韩凌霞 ( 二 ) 主要工作过程 标准主要起草人及其所做的工作等 2016 年上半年, 召开了标准起草启动会和研讨会, 确定了起草标准的内容 方案和可行性, 并完成了对收集到的国内外相关标准及相关资料数据的整理 分析, 为整理 SPF 猪微生物学监测项目提供基础参数 2016 年下半年, 向实验动物研究 猪培育和猪病研究等相关领域的专家请教, 根据其建议和意见, 起草小组进行了反复的研究和商讨后, 提出本标准研究稿 ( 三 ) 标准编写背景无特定病原体 (Specific pathogen free, SPF) 猪是指在清洁级猪的基础上, 排除了主要潜在感染或条件致病性和对科学试验干扰大的病原体的猪, 饲养在屏障环境或隔离环境中, 是符合国际通用标准的实验动物 标准化 SPF 猪的生产 应用和动物模型是我国农业生命科学研究的基础和重要的支撑条件之一 欧美已完成 SPF 猪的培育, 而我国尚未建立符合我国国情的 SPF 猪标准, 已有的标准 GB/T 22914-2008 SPF 猪病原的控制与监测 主要考虑的是我国养猪业的现状, 偏向于集约化生产, 并未考虑实验动物化需求, 而且颁发时间较早, 地方标准 DB/T 828.1-2011 实验用小型猪微生物学等级及监测 和 DB23/T 1674-2015 无特定病原体猪微生物学监测技术规范 针对我国实验用小型猪以及部分现流行的病原并未做出规定, 因此导致我国实验用猪携带的病原体质量不清, 各种疫苗免疫或自然感染形成的抗体水平参差不齐, 严重制约我国畜禽疫病防控产品的创制 防控措施的建立和防控效果的科学评价 因此参照国外发达国家 SPF 猪的微生物监测, 结合我国国情制定 SPF 猪微生物学监测标准, 可加快实验用猪标准化进程, 为我国科技自主创新和重大疫病防控提供有力支撑 ( 四 ) 标准编制原则本标准在制定中编写格式符合 GB/T 1.1-2000 的规定, 规定的技术内容及要求科学合理, 具有适用性和可操作性 本标准编写依据 :GB/T 22914-2008 SPF 猪病原的控制与监测 地方标准 DB/T 828.1-2011 实验用小型猪微生物学等级及监测 和 DB23/T 1674-2015 无特定病原体猪微生物学监测技术规范 以及迄今为止国内外研究机构发表的以 SPF 猪作为实验材料开展的微生物学质量控制研究成果 丹麦 SPF 猪群的标准是排除 14 种疾病 : 地方流行性肺炎 胸膜肺炎嗜血杆菌病 萎缩性鼻炎 猪痢疾 伪狂犬病 古典猪瘟 非洲猪瘟 传染性胃肠炎 口蹄疫 猪水疱病 布氏杆菌病 旋毛虫病 螨和虱 日本 SPF 猪协会推荐的 SPF 养猪标准中 SPF 猪排除 5 种疾病 : 猪气喘病 ( 猪霉形体性肺炎 ) 猪萎缩性鼻炎 猪痢疾 伪狂犬病和猪弓浆虫病, 部
分家畜试验场根据当地生产情况增加了猪巴氏杆菌病和猪接触传染性胸膜肺炎 ( 又称嗜血杆菌感染症, 病原为胸膜肺炎放线杆菌 ) 加拿大 SPF 猪已排除地方流行性肺炎 胸膜肺炎 猪繁殖与呼吸综合征 猪传染性胃肠炎 猪萎缩性鼻炎 猪痢疾和疥癣 台湾 SPF 猪主要排除对象有 7 种 : 萎缩性鼻炎 流行性肺炎 伪狂犬病 嗜血杆菌肺炎 猪赤痢 弓虫症和疥癣 ( 五 ) 确定标准主要内容 ( 如技术指标 参数 公式 性能要求 试验方法 检验规则等 ) 的论据 ( 包括试验 统计数据 ) 1 规定了 SPF 猪病原微生物检测项目和检测方法 根据我国猪病流行和发病情况以及国外发达国家 SPF 猪排除病原体种类的要求, 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所进行了我国 SPF 猪微生物监测标准的研究, 确定了 SPF 猪微生物学监测的病原体种类, 检测项目有猪瘟 口蹄疫 猪繁殖与呼吸综合征 流行性乙型脑炎 猪伪狂犬病 猪圆环病毒病 猪细小病毒病 猪布鲁菌病 猪传染性胃肠炎 猪流行性腹泻 猪巴氏杆菌病 猪放线杆菌胸膜肺炎 猪痢疾 猪萎缩性鼻炎 沙门氏菌病 猪支原体肺炎 猪流感 副猪嗜血杆菌病 猪链球菌病 猪皮肤真菌病 检测方法按已有标准规定的方法进行检测, 包括 GB 16551 猪瘟检疫技术规范 GB/T 18935 口蹄疫检疫技术规程 GB/T 18090 猪繁殖和呼吸综合征诊断方法 GB/T 18638 流行性乙型脑炎诊断技术 