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1 2200 第三军医大学学报,2017,39(22) htp://aammt.tmmu.edu.cn DOI: /j 重庆某三甲医院 年铜绿假单胞菌耐药表型及金属酶 外膜孔蛋白耐药基因型分析 李进 1, 胡韦维 2, 张峰领 1, 陈鸣 1, 邓少丽 1 1, 鲁卫平所检验科 1 ; 重庆, 重庆医科大学附属儿童医院检验科 2 ) ( 重庆, 第三军医大学大坪医院野战外科研究 [ 摘要 ] 目的检测亚胺培南耐药铜绿假单胞菌金属酶基因分布和外膜孔蛋白 OprD2 基因缺失情况, 了解铜绿假单胞菌的耐药状况 方法收集第三军医大学大坪医院野战外科研究所 年临床分离的非重复铜绿假单胞菌 1887 株,VITEK MS 质谱仪进行菌株鉴定, 最小抑菌浓度 (minimal inhibitoryconcentration,mic) 法测定其对 10 种常用抗菌药物的敏感性, 利用 WHONET5.6 软件对药敏资料进行统计分析, 同时采用亚胺培南 EDTA 纸片法筛选金属酶表型阳性的菌株, 用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction,pcr) 测铜绿假单胞菌金属 β 内酰酶 (metalo β lactamase,mbl) 相关基因 (IMP VIM SPM GIM SIM NDM) 和外膜孔蛋白 OprD2 基因的情况 结果 3 年中铜绿假单胞菌每年的分离数量分别为 756 株 (9.4%) 579 株 (9.5%) 和 552 株 (10.7%), 主要来自 ICU 病房和呼吸内科病房, 标本类型以痰液为主 ; 年分离出的铜绿假单胞菌对妥布霉素 庆大霉素的耐药率逐年下降, 其耐药率分别从 2014 年的 11.3% 13.2% 下降至 2016 年的 7.8% 9.0%, 对左旋氧氟沙星 哌拉西林 / 他唑巴坦的耐药率呈上升趋势, 其耐药率从 2014 年的 10.7% 9.2% 上升至 2016 年的 23.5% 11 6% 从基因型分布情况来看,269 株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中 MBL 基因阳性 51 株 (18 9%), 外膜孔蛋白 OprD2 缺失 158 株 (58.7%);51 株产酶菌株中 VIM 型阳性 29 株,SPM 型阳性 22 株, 未检测出其他基因型 结论铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率较高 ; 产 MBL 和外膜孔蛋白 OprD2 基因缺失是引起铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因 [ 关键词 ] 铜绿假单胞菌 ; 耐药性 ; 金属酶 ; 外膜孔蛋白 OprD2 基因 [ 中图法分类号 ] R181.34;R ;R915 [ 文献标志码 ] A Drugresistanceprofilesand metalo β lactamaseand outermembraneprotein OprD2genotypesofPseudomonasaeruginosa:a surveyinaGrade3 ClasAgeneralhospitalinChongqing LIJin 1,HU Weiwei 2,ZHANG Fengling 1,CHEN Ming 1,DENG Shaoli 1,LU Weiping 1 ( 1 DepartmentofClinical Laboratory,InstituteofSurgeryResearch,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400042; 2 DepartmentofClinicalLaboratory,Children shospitalofchongqingmedicaluniversity,chongqing,400014,china) [Abstract] Objective ToinvestigatethedrugresistanceprofilesofPseudomonasaeruginosaisolates andsurveythedistributionofmetalo β lactamase(mbl)phenotypesandoutermembraneproteinoprd2 genedeletionamongthestrains.methods From January2014toDecember2016,atotalof1887non duplicateclinicalisolatesofpseudomonasaeruginosawerecolectedfromdapinghospital.althestrainswere identifiedbyvitek MS,andtheirsusceptibilitiesto10antimicrobialagentsweredetectedusingtheminimal [ 基金项目 ] 全军医学科研 十二五 计划面上项目 (CWS13J039); 国家自然科学基金重点项目 ( ) [ 通信作者 ] 鲁卫平,E mail:ronnylu@126.com [ 优先出版 ] htp://kns.cnki.net/kcms/detail/ r html

