五分类血液分析仪 相关知识与临床应用讲座 血细胞形态学基础 分析流程 所用试剂与检测原理 参数 图形与临床应用 粒细胞动力学及临床意义
第一部分 血细胞形态学基础
原始细胞早幼粒中幼粒晚幼粒杆状核分叶核
传染性单核细胞增多症 异形淋巴细胞
急性非淋 急性非淋巴细胞型白血病 胞型 病 原粒白 AML M1 急性单核白AML M5a 原粒白 AML M2 红白血病AMLM6 早幼粒白 AML M3 粒单核白 AML M4 巨核白 AML M7 慢性粒细胞 CML
急性淋巴细胞白血病 急淋 -ALL L1 急淋 -ALL L2 急淋 ALL L3
红细胞系统各阶段细胞基本形态 原始红细胞早幼红细胞中幼红细胞 晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞
产生血小板巨核细胞
正常血小板
第二部分 分析流程 所用试剂与检测原理
XT 分析流程 全血标本 only for XT-2000i 检测模块 RBC/PLT HGB WBC RET 分析原理 鞘流电阻法 比色法 半导体激光 FCM 半导体激光 FCM 检测通道 RBC/PLT 通道 HGB 通道 DIFF 通道 WBC/Ba 通道 RET 通道 图形 PLT RBC DIFF 散点图 WBC/BA RET 散点图 直方图 直方图 散点图 参数 PLT RBC HGB Lymph WBC# Mono Baso Neut+Ba EO *IG - research RET PLT-O IRF
稀释液的成分及作用 氯化钠 : 提供并调节稀释液的离子强度 渗透压和电导率, 能够在一定的时间内完整地保持血细胞原来的体积, 得到与细胞体积相应的脉冲信号 ; 缓冲剂 : 维持稀释液的 PH 值恒定 ; 抗凝剂 : 防止血液凝固 ; 防腐剂 : 抑制微生物生长
清洁剂的作用 溶解并清除仪器检测样本后附着在检测孔 及管道内的蛋白质 红细胞和血小板碎片
Diff 通道 STROMATOLYSER-4DL 试剂中的表面活性剂可溶剂解红细胞破坏血小板, 并在白细胞膜上打孔, 打孔的目的是有利于在 STROMATOLYSER-4DS 试剂中的核酸染料对白细胞核与胞浆中细胞器进行染色 ; 4DL 试剂中含有的有机酸染料同时可特异对嗜酸粒细特异胞的颗粒进行染色, 染色的目的是加强嗜酸细胞侧向散射光信号, 让它与中性粒细胞严格分开 然后仪器根据荧光强度和侧向散射光强度将嗜酸粒细胞从嗜中性粒细胞区内分离出来 Lymph( 淋巴细胞 ) Monoc( 单核细胞 ) Eo( 嗜酸粒细胞 ) Neut( 嗜中性粒细胞 ), IG( 幼稚粒细胞 ) 在此通道中检出
流式细胞技术, 核酸 有机酸染色 + 特殊溶血素与半导体激光联合应用 RNA/DNA 含量 分光镜 细胞内部结构 激光束 细胞体积大小
X 系列血球分析仪的共同特点 流式细胞技术结合荧光染色技术
淋巴细胞单核细胞嗜中性细胞嗜酸细胞 Fluorescence (RNA,DNA) RBC ghost Side Scatter (Internal structure)
淋巴细胞单核细胞嗜碱细胞嗜中性细胞嗜酸细胞 Fluorescence (RNA,DNA) RBC ghost Side Scatter (Internal structure)
WBC/BASO 通道 单独的 Baso 通道 专用 TROMATOLYSER-FB 溶 血素, 除嗜硷粒细胞以外的 RBC PLT 溶解或 破坏, 其它四种 WBC 裸核化, 仪器根据前向散射光和侧向散射光信号, 将 嗜硷细胞分离出来 WBC( 白细胞总数 ) Baso( 嗜碱粒细胞 ) 在此通道检出
