蔬果農藥殘毒快速檢驗試劑 Rapid Bioassay for Pesticide Residues (RBPR) Reagent Kit 500 tests / 1000 tests 使用說明書

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1 農藥殘留快速檢驗試劑 Rapid Bioassay for Pesticide Residues (RBPR) Reagent Kit 500 tests / 1000 tests 使用說明書 Operation Manual 台中市霧峰區中正路 189 號 ( 行政院農委會農業試驗所創新育成中心 ) 電話 傳真 網址

2 目錄 一 產品說明...1 二 檢測原理...1 三 產品內容...2 產品包裝規格...2 儲存條件...2 四 試劑配製說明...3 蒸餾水添加量 試劑配製操作方法.3 試劑配製說明...4 五 操作流程...5 酵素活性測試...5 對照組測試...6 取樣流程...7 樣品組測試...8 六 結果判讀...9 抑制率之計算方式...9 抑制率判定標準...9 農藥類別判定...10 七 注意事項...10 八 未提供之必要實驗器材 九 疑難排解...12 駟丞生物科技股份有限公司

3 一 產品說明 經由特殊品系家蠅體內提取出乙醯膽鹼酯酶 ( 酵素 ), 在經過國內農政單位近 20 年的研究及技術實際應用證實, 該酵素 (AChE) 的活性及偵測毒物敏感度為全世界最高, 尚無其他產品可以超越 應用此酵素發展 蔬果農藥殘毒快速檢測法, 檢測農作物農藥殘留, 可快篩近百種有機磷及氨基甲酸鹽類殺蟲劑之累計毒性 二 檢測原理 有機磷及氨基甲酸鹽類殺蟲劑會抑制乙醯膽鹼酯酶 (AChE) 之活性, 其抑制率與農藥之濃度呈正相關 在正常情況下, 乙醯膽鹼酯酶 (AChE) 可將基質 ( 碘化硫代乙醯膽鹼 ATCI) 分解為乙酸及硫代膽鹼, 硫代膽鹼與呈色劑 ( 二硫代二硝基甲酸 DTNB) 反應會產生黃色產物 利用在波長 412nm 下吸光值的變化量 (da/min) 計算出抑制率, 可用來判斷樣品中是否有有機磷及氨基甲酸鹽類農藥殘留 1 駟丞生物科技股份有限公司

4 三 產品內容 產品包裝規格 項次 內容物 500 Tests 1000 Tests 1 乙醯膽鹼酯酶 ( 酵素 )( AChE ) 1 瓶 2 瓶 2 基質 (ATCI) 1 瓶 2 瓶 3 呈色劑 (DTNB) 1 瓶 2 瓶 4 緩衝液 (PBS buffer) 3 瓶 ( 小 ) 3 瓶 ( 大 ) 5 溴水 (Bromine) 5 瓶 10 瓶 6 操作說明書 1 份 1 份 * 請於收到此套組後細心檢視以上表列中各項組成及數量, 若有任何缺失, 請立即反應 * 蔬果農藥殘毒快速檢驗另需自備 95% 酒精 ( 請採用公賣局藥用酒精 ) 儲存條件 1. 除緩衝液及溴水外, 試劑不論是粉狀或液狀 ( 已稀釋 ), 建議冷凍保存 2. 緩衝液粉末為避免受潮, 可儲存於 0 C 以下, 配製成溶液後可儲存於室溫下 30 天 ( 若要保存更久, 可先分裝並儲存於 0 C 以下 ) 3. 溴水儲存於室溫 保存期限 1. 試劑粉末儲存於 0 C 以下可保存兩年, 室溫下保存三個月 2. 試劑粉末配製成溶液後可於 0 C 以下保存 180 天 3. 溴水無保存期限, 但褪色後即失去效用 2 駟丞生物科技股份有限公司

5 四 試劑配製說明 蒸餾水添加量 項次 內容物 蒸餾水添加量 500 Tests 1000 Tests 1 乙醯膽鹼酯酶 ( 酵素 )( AChE ) 10ml 10ml 2 基質 (ATCI) 10ml 10ml 3 呈色劑 (DTNB) 50ml 50ml 4 緩衝液 (PBS buffer) 500ml 1000ml 5 溴水 (Bromine) 無 無 試劑配製操作方法 1. 每瓶乙醯膽鹼酯酶 ( AChE ), 加入 10ml 蒸餾水溶解, 分裝後保存於 0 C 以下 2. 每瓶基質加入 10ml 蒸餾水溶解, 分裝後保存於 0 C 以下 4. 每瓶呈色劑加入 50ml 蒸餾水溶解, 分裝後保存於 0 C 以下 5. 每瓶緩衝液以 1000ml 蒸餾水溶解後, 保存於室溫 6. 溴水保存於室溫 7. 酵素試劑使用前需回溫至室溫後才可進行檢測 3 駟丞生物科技股份有限公司