2 htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(22) 2201 inhibitoryconcentrationmethod.whonet5.6softwarewasusedtoanalyzetheresultsofdrugsensitivity tests.imipenem EDTAdisctestwasusedtodetecttheMBLphenotypesofthestrains,andtheMBLgenes (IMP,VIM,SPM,GIM,SIM,andNDM)andOprD2geneweredetectedbyPCRamplification.Results Amongthetotalof1887Pseudomonasaeruginosastrainsisolated,756(9 4%)wereisolatedin2014,579 (9.5%)in2015,and552(10.7%)in2016;mostofthestrainswereisolatedfromthesputumsamplesin thedepartmentofrespiratorymedicineandicu.fromjanuary2014todecember2016,thedrugresistance ratesoftheisolatedstrainstotobramycinandgentamicindecreasedprogresively(from11.3% and13.2% in 2014to7.8% and9.0% in2016,respectively),whiletheirresistanceratestolevofloxacinandpiperacilin/ tazobactamtended toincrease(from 10.7% and9.2% in2014 to23.5% and11.6% in2016, respectively).ofthe269imipenem resistantisolates,51(18.9%)werembl producingstrains(including 29VIM typembl positiveand22spm typembl positiveisolates),and158(58.7%)showeddeletionof OprD2gene;noothergenotypesweredetectedamongtheisolatedstrains.Conclusion Wefoundahigh incidenceofdrugresistance(particularlyimipenem)intheclinicalisolatesofpseudomonasaeruginosa.mbl productionandthelosofoprd2genearethemaincontributorstoimipenem resistanceinpseudomonas aeruginosa. [Keywords] Pseudomonasaeruginosa;drugresistance;metalo β lactamase;outermembrane proteinoprd2gene SupportedbytheGeneralProgramofthe TwelfthFive YearPlan forsci&techresearchofpla(cws13j039)andthekeyprojectofnationalnatural ScienceFoundationofChina( ).Corespondingauthor:LUWeiping,E 铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaeruginosa,PA) 是医院感染的常见条件致病菌之一, 随着抗生素的广泛使用, 铜绿假单胞菌出现耐药的现象也日趋严重, 特别是亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的检出率呈逐年上升趋势, 给临床抗感染治疗带来巨大的挑战, 为此迫切需要研究其耐药机制, 以便更快速准确对其感染进行预防控制 铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的机制比较复杂, 目前报道主要有 : 碳青霉烯酶的产生 外膜孔蛋白缺失或表达减少 药物主动外排泵的过度表达 生物膜的形成和青霉素结合蛋白 (penicilinbindingproteins, PBPs) 靶位改变等 [1-2] 为了解铜绿假单胞菌的耐药表型及金属酶 外膜孔蛋白耐药基因型情况, 本研究对 1887 株铜绿假单胞菌的临床和药敏资料进行了统计分析, 同时对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌进行金属酶基因和外膜孔蛋白基因缺失情况进行检测, 现报告如下 1 材料与方法 1.1 菌株来源收集 年第三军医大学大坪医院野战外科研究所临床分离的非重复铜绿假单胞菌菌株 1887 株 大肠埃希菌 ATCC8739 为质谱鉴定试验质控菌株, 铜绿假单胞菌 ATCC27853 为药物敏感试验质 控菌株和阴性对照菌株, 均为本实验室保存 阳性对照菌株为产 VIM 型和产 SPM 型金属酶的铜绿假单胞菌, 均为重庆医科大学附属儿童医院检验科惠赠 1.2 仪器与试剂仪器 :GNP29270 型恒温培养箱 ( 上海精宏实验室设备有限公司 ),VITEK MS 质谱仪 ( 法国生物梅里埃公司 ),VITEK 2Compact 全自动微生物鉴定药敏仪 ( 法国生物梅里埃公司 ),CFX96 荧光定量 PCR 扩增仪 ( 美国 Bio Rad 公司 ),Bio RadChemiDocXRS 凝胶成像系统 ( 美国 Bio Rad 公司 ),BG submidi(v) 可见光电泳 透射仪 ( 北京百晶公司 ) 试剂 :VITEK MS CHCA 基质液 ( 法国生物梅里埃公司 ), 血琼脂平皿和药敏纸片 ( 英国 OXOID 公司 ),M H 琼脂平皿 ( 重庆庞通公司 ),PremixTaq TM 酶和 DL2000DNAMarker( 大连宝生物公司 ), 引物由上海生工生物工程有限公司合成 1.3 细菌分离鉴定及药敏试验所有菌株经 VITEK MS 质谱仪鉴定到种, 再通过 VITEK 2Compact 进行药敏试验, 并用最小抑菌浓度 (MIC) 法测定其对 10 种常用抗生素的敏感性, 药敏结果判定参照 CLSI 标准, 采用 WHONET5.6 软件对数据进行统计分析, 并对各种抗生素耐药率的变迁进行数据分析

3 2202 第三军医大学学报,2017,39(22) htp://aammt.tmmu.edu.cn 1.4 金属 β 内酰酶 (metalo β lactamase,mbl) 表型初筛试验 亚胺培南 EDTA 纸片法 : 按标准纸片扩散法药敏试验操作规程, 将新鲜待测菌配成 0.5 麦氏浊度的菌悬液, 均匀涂布在 MH 药敏平皿上, 在平板上分别贴上亚胺培南纸片 2 张, 二者中心到中心相距 15~20mm 在其中一张纸片上滴加 0.5mol/LEDTA 10μL 35 孵育 18~24h 后, 测量组合了 EDTA 的亚胺培南纸片产生的抑菌环与单纯的亚胺培南纸片产生的抑菌环, 以两者直径差 7mm 判定为阳性, 即该菌株产金属酶 1.5 MBL 基因及 OprD2 基因检测 模板制备细菌 DNA 采用煮沸法提取, -20 保存备用 MBL 基因及 OprD2 基因的 PCR 检测以 DNA 为模板分别进行 IMP VIM SPM GIM SIM NDM 和 OprD 2 基因的 PCR 扩增, 各引物序列根据文献 [3-6] 设计, 见表 1 PCR 体系 :TaqPCRMasterMix 体系 12.5μL, 上下游引物各 1μL, 模板 DNA1μL, 用 ddh 2 O 补足至 25μL PCR 反应条件 :94 预变 5min;94 变性 30s; 退火 30s, 各退火温度见表 1; 72, 延伸 30s 或者 60s( 具体根据产物长度而定 ); 变性 退火 延伸 30 个循环 ;72 继续延伸 7min 扩增产物在 2.0% 琼脂糖凝胶电泳, 凝胶成像仪观察结果 阴性对照菌株为铜绿假单胞菌 ATCC27853, 阳性对照菌株为产 VIM 型和产 SPM 型金属酶的铜绿假单胞菌 引物 IMP VIM SPM GIM SIM NDM OprD2 表 1 PCR 扩增引物的名称及产物 序列 (5 3 ) 上游 :CTACCGCAGCAGAGTCTTTG 下游 :AACCAGTTTTGCCTTACCAT 上游 :GTTTGGTCGCATATCGCAAC 下游 :AATGCGCAGCACCAGGATAG 上游 :CTGCTTGGATTCATGGGCGC 下游 :CCTTTTCCGCGACCTTGATC 上游 :TCGACACACCTTGGTCTGAA 下游 :AACTTCCAACTTTGCCATGC 上游 :TACAAGGGATTCGGCATCG 下游 :TAATGGCCTGTTCCCATGTG 上游 :GGGCAGTCGCTTCCAACGGT 下游 :GTAGTGCTCAGTGTCGGCAT 上游 :ATGAAAGTGATGAAGTGGAGCG 下游 :TTACAGGATCGACAGCGGATAG 片段大退火温小 (bp) 度 ( ) MBL 基因和 OprD2 基因测序将 MBL 基因和 OprD2 基因阳性的 PCR 产物连接到 TA 载体上, 连接载体送华大基因有限公司测序, 测序结果在 GenBank 进行 Blast 比对 2 结果 2.1 菌株分布特征 年从临床分离的非重复病原菌中筛选出铜绿假单胞菌每年的数量分别为 756 株 579 株和 552 株, 分离率分别为 9.4%(756/8077) 9.5% (579/6117) 和 10.7%(552/5160) 1887 株铜绿假单胞菌中分离自痰及肺泡灌洗物 1320 株 (69.9%), 尿液 232 株 (12.3%), 分泌物 160 株 (8.5%), 其他类型标本 175 株 (9.3%); 科室分布情况看, 主要分离自 ICU21.3%(402/1887), 呼吸内科 18.8% (355/1887), 胸外科 9.4%(178/1887), 其他各科室 ( 如 CCU 神经外科 创伤外科 泌尿外科等 )50.4% (952/1887) 2.2 抗菌药物敏感性试验结果 年铜绿假单胞菌的药敏试验结果显示 :1887 株菌对 10 种抗生素的耐药率从高到低分别为氨曲南 左旋氧氟沙星 头孢吡肟 亚胺培南 头孢他啶 环丙沙星 庆大霉素 哌拉西林 / 他唑巴坦 妥布霉素 阿米卡星 3 年来分离出的铜绿假单胞菌对各种抗菌药物的耐药率各不相同, 铜绿假单胞菌对妥布霉素 庆大霉素的耐药率逐年下降, 其耐药率分别从 2014 年的 11.3% 13.2% 下降至 2016 年的 7.8% 9 0%; 铜绿假单胞菌对左旋氧氟沙星 哌拉西林 / 他唑巴坦的耐药率呈上升趋势, 其耐药率从 2014 年的 10 7% 9.2% 上升至 2016 年的 23.5% 11.6% 对其他几种抗生素的耐药率而言, 年变化趋势不明显, 见表 2 表 年重庆某三甲医院铜绿假单胞菌耐药率分析 [ 例 (%)] 抗菌药物 2014 年 (n=756) 2015 年 (n=579) 2016 年 (n=552) 合计 (n=1887) 阿米卡星 54(7.1) 48(8.3) 31(5.6) 133(7.0) 妥布霉素 86(11.3) 59(10.1) 43(7.8) 188(10.0) 哌拉西林 / 他唑巴坦 70(9.2) 63(10.9) 64(11.6) 197(10.4) 头孢吡肟 110(14.5) 83(14.3) 107(19.4) 300(15.9) 庆大霉素 100(13.2) 76(13.1) 50(9.0) 226(12.0) 左旋氧氟沙星 81(10.7) 124(21.4) 130(23.5) 335(17.8) 头孢他啶 95(12.5) 85(14.7) 74(13.4) 254(13.5) 环丙沙星 98(12.9) 98(16.9) 54(9.7) 250(13.2) 亚胺培南 116(15.3) 97(16.7) 56(10.1) 269(14.3) 氨曲南 171(22.6) 145(25.0) 104(18.8) 420(22.3)

4 htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(22) MBL 表型初筛试验结果 269 株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中有 64 株为 MBL 表型阳性菌株,205 株为 MBL 表型阴性菌株, 其 MBL 表型阳性检出率为 23.8%(64/269) 2.4 MBL 基因和 OprD2 基因 PCR 扩增结果以细菌 DNA 为模板分别对 64 株 MBL 表型阳性菌株进行金属酶基因扩增,MBL 基因阳性 51 株, 其中 VIM 型阳性 29 株,SPM 型阳性 22 株, 未扩增出 IMP SIM GIM 和 NDM 阳性株 以细菌 DNA 为模板分别对 269 株亚胺培南耐药菌株进行 OprD2 基因扩增, 扩增出携带 OprD2 基因 111 株, 外膜孔蛋白 OprD2 缺失 158 株 部分菌株 PCR 产物电泳见图 1~3 2.5 PCR 产物测序结果将 64 株 MBL 菌株和 111 株 OprD2 菌株的 PCR 产物,TA 克隆连接到 T 载体上后, 送华大基因公司进行基因测序, 结果在 GenBank 中进行序列比对, 证实有 29 株 VIM 型 MBL,22 株 SPM 型 MBL 和 111 株 OprD2 外膜孔蛋白, 测序分析结果与电泳结果完全一致 部分测序结果见图 4~6 M: 标准 ;11~20: 检测菌株 图 3 OprD2 阳性 PCR 产物电泳图谱 图 4 VIM 测序结果部分峰图 M: 标准 ;5~13,18: 检测菌株 图 1 VIM 阳性 PCR 产物电泳图谱 图 5 SPM 测序结果部分峰图 M: 标准 ;1~4,14,15,17,21,22,24: 检测菌株 图 2 SPM 阳性 PCR 产物电泳图谱 图 6 OprD2 基因测序结果部分峰图