BASO 试剂系统 BASO other WBC RBC
X 系列血球分析仪的共同特点 流式细胞技术结合荧光染色技术
嗜碱粒细胞 Forward Scatter(Volume) 其它 4 种白细胞 ghost
原始细胞异型淋巴细胞 幼稚粒细胞 单核细胞 淋巴细胞 杆状核细胞 嗜酸细胞 有核红细胞 中性分叶核细胞
Auer 小体 急性粒细胞白血病
急性原始粒细胞白血病末梢血涂片染色
慢性粒细胞白血病血片
慢性粒细胞白血病
类白血病反应血片
溶血剂的成分及作用 月桂酰钠 - 十二烷基磺酸钠 (LSL): 溶解红细胞, 释放血红蛋白与月桂酰钠反 应形成血红蛋白衍生物, 用于 HGB 测定
HGB( 血红蛋白 ) 的测量原理灯标本电转换器泡光镜光片聚滤光
无毒血红蛋白法 无氰化物的试剂 氰化物含有剧毒 与国际血液学标准委员会推荐的方法有极好的相关性
HCT 的测定原理 100% 手工 : 毛细管法 60% 内径 :1mm 长度 :10cm 离心 计算板
HCT 的测定原理 HCT=( 红细胞总体积 / 血液总体积 )x 100% h1 h2 标本经过 5 万倍稀释后, 通过检测孔时, 产生信号波, 将信号波的大小累 h3 加, 乘以一常数, 即得 HCT 的值
RET 通道 : RET 原理 RET 稀释剂能使 RBC 体积增大, 然后通过 RET 染液分别对 RET 膜的 RNA 及渗入 WBC 细 胞膜, 对核 细胞器进行染色, 根据 DNA 和 RNA 含量的不同将 RET 同成熟 RBC WBC 通 过分析前向散射光和侧向荧光区分开来
网织红细胞散点图 RBC-O LFR MFR HFR WBC PLT
体积 网织红细胞检测通道 RET% RET# IRF LFR MFR HFR 荧光强度
PLT-O 用于明显的病理性标本 XE-2100 以电阻抗法 PLT-I 为准 当出现异常标本时,XE-2100 会自动转换用光学法 PLT-O 检测 正常 PLT-I 当明显病理性标本存在 RBC 碎片, 异常直方图, 等等 PLT-O 报告
PLT-I PLT-O 直方图 ( 直流阻抗法 ) 散射图 ( 核酸染色光学法 )
第三部分 检测参数与图形解析
白细胞正常参考值范围 WBC:4.0 10.0 x 10 9 /L NEUT: 50 70 % [ 2.0 7.0x10 0 9 /L E O:0.5 5.0 % [ 0.02 0.5x10 9 /L BASO:0.0 1.0 % [ 0.00 0.1x10 9 /L LYMPH:20 40 % [ 0.8 4.0x10 0 9 /L MONO:3.0 8.0 % [0.12 0.8x10 9 /L
红细胞 血小板正常参考值范围 RBC 红细胞计数 3.5-5.5x10 12 /L HCT 红细胞压积 37-49% HGB 血红蛋白 MCV 红细胞平均体积 110-160g/L 80-95fl MCH 红细胞平均血红蛋白含量 27-31pg MCHC 红细胞平均血红蛋白浓度 320-360g/L PLT 血小板计数 100-300x10 9 /L
红细胞 血小板正常参考值范围 RDW-CV 红细胞体积分布宽度变异数 < 15% RDW-SD 红细胞体积分布宽度标准差 PDW 血小板体积分布宽度 37-51fl 9-13fl MPV 血小板平均体积 9-17fl PCT 血小板压积 011-0 0.11-0.30% P-LCR 大小板比率 13-43%
