期 韩 蕾 雷金娥 祁 杰 等 多重耐药鲍曼不动杆菌的临床流行特征 +,#""##"" &!( "*"/,"#*.*####& ' " ##+,###"# ###!$ 鲍曼不动杆菌 是一种重要的条件致病菌 可引起呼吸机相关性肺炎及创口 血流 泌尿系 中枢神经系统等感染 在长期收住于 '* 的免疫力较

第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& '& 临床研究 多重耐药鲍曼不动杆菌的临床流行特征 韩 蕾 雷金娥 祁 杰 $ 徐纪茹 韩少山 % 西安交通大学医学部基础医学院病原生物学与免疫学系 陕西西安 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 陕西西安 西安交通大学第一附属医院检验科 陕西西安 $ 陕西省人民医院心内二科 陕西西安 % 西安交通大学第一附属医院肝胆外科 陕西西安 摘要 目的 对西安交通大学第一附属医院收集的多重耐药鲍曼不动杆菌进行菌种确认 并检测其临床感染分布特点 耐药性及分子分型特征 方法 收集经 &' 鉴定的多重耐药鲍曼不动杆菌 $ 株 利用特异性引物 $ 和 $( 通过 *( 扩增的方法复检菌株 使用 &' 检测鲍曼不动杆菌的药物敏感性 通过多位点序列分型 +,- 方法分析临床菌株的同源性 结果 经过特异性 *( 扩增法确认 $ 株临床样本中有 $ 株为鲍曼不动杆菌 它们大多分离自痰标本 主要收集于重症监护室 呈多重耐药性 +,- 分析发现 -.%-- 及 - 共 $ 种 - 型 其中 - 与 - 亲缘关系最近 结论 特异性 *( 扩增法可快速 准确地鉴定鲍曼不动杆菌 本院的多重耐药鲍曼不动杆菌主要分布在重症监护室 仅对替加环素等少数抗生素有较高敏感性 存在同源性差异 关键词 多重耐药鲍曼不动杆菌 特异性 *( 扩增鉴定 临床流行特征 多位点序列分型 +,- 中图分类号 ( 文献标志码 / %!!"##$!!!! 0/1,#,'!# '# $ " 0/1-232! % 4#25#!36+337382!'55"!3738-3373692 +#27-#!#36 :2!233!8!;#0#27-#!#*#!#:2!#,232336!;3!5#!2!#!#(#72#34#2#+!36"23!:2! 4#25#!36,2323 +#!##/672#032736:2!233!8!;#:2!$4#25#!36*23738-22!3;!27 #37#:0327:2!%4#25#!360#2372-"8# #/672#032736:2!233!8!;#:2!*!2 %&'%##"!( ##" * ## +, #""**# #"######&-##"$!(##.#" *""* %/01."* ####$"$ +, #&(*#####."#" %/01&("!(." ##!$& -#"$ $(. "". " # /,&!$"$$ $.%$$"$&."##& $## 收稿日期 % 修回日期 $ 基金项目 陕西省自然科学基础研究计划青年人才项目 '&. 中央高校基本科研业务费专项资金 '&$ $"* '$##"$2+# '&"."# ",'&$ 通信作者 韩少山 &0&2&# 优先出版 3&#3&3#"&..&&&.%&$&

期 韩 蕾 雷金娥 祁 杰 等 多重耐药鲍曼不动杆菌的临床流行特征 +,#""##"" &!( "*"/,"#*.*####& ' " ##+,###"# ###!$ 鲍曼不动杆菌 是一种重要的条件致病菌 可引起呼吸机相关性肺炎及创口 血流 泌尿系 中枢神经系统等感染 在长期收住于 '* 的免疫力较低及持续使用抗生素的患者中感 染率尤其高 其对部分抗生素天然耐药 还可通过水平转移 基因突变 外膜蛋白或外排泵活性改变等不同方式对多种抗生素发生耐药 导致多重耐药菌 的产生 增加了临床用药选择与治疗的难度 鲍曼不动杆菌可粘附在各类医用材料及器械上 并可在干燥环境中长期生存 因此易通过感染的患者 被污染的仪器设备 医护人员的手及通风设备等 $% 进行传播 从而引起院内暴发流行 本研究自西安交通大学第一附属医院收集多重耐药鲍曼不动杆菌临床致病菌株 经种属确认后检测它们的临床感染分布特点 耐药性及分子分型特征 分析本院耐药鲍曼不动杆菌的临床流行特征 为合理用药治疗及加强院内感染的管理提供依据 ( 材料与方法 (( 细菌及培养条件 自 年 月至 年 月 从西安交通大学第一附属医院收集经 &' 全自动微生物分析仪鉴定为多重耐药鲍曼不动杆菌 表 ( 本研究中所用引物 25#"#!" 的临床菌株 $ 株 耐药标准菌株 /**. 为本实验室保存 用 +"#7#0!3!