46 [7] 生化试剂组 : 精氨酸分别与生理盐水配和 29% 柠檬酸钠配 2 种, 处理方法为注入子宫内上 1/3 处中药试剂组 : 川牛膝粗提液中草药 ( 当归白芍益母草香附川丹参菟丝子甘草 ) 水提醇沉法 [8], 提取生物碱黄酮酚类等, 处理方法为注入子宫内上 1/3 处

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心麻
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1 第卷第期年９月延安大学学报自然科学版ＪｏｕｒｎａｌｏｆｙａｎａｎｕｎｖｅｒｓｔｙＮａｔｕｒａｌｓｃｅｎｃｅｅｄｔｏｎＶｏｌＮｏＳｅｐＤＯＩ９６９ＪＩＳＳＮ４６Ｘ４５家兔受精环境控制初探孙志宏李延清李小卫延安大学生命科学学院陕西延安７６摘要哺乳动物性别控制对提高畜牧业的经济效益和排除有害基因具有重要意义本实验设实验组和对照组实验组为精氨酸中草药提取物等配制几种酸度不同的阴道酸性调剂液来调整母兔阴道酸碱度在处理后ｈ内测定生殖道分泌液ｐｈ值对照组注射生理盐水除盐酸水苏碱牛膝煎煮液醋酸处理组外各试验试剂均明显改变了生殖道分泌液ｐｈ值关键词性别控制受精环境家兔中图分类号Ｓ８文献标识码Ａ文章编号４６Ｘ４５６由于畜牧生产中许多重要的经济性状都与性别别比例有很大影响有关家畜动物各种产品的生产产量的提高都需要本试验根据生物化学原理中医理论和传统配特定性别的动物进行生产所以性别控制在家畜育方通过由精氨酸中草药提取物等配制几种酸度不种畜牧业生产中具有巨大的经济价值有着非常重同的阴道酸性调剂液来调整母兔阴道酸碱度的方法要的现实意义来提高母仔率６为性别控制技术上的研究及其应目前性别控制技术有多种大体可归纳为三类一是将Ｘ和Ｙ精子分离再通过人工授精达到性别控制主要是以ＸＹ精子间存在的物理学生物化学及免疫学性质差异为依据但目前存在技术本身偏高成功率低和费用昂贵等问题用提供验证依据材料与方法试验药品二是对胚胎进行性别鉴定实现性别控制但存在操作复杂精氨酸广州伟伯化工有限公司９８７７盐酸水苏碱四川天然活性成份研究所苹果酸北并且定量测定受分析仪器灵敏度的影京化学试剂公司川牛膝当归白芍益母草香响较大由此得到的统计学分析结果不能最直观的附川芎丹参菟丝子甘草等延安市建华医药反映出精子样品中Ｘ精子或Ｙ精子的含量三是通店生理盐水柠檬酸钠过控制外环境来影响受精过程以控制性别有精氨试验动物条件严格酸法ｐｈ值控制营养控制年龄控制授精时间控新西兰白兔雄兔６只雌兔只均无明显的制等方法成本低且操作简单据研究报道Ｙ精子繁殖疾病的特点为头小而圆体积也小在相同的动力下比试验仪器设备Ｘ精子运动快但寿命短尤其是对疲劳和酸的耐受力较差Ｘ精子与之相反４而且有资料显示生公ＢＳ双目平场视显微镜ｐｈｓ５酸度计ＫＤＣ６Ｈ高速台式离心机优普系列超纯水机兔兔比例高的母兔在配种前测定阴道分泌液的ｐｈ值人工授精器械ＲＬＦ中号假阴道橡胶内胎等均在７以上生母兔比例高的母兔在配种前测定４试验分组Ｈ值均在７以下阴道分泌液的ｐ５从而说明改变发情母兔适时配种时阴道的ｐＨ值对所产后代性根据研究分为生化试剂组中药试剂组和混合试剂组收稿日期７基金项目延安市８年科技计划项目８Ｋｎ７作者简介孙志宏９６８男陕西延安人延安大学教授