6 試劑配製說明 1. 若無蒸餾水時, 可使用市面上販售之純水替代, 勿使用礦泉水 RO 逆滲透水 等 2. 酵素試劑建議分裝成 1ml/ 管, 以避免反覆冷凍 解凍 3. 因溴水易揮發, 使用時請盡量縮短打開瓶蓋的時間, 使用後請旋緊瓶蓋 若每次使用量較少, 建議先進行分裝, 以延長保存時間 4. 緩衝液粉末不易溶解, 配製時請注意務必確定完全溶解後再使用 4 駟丞生物科技股份有限公司

7 五 操作流程 酵素活性測試 1. 取 3ml 緩衝液加入比色管內 2. 加入 20µl 酵素 3. 加入 100µl 呈色液 4. 加入 20µl 基質 5. 將溶液混合均勻後, 放入分光光度計在波長 412nm 下量測每分鐘吸光值的變化 (da/min) 測吸光值波長 412nm 取 3ml 緩衝液 加 20µl 酵素液 加 100µl 呈色液 加 20µl 基質混合均勻 5 秒 * 每瓶酵素配製好後都需檢測酵素活性, 酵素活性需在 da/min 之間 當酵素活性高於 0.50 da/min 時, 依酵素濃度調整公式加蒸餾水稀釋, 低於 0.40 da/min 時則需加入 酵素粉末 提高其活性 * 酵素濃度調整公式 : 蒸餾水添加量 =( 實測 da/min 值 -0.45)/0.45X 總體積 5 駟丞生物科技股份有限公司

8 對照組測試 1. 取 3ml 緩衝液加入比色管內 2. 加入 20µl 酵素 3. 加入 20µl 95% 酒精, 將溶液混合均勻, 並開始 計時 4. 於 30 秒後至 2 分 50 秒之間加入 100µl 呈色液 5. 於 3 分鐘時加入 20µl 基質 6. 將溶液混合均勻後, 放入分光光度計在波長 412nm 下量測每分鐘吸光值的變化 (da/min) * 連續兩次對照組測試誤差需小於 才能繼續樣品組測試 時間 0:00 0:30-2:50 3:00 分 測吸光值波長 412nm 取 3ml 緩衝液 加 20µl 酵素液 加 20µl 酒精混合均勻 加 100µl 呈色液 加 20µl 基質混合均勻 5 秒 6 駟丞生物科技股份有限公司

9 樣品萃取流程 每件樣品皆需同時檢測氨基甲酸鹽與有機磷類殺蟲劑 檢測氨基甲酸鹽 : 1. 以內徑約 1 英吋的不鏽鋼管切取蔬菜樣品 4 片或 1 公克蔬果樣品, 稍加切碎後置於玻璃試管中 2. 在試管中加入 1ml 95% 酒精, 振盪 20 秒後靜置 3 分鐘 3. 將萃取液倒至乾淨的試管中 農藥殘留快速檢測試劑 氨基甲酸鹽 (P=O) 以取樣器取 4 片葉子 切碎後放入試管中 加 1ml 酒精 振盪 20 秒靜置 3 分鐘後倒出 檢測有機磷劑 : 1. 以內徑約 1 英吋的不鏽鋼管切取蔬菜樣品 4 片或 1 公克蔬果樣品, 稍加切碎後置於玻璃試管中 2. 在試管中加入 2ml 95% 酒精以及 100µl 溴水, 振盪 20 秒後靜置 3 分鐘 3. 將萃取液倒至乾淨的試管中, 靜置 20 分鐘等溴水揮發後, 方可進行檢測 有機磷劑 (P=S) 以取樣器取 4 片葉子 切碎後放入試管中 加 2ml 酒精 加 100µl 溴水 振盪 20 秒靜置 3 分鐘後倒出再靜置 20 分鐘 7 駟丞生物科技股份有限公司

