中華民國第 屆中小學科學展覽會

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1 中華民國第 51 屆中小學科學展覽會作品說明書科別 : 生物科組別 : 高中組作品名稱 :Toxic Out 枯草桿菌對農藥的分解關鍵詞 : 農藥 枯草桿菌 微生物製劑編號 : - 1 -

2 摘要 枯草桿菌 (Bacillus Subtilis), 因其對許多植物病菌有拮抗作用, 近年來常被用來製成微生物製劑進行植物病害與生物防治而聞名, 但它仍有一樣令我們感興趣的功用 就是加速農藥分解 本實驗的目的是在於探討枯草桿菌為生物製劑施用於植物後, 其對於農藥殘留之影響 於前準備試驗中, 檢測傳統市場 超市與家中的蔬菜, 發現除了自家農田所種植的蔬菜之外, 均有農藥殘留, 顯示目前農摘種蔬果農藥使用氾濫, 已嚴重影響人民食的安全 農藥於自然界中即可自然分解, 微生物體內已知具有多項酵素能分解農藥, 試驗嘗試分離土壤及納豆普遍存在之枯草桿菌, 發現其能與植物共生存, 顯示其與農藥的分解或許有關聯性 再於農藥殘留分解試試驗中, 我們使用種植四週之茼蒿, 噴灑陶斯松 貝芬替 益達胺 亞托敏以及因得克等農藥, 每三天分別處理微生物製劑 TKS1-1 及 WG6-14, 對照組則噴水以同方法處理 試驗中發現五種農藥均能被有效分解 顯示微生物處理能有效加速農藥衰退加速, 未來若能於農田間普及使用可縮短農藥使用後的安全採收期 壹 研究動機 茼蒿農藥檢驗消基會 : 高達 5 成有農藥殘留 摘錄自 2010 年 12 月 28 日中時電子報台北報導寒冷的冬天吃火鍋, 茼蒿是不可缺少的搶手貨, 為了替消費者把關, 消費者文教基金會在日前進行茼蒿菜農藥殘留檢驗,28 日公布檢驗結果, 在採樣 20 件茼蒿菜樣品調查中發現, 其中更有 3 件樣品被檢出殘留不止一種農藥 據消基會表示, 這 3 件樣品分別為 景美市場外攤販 熊威超市 及 環南市場甲棟生群商行 ; 而 熊威超市 及 環南市場甲棟生群商行 更是同時檢出含有三種農藥 茼蒿是大家在冬天吃火鍋時的好夥伴, 但人們所不知道的是, 當我們想親自燉煮火鍋或者到火鍋店享受美味的同時, 不知不覺將農藥吃進肚子裡了, 或許你會覺得只是微小的量, 不足以影響人的健康, 但那些致命的毒素卻一點一滴的囤積在體內, 像是不定時炸彈一般, 趁著你最沒有防備的時候引爆 隨著台灣農業的迅速發展, 大家對農產品品質的要求以及安全性日趨迫切, 農藥的重要性也與日俱增 但因大家太強調其殺蟲和殺菌的效果而在使用時未加以控制用量, 也有一些農民在噴灑農藥後因天氣因素或者市場需求而太早採收, 造成大量農藥殘留的蔬果流入市面 難道, 農藥的發明真的是寂靜的春天之元兇嗎? 這挑起了我們的興趣, 決定試試以枯草桿菌做成的微生物製劑是否能夠有效分解農藥, 縮短安全採收期, 省下等待農藥消退的時間, 農夫們採得開心, 人們吃得放心 - 2 -