GB/T 18641 伪狂犬病诊断技术 GB/T 21674 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法 GB/T 18646 动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T 14926.4 实验动物皮肤病原真菌检测方法 GB/T 19915.1 猪链球菌 2 型平板和试管凝集试验操作规程 GB/T 19915.2 猪链球菌 2 型分离鉴定操作规程 GB/T 27535 猪流感 HI 抗体检测方法 NY/T 537 猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术 NY/T 544 猪流行性腹泻诊断技术 NY/T 545 猪痢疾诊断技术 NY/T 546 猪萎缩性鼻炎诊断技术 NY/T 548 猪传染性胃肠炎诊断技术 NY/T 550 动物和动物产品沙门氏菌检测方法 NY/T 564 猪巴氏杆菌病诊断技术 NY/T 1186 猪支原体肺炎诊断技术 DB13T 1216 副猪嗜血杆菌病防治技术规程 SN/T 2708 猪圆环病毒检疫技术规范 SN/T 1919 猪细小病毒病红细胞凝集抑制试验操作规程和 SB/T 10463 猪肺炎支原体检验方法 2 规定了 SPF 猪微生物学监测程序和检测内容 根据规定的检测项目, 参考已有标准制定了 SPF 猪微生物学监测程序 ( 图 1) 和检测内容
图 1 SPF 猪微生物学监测流程示意图 3 规定了结果判定 样品检测项目的检测结果均为阴性者, 判为合格, 若有 1 项以上 ( 含 1 项 ) 为阳性, 则判为不合格 ( 六 ) 主要试验 ( 或验证 ) 的分析 综述报告, 技术经济论证, 预期的经济效果 2014 年 12 月, 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进纯种大约克夏和长白猪共 100 头进行采血采样, 经检疫部门检疫, 引进猪无猪喘气病 猪胸膜性肺炎 (1,2,5,7,12 型 ) 萎缩性鼻炎 猪痢疾 猪繁殖与呼吸综合症 猪传染性胃肠炎 猪流行性腹泻 猪流感 伪狂犬等动物疫病, 项目组分别在 2015 年 1 月和 5 月对猪群进行包括猪瘟 口蹄疫 猪繁殖与呼吸综合征 流行性乙型脑炎 猪伪狂犬病 猪圆环病毒病 猪布鲁氏菌病 猪链球菌病 猪萎缩性鼻炎 猪放线杆菌胸膜肺炎 猪支原体肺炎 猪流感 猪传染性胃肠炎 猪细小病毒病等在内的 14 个检测参数的检测, 结果均为阴性 2016 年 8 月, 课题组研究人员对大白猪和长白猪共 92 头进行抗体检测, 包括猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 猪伪狂犬病 猪轮状病毒病 猪圆环病毒病 猪传染性胃肠炎 猪细小病毒病 A 型猪流感 口蹄疫 猪乙型脑炎 猪胸膜肺炎 副猪嗜血杆菌病 猪布鲁氏杆菌病 猪支原体肺炎 猪链球菌病共 15 种疫病, 其中猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 猪伪狂犬病 猪传染性胃肠炎 A 型猪流感 口蹄疫 猪布鲁氏杆菌病等 7 种为阴性, 其余 8 种部分为阳性 进行病原检测, 包括猪圆环病毒 猪轮状病毒 猪传染性胃肠炎 流行性腹泻和猪胸膜肺炎共 5 种病原体, 其中猪圆环病毒 猪传染性胃肠炎病毒 流行性腹泻病毒阴性, 猪轮状病毒和猪胸膜肺炎放线杆菌为阳性 以上基础研究结果为我们制定团体标准提供了重要依据 ( 七 ) 采用国际标准和国外先进标准的程度, 以及与国际 国外同类标准水平的对比情况, 或与测试的国外样品 样机的有关数据对比情况目前我国尚未建立符合我国国情的 SPF 猪标准, 已有的标准 GB/T 22914-2008 SPF 猪