5 2204 第三军医大学学报,2017,39(22) htp://aammt.tmmu.edu.cn 3 讨论 PA 是临床上最常见的条件致病菌之一, 以呼吸系统感染为主, 已成为医院感染的主要病原菌之一, 而碳青霉烯类药物的使用会加大感染耐碳青霉烯类 PA 的危险性 金属 β 内酰酶 (MBL) 是 PA 产生最主要的碳青霉烯酶, 可以水解除氨曲南以外所有 β 内酰胺酶类抗生素 [7] 外膜孔蛋白 OprD2 是碳青霉烯类抗生素进入菌体内的特异性通道,OprD2 缺失将直接导致 PA 对碳青霉烯类抗生素产生耐药 [8] 铜绿假单胞菌广泛分布于周围环境及正常人的皮肤 呼吸道和消化道等部位, 当患者年老体弱 患有慢性疾病或者免疫功能低下时常可引发肺炎 败血症等严重感染 以亚胺培南为代表的碳青霉烯类抗生素是美国临床实验室标准化协会 (CLSI) 推荐治疗铜绿假单胞菌感染的最主要抗菌药物之一 然而, 这些广谱抗菌药物的广泛与不合理的使用, 使铜绿假单胞菌的耐药现象越来越严重, 出现了大量亚胺培南耐药菌株, 给临床治疗带来极大困难 [8] 本研究结果显示, 铜绿假单胞菌每年的分离率有增加的趋势, 主要分离自痰液标本, 病区则主要集中在 [9] ICU 和呼吸科病房, 与张春平等的报道结果相符 药敏试验结果显示, 年第三军医大学大坪医院野战外科研究所分离的铜绿假单胞菌对妥布霉素 庆大霉素的耐药率逐年下降, 对左旋氧氟沙星 哌拉西林 / 他唑巴坦的耐药率呈上升趋势, 而对其他几种抗菌药物的耐药率变化趋势不明显 这与 [10] 2011 年重庆某三甲医院铜绿假单胞菌耐药性分析 相比, 抗菌药物的耐药变化趋势及耐药率略有差异 ; 与同时期国内其他地区的研究结果相比, 本研究中铜绿假单胞菌对 10 种抗菌药物的耐药率也低于 2014 年中国 CHINET 铜绿假单胞菌耐药性监测结果 [11] 分析其原因, 可能与医院采取抗菌药物专项整治有关 经过整治, 医院在院内感染控制 抗菌药物规范使用等方面做了大量工作, 使一些细菌耐药克隆株的传播被切断, 抗生素的使用率和使用强度也得到了一定的控制 年 1887 株铜绿假单胞菌耐药率分析结果提示, 实验室应及时监测铜绿假单胞菌耐药性变迁, 医院需加强包括亚胺培南在内的碳青霉烯类抗生素的使用管理, 临床医师应根据药敏试验结果有针对性地合理地选用抗菌物, 选择 两种有效抗菌药物联合用药 [12] 基因检测结果显示 269 株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中有 64 株 MBL 表型阳性,PCR 扩增出 MBL 基因 阳性 51 株, 其中 VIM 型阳性 29 株,SPM 型阳性 22 株, 未扩增出其他基因型阳性菌株, 而国内外报道 MBL 基因型以 IMP 型和 VIM 型为主 [13-17], 本研究结果与其存在一定差异 分析其原因, 可能与我们入选菌株的标准和环境差异等因素有关 269 株亚胺培南耐药菌株同时进行 OprD2 基因扩增, 扩增出携带 OprD2 基因 111 株, 外膜孔蛋白 OprD2 缺失 158 株 因此, 外膜孔蛋白 OprD2 基因缺失和产 MBL 是引起铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因 本研究结果提示, 年第三军医大学大坪医院野战外科研究所临床科室存在不同程度亚胺培南耐药铜绿假单胞菌交叉感染现象 部分菌株虽对亚胺培南耐药, 但既无 OprD2 基因的缺失, 也无金属酶的产生, 提示分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌中, 除 OprD2 基因缺失和金属酶产生以外, 还存在其他耐药机制, 如主动外排系统的过度表达, 将进入到菌体内的药物泵出体外, 使亚胺培南排除增多 ; 生物膜的形成, 使抗菌药物不能有效到达作用部位等等 [18-19] 对于这部分菌株我们将做进一步研究, 为临床治疗和医院感染控制提供理论依据, 也为铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的深入研究奠定基础 综上所述, 亚胺培南耐药铜绿假单胞菌引起的医院感染越来越严重, 已成为临床医师面临的棘手问题 因此, 临床应加强对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌及其产酶株的检测和监控, 合理选用抗菌药物 参考文献 : [1] 陈媛媛. 铜绿假单胞菌的金属 β 内酰胺酶基因型研究 [D]. 