3 貳 研究目的 一 檢測超市 傳統市場和家中農田的蔬果是否有農藥殘留, 並探討殘留農藥的種類及多寡 二 認識枯草桿菌的特性與型態 三 檢測家中土壤以及市售納豆中是否有枯草桿菌的存在 四 以親自種植的茼蒿為樣本, 檢測枯草桿菌在安全採收期中對農藥的分解效果 一 供試菌株以及植物樣本 參 實驗材料 研究設備及器材 ( 一 ) 枯草桿菌 (Bacillus Subtilis)WG6-14 ( 二 ) 枯草桿菌 (Bacillus Subtilis)TKS1-1 ( 三 ) 茼蒿 ( 四 ) 家中土壤 ( 五 ) 市售納豆 ( 楓康超市以及松青超市 ) ( 六 ) 家中蔬果 ( 傳統市場和家中農田 ) 二 實驗用培養基 馬鈴薯蔗糖培養基平板製備 (PSA) 此培養基用於養枯草桿菌以及土壤菌的鑑定 1. 將馬鈴薯秤重 200g( 約 2 粒小馬鈴薯 ) 削皮並切片至適當厚度, 煮沸至馬鈴薯軟化 2. 取出汁液, 以紗布對折過濾約一 二次, 過濾大顆粒殘渣 3. 秤重 20g 蔗糖 4. 分別量秤 7.5g 洋菜粉分裝置 2 個血清瓶 ( 不影響酸鹼值, 故可以直接倒入 ) 5. 將溶液加蒸餾水至大燒杯中大約 1L, 加入蔗糖並攪拌均勻 6. 放入磁石並擺置酸鹼校正儀下, 固定 ph 值至 7.0( 若溶液過酸, 加入 NaOH; 若溶液過鹼, 則加入 HCl) 7. 倒入大量筒中加蒸餾水定量至 1L, 分別倒入兩個 500 ml 的血清瓶中 8. 利用滅菌釜進行高溫滅菌完, 倒入培養皿中, 放待其凝固即可 三 一般化學藥品 蔗糖 (sucrose) 洋菜粉(agar powder) 酒精(C2H5OH) 氫氧化鈉(NaOH) 氯化氫(HCl) 結晶紫 (crystal violet) 碘液(I-KI) 番紅(Safranin O) 孔雀綠(malachite green) 乙腈(CH3CN) 丙酮 (C3H6O) 正己烷(C6H14) 氯化鈉(NaCl) 甲苯(C7H8) 氮氣(N2) 水相緩衝液(phosphate buffer) 液態氮(N2) 測劑 - 3 -

4 四 實驗設備 ( 一 ) 串聯式氣體層析質譜儀 (GC/MS/MS Agilent 7890A / 7000A) ( 二 ) 液相層析串聯質譜儀 (API4000) 五 實驗器材 無菌操作箱 恆溫培養箱 (30 ) 水浴槽 ph 儀 震盪器 電子天平 本生燈 量筒 秤量紙 血清瓶 移植環 微波爐 滅菌釜 微量吸管 試管 微量吸管頭 光學顯微鏡 滴管 冰箱 (-20 ) 果汁機 共栓量筒 離心機 分液漏斗震盪機 注射針筒 離心管 燒杯等 肆 研究方法 一 檢測超市 傳統市場和家中農田的蔬果是否有農藥殘留, 並探討殘留農藥的種類及多寡 - 4 -

5 ( 一 ) 檢測流程 樣品 : 波菜 青江菜 小白菜 葡萄 高麗菜 青蔥等 將六種樣品測重 10 g 以球型吸管加入 10 ml 乙腈 倒入測劑 ( 調整 ph 值 ), 並上下搖動一分鐘使其均勻混合 放入離心機中離心 轉速 3000rps 以吸管吸 6 ml 上清液, 加入事前已先準備好的離心管中 ( 內含另一測劑 ), 上下搖動一分鐘使其混合均勻, 並再次離心 吸取離心完後的上清液 2mL 至圓底燒瓶中 吸取離心完後的上清液 2mL 至針筒中 減壓濃縮, 並用丙酮溶解附在瓶身的農藥, 以 N2 吹乾, 留下農藥固體, 再加入 2mL 正己烷和丙酮 (1:1), 用超音波震盪均勻混合 放入樣品瓶中, 即可放入液相與氣相質譜儀中檢測 - 5 -

6 1. 以果汁機打成泥, 混合均勻, 方便待會精確的測重 2. 樣品測重 10 g 順序由右至左分別是 : 波菜 ( 傳統市場 ) 青江菜( 傳統市場 ) 小白菜( 傳統市場 ) 葡萄( 家中農田 ) 高麗菜 ( 家中農田 ) 青蔥( 傳統市場 ) 3. 以球型吸管加入 10mL 乙腈 4. 倒入測劑, 並上下搖動一分鐘使其均勻混合 : 吸附蛋白質及油質 5. 放入離心機中離心 : 以分離出有機溶劑 6. 以吸管吸 6mL 上清液, 加入事前已先準備好的管子中 ( 內含另一萃取試劑 ), 上下搖動一分鐘使其混合均勻, 並再次離心 : 吸附極性較強之物質 7. 吸取離心完後的上清液 2mL 至圓底燒瓶中 8-1. 吸取離心完後的上清液 2mL 至針筒中 8-2 減壓濃縮, 並用丙酮溶解附在瓶身的農藥, 以 N2 吹乾, 留下農藥固體, 再加入 2mL 正己烷和丙酮 (1:1), 用超音波震盪均勻混合 9. 放入樣品瓶中, 即可放入質譜儀中檢測 - 6 -