2 46 [7] 生化试剂组 : 精氨酸分别与生理盐水配和 29% 柠檬酸钠配 2 种, 处理方法为注入子宫内上 1/3 处中药试剂组 : 川牛膝粗提液中草药 ( 当归白芍益母草香附川丹参菟丝子甘草 ) 水提醇沉法 [8], 提取生物碱黄酮酚类等, 处理方法为注入子宫内上 1/3 处混合试剂组 :1% 苹果酸与中药复方盐酸水苏碱 [9-10] + 牛膝煎煮液 [11] +3% 醋酸, 处理方法为注入子宫内上 1/3 处 1 5 注药投药方法类同直肠把握输精用输精管吸取配制好的试剂 1mL 注入发情雌兔子宫内上 1/3 处, 然后每隔 10min [8] 测定生殖道粘液 ph 值变化情况对照组注射生理盐水 1 6 记录从 2008 年 8 月开始注射至 2009 年 9 月, 对药物影响情况进行跟踪记录 2 结果 2 1 生化试剂对受精环境的影响精氨酸和生理盐水配浓度对受精环境 ph 值的影响用输精管以直肠把握输精法注射 1mL5% ~ 10% 精氨酸, 通过是指不同浓度梯度考察精氨酸对生殖道内环境的影响实验结果见表 1: 表 1 利用精氨酸改变的 ph 值实例总结 5% % % % 注释 : 表中表示在 0 05 水平上极显著从表 1 可见, 采用 5% ~10% 精氨酸处理发情期雌兔,pH 值变化显著经过 20~30min 实验组雌兔子宫颈分泌粘液均为酸性或接近于中性, 且用 5% 精氨酸处理组 30min 时的 ph 值差值为 0 12 与其相对应的对照组做方差齐性分析 T 检验, 判断出各实验组与对照组差异显著 (P<0 05), 这说明精氨酸有使生殖道的 ph 变酸的作用且发现精氨酸对生殖道内环境的影响主要和试剂 ph 相关而与试剂浓度无关精氨酸柠檬酸钠配浓度对受精环境 ph 值的影响 29% 柠檬酸钠溶解精氨酸, 配制 0 5% 1% 两个浓度用输精管以直肠把握输精法注射 1mL, 考察试剂对生殖道内环境的影响实验结果见表 2 与表 3 表 2 29% 柠檬酸钠配制 0 5% 精氨酸对受精环境 ph 值的影响第一组第二组第三组第四组第五组平均值 6 70± ± ± ± ± ± ±0 34 注释 : 表中表示在 0 05 水平上极显著表 3 29% 柠檬酸钠配制 1% 精氨酸对受精环境 ph 值的影响第六组第七组第八组第九组第十组第十一组平均值 6 75± ± ± ± ± ± ±0 37 注释 : 表中表示在 0 05 水平上极显著

3 第 3 期家兔受精环境控制初探 47 由表 2 与表 3 可看出 : 经过 0 5% 和 1% 的精氨酸 (29% 柠檬酸钠配制 ) 处理, 在处理后 20~30min 所测得母兔生殖道分泌液的 ph 值较处理前降低了 0 1 左右这说明用柠檬酸钠稀释的精氨酸溶液也同样具有改变受精环境 ph 值的功效, 与其相对应的对照组做方差齐性分析 T 检验, 判断出各试验组与对照组差异明显 (P<0 05) 但仍发现处理后 40 min 开始生殖道分泌液有转变为碱性的趋势, 故由精氨酸 (29% 柠檬酸钠配制 ) 处理, 其效果不稳定 2 2 中药试剂对受精环境的影响表 4 川牛膝粗提液对生殖道内 ph 值的影响川牛膝粗提液对生殖道内 ph 值的影响牛膝根内主要含三萜皂苷, 水解后的苷元为齐墩果酸, 离体实验发现 1 0mg/ml 牛膝浸膏或煎剂可使未孕或已孕家兔子宫产生兴奋以直肠把握输精法注射 1mL 川牛膝煎剂, 考察对生殖道内环境的影响实验结果见表 4 时间 /mim 第一组第二组第三组第四组第五组第六组第七组第八组第九组第十组平均值 6 55± ± ± ± ± ± ±0 35 注释 : 表中表示在 0 01 水平上极显著经试验用 1 0mg/mL 处理发现虽然能刺激子宫兴奋, 与其相对应的对照组做方差齐性分析 T 检验, 判断出各试验组与对照组酸碱度变化差异明显 (P< 0 01) 但由表 3 可知处理结果波动较大, 并对实验对象的生理状况产生不良影响, 故以单一川牛膝粗提液作为控制生殖道 ph 值不能达到理想的效果中草药复方对生殖道内 ph 值的影响表 5 中草药复方对生殖道内 ph 值的影响根据中医配方原理, 选取有活血止痛安胎抗菌等功效的中草药组方再以水提醇沉法提取中草药复方主要成分生物碱黄酮酚类等, 以蒸馏水溶解配置试剂输精管以直肠把握输精法注射 1mL, 间隔 10min 测定一次生殖道分泌液酸碱变化及脱落细胞变化以考察该组方对生殖道内环境的影响实验结果见表 5 第一组第二组第三组第四组第五组 7/ 第六组第七组第八组第九组第十组平均值 6 51± ± ± ± ± ± ±0 34 注释 : 表中表示在 0 01 水平上极显著