+0 培养基培养细菌 并进行药物敏感性检测 (*+% 提取及, 特异性引物鉴定 使用细菌 41/ 提取试剂盒 天根 对 $ 株鲍曼不动杆菌进行基因组 41/ 提取 操作步骤按说明书进行 为确保实验准确性 使用特异性引物 $ 和 $( 通过 *( 方法复检菌株 引物序列见表 采用 37#!2 *(-#5 天根 进行 *( 扩增 反应体系遵照说明书 *( 循环体系.$ % 5!.$ %% 个循环 5! 取 %, *( 产物在 8, 琼脂糖凝胶中电泳检测 并在成像分析仪中拍照分析 (- 药物敏感性检测 使用 &' 全自动微生物分析仪对鲍曼不动杆菌进行药物敏感性检测 检测的抗生素包含氨苄西林 氨苄西林 舒巴坦 哌拉西林 哌拉西林 他唑巴坦 头孢唑林 头孢呋辛 头孢替坦 头孢他啶 头孢曲松钠 头孢吡肟 氨曲南 亚胺培南 美罗培南 阿米卡星 庆大霉素 妥布霉素 环丙沙星 左氧氟沙星 呋喃妥英 复方新诺明 头孢哌酮 舒巴坦及替加环素等 引物名称引物序列 % 扩增长度 来源 $ $( 25# 25#( 25# 25#( 25 25( # #( 25# 25#(!25#!25#(!25#!25#(!"25#!"25#( **/**///** */***///*// //*/**// ///*/*/*//*** *////**/*////*/* //**/*/ ****/*/ */*/*//*//** /*/* /**/*/*/ */* **//**////* ****///*//* **//**/ */**///**//*/ ///**/**/*// *//*///****/** /***/////*/ */*/*/*//.$ $. 文献 "+,- %.$ "+,- $ $% $ $% "+,- "+,- "+,- "+,- "+,- "+,-

$ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 (./0' 分析细菌同源性 根据 "+,- 数据库 "573822"52!! 提供的实验方案检测鲍曼不动杆菌的多位点序列分型 5"773 "#"#!#!8+,- 用以分析临床菌株的基因相关同源性 选择 <63 方案扩增!! 及!" 等 个管家基因 采用 37#!2*(-#5 进行 *( 扩增 反应体系遵照说明书 *( 循环体系.$5!.$5! % 5! 5! 个循环 5! 取 %,*( 产物在 8, 琼脂糖凝胶中电泳检测 并在成像分析仪中拍照分析 剩余 *( 产物送上海生工公司测序 比对各管家基因的基因型 * 结 果 *( 鲍曼不动杆菌菌株鉴定结果 使用特异性多重 引物 $ 和 $( 通过 *( 扩增验证细菌鉴定的准确性 *( 扩增后得到.$ 和 $. 两个片段的菌株即为鲍曼不动杆菌 由图 可知 收集的经 &' 初步鉴定为鲍曼不动杆菌的 $ 株临床样本中 除 13% 外 其余 $ 株均确定为鲍曼不动杆菌 ** 鲍曼不动杆菌的临床资料分析 $ 株不同时间分离得到的临床鲍曼不动杆菌来源于 $ 个患者 临床感染株大多分离自痰标本 主要收集于呼吸科 '*%= 和中心 '*= 此外 株细菌分离自肝胆外科 株细菌分离自神经外科 $ 株细菌分离自神经内科 '* 表 *- 鲍曼不动杆菌的药敏结果 经 &' 全自动微生物分析仪检测后发现 $ 株鲍曼不动杆菌均为多重耐药株 表 图 ( 特异性引物, 鉴定鲍曼不动杆菌 8'#!623!36#"!8#6 *( +52>#$$ 株临床菌株 &#*( 阴性对照 *. 鲍曼不动杆菌的 /0' 分型分析 对 $ 株鲍曼不动杆菌的 个管家基因扩增后进行基因测序 图 结果在 "+,- 数据库中进行比对 发现 -.% -- 及 - 共 $ 种 - 分型 它们在 $ 株细菌中所占的比例分别为 $=.$$=$ $=$%=$ 由图 可见 - 与 - 的亲缘关系最近 分析 个管家基因序列发现 - 与 - 相比在! 基因中发生了./ 和.%/ 两个位点的基因突变 其余序列一致 - 讨 论 &' 全自动微生物分析仪利用生化反应的差异对细菌进行鉴定 是目前临床中常用的较为可靠的鉴定方法 然而 在不动杆菌属中 亲缘关系相近 的醋酸钙不动杆菌 鲍曼不动杆菌 型不动杆菌和 型不动杆菌很难由生化表型区分 故统称为醋酸钙 鲍曼不动杆菌簇 #$% #% 357# 或简称为鲍曼不动杆菌簇 # 357#/ 其中鲍曼不动杆菌与临床感染关系最为密切 感染率在不动杆菌属中高达.= 其引起的症状与 / 中的其他成员有差别 且耐药谱更广 耐药率更高 因此 在进行诊断 分析及治疗时有必要将其与非鲍曼不动杆菌加以区分 分子生物学方法已广泛应用于细菌的种属鉴定 技. 术可靠 0''1- 等利用特异性 *( 扩增的方法将 / 中的四种不动杆菌进行区分 其中特异性引物 $ 和 $( 可鉴定鲍曼不动杆菌与 型不 动杆菌 结果准确 本研究通过该组引物 *( 扩增发现 经 &' 鉴定后的菌株中有一株并非鲍曼不