网织红细胞正常参考值范围 RET %: 男 :0.67 1.92 女 :0.59 2.07 RET# / L: 男 :30.4 93.5 女 : 22.4 82.9 IRF %: 男 : 2.1 13.8 女 : 2.4 17.5 LFR %: 男 :87.8 98.6 女 :89.4 99.5 MFR %: 男 :2.4 12.5 女 :1.8 14.4 HFR %: 男 : 0.0 2.0 女 : 0.0 2.4
散点图
缺铁性贫血治疗前 RBC 外观无异常, 但主峰 65 fl 提示小红细胞, RDW 轻度增高 血小板直方图右侧明显有小红细胞出现, 浮动界标 PU 在 +20fL 定位
缺铁性贫血治疗后 铁剂治疗 2 周后, 红细胞直方图发生变化, 出现了双峰, 少部分红细胞体积已趋正常, 网织红随之升高, 说明诊断正确, 已见疗效 ; 铁剂治疗 4 周后, 双峰以右剂疗峰侧峰明显增多, 表现疗效显著
检测结果 WBC 5.04 * [10 /L] P-LCR ---- RBC 3.82 12 [10 /L] PCT ---- HGB 85 [g/l] NEUT 2.62 * HCT 29.2 [%] LYMPH 2.14 * MCV 76.4 - [fl] MONO 0.46 * MCH 22.3 - [pg] EO 0.13 * MCHC 291 - [g/l] BASO 0.05 * PLT & 313 * 9 [10 /L] RET 4.04 RDW-SD 53.8 [fl] IRF 34.2 RDW-CV 21.8 + [%] LFR 65.8 PDW ---- [fl] MFR 28.8 MPV ---- [fl] HFR 5.4 9 α 地中海贫血 [%] [%] 9 [10 /L] 44.8* [%] 9 [10 /L] 42.5* [%] 9 [10 /L] 9.1* [%] 9 [10 /L] 2.6* [%] 9 [10 /L] 1.0 [%] 9 [%] 154.3 [10 /L] [%] [%] [%] [%] 白细胞报警信息 红细胞 / 网织红报警信息红细胞大小不均贫血红细胞碎片? 血小板报警信息血小板直方图异常血小板簇?
α 地中海贫血
检测结果 WBC 6.76 * [10 /L] P-LCR ---- RBC 4.66 12 [10 /L] PCT ---- HGB 93 [g/l] NEUT 4.21 * HCT 28.9 [%] LYMPH 1.46 * MCV 62.0 - [fl] MONO 1.04 * MCH 20.0 - [pg] EO 0.03 * MCHC 322 [g/l] BASO 0.02 * PLT & 241 * 9 [10 /L] RET 2.28 RDW-SD 39.5 [fl] IRF 20.3 RDW-CV 19.99 + [%] LFR 79.77 PDW ---- [fl] MFR 18.7 MPV ---- [fl] HFR 1.6 9 β 地中海贫血 [%] [%] 9 [10 /L] 62.3* [%] 9 [10 /L] 21.6* [%] 9 [10 /L] 15.4* [%] 9 [10 /L] 0.4* [%] 9 [10 /L] 0.3* [%] 9 [%] 106.2 [10 /L] [%] [%] [%] [%] 白细胞报警信息单核细胞增多幼稚粒细胞? 红细胞 / 网织红报警信息小红细胞贫血红细胞碎片? 血小板报警信息血小板直方图异常血小板簇?