7 二 認識枯草桿菌 (TKS1-1 以及 WG6-14) 的特性與型態 ( 一 ) 革蘭氏染色法 在載玻片上滴一滴水, 將菌泥均勻塗抹於上 火烤一分鐘固定 靜置一分鐘 加入初染劑 : 結晶紫 Crystal violet 以自來水沖掉染劑後風乾 靜置三分鐘 媒染劑 : 碘液 I-KI 利用脫色劑 95% 酒精沖洗到無結晶紫流出 靜置一分鐘 複染劑 : 番紅 Safranin O 水洗後蓋上蓋玻片 鏡檢 (1000X) - 7 -

8 ( 二 ) 內生孢子染色法 在玻片上加一滴水, 將細菌均勻塗抹在其上 火烤一分鐘固定 加入初染劑 : 孔雀綠 malachite green 至於水蒸氣上加熱十分鐘 以沖水自然風乾 靜置 30~60 秒 加入複染劑 : 番紅 safranin O 水洗, 風乾後蓋上玻片 鏡檢 (1000X) - 8 -

9 ( 三 ) 周生鞭毛染色法 以滴管取蒸餾水滴於培養基邊緣 靜置十分鐘, 等待枯草桿菌張開鞭毛游出 撥片上滴水蓋上蓋玻片, 於邊緣低上少許水 以移植環取培養基上懸浮水溶 液, 點於水滴上 注意 : 點太大力會使鞭毛斷裂 將玻片傾斜以便水滴滲入 靜置十分鐘 將染劑滴於玻片邊緣, 便其 自然滲色 注意 : 勿滴太多使鞭毛斷裂 靜置十分鐘 鏡檢 (1000X) - 9 -

10 三 檢測家中土壤以及市售納豆中是否有枯草桿菌的存在 ( 一 ) 土壤與納豆序列稀釋 土壤一 納豆一 土壤二 納豆二 將土壤與納豆加入無菌水, 並震盪使其混合均勻 用 pipet 吸取第一管的混合液 100μL, 加入第二管 90μL 無菌水中 (10% 稀釋 ), 以此類推到第五管 放入 100 沸水中滾煮五分鐘 在無菌操作台上開始塗布畫菌, 每管塗兩皿 結果一 結果二

11 四 以親自種植的茼蒿為樣本, 檢測枯草桿菌對農藥的分解是否真的能使安全採收期縮短 ( 一 ) 茼蒿種植方法 播種 生長四週 第一區 第二區 第三區 對照組 灑上混合農藥 灑上混合農藥 灑上混合農藥 貝芬替 益達 貝芬替 益達 貝芬替 益達 無添加農藥 胺 陶斯松 因 胺 陶斯松 因 胺 陶斯松 因 得克 亞托敏 得克 亞托敏 得克 亞托敏 不添加微生物 一星期噴灑 2 一星期噴灑 2 不添加微生物 製劑 次 每隔三 次 每隔三 製劑 天 微生物製 天 微生物製 劑 TKS1-1 劑 WGS6-14 每隔三天採樣一次, 為期一個月, 共 10 次 ( 二 ) 播種我們選用茼蒿的種子, 先播種於腐質土 peat moss 上大約五日, 等其長出苗來, 再將小幼苗移入盆栽, 將兩株植株種在一個盆栽中, 種植四周後, 即可進行試驗, 共一百盆