期 韩 蕾 雷金娥 祁 杰 等 多重耐药鲍曼不动杆菌的临床流行特征 % 动杆菌 证实 &' 鉴定存在误差 表 *.1 株临床鲍曼不动杆菌的特征 2# 22#36$ 7!27#2! 菌株来源患者来源病区来源标本药敏结果 - 分型 呼吸科 '* 痰 亚胺培南 美罗培南敏感 余耐药.% 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药.% 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药.% $ $ 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药.% % % 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药.% 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药 呼吸科 '* 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药. 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药. 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药.% 中心 '* 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药 呼吸科 '* 痰 替加环素中介 余耐药.% $ 呼吸科 '* 痰 替加环素中介 余耐药.% % $ 中心 '* 痰 替加环素中介 余耐药.% % 呼吸科 '* 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦敏感 余耐药.% 中心 '* 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药.% 肝胆外科 痰 替加环素中介 余耐药.%. 呼吸科 '* 痰 替加环素 亚胺培南 美罗培南 头孢哌酮 舒巴坦敏感 余耐药.%. 中心 '* 痰 替加环素中介 余耐药.% 中心 '* 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药 中心 '* 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药.% $ 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药.% % $ 呼吸科 '* 痰 替加环素中介 余耐药.% % 中心 '* 痰 替加环素敏感 余耐药 % 中心 '* 引流液 替加环素敏感 余耐药 中心 '* 痰 替加环素敏感 余耐药. 中心 '* 痰 复方新诺明敏感 替加环素中介 余耐药 呼吸科 '* 痰 替加环素中介 余耐药.%. 神内科 '* 痰 替加环素 亚胺培南 美罗培南敏感 余耐药 呼吸科 '* 痰 复方新诺明敏感 余耐药.% 神外科 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦敏感 余耐药 $ % 中心 '* 痰 头孢哌酮 舒巴坦 左氧氟沙星中介 余耐药. 神内科 '* 痰 替加环素 亚胺培南 美罗培南敏感 余耐药. 神内科 '* 痰 替加环素 亚胺培南 美罗培南敏感 余耐药 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药. 神内科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药 $ $ 呼吸科 '* 灌洗液 替加环素敏感 余耐药 $ % 呼吸科 '* 灌洗液 左氧氟沙星敏感 替加环素中介 余耐药 $ 呼吸科 '* 痰 阿米卡星 复方新诺明敏感 余耐药 $ 呼吸科 '* 痰 阿米卡星敏感 余耐药 $$ 呼吸科 '* 痰 替加环素敏感 余耐药 $%. 中心 '* 痰 左氧氟沙星敏感 氨苄西林 舒巴坦 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药 $ % 呼吸科 '* 痰 左氧氟沙星敏感 替加环素中介 余耐药 $ $ 中心 '* 痰 替加环素 头孢哌酮 舒巴坦中介 余耐药