长春 : 吉林大学,2012. CHENYY.Studyonthegenotypesofmetalo β lactamasesin pseudomonasaeruginosa[d]. Changchun: Jilin University, [2] 邱春华, 王静, 刘玉敏.330 株铜绿假单胞菌耐药情况分析 [J]. 第三军医大学学报,2014,36(15):1613,1618. QIUCH,WANGJ,LIUYM.Analysisofdrugresistanceof 330strainsofPseudomonasaeruginosa[J].JThirdMilMed Univ,2014,36(15):1613,1618. [3] RODRíGUEZ MARTíNEzJM,POIRElL,NORDMANNP. Molecularepidemiologyandmechanismsofcarbapenemresist anceinpseudomonasaeruginosa[j].antimicrobagentsche mother,2009,53(11): doi: /aac [4] TATOM,COQUETM,BAQUEROF,etal.Dispersalof carbapenemaseblavim 1geneasociatedwithdiferentTn402 variants,mercurytransposons,andconjugativeplasmidsin EnterobacteriaceaeandPseudomonasaeruginosa[J].Antimi crobagentschemother,2010,54(1): doi:10.

6 htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(22) /AAC [5] HENTSCHKEM,GORITZKAV,CAMPOSCB,etal.E mergenceofcarbapenemasesin Gram negativebacteriain Hamburg,Germany[J].DiagnMicrobiolInfectDis,2011, 71(3): DOI: /j.diagmicrobio [6] VATCHEVA DOBREVSKA R,MULETX,IVANOV I,et al.molecularepidemiologyandmultidrugresistancemecha nismsofpseudomonasaeruginosaisolatesfrombulgarianhos pitals[j].microbdrugresist,2013,19(5): DOI: /mdr [7] 黄义山, 龙彦, 方莉, 等. 多药耐药铜绿假单胞菌金属 β 内酰胺酶及相关基因检测 [J]. 中华临床医师杂志 ( 电子版 ),2010,4(9): HUANGYS,LONGY,FANGL,etal.Studyontheresist antgenesofmetalβ lactamase(mbls)ofthemulti drugre sistantmechanism ofpseudomonasaeruginosa[j].chinj Clinicians(ElectronicEdition),2010,4(9): [8] 应春妹, 应骏, 罗柳林, 等. 耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究 [J]. 中国感染与化疗杂志,2008,8(4): YINGCM,YINGJ,LUOLL,etal.Mechanismofimipen emresistanceinpseudomonasaeruginosa[j].chinjinfect Chemother,2008,8(4): [9] 张春平, 喻华, 刘华, 等. 铜绿假单胞菌感染分布及耐药性动态变迁 [J]. 中华医院感染学杂志,2008,18(1): ZHANGCP,YUH,LIUH,etal.Dynamicchangesofdrug resistanceandinfectiousdistributionofpseudomonasaerugi nosa[j].chinjnosocomiol,2008,18(1): [10] 杨政 年重庆某三甲医院铜绿假单胞菌耐药性分析 [D]. 重庆 : 重庆医科大学,2013. YANGZ.ResistancesurveilanceofPseudomonasaerugino sainachongqinggradeaaa hospitalfrom 2009to2011 [D].Chongqing:ChongqingMedicalUniversity,2013. [11] 张 博, 孙景勇, 倪语星, 等.2005~2014 年 CHINET 铜绿假单胞菌耐药性监测 [J]. 