病原的控制与监测 主要考虑的是我国养猪业的现状, 偏向于集约化生产, 并未考虑实验动物化需求, 而且颁发时间较早, 地方标准 DB/T 828.1-2011 实验用小型猪微生物学等级及监测 和 DB23/T 1674-2015 无特定病原体猪微生物学监测技术规范 针对我国实验用小型猪以及部分现流行的病原并未做出规定 检测方法按已有标准规定的方法进行检测, 包括 GB 16551 猪瘟检疫技术规范 GB/T 18935 口蹄疫检疫技术规程 GB/T 18090 猪繁殖和呼吸综合征诊断方法 GB/T 18638 流行性乙型脑炎诊断技术 GB/T 18641 伪狂犬病诊断技术 GB/T 21674 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法 GB/T 18646 动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T 14926.4 实验动物皮肤病原真菌检测方法 GB/T 19915.1 猪链球菌 2 型平板和试管凝集试验操作规程 GB/T 19915.2 猪链球菌 2 型分离鉴定操作规程 GB/T 27535 猪流感 HI 抗体检测方法 NY/T 537 猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术 NY/T 544 猪流行性腹泻诊断技术 NY/T 545 猪痢疾诊断技术 NY/T 546 猪萎缩性鼻炎诊断技术 NY/T 548 猪传染性胃肠炎诊断技术 NY/T 550 动物和动物产品沙门氏菌检测方法 NY/T 564 猪巴氏杆菌病诊断技术 NY/T 1186 猪支原体肺炎诊断技术 DB13T 1216 副猪嗜血杆菌病防治技术规程 SN/T 2708 猪圆环病毒检疫技术规范 SN/T 1919 猪细小病毒病红细胞凝集抑制试验操作规程和 SB/T 10463 猪肺炎支原体检验方法 部分检测方法为国际通用方法, 因此本标准检测方法与国际接轨 ( 八 ) 与有关的现行法律 法规和强制性标准的关系本标准在编制过程中参照了一些已有标准, 补充了部分检测项目, 与国内现行法律 法规和强制性标准没有冲突关系 ( 九 ) 重大分歧意见的处理经过和依据从标准结构框架和制定原则的确定 标准的引用 有关技术指标和参数的试验验证 主要条款的确定直到标准草稿征求专家意见 ( 通过函寄和会议形式多次咨询和研讨 ), 均未出现重大意见分歧的情况 ( 十 ) 标准作为强制性标准或推荐性标准的建议本标准建议,SPF 猪微生物学监测的病原体种类为强制性条款, 检测方法可根据需要依据推荐标准监测 ( 十一 ) 贯彻标准的要求和措施建议 ( 包括组织措施 技术措施 过渡办法等内容 ) 建议由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会组织本标准的宣传 推广和实施监督 ( 十二 ) 废止现行有关标准的建议无 ( 十三 ) 其他应予说明的事项 本部分的制定引用了以下文件 : GB 16551 猪瘟检疫技术规范 GB/T 18935 口蹄疫检疫技术规程 GB/T 18090 猪繁殖和呼吸综合征诊断方法 GB/T 18638 流行性乙型脑炎诊断技术 GB/T 18641 伪狂犬病诊断技术 GB/T 21674 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法
GB/T 18646 动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T 19915.1 猪链球菌 2 型平板和试管凝集试验操作规程 GB/T 19915.2 猪链球菌 2 型分离鉴定操作规程 GB/T 27535 猪流感 HI 抗体检测方法 GB/T 14926.4 实验动物皮肤病原真菌检测方法 NY/T 537 猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术 NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法 NY/T 544 猪流行性腹泻诊断技术 NY/T 545 猪痢疾诊断技术 NY/T 546 猪萎缩性鼻炎诊断技术 NY/T 548 猪传染性胃肠炎诊断技术 NY/T 550 动物和动物产品沙门氏菌检测方法 NY/T 564 猪巴氏杆菌病诊断技术 NY/T 1186 猪支原体肺炎诊断技术 DB13T 1216 副猪嗜血杆菌病防治技术规程 SN/T 2708 猪圆环病毒检疫技术规范 SN/T 1919 猪细小病毒病红细胞凝集抑制试验操作规程 SB/T 10463 猪肺炎支原体检验方法