β 地中海贫血
检测结果 WBC 5.55 55 * [10 /L] P-LCR ---- RBC 4.61 12 [10 /L] PCT ---- HGB 96 [g/l] NEUT 3.62 * HCT 33.0 [%] LYMPH 1.01 * MCV 71.6 - [fl] MONO 0.78 * MCH 20.8 - [pg] EO 0.12 * MCHC 291 - [g/l] BASO 0.02 * PLT & 254 * 9 [10 /L] RET 0.68 RDW-SD 54.8 + [fl] IRF 5.4 RDW-CV 22.1 + [%] LFR 94.6 PDW ---- [fl] MFR 4.7 MPV ---- [fl] HFR 0.7 9 缺铁性贫血 [%] [%] 9 [10 /L] 65.1* [%] 9 [10 /L] 18.2* [%] 9 [10 /L] 14.1* [%] 9 [10 /L] 2.2* [%] 9 [10 /L] 0.4* [%] 9 [%] 31.33 [10 /L] [%] [%] [%] [%] 白细胞报警信息 红细胞 / 网织红报警信息 血小板报警信息 红细胞大小不均 贫血 血小板直方图异常 红细胞碎片? 缺铁? 血小板簇?
缺铁性贫血
检测结果 WBC 8.89 89 [10 /L] P-LCR ---- 12 RBC 3.04 [10 /L] PCT ---- HGB 85 * [g/l] NEUT 5.11 * HCT 23.0 - [%] LYMPH 2.24 * MCV 75.7 - [fl] MONO 1.44 * MCH 28.0 * [pg] EO 0.07 * MCHC 370 * [g/l] BASO 0.03 * PLT & 31-9 [10 /L] RET 5.69 RDW-SD 42.6 [fl] IRF 26.6 RDW-CV 17.5 + [%] LFR 73.4 PDW ---- [fl] MFR 22.3 MPV ---- [fl] HFR 4.3 9 溶血性尿毒症 (HUS) [%] [%] 9 [10 /L] 57.5* [%] 9 [10 /L] 25.2* [%] 9 [10 /L] 16.2* [%] 9 [10 /L] 0.8* [%] 9 [10 /L] 0.3* [%] 9 [%] 173.0 [10 /L] [%] [%] [%] [%] 白细胞报警信息单核细胞增多幼稚粒细胞? 异型淋巴细胞? 红细胞 / 网织红报警信息网织红细胞增多贫血乳糜颗粒 / HGB 干扰? 血小板报警信息血小板直方图异常血小板减少
溶血性尿毒症 (HUS)
第四部分 粒细胞动力学与临床意义
粒细胞动力学 分裂池 : 包括原粒 早幼粒 中幼粒 一个原始粒细胞经数次有丝分裂而依次增殖分化为早幼粒 中幼粒及晚幼粒细胞 ( 晚幼粒在成熟池 ); 成熟池 : 晚幼粒细胞已丧失分裂能力, 仅能在成熟池继续发育为成熟的杆状核和分叶细胞 ( 原始粒到分叶 10 天左右 ); 储存池 : 成熟的杆状核和分叶细胞在此等待外周血液需要时释放, 正常时, 储存池中成熟的中性粒细胞储存量为 2-3X10 11 个 (1/20 的比例释放到外周血 ), 比外周血中成熟的粒细胞总数高 15-20 倍