西 安 交 通 大 学 学 报!医 学 版 " " '# " 第!" 卷 &! 测序结 果% G#菌株 & 的 -. W#菌 株 & 的 -/*0 测 序 结 果% B#菌株 & 的 -120 测序结果% R#菌 株 & 的 * % "! 测 序 结 果% ;#菌株 & 的 "3$#% 测 序 结 果%?#菌 株 & 的 -3# 测 序 结 果% Z#菌株 & 的*3'4 测序结果( 图 B"GH9: 测序结果示例? $;0PS* 5 >Q TCDE:> 5 3VO 5 >4 > V, ]4532 图 E" 鲍曼不动杆菌临床菌株的同源性进化分析?! HQSQ QVQ4>5 YQ 4 Q3P3P > >Q T2 3 2 P V, /!5(+,$$ # #> O P 3> G#临床菌株的聚类分析图% W#四种 E: 型的聚类分析图( $$+++, $$/001, (./01, 23%( 0 4, 5.4, 23 *# *# -

期 韩 蕾 雷金娥 祁 杰 等 多重耐药鲍曼不动杆菌的临床流行特征 本研究中的 $ 株鲍曼不动杆菌主要分布于重症监护室 来源自长期卧床的呼吸系统感染患者 所有细菌均为多重耐药鲍曼不动杆菌 大多数菌株对替加环素敏感性较高 %$= 敏感 $= 中介 部分菌株还对亚胺培南 美罗培南 头孢哌酮 舒巴坦 复方新诺明 左氧氟沙星及阿米卡星等抗生素有一定敏感性 符合 *0'1 中国细菌耐药性监测结果的趋 势 但是 对比发现部分抗生素的耐药率高于 *0'1 监测结果 可能是由于本研究收集的目标菌株为耐药菌所引起 +,- 法分析 $ 株鲍曼不动杆菌 发现 -.% -- 及 - 四种 - 型 并且 -.% 和 - 的分离时间靠前 - 和 - 的分离时间偏后 说明有流行趋势 其中 - 与 - 菌株同源性高 仅在! 基因的. 和.% 两个位点存在碱基差异 推测为致病菌在传播过程中出现了基因突变导致 综上所述 将分子生物学方法与 &' 结合使用可提高鲍曼不动杆菌鉴定的准确率 本研究中的多重耐药鲍曼不动杆菌在院内传播具有科室及同源性的局限性 主要分离自 '* 内 为 -.% -- 及 - 四种 - 型 对这些资料的分析将有助于指导临床治疗 并为监测与控制院内流行菌株的感染奠定基础 参考文献,4'$(0$55(!/5'/06(!/70/&( " (#*#**3 #(#*"&,,%$%$%.& +005(8$0/09+(0$4'7&(#*#* ###&,!#* %%& 4'/0+0/,909&" "# (#*#*##&,/ #7$%...& $,/$/'(!$+(5'44 (!4/( 5&$" "#*(#*#* "."/&(/#,...$& %0/9('$- -&02 "(# *#**3#" #" #&(/#,$$$& 9/55/'$+5-/$+/'594914&(+, *"""*.(#*#* " (#*###&,!#* /#..& 胡付品 朱德妹 汪复 等 &$ 年,9/'0 中国细菌耐药性监测 & 中国感染与化疗杂志 %%%$$& 8/',9/('5!,/(-&,#### (#*#*#2*# #&,!"(# %&.9/55/'$+509!(''!-/$+/'594 9& 2+,"*.(#*## ###"(#*###&,! #*$$%.$%.$& 韩蕾 张旭燕 韩少山 等 & 临床致病性不动杆菌的分子生物学鉴定 & 西安交通大学学报 医学版 %& 9 +54 869 7!&#" ##,",9/'0# *##%$ &,!#*/# $$.$& 编辑 卓选鹏 国外医学 医学地理分册 征稿启事 国外医学 医学地理分册 为国家教育部主管 西安交通大学主办的全国性医学专业期刊 主要报道国内外环境因素与人体健康疾病 地方病 地球化学元素与人体健康疾病 动物 植物与人体健康疾病 气候 气象 季节诸因素与人体健康疾病 水文地理因素与人体健康疾病 土壤因素与人体健康疾病 人文 社会因素与人体健康疾病 主要栏目有 专家论坛 专题报道 论著 基础医学 预防医学 现场调查 临床医学 综述与介评 介绍评论国外权威期刊刊登的本专业科研成果 短篇与个案 文摘 讲座 最新科研快讯等栏目 现面向国内外医 药学院校 科研机构 医疗单位 公共卫生和疾病预防控制机构征集稿件 国外医学 医学地理分册 以自由投稿为主 欢迎下列稿件 凡经编委和特邀编审推荐的具有新动态 新观点 新技术 新经验 新成果 新发现 新进展的论文 将不再另行专家审稿 优先在最近一期发表 国家自然科学基金 部 省科研基金资助项目的文章 以及评审优秀的文章 本刊可优先发表 投稿地址 西安市雁塔西路 号 号信箱 国外医学 医学地理分册 编辑部 邮编 投稿网址 8"#"! 5275#8#382527"#"! 编辑部电话.%%$