第 7 卷第 1 期 1998 年 3 月 上海水产大学学报 ]OURNAL OF SHANGHAI FISHERIES UNIVERSITY Vol. 7, No.1 March, 1998 草鱼胆汁酸与细菌生长试验 刘玉劳欧杰 ( 上海水产大学食品学院, 200090) 摘要本文研究了草鱼结合胆汁酸盐及游离胆汁酸盐的抑菌作用 研究结果表明, 草鱼结合胆汁酸盐和游离胆汁酸盐对三种革兰氏阳性菌, 如金黄色葡萄球菌 CStaphylococcus aureus) 藤黄八叠球菌 CSarcina lutea) 和枯草芽抱杆菌 CBacillus subtilis) 有抑菌作用, 能够明显地抑制革兰氏阳性菌的生长 草鱼结合胆汁酸盐像乳糖培养基中的牛胆盐一样, 能够抑制革兰氏阳性菌的生长, 而有利于革兰民阴性菌如大肠杆菌 CBacillus coli) 的生长 萃鱼游离胆汁酸盐像 GN 增菌液中的去氧胆酸销一样, 能够抑制革兰氏阳性菌的生长, 而对革兰氏阴性菌喇疾志贺氏菌 CShigella dysenteriae) 的生长则无影响 关键词草鱼, 胆汁酸, 结合胆汁酸盐, 游离胆汁酸盐, 抑菌中团分类号 Q8,S917.1 草鱼胆汁酸盐是草鱼胆汁中的主要固体物质 动物胆盐如牛胆盐 猪胆盐 羊胆盐等在食品检测中是培养基的成分作为抑菌剂, 抑制样品中的其它细菌生长, 对于耍检测的细菌生长则无影响 f 耿彼麟 1984J 本文研究了草鱼胆汁酸盐的抑菌作用, 试图用草鱼胆汁酸盐作为微生物培养基中的一种成分, 作为替代品, 用于微生物培养试验, 为草鱼胆的综合利用迈出新的一步 1 材料与方法 1.1 材料 实验用培养基有营养琼脂培养基, 乳糖胆盐培养基,GN 增菌掖,SS 琼脂培养基, 伊红美兰琼脂培养基, 试验细菌荆疾志贺氏菌等均购自上海市卫生防疫站 大肠杆菌 藤黄八叠球菌 枯草芽抱杆菌 金黄色葡萄球菌等均为本校微生物实验室保存菌种 胆酸和去氧胆酸为 Fluka 产品 牛胆盐为包头市生物化学制药厂生产 草鱼结合胆汁酸盐与草鱼游离胆汁酸盐由作者自制 [ 刘玉芳 199J 草鱼结合胆汁酸盐中含有牛磺脱氧胆酸, 草鱼游离胆汁酸盐中含有胆酸铀和去氧胆酸锅 新鲜牛奶和豆奶为市场上购买 1.2 草鱼胆盐对细菌的抑菌试验抑菌试验采用管碟法测量胆盐抑菌圈直径 标准胆酸 标准去氧胆酸 牛胆盐 草鱼结合胆 1997-09 一 16 收到
34 上海水产大学学报 7 卷 汁酸盐及草鱼游离胆汁酸盐均用煮沸冷却蒸馆水配制成所需浓度 试验菌掖为经活化后的纯菌液, 浓度用十倍稀释表示, 用生理盐水稀释 10 倍 100 倍 1000 倍后分别用 10 一 l 10-2 和 10-3 表刁亏 1.3 草鱼结合胆汁酸盐对大肠杆菌生长的试验自配乳糖草鱼胆盐培养基为用草鱼结合胆汁酸盐代替标准乳糖胆盐培养基中的牛胆盐配制而成 中华人民共和国卫生部 199J 将 10-1 10-2 和 10 不同浓度大肠杆菌液分别接种于自配乳糖草鱼结合胆汁酸盐培养基和标准乳糖胆盐培养基中, 培养 24 小时后, 观察产酸产气情况 新鲜牛奶及新鲜豆奶浓度用 10 表示, 均质稀释 10 倍 100 倍后分别用 10-1 和 10-2 表示 将三种不同浓度的牛奶及豆奶各 1 毫升分别加到自配乳糖草鱼结合胆汁酸盐培养基和标准乳糖胆盐培养基中, 培养 24 小时, 观察产酸产气情况 1.4 草鱼游离胆汁酸盐对病疾志贺氏菌生长的试验躏疾志贺氏菌的培养, 安瓶瓶中的纯干粉状菌种用适量生理盐水稀释后, 将菌液接种在营养琼脂斜面上, 置培养箱中 36 土 1'C, 培养 24 小时即为活化菌种的备用 将此斜面菌种分别接种到标准和自配的 GN 增菌液中,36 土 1'C 培养 8 小时, 然后再分别接种到 ss 琼脂和 EMB 琼脂培养基上,36 士 1'C, 培养 24 小时, 观察结果 新鲜豆奶检测, 分别取新鲜豆奶 2mL 加到盛有标准和自制的 GN 增菌液的瓶中.36 土 1'C. 培养 8 小时, 再接种到 ss 琼脂和 EMB 琼脂培养基上, 操作同上, 观察结果 2 结果与讨论 2. 1 草鱼胆盐对细菌的抑菌作用 2.1.1 草鱼游离胆汁酸盐对细菌的抑菌作用草鱼游离胆汁酸盐对某些细菌抑菌实验结果列于表 1. 