12 ( 三 ) 農藥的準備此次實驗的混合農藥共由四種常用農藥組成 : 農藥名稱 稀釋倍率 殘留農藥安全容許量 作用對象 亞托敏 Azoxystrobin 2000 倍 1.0 殺菌劑 貝芬替 Carbendazim 2000 倍 1.0 殺菌劑 陶斯松 Chlorpyrifos 3000 倍 1.0 殺蟲劑 益達胺 Imidacloprid 8000 倍 1.0 殺蟲劑 因得克 Indoxacarb 2000 倍 2.0 殺蟲劑 ( 四 ) 微生物製劑的準備 1. 此次實驗的微生物製劑共有兩種 : (1) 枯草桿菌 (Bacillus Subtilis)TKS1-1 (2) 枯草桿菌 (Bacillus Subtilis)WG 微生物製劑的製備 : 取自中興大學植物病理系實驗室 3. 實際噴灑之稀釋倍率 : 枯草桿菌 : 水 =1:100 ( 五 ) 種植區域分配 一二三四 1. 第一區 : 此區作為植物自然分解農藥之標準 灑上混合農藥, 但不噴灑微生物製劑, 一次採樣兩株, 共採十次 2. 第二區 : 此區作為微生物製劑 TKS1-1 分解農藥之標準 灑上混合農藥, 並在採樣期間, 三天噴灑一次微生物製劑 TKS1-1, 一次採樣三盆 ( 三株 ), 共採十次 3. 第三區 : 此區作為微生物製劑 WG6-14 分解農藥之標準 灑上混合農藥, 並在採樣期間, 三天噴灑一次微生物製劑 WG6-14, 一次採樣三盆 ( 三株 ), 共採十次 4. 第四區 ( 對照組 ): 不灑混合農藥, 也不添加微生物製劑, 僅澆水維持生命

13 ( 六 ) 植株採樣以及檢測方法 第一區採收的茼蒿第二區採收的茼蒿第三區採收的茼蒿 對照組 加入液態氮 ( 葉片變脆, 使研磨效率提升 ) 研磨成粉狀 裝入樣品罐中, 每區各有十罐, 對照組一罐, 十次採樣共有 31 罐 以球型吸管加入 10 ml 乙腈 倒入萃取試劑 ( 吸附蛋白質及油質 ), 並上下搖動一分鐘使其均勻 放入離心機中離心 以吸管吸 6 ml 上清液, 加入事前已先準備好的離心管中 ( 內含另 一萃取試劑 ), 上下搖動一分鐘使其混合均勻, 並再次離心 取上清液 1 ml, 加至小玻璃瓶中 在另一小玻璃瓶中, 取樣品一中液體 0.1mL, 加上 0.9 ml 乙腈 放入液相層析串聯式質譜儀, 等待檢測 1. 採樣方法 (1) 將樣本放入研缽中, 將菜梗先以剪刀剪成多段, 防止菜梗冷凍 ( 下一個步驟 ) 之後, 因太粗太硬而無法磨成細粉 (2) 加入液態氮, 使其冷凍, 葉片變硬有助於研磨之便利性 (3) 將植株磨成粉末狀 (4) 將植株的粉末裝入樣品罐中, 完成採樣

14 2. 檢測流程 (1) 將樣品測重 10 g (2) 以球型吸管加入 10 ml 乙腈, 上下搖晃確保其混合均勻 : 將樣本上的農藥溶於乙腈中 (3) 倒入萃取試劑, 使用分液漏斗震盪機器上下搖動一分鐘使其均勻混合 : 萃取試劑 菜渣 + 農藥 + 乙腈 萃取試劑 (4) 放入離心機中離心 農藥 + 乙腈 上清液 植物殘體 水層 未反應試劑 (5) 以球型吸管吸取 6 ml 上清液, 加入事前準備好的離心管中 ( 內含另一萃取試劑 ), 上下搖動一分鐘使其混合均勻, 並再次離心 : 將農藥雜質吸附介質與檢液分離 乙腈 + 農藥 吸附雜質沉澱物

15 (6) 取上清液 1 ml, 加至小玻璃瓶中 : 此樣品濃度過高, 需稀釋 1 ml 步驟五的上清液 乙腈 + 農藥 (7) 在另一小玻璃瓶中, 取樣品一中液體 0.1mL, 加上 0.9 ml 乙腈 : 將樣品稀釋, 此樣品將放入液相層析串聯式質譜儀 0.1mL 樣品一 ml 乙腈

16 伍 研究結果 一 檢測超市 傳統市場和家中農田的蔬果是否有農藥殘留, 並探討以何種農藥為多 我們三人各自從家中或市場帶來蔬果做為檢測樣本, 依照歐盟檢測方法 QuEChERS, 檢測大眾平常購買的蔬果中是否殘留過量農藥 表一 六種蔬果農藥檢測結果 ( 註 : 括號內表示該植物的殘留農藥安全容許量, 且表中 LC 表液相質譜儀檢測結果 GC 表氣相質譜儀檢測結果 ) 表二 六種蔬果樣本農藥殘留檢測種類與安全性 樣品名稱 是否殘留農藥 殘留農藥種類 是否符合安全 小白菜 + 亞滅培 賽滅寧 達滅芬 賓克隆 佈飛松 + 青蔥 + 貝芬替 剋安勃 賽洛寧 益達胺 依普同 + 波菜 + 甲基巴拉松 賓克隆 + 葡萄 + 達滅芬 克收欣 + 青江菜 + 甲基巴拉松 佈飛松 + 高麗菜 - 無農藥殘留 + 從表一和表二得知, 家中農田種的高麗菜, 因以自家有機方式栽培, 故無農藥檢出 其中, 從傳統市場購入的小白菜及蔥的農藥殘留種類最多 雖然有五種蔬果被檢測出有農藥殘留, 但檢測出的農藥殘留量均在安全容許量的標準之內