粒细胞动力学 循环池 : 成熟粒细胞进入血液后构成总血液粒细胞池, 池中约 50% 粒细胞游离运行于血液循环中, 构成循环粒细胞池, 另 50% 则附着于血管内壁而形成边缘粒细胞池 1. WBC 计数时所得的白细胞值仅为循环池的粒细胞数 ; 2. 循环与边缘池的细胞之间可以互换, 并保持动态平衡 由于许多因素可以使其发生较大幅度的波动, 故此在 WBC 增多时要予以考虑 3 进入血液的粒细胞约平均停留 10 小时之后即逸出血管壁 3. 进入血液的粒细胞约平均停留 10 小时之后, 即逸出血管壁进入组织或体腔, 在其发挥功能作用的时间为 1-2 天后即消失, 消亡后的粒细胞由骨髓释放新生的粒细胞加以补充, 而保持外周血中 WBC 量的相对恒定
嗜中性粒细胞增高临床意义 生理性增多 : 年龄 : 1. 初生儿 WBC 较高, 一般 15x10 9 /L 左右, 个别高达 30x10 9 /L 以上, 通常在 3-4 天降至 10x10 9 /L 左右, 约维持 3 个月, 然后逐渐降低至成人水平, 增高时主要为中性粒细胞, 到第 6-9 天逐渐下降至与淋巴细胞大致相等, 以后淋巴细胞逐渐增多, 整个婴幼儿期可高大 70%; 2. 2-3 岁后, 淋巴细胞逐渐下降, 中性细胞逐渐上升, 到 4-5 岁两者又基本相等, 形成中性粒细胞和淋巴细胞变化曲线的两次交叉, 至青春期与成人基本相同
嗜中性粒细胞增高临床意义 生理性增多 : 日间变化 : 1. WBC 在静息状态时较低, 活动和进餐后高 ; 2. 早晨较低, 下午较高 ; 一日之间最高值与最低值可差 1 倍 ; 3. 运动 头痛 和情绪变化 一般体力劳动 冷热水浴日光或紫外线照射等, 均可使 WBC 轻度增高 ; 4. 剧烈运动 剧痛和激动可使 WBC 显著增高 如剧烈运动, 可于短时间内使 WBC 高达 35x10 9 /L, 以中性粒细胞为主, 当运动结束后会迅速恢复原有水平 这种暂短的变化, 主要是由于循环池和边缘池的粒细胞重新分配所致
嗜中性粒细胞增高临床意义 生理性增多 : 妊娠与分娩 : 1. 妊娠期常见 WBC 增高, 特别最后一个月常波动于 12-17x10 9 /L 之间 ; 2. 分娩时可高达 34x10 9 /L, 分娩后 2-5 日恢复正常 由于 WBC 生理变化波动很大, 只有通过定时和反复观察才有意义
嗜中性粒细胞增高临床意义 病理性增多 : 急性化脓性感染时, 嗜中性粒细胞程度取决于感染微生物的种类 感染灶的范围 感染的严重程度 患者的反应能力 1. 如感染很局限且轻微,WBC 总数正常, 中性分叶百分比有所增高 ; 2. 中度感染时,WBC 常增高 > 10x10 9 /L, 伴轻度核象左移 ); 3. 严重感染时, WBC 可达 20x10 9 /L 以上, 且伴明显核象左移 ;
嗜中性粒细胞增高临床意义 病理性增多 : 严重组织损伤或大量血细胞破坏 : 1. 在较大手术 12-36 小时, WBC 常达 10x10 9 /L 以上, 其增多以中性粒细胞为主 ; 2. 急性心梗 1-2 天内常见 WBC 明显增高, 借此可与心绞痛相区别 ; 3. 急性溶血反应时, 也可见 WBC 增多,WBC 常达 10x10 9 /L 以上 4. WBC 增高机理 : 可能与心肌破损和手术创伤等所产生的蛋白质分解及急性溶血所导致的相对缺氧等, 促使骨髓储备池增加释放有关
嗜中性粒细胞增高临床意义 病理性增多 : 急性大出血 : 1. 在脾破裂或宫外孕输卵管破裂后,WBC 迅速增高, 常达 20-30x10 9 /L, 其增多也主要是中性分叶核细胞 2 WBC 增高机理 : 增多原因可能与应激 2. WBC 增高机理 : 增多原因可能与应激状态 内出血而一过性缺氧等有关