表 1 表明, 当菌液浓度为 1 一 2 和 10-3 时, 草鱼游离胆汁酸盐及其对照品标准脱氧胆酸和标准胆酸都对藤黄八叠球菌和枯草芽抱杆菌都产生了基本相同大小的抑菌圈, 显示了草鱼游离胆汁酸具有明显的抑菌效果, 而对金黄色葡萄球菌来说, 草鱼游离胆汁酸盐与其对照品标准脱氧胆酸和标准胆酸相比较, 抑菌圈直径更大一些, 抑菌效果显示更强一些 2.1.2 草鱼结合胆汁酸盐对细菌的抑窜作用草鱼结合胆汁酸盐对某些细菌的抑菌试验结果列于表 2 表 2 表明, 当菌液浓度为 10-2 和 10-3 时, 草鱼结合胆汁酸盐对金黄色葡萄球菌和枯草芽抱杆菌都有相同大小的抑菌圈, 与对照品牛胆盐相比较, 抑菌圈大小也相同, 其抑菌效果相当, 在试验浓度范围内抑菌圈的大小与其浓度关系不大 草鱼结合胆汁酸盐对藤黄八叠球菌亦有明显的抑菌作用, 和对照晶牛胆盐一样, 抑菌效果随着胆盐浓度增加而增加 2.2 草鱼结合胆汁酸盐对大肠杆菌生长的作用草鱼结合胆汁酸盐对大肠杆菌生长试验结果列于表 3 大肠菌群是食品卫生检测中最常用
1 期刘玉芳 欧杰 g 草鱼胆汁酸与细菌生长试验 3 的指标之一, 通过检测食品中有无大肠菌群及其含量来判断食品是否符合卫生标准 胆盐 ( 牛胆盐或猪胆盐 ) 作为培养基的一种成分起到抑菌作用, 抑制样品中革兰氏阳性菌的生长而有利于大肠菌群的生长, 这也是乳糖胆盐培养基的特征所在 表 3 表明, 标准乳糖胆盐培养基与自配乳糖草鱼结合胆汁酸盐培养基里接入大肠杆菌菌液后, 小倒管中产酸产气, 对乳糖发酵, 表明有大肠菌群存在 这说明自配培养基中的草鱼结合胆汁酸盐同标准胆盐培养基中的牛胆盐一样有利于大肠菌群的生长 从新鲜牛奶 豆奶的发酵培养中发现, 小倒管中没有产酸产气, 对乳糖不发酵, 没有观察到大肠菌群的生长, 从而检测出新鲜牛奶 豆奶是符合食品卫生标准的 由此表明, 自配乳糖草鱼结合胆汁酸盐培养基与标准乳糖胆盐培养基一样可以用来检测样品, 证明了草鱼结合胆汁酸盐像标准乳糖胆盐培养基中的牛胆盐一样可以用来检验食品中大肠菌群的存在与否 表 1 草鱼游离胆汁酸盐对细菌的抑菌作用 ( 抑菌圈直径,mm) Tab. 1 The effect of the inhibition of the growth of bacteria by the grass carp free bile sait Cbacteriostatic clrcle diameter, mm) 药品浓度 细菌名称 药品名称 1mg/mL 2mg/mL 3mg/mL 菌液浓度 10-2 10-3 10-2 10-3 10-2 标准脱氧胆酸 8 10-3 9 金黄色葡萄球菌 标准胆酸 8 8 8 8 草鱼游离胆汁酸盐 10 10 10 标准脱氧胆酸 藤黄八叠球菌 标准胆酸 革鱼游离胆汁酸盐 标准脱氧胆酸 8 10 9 枯草芽抱杆菌标准胆酸 草鱼游离胆汁酸盐 6 6 Tab. 2 表 2 革鱼结合胆汁酸盐对细菌的抑菌作用 ( 抑菌圃直径,mm) The effect of the inhibition of the growth of bacteria by the grass carp combined bile salt Cbacteriostatic circle diameter, mm) 细菌名称 药品名称 药晶浓度 100mg/mL 10mg/mL 200mg/mL 菌液浓度 10-2 10-3 10-2 10-3 10-2 10-3 金黄色葡萄球菌 藤黄八叠球菌 枯草芽泡杆菌 牛胆盐 草鱼结合胆汁酸盐 牛胆盐 11 12 12 1 1 草鱼结合胞汁酸盐 10 10 牛胆盐 草鱼结合胆汁酸盐
36 上海水产大学学报 7 卷 Tab. 3 表 3 大肠杆菌在不同乳糖胆盐发酵培养基中的生长作用 The effect of the growth of the Bacillus coli on different kinds or lactose bile sait medium 大肠杆菌新鲜牛奶新鲜豆奶牛奶 ( 豆奶 ) 菌液浓度标准乳糖胆自配乳糖草鱼浓度标准乳糖胆自配乳糖草鱼标准乳糖胆自配乳糖草鱼盐培养基服盐培养基盐培养基胆盐培养基盐培养基胆盐培养基 10-1 100 10-2 10-1 10-3 10-2 注."" 