17 二 認識枯草桿菌的特性與型態枯草桿菌是一種革蘭氏陽性且好氧的桿菌, 細胞主要的特徵是具有周生鞭毛, 在逆境中會產生內生孢子, 使我們得以利用這些特性找到枯草桿菌, 方法共有三種 : 革蘭氏染色 周生鞭毛染色及內生孢子染色 我們分別帶來家中的土壤以及市售納豆, 利用其上述特性, 檢測在我們日常生活是存有枯草桿菌 ( 一 ) 選用 TKS1-1 以及 WG6-14 兩種不同類型的枯草桿菌, 了解其特性 圖一 PSA 培養基中畫菌圖 (TKS1-1) 圖二 PSA 培養基中畫菌圖 (WG6-14) 枯草桿菌 TKS1-1 以及 WG6-14, 兩者在培養皿中生長的外觀皆為荷包蛋狀, 質地為黏稠狀, 富有特殊氣味, 唯一有不同之處為顏色,TKS1-1 偏白色, 而 WG6-14 則是偏黃色 由圖一與圖二看來, 皆在畫菌的第三區開始出現單一菌落 圖三 革蘭氏染色圖 (TKS1-1) 圖四 革蘭氏染色圖 (WG6-14) 從圖三以及圖四中可發現,TKS1-1 和 WG6-14 的染色結果皆為革蘭氏陽性, 呈現藍色, 且形狀呈現桿狀

18 內生孢子 枯草桿菌細胞 圖五 內生孢子染色圖 (TKS1-1) 使枯草桿菌產生內生孢子, 須在培養皿中生長大約五天 等待期氧氣耗完, 在惡劣的情況下使可形成內生孢子 從圖五中可發現, 染色成功的細胞體呈紅色 番紅染色, 內生孢子則為墨綠色 孔雀綠染色 三 檢測家中土壤以及市售納豆中是否有枯草桿菌的存在 ( 一 ) 我們從家中帶來兩種土壤, 分別是枇杷樹以及玉龍草旁的土壤, 將土壤序列稀釋, 並塗布畫菌培養, 之後, 加以革蘭氏染色, 檢測其是否為枯草桿菌 圖六 枇杷樹旁的土壤 圖七 玉龍草旁的土壤 1000 由圖六可知, 革蘭氏染色結果是藍色, 為革蘭氏陽性, 又此菌經過 100 的水沸騰過後仍生存下來, 型態為桿狀, 故推測其為枯草桿菌 由圖七可知, 革蘭氏染色結果為紅色, 為革蘭氏陰性, 不符合枯草桿菌的型態, 故推測其不為枯草桿菌

19 ( 二 ) 檢測了市售納豆中是否有枯草桿菌, 將其序列稀釋, 並塗布培養後, 加以內生孢子染色, 檢測其是否為枯草桿菌 1000 圖八 市售納豆中菌的內生孢子染色圖由圖八可得知, 納豆中的菌是可以在 100 沸水煮過之後, 產生內生孢子而存活, 觀察其外型為桿狀, 故推測其為枯草桿菌 四 以茼蒿為樣本, 分別以檢測枯草桿菌對農藥的分解是否真的能使安全採收期縮短 ( 一 ) 種植區域分配說明 1. 加水處理組 : 第一天噴灑混合農藥後, 正常澆水處理 2.TKS1-1: 第一天噴灑混合農藥後, 並與採樣同一時間, 噴灑微生物製劑 TKS1-1, 持續一個月 3.WG6-14: 第一天噴灑混合農藥後, 並與採樣同一時間, 噴灑微生物製劑 WG6-14, 持續一個月 4. 對照組 : 此區茼蒿無噴灑混合農藥, 故農藥殘留量為零, 在圖中不顯示 ( 二 ) 檢測三種栽種處理的茼蒿樣品中農藥亞托敏的殘留量 圖九 樣品中農藥亞托敏的殘留量 單位 :ppm