10 樣品組測試 1. 取 3ml 緩衝液加入比色管內 2. 加入 20µl 酵素 3. 加入 20µl 樣品液, 將溶液混合均勻, 並開始計時 4. 於 30 秒後至 2 分 50 秒之間加入 100µl 呈色液 5. 於 3 分鐘時加入 20µl 基質 6. 將溶液混合均勻後, 放入分光光度計在波長 412nm 下量測每分鐘吸光值的變化 (da/min) 7. 依吸光值變化速率與對照組之差異計算其抑制率 時間 0:00 0:30-2:50 3:00 分 測吸光值波長 412nm 取 3ml 緩衝液 加 20µl 酵素液 加 20µl 樣品液混合均勻 加 100µl 呈色液 加 20µl 基質混合均勻 5 秒 8 駟丞生物科技股份有限公司

11 六 結果判讀 抑制率之計算方式 : 對照組之吸光值 - 樣品之吸光值抑制率 (%) = 對照組之吸光值 抑制率判定標準 : 抑制率 建議處理方式 35% 有機磷與氨基甲酸鹽類農藥殘留疑慮較小, 可清洗後安心食用 35%-45% 有機磷與氨基甲酸鹽類農藥疑似殘留, 建議加強清潔 45% 有機磷與氨基甲酸鹽類農藥可能超標 9 駟丞生物科技股份有限公司

12 農藥類別判定 農藥類別無溴水加溴水結果 氨基甲酸鹽 (P=O) 陽性反應 ( 抑制率 >35%) 陽性反應 ( 抑制率 >35%) 無溴水與加溴水組別抑制率相近 有機磷劑 (P=S) 陰性反應 ( 抑制率 <35%) 陽性反應 ( 抑制率 >35%) 無溴水與加溴水組別抑制率落差大 七 注意事項 1. 試劑使用前皆請先回溫至室溫, 並混合均勻後再使用, 使用完畢後儲存於 0 C 以下 2. 溴水請於通風處使用, 以確保人員健康 3. 未使用完的溴水可保存於螺蓋玻璃瓶中, 以避免溴水揮發, 褪色後請勿使用 4. 酵素試劑加蒸餾水配製後, 冷凍可保存 180 天 5. 酵素活性會隨溫度改變, 溫度上升時酵素活性會變高, 因此建議在恆溫的環境下進行檢測 6. 酵素活性若因溫度變化而改變時, 活性範圍在 da/min 之間皆可正常使用, 但第一次配製完成時需調整酵素活性到 da/min 之間 7. 使用比色管時, 請拿霧面的兩側, 勿觸摸比色管的透明面, 以免干擾檢測結果 10 駟丞生物科技股份有限公司

13 八 未提供之必要實驗器材 儀器 耗材 1. 分光光度計 : 可讀取波長 412nm 之吸光值變化 μl 自動吸管 μl 自動吸管 μl 自動吸管 5. 計時器 1. 4ml 比色管 μl 自動吸管套 μl 自動吸管套 4. 玻璃試管 5. 塑膠離心管 6. 石蠟膜 試藥 95% 酒精 ( 公賣局藥用酒精 ) 11 駟丞生物科技股份有限公司

14 九 疑難排解 問題 可能原因及建議 實驗誤差 : 可能為實驗操作的誤差, 建議吸取樣品及試劑時, 要注意吸取的量是否準確 抑制率出現負值 環境溫度變化太大 : 若連續 3 次以上出現負值, 可能是因環境溫度變化太大產生的影響, 建議重新做對照組, 並儘量避免在溫度變化大的環境下進行檢測 樣品含水量較多 : 若蔬果樣品的含水量較大, 容易產生懸浮物, 造成抑制率出現負值 特殊樣品 : 部份品項的樣品, 因澱粉值含量較高, 檢測時容易出現負值 12 駟丞生物科技股份有限公司

15 問題 酵素活性太高或太低 未出現呈色反應 基質變黃 可能原因及建議 溫度變化大 : 酵素活性會隨溫度改變, 溫度上升時酵素活性會變高, 因此建議在恆溫的環境下進行檢測 酵素變質 : 若配製酵素時未正確使用蒸餾水, 或酵素未適當保存, 可能會導致酵素變質, 而影響酵素活性 未加入酵素 呈色劑或基質 : 檢測過程中未加入酵素 呈色劑或基質, 建議重新檢測 基質汙染 : 實驗操作過程中需注意吸取不同試劑時, 需更換自動吸管套, 避免試劑交叉汙染 13 駟丞生物科技股份有限公司

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