4 48 由表 5 可以发现, 处理前生殖道分泌液多数已呈酸性或接近于中性但经试剂处理后均表现出 ph 值下降的现象, 在处理 30min 时 ph 值平均下降了 0 2, 与其相对应的对照组做方差齐性分析 T 检验, 判断出各试验组与对照组差异极显著 (P< 0 01) 该中草药复方处理有活血止痛安胎抗菌等功效, 故此与其它试验试剂相比天然中草药在 2 3 混合试剂对受精环境 ph 值的影响盐酸水苏碱 + 牛膝煎煮液 +3% 醋酸对生殖道内 ph 值的影响称取一定量盐酸水苏碱, 后将盐酸水苏碱加热溶解, 与川牛膝煎剂及 3% 醋酸以一定比例组合配制试剂以直肠把握输精法注射 1mL, 以考察该混合试剂对生殖道内环境的影响实验结果见表 6 性别控制领域拥有更为广阔的发展前景表 6 盐酸水苏碱 + 牛膝煎煮液 +3% 醋酸对生殖道内 ph 值的影响第一组第二组第三组第四组第五组第六组第七组第八组平均值 7 08± ± ± ± ± ± ±0 86 表 6 显示, 用试剂处理后生殖道分泌粘液的 ph 值变化较为剧烈,pH 值波动为 1 左右, 这可能是由于醋酸的酸性过强引起处理后 30min 时的 ph 值为 6 0, 但与其相对应的对照组做方差齐性分析 T 检验, 判断出各试验组与对照组差异不显著 (P> 0 05), 处理效果不理想, 其内在的机理尚不明确还有待于进一步研究表 7 1% 苹果酸与中药复方对受精环境 ph 值的影响 % 苹果酸与中药复方对受精环境 ph 值的影响根据之前试验结果将中药复方提取物与苹果酸按一定比例组合, 用生理盐水溶解成 1 0mg/mL 试剂以直肠把握输精法注射 1mL, 以考察该混合试剂对生殖道内环境的影响实验结果见表 7 第一组第二组第三组第四组第五组第六组第七组第八组第九组第十组平均值 7 22± ± ± ± ± ± ±0 31 注释 : 表中表示在 0 01 水平上极显著

5 第 3 期家兔受精环境控制初探 49 由表 7 可看出, 用 1% 苹果酸与中药复方处理发情期母兔生殖道可使生殖道酸碱环境由偏碱性转变为偏酸性, 且在处理后的一小时内生殖道内 ph 值较为稳定在 30min 时 ph 变化值为 0 9 与其相对应的对照组做方差齐性分析 T 检验, 判断出各试验组与对照组差异极显著 (P<0 01) 虽然变化幅度较前面中草药组大, 但仍在精子可忍受范围内故该试剂可达到控制受精环境 ph 值的目的, 然而其调控范围有待于进一步深入研究 3 讨论目前哺乳动物性别控制液的研发工作尚处于起步阶段, 虽然全国各地已有多家机构进行性别控制液研发工作, 但除了北京三牛兴业科技发展有限责 [8] 任公司等少数厂家推出的商业产品, 大多数都处于试验阶段故本实验运用现已报道的各种控制生殖环境的方法进行设计, 通过不同试剂进行处理比较本实验中设计了三组不同处理方式, 通过 ph 检测三组试剂的处理效果用统计学方法 ( 方差齐性检验 T 检验 ) 对各个实验组与对照组数据分析对比, 发现通过药物处理就可以改变母兔生殖道内酸碱环境, 从而达到控制子代性别比例的目的 3 1 精氨酸对性别影响机理探讨生化试剂组的处理结果表明生化试剂能显著地改变受精环境, 其作用机理可能为 : 哺乳动物体内许多细胞均可由一氧化氮合酶 (NOS), 催化精氨酸生成 NO, 通过 NO 激活血小板的可溶性鸟苷酸环化酶, 使 cgmp 