20 從圖九可得, 農藥亞托敏到了一般安全採收期的天數, 以添加 WG6-14 組衰退的最為迅速, 推測枯草桿菌 WG6-14 能降低農藥殘留量 ( 三 ) 檢測三種栽種處理的茼蒿樣品中農藥貝芬替的殘留量 圖十 樣品中農藥貝芬替的殘留量 單位 :ppm 從圖十可得, 農藥貝芬替到了一般安全採收期的天數, 以添加 WG6-14 組衰退的最為迅速, 推測枯草桿菌 WG6-14 能降低農藥殘留量 ( 四 ) 檢測三種栽種處理的茼蒿樣品中農藥陶斯松的殘留量 圖十一 樣品中農藥陶斯松的殘留量 單位 :ppm 從圖十一可得, 農藥陶斯松到了一般安全採收期的天數, 以添加 WG6-14 組衰退的最為迅速, 推測枯草桿菌 WG6-14 能降低農藥殘留量

21 ( 五 ) 檢測三種栽種處理的茼蒿樣品中農藥益達胺的殘留量 圖十二 樣品中農藥益達胺的殘留量 單位 :ppm 從圖十二可得, 農藥益達胺到了一般安全採收期的天數, 以添加 WG6-14 組衰退的最為迅速, 推測枯草桿菌 WG6-14 能降低農藥殘留量 ( 六 ) 檢測三種栽種處理的茼蒿樣品中農藥因得克的殘留量 圖十三 所有樣品中農藥因得克的殘留量 單位 :ppm 從圖十三可得, 農藥因得克到了一般安全採收期的天數, 以添加 WG6-14 組衰退的最為迅速, 推測枯草桿菌 WG6-14 能降低農藥殘留量

22 陸 討論 一 檢測家中土壤中是否有枯草桿菌時, 需將土壤樣本煮至 100, 使土壤中能夠抵禦惡劣環境的菌存活, 產生內生孢子, 但在土壤中能產生內生孢子的菌不只枯草桿菌, 所以仍須經 DNA 定序才能確認即為枯草桿菌 二 在進行種植一個月的茼蒿為試驗材料之前, 我們也選用了其他材料, 如小白菜及青江菜做為實驗的樣本, 但因為採樣時間間隔太短 每天採樣一次, 且採樣次數不足, 導致實驗誤差 有了此經驗, 使我們在栽種茼蒿時, 能順利取樣 三 此實驗我們的種植茼蒿的地點是溫室, 若將其栽種在一般室外環境, 則可以進一步比較微生物製劑的應用效果 柒 結論 一 實驗結果得知, 市售蔬果農藥殘留量雖皆符合安全容許量標準, 但若食入的農藥為脂溶性物質, 或是農藥殘留累積量太多, 若人體生理機能無法排出, 恐對人體造成威脅 二 家中土壤有枯草桿菌的存在, 可以幫助植物抵禦一些植物疾病, 若能將其作為肥料定期噴灑, 將能使土地更肥沃, 使植物更強壯 三 以栽種茼蒿為樣本, 結果發現微生物製劑能在一般植物的安全採收期, 也就是第十天到第十一天之間, 有效使常用農藥加速衰退, 且枯草桿菌樣品 WG6-14 優於 TKS1-1 四 微生物製劑能幫助植物生長, 且其菌種與市售納豆的雷同, 故無須擔心食用後是否對人體有害 以枯草桿菌製成的微生物製劑, 取材容易且價格便宜, 製作方式也不需要複雜的器材, 以噴灑方式更是簡單容易, 故此種微生物製劑值得推廣 玖 參考資料及其他 一 漢聲雜誌 18 免於吃的恐懼專集 2 農藥篇 台北市 漢聲 二 近期公告之新農藥檢測方法 ( 無日期 ) 衛生署 民 100 年 2 月 25 日取自 : 三 功能性微生物製劑在有機作物栽培病害管理上之應用 衛生署 民 100 年 2 月 25 日取自 : 四 植物病害的殺手 枯草桿菌 民 100 年 2 月 25 日取自 : 五 生物農藥枯草桿菌在植物病害防治上之應用 民 100 年 2 月 25 日取自 : 六 CAMPBELL.REECE 編譯, 鐘楊聰, 葉開溫, 催文慧, 徐歷鵬, 生物學, (2005), 偉明

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