嗜中性粒细胞增高临床意义 病理性增多 : 急性中毒 : 1. 化学药物如安眠药 敌敌畏等中毒时, 常见 WBC 增高, 甚至可达常达 20x10 9 /L 或更高 ; 2. 代谢性中毒如糖尿病酮症酸中毒及慢性肾炎尿毒症时, 也见 WBC 增多, 以中性分叶核粒细胞为主
嗜中性粒细胞增高临床意义 病理性增多 : 肿瘤性增多,WBC 持续增多, 最常见于以下疾病 : 1. 粒细胞白血病, 其增高机制为白血病细胞失控地无限增殖 周期延长和血中转运时间 ( 正常白细胞 10 小时, 白血病细胞 33-38 小时 ); 2. 恶性肿瘤晚期, 其增高机制为某些恶性肿瘤如肝癌 胃癌等可产生过多粒细胞生成素 恶性肿瘤坏死分解产物促进骨髓储备池增加释放 恶性肿瘤伴有骨髓转移而将骨髓内的粒细胞 ( 甚至幼稚的粒细胞, 并可伴有幼红细胞 ) 排挤释放入血
嗜中性粒细胞降低临床意义 某些微生物感染 : 1. 某些革兰氏阴性杆菌如伤寒或付伤寒杆菌感染时, 如无并发症,WBC 均减少甚至可低到 2x10 9 /L 以下 ; 2. 一些病毒感染, 如流感 麻疹时 WBC 减少 3. WBC 减少机制 : 可能是由于在细菌内毒素或病毒作用下使贴壁的即边缘池粒细胞增多而导致循环池粒细胞减少所致, 也可能与内毒素抑制骨髓释放粒细胞有关
嗜中性粒细胞降低临床意义 某些血液病 : 1. 如典型的再生障碍性贫血, 此时 WBC 可少到 1.0x10 9 /L 以下, 分类时几乎均为淋巴细胞 ; 2. 小部分急性白血病总数不高, 称非白血性白血病, 其 WBC<1.0x10 9 /L, 分类时也呈淋巴细胞增多, 此时只有骨髓穿刺检查才能明确诊断 慢性理化性损伤 X 线长期服用氯霉素 慢性理 化性损伤 :X 线 长期服用氯霉素, 可因抑制骨髓细胞的有丝分裂而致 WBC 减少 ;
嗜中性粒细胞降低临床意义 自身免疫病 : 如系统红斑狼疮等, 由于自身免疫抗核抗体导致 WBC 破坏而致减少 ; 脾亢 : 各种原因所致的脾肿大, 如门脉肝硬化可见 WBC 减少, 其机制为舯大脾中的单核 - 巨噬细胞系统破坏了过多的 WBC; 特别注意白细胞总数在严重感染时突然减少, 而嗜中性粒细胞又明显增高 (N:L>10), 表示感染十分严重 ( 机体应激能力太差所致 )
嗜酸性粒细胞增高 降低临床意义 增高 : 过敏性变态反应, 如支气管哮喘 寻麻疹 特别是急性血吸虫病, 钩虫病及一些寄生虫病的幼虫在人体内移行过程中 ( 病人粪便中无虫卵 ) 大手术后 伤寒 急性心肌梗塞等疾病的治疗过程中如发现嗜酸细胞逐渐上升, 表示病情好转, 是愈后良好的标志 降低 : 一般较严重的疾病在进行期, 常显著减少, 甚至消失, 待疾病转入恢复期, 嗜酸性粒细胞即转入正常, 如大手术后 伤寒 急性心肌梗塞等疾病初期常显著减少 ;
单核细胞临床意义 增高 : 多见于结核 皮肌炎 伤寒 斑疹伤寒 寒传单 单核细胞性白血病 疟疾及黑热病 降低 : 无临床意义
淋巴细胞增高临床意义 某些细菌感染, 如伤寒及付伤寒 百日咳等 ; 病毒感染, 如流行性感冒 麻疹 传染性单核细胞增多症 病毒性肝炎等 ; 血液病, 如再障 淋巴细胞性白血病等 ; 在一些急性传染病恢复期, 淋巴细胞往往有增高
淋巴细胞降低临床意义 淋巴细胞减少大多是相对的, 如在化脓性感染时, 嗜中性粒细胞增加, 淋巴细胞呈相对性的减少, 其绝对值一般变化不大 非典型肺炎淋巴细胞的绝对值明显偏低
嗜碱性粒细胞增高临床意义 慢性粒细胞白血病及慢性溶血性贫血时, 嗜碱性粒细胞增高 ; 嗜碱性粒细胞白血病时.