水平升高, 进而抑制 Ca 2+ 在血小板内的移动, 抑制血小板聚集并促进已聚集的血小板解体改变血流量, 造成 HCO 3 含量变化从而影响受精环境同时表明同种药品不同的处理方式其结果差异较大, 生理盐水配 5% 精氨酸处理 30min 后, 生殖道粘液 ph 值降低 0 12 进一步验证了精氨酸具有使生殖道内环境变酸的趋势的能力 [12-17] 与 29% 柠檬酸钠配制 0 5% 精氨酸相比效果显著, 且较为稳定, 故只有选择适宜的处理方式才有可能得到理想的效果同时发现单一生化试剂处理 40min 后生殖道分泌粘液酸碱度波动较大均存在变碱的趋势 [14], 故单一的生化试剂很难达到稳定控制生殖道内环境的目的 [18-22], 单个因子影响受精环境的效应较弱 3 2 中草药对性别影响机理探讨中草药提取物作用使生殖道的 ph 偏酸或近中性, 有利于 X 精子泳动加快, 同时改善子宫 - 卵巢的微循环, 如益母草中的生物碱成分可增加 Na + 的排出量, 而使 K + 的排出量减少,Cl - 也有所增加, 可能改变受精环境影响精子获能从而形成雌性, 所以产母率提高局部给药实验中, 给予家兔牛膝总皂苷后 1~4min 内, 未孕和中孕家兔在体子宫均可出现强烈的宫缩, 作用持续 25min 左右 [11], 同时经实验发现川牛膝煎剂也能够改变生殖道酸碱环境但牛膝总皂苷对小鼠有显著的抗生育作用 [11], 不可单独用作无针对性的性别控制试剂因此单方中药试剂很难达到合理控制受精环境 ph 值的目的中药复方试剂结合各种药物的功效相配伍, 可达到较为稳定的处理效果同时具有具有兴奋子宫活血止痛安胎抗菌等功效 [23-25], 因此基本上能够达到控制生殖环境酸碱度的目的, 但是仍然存在溶解性差的问题混合试剂组中盐酸水苏碱 + 牛膝煎煮液 + 3% 醋酸处理效果不理想,1% 苹果酸与中药复方试剂的 ph 值 3 4 与北京三牛兴业生产的奶牛性控胶囊 ph 值 3 5(4mL 稀释 ) 十分接近, 但处理同样存在酸碱度波动过大的问题各试剂作用的生理效应机制还有待于进一步研究因此, 在充分考虑哺乳动物性别控制试剂的配制中阴道给药途径所产生的局部药理作用以及筛选药物的标准, 药剂用量及毒理作用考察的同时, 进一步考虑筛选药品的稳定性和溶解性及处理后效果的稳定性等问题才能解决中药复方的溶解性问题化学药物刺激性过强效果不稳定, 最终制备出适用于大规模使用的性别控制试剂参考文献 : [1]FuggerEF,BlackSH,KeyvanfarK,etal.Birtsofnormal daughtersaftermicrosortsperm separationandintrauterine insemination,in vitrofertilization,orintracytoplasmicsperm injection[j]. Human Reproduction,1998,13: [2] 丁凤焕, 罗晓林. 哺乳动物性别控制的主要技术 [J]. 草业与畜牧,2008,(1): [3]FrancoisPiumi,DanielVaiman,Edmond-PaulCribiu,et al.specificcytogeneticlabelingofbovinespermatozoabear ingxorychromosomesusingfluorescentinsituhybridiza tion(fish)[j].genetselevol,2001,33: [4] 陈元明. 哺乳动物的性别控制. 北京 : 中国农业科学技术出版社,1995:3. [5] 向前, 张秀江, 刘玉蝉, 等. 性别控制技术在家兔生产中的应用 [J]. 中国养兔杂志,1995(4):42-43.