中国感染与化疗杂志, 2016,16(2): ZHANGYB,SUNJY,NIYX,etal.Resistanceprofile ofpseudomonasaeruginosainhospitalsacroschina:there sultsfromthechinetantimicrobialresistancesurveilance Program, [J].ChinJInfectChemother,2016, 16(2): [12] 郭小兵, 贺小红, 曹在秋, 等. 临床分离铜绿假单胞菌 株的分布及耐药性变迁 [J]. 中国感染与化疗杂志,2016,16(5): DOI: /j GUOXB,HEXH,CAOZQ,etal.Changingdistribution andantibioticresistanceprofilein10662clinicalstrainsof Pseudomonasaeruginosa[J].ChinJInfectChemother, 2016,16(5): DOI: /j [13] VALENZAG,JOSEPHB,ELIASJ,etal.Firstsurveyof metalo beta lactamasesinclinicalisolatesofpseudomonas aeruginosainagermanuniversityhospital[j].antimicrob AgentsChemother,2010,54(8): DOI: /AAC [14] JOVCICB,LEPSANOVICZ,SULJAGICV,etal.Emer genceofndm 1metalo β lactamaseinpseudomonasaerug inosaclinicalisolatesfrom Serbia[J].AntimicrobAgents Chemother,2011,55(8): DOI: / AAC [15] 卓超, 伍晓锋, 金光耀, 等. 广州地区泛耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学调查 [J]. 中华检验医学杂志, 2008,31(6): DOI: /j.isn: ZHUOC,WUXF,JINGY,etal.Investigationonepide miologyofpan drugresistantpseudomonasaeruginosa in Guangzhou[J].ChinJLabMed,2008,31(6): DOI: /j.isn: [16] 周志慧, 吕芳芳, 周建英, 等. 中国部分地区铜绿假单胞菌耐药性及主要 β 内酰胺酶基因型分布 [J]. 中华传染病杂志,2010,28(10): DOI: / cma.j.isn ZHOUZH,LVFF,ZHOUJY,etal.ResistanceofPseudo monasaeruginosaandgenotypingofthemainβ lactamasesin China[J].ChinJInfectDis,2010,28(10): DOI: /cma.j.isn [17] 邬靖敏, 邹明祥, 李军. 长沙地区产金属 β 内酰胺酶铜绿假单胞菌的分子流行病学特征 [J]. 中国感染控制杂志,2016,15(7): DOI: /j.isn WUJM,ZOUM X,LIJ.Molecularepidemiologicalchar acteristics ofmetalo β lactamase producing Pseudomonas aeruginosafrom Changsha[J]. Chin JInfectControl, 2016,15(7): DOI: /j.isn [18] 胥飚, 王东升, 余显书. 耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及相关基因研究 [J]. 重庆医科大学学报,2009,34 (4): XUB,WANGDS,YUXS.Astudyofdrugresistanceand relatedgenesofimipenem resistantpseudomonasaeruginosa [J].JChongqingMedUniv,2009,34(4): [19] 程新. 铜绿假单胞菌耐药分析与耐亚胺培南菌株基因型检测研究 [D]. 贵阳 : 贵州医科大学,2016. CHENGX.Investigationofdrugresistanceandgenesinimi penem resistantpseudomonasaeruginosa[d]. Guiyang: GuizhouMedicalUniversity,2016. ( 收稿 : ; 修回 : ) ( 编辑邓强庭 )

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