表明产酸产气一 " 表明不产酸不产气, 即不发醇 2.3 草鱼游离胆汁酸盐对荆疾志贺氏菌生长的作用草鱼游离胆汁酸盐对荆疾志贺氏菌生长试验结果列于表 4 表 4 表明, 自配 GN 增菌液和标准 GN 增菌液一样, 对荆疾志贺氏菌能同样起到增菌的作用 通过划线接种法把荆疾志贺氏菌接种到 ss 琼脂培养基和 EMB 琼脂培养基上, 观察到有生长良好的无色透明状荆疾志贺氏菌菌落 对新鲜豆奶检测中, 从 ss 琼脂培养基和 EMB 琼脂培养基上没有观察到无色透明的瘸疾志贺氏菌菌落存在, 这说明新鲜豆奶中没有致病性的瘸疾志贺氏菌, 符合食品卫生标准 实验结果证明了自配 GN 增菌液和标准 GN 增菌液一样增菌效果完全相同, 能够用来检测样品中的喇疾志贺氏菌的试验, 从而证实了草鱼游离胆汁酸盐像标准 GN 增菌液中的去氧胆酸铀一样能作为增菌液培养基的成分作为去氧胆酸铀的替代品 表 4 草鱼游离胆汁酸盐对摘疾志贺氏菌生长的作用 Tab. 4 The effect of the growth of the shigella dysenteriae caused by the grass carp free bile sait 培养基 标准 GN 增菌液 喇疾志贺氏菌 自配 GN 增菌液 标准 GN 增菌液 新鲜豆奶 自配 GN 增菌液 琼脑培养基菌落生 * EMB 琼脂培养基菌落生长 注 :"" 表示有荆疾志贺氏茵茵落, 菌落为无色透明状 表示无瘸疾志贺氏茵茵落 3 小结 草鱼胆汁酸盐即草鱼游离胆汁酸盐和草鱼结合胆汁酸盐对三种革兰氏阳性菌即金黄色葡萄球菌 藤黄八叠球菌和枯草芽抱杆菌都具有明显的抑菌作用, 其抑菌效果的大小与多种因素有关, 与试验菌的种类 试验菌液的浓度 胆汁酸盐的浓度等因素有关 草鱼结合胆汁酸盐像标准乳糖胆盐培养基中的牛胆盐一样, 能作为培养基的成分替代牛胆盐配制鉴别性培养基, 用来检测样晶中大肠菌群 草鱼游离胆汁酸盐像标准 GN 增菌液中的去氧胆酸铺一样, 能做为配制标准 GN 增菌液培养基中的成分检测样品中荆疾志贺氏菌的存在与否 从而表明草鱼游离胆汁酸盐能作为去氧胆酸铀的替代品
1 期刘玉芳 欧杰 g 草鱼胆汁酸与细菌生长试验 37 参考文献 刘玉芳. 199. 薄层色谱扫描法测定草鱼胆汁酸的含量. 上海水产大学学报. 4(2),12-1. 耿彼麟. 1984. 胆盐对大肠菌群生长试验的观察. 中华预防医学杂志.1(1):3. 中华人民共和国卫生部. 199. 国家标准, 食品卫生微生物学检验. GB4789.3-94.GB4789.-94. 北京, 中国标准出版社. STUDY ON BILE ACID FROM GRASS CARP BILE AND ITS BACTERIOSTATIC EFFECT LIU Yu-Fang, OU Jie (College 0/ Food Science, SFU, 200090) ABSTRACT The bacteriostatic effect of both free and combined bile salts from grass carp bile was studied in this paper. The experimental results show that both salts remarkably exerted their bacteriostasis to three species of such Gram positive bacteria as Staphylococus aureus, Sarcina lutea and Bacillus subtilis. The combined salt was quite similar to cow bile salt cultured in lactose bile medium, which showed bacteriostasis to Gram positive bacteria, but not to Gram negative ones like B acillus coli. As to the free bile salt, it was similar to deoxycholic acid in GN-enriched medium and showed bacteriostasis to Gram positive bacteria, but no effect on the growth of Shigella dysenter 证 ae. KEYWORDS grass carp, bile acid, combined bile salt, free bile salt, bacteriostasis