6 50 [6] 段子渊. 动物性别决定的分子机理及性别鉴定与控制新技术 [J]. 黄牛杂志,1998,24(3): [7] 谢献胜, 仲崇怀, 蒋春茂, 等. 精氨酸对奶牛后代性别控制的试验 [J]. 畜牧与兽医,2003,35(12): [8] 黄文明, 安福刚, 王凤岭, 等. 应用奶牛性控胶囊进行奶牛性别控制的试验 [J]. 现代畜牧兽医,2006,(12): [9] 晁志. 益母草碱在大鼠体内的药动学研究 [J]. 中国药学杂志,2002,37(1): [10] 何黎琴, 黄鹏, 王效山盐酸水苏碱的含量测定 [J]. 安徽中医学院学报,2007,26(5): [11] 余黎, 王坚, 朱荃. 具有子宫兴奋作用的中药研究概况 [J]. 广东药学院学报,2002,18(1): [12] 梁子安, 杨玉霞. 论哺乳动物性别控制 [J]. 高等函授学报,2000,13(5): [13] 胡春山, 郑昌乐, 王志兰, 等. 应用 5% 精氨酸溶液对奶牛控性输精试验中得到的启示 [J]. 黑龙江畜牧兽医, 1989,(2):1-2. [14] 俞颂东, 王友明, 余东游. 改变哺乳动物后代性比的技术比较 [J]. 上海畜牧兽医通讯,2002,(4): [15] 郑江霞, 郑永华. 奶牛胚胎性别鉴别技术在生产中应用的几个要点 [J]. 中国乳业,2004,(8): [16] 施巧婷, 徐照学, 周梦蛟. 家畜的性别选择方式 [J]. 畜牧兽医科学,2008,24(1): [17] 张丽, 杜卫华, 张爱玲, 等. 受精环境对哺乳动物性别形成的影响 [J]. 遗传,2007,29(1): [18]CHEN Y M.SexDeterminationofMammalian[J].Bei jing:chinaagriculturalsci-technologypres,1995. [19]LIXS,YANGXJ,JIANXW,etal.Elementaryresearch intheefectofarginineonbovineembryosex[j].hei longjianghusbandry&veterinarymedicine,1988(2):17. [20]LIYH,DUANZY,MENGXY.Efectofarginineonof springsexofmilkcow[j].chinaveterinarymedicine Technology,1994,24(2): [21] 吴伟, 刘润铮, 王光辉. 限制 Y 精子活力对犊牛性别的影响 [J]. 吉林农业大学学,1998,20(1): [22] 石米扬, 昌兰芳, 何功倍, 等. 红花当归益母草对子宫兴奋作用的机理研究 [J]. 中国中药杂志,1995,20 (3):173. [23] 李仪奎, 姜名瑛. 中药药理学 [M]. 北京 : 中国中医药出版社, [24]YangM H,WangW Q,JinZH,etal.Studyonefects freshyimucaocontractionuterus[j].primaryjchin MaterMed,2001,15(3): [25] 顾月丽, 江红. 益母草药理作用的研究进展 [J]. 中国中医药科技,2008,15(4):320. [26] 胡明信, 罗应荣, 吴学清, 等. 奶牛性控胶囊与性别控制效果试验研究 [J]. 中国奶牛,2006,(12): [ 责任编辑李晓霞 ] EnvironmentalControlofFertilizationinRabbits SUNZhi hong,liyan qing,lixiao wei (ColegeofLifeScience,YananUniversity,Yanan716000,China) Abstract:Mammaliansexcontrolhasgreatsignificancetoincreasetheeconomicprofitsofanimalhusbandryande liminatethedeleteriousgene.forexperimentalgroupandcontrolgroup,experimentalgroupusearginine,herbalex tractsconfectsolutionsofdiferentph valuestoadjustrabbitvagina'sph,measuredph valueofgenitalsecretion within1houraftertreated.thecontrolgroupreceivednormalsaline.inadditiontostachydrinehydrochl-orideand achyranthesdecoctionand3% aceticacidtreatgroup,eachtestreagentsignificantlychangedthegenitalsecretion phvalue. Keywords:sexcontrol;fertilizationenvironment;rabbit

内科学 ( 消化内科 ) 第二组第四组内科学 ( 心血管病 ) 第二组第四组内科学 ( 心血管病 ) 第二组第四组内科学 ( 心血管病

内科学 ( 消化内科 ) 第二组第四组内科学 ( 心血管病 ) 第二组第四组内科学 ( 心血管病 ) 第二组第四组内科学 ( 心血管病 4 月 26 日 27 日临床综合能力考核结果考试人数 :262 缺考 3 人不合格 3 人学号专业思维分组技能分组问病查体临床思维技能操作总分 21418358 外科学 ( 泌尿外 ) 第八组第八组 20 35 22 77 21318534 外科学 ( 神外科 ) 第八组第八组 24 35 23 82 21418547 外科学 ( 泌尿外 ) 第八组第六组 25 33 18 76 21418412