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坟易荀
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1 2013 年 10 月 Vol. 31 No. 10 October 2013 Chinese Journal of Chromatography 934 ~ 938 研究论文 DOI: / SP. J 超高效亲水色谱串联质谱法快速检测鸡肉及其制品中的祝伟霞 1 ꎬ 杨冀州 1 ꎬ 袁萍 1 ꎬ 孙转莲 1 ꎬ 王彩娟 2 ꎬ 孙武勇 1 2 ꎬ 张书胜 (1. 河南出入境检验检疫局 ꎬ 河南郑州 ꎻ 2. 郑州大学化学与分子工程学院 ꎬ 河南郑州 ) 摘要 : 建立了鸡肉及其制品中利巴韦林和磷酸化利巴韦林代谢物总残留量的亲水作用色谱串联质谱分析方法 (HILIC MS / MS)ꎮ 样品采用含 1% (v / v) 乙酸的乙腈超声提取 ꎬ 于 37 条件下以酸性磷酸酶酶解 ꎬ 正己烷除脂后用 C 18 与 PSA 填料分散固相萃取净化 ꎮ 采用酰胺基超高效亲水作用色谱柱 ꎬ 在乙腈和 0 1% 甲酸组成的梯度洗脱流动相中分离 ꎬ 在电喷雾正离子电离多反应监测模式下监测 ꎬ 结果表明 ꎬ 样品中利巴韦林残留量在 1 ~ 200 μg / kg 之间时 ꎬ 线性相关系数大于 0 999ꎬ 方法检出限 (LODꎬ S / N 3) 为 1 μg / kgꎬ 定量限 (LOQꎬ S / N 10) 为 5 μg / kgꎬ 在 3 个添加水平下的回收率为 67 8% ~ 112 7%ꎬ 相对标准偏差为 6 1% ~ 13 6%ꎮ 经测定多种实际样品 ꎬ 证明该方法简便快速准确 ꎬ 可以满足日常鸡肉及其制品中利巴韦林及其代谢物总残留量的分析要求 ꎮ 关键词 : 液相色谱串联质谱 ꎻ 亲水色谱 ꎻ 分散固相萃取 ꎻ 利巴韦林 ꎻ 速成鸡 ꎻ 鸡肉制品中图分类号 :O658 文献标识码 :A 文章编号 : (2013) Rapid determination of total residues of ribavirin and its metabolites in chicken and chicken products by ultra performance hydrophilic interaction chromatography tandem mass spectrometry ZHU Weixia 1 ꎬ YANG Jizhou 1 ꎬ YUAN Ping 1 ꎬ SUN Zhuanlian 1 ꎬ WANG Caijuan 2 ꎬ SUN Wuyong 1 ꎬ ZHANG Shusheng 2 (1. Henan Entry Exit Inspection and Quarantine Bureauꎬ Zhengzhou ꎬ Chinaꎻ 2. College of Chemistry and Molecular Engineering of Zhengzhou Universityꎬ Zhengzhou ꎬ China) Abstract: An analytical method was developed for the determination of total residues of ribavi rin and its phosphorylated metabolites in chicken and its products by hydrophilic interaction chromatography tandem mass spectrometry. The samples were extracted with acetonitrile con taining 1% ( v / v) acetic acid under ultrasonic condition and then enzymatically hydrolysed with acid phosphatase at 37. After liposoluble substances being removed with hexaneꎬ C 18 and PSA dispersion solid phase extraction ( DSPE) was introduced to cleanup procedures. The sep aration was performed on an ultra performance hydrophilic interaction chromatographic (HILIC) amide column under a gradient elution using acetonitrile and 0 1% formic acid. The analytes were detected in the positive electrospray ionization and multi reaction monitoring ( MRM) mode. In the range of μg / kgꎬ the correlation coefficient was greater than The limit of detection ( LODꎬ S / N 3) was 1 μg / kg and the limit of quantification (LOQꎬ S / N 10) was 5 μg / kg. The recoveries of ribavirin spiked at three levels ranged from 67 8% to 112 7% with the relative standard deviations (RSDs) of 6 1% %. The results of the determination of ribavirin in various real samples showed that the method is simpleꎬ rapidꎬ accurate and suitable for the determination of total residues of ribavirin and its metabolites in chicken and its products. 通讯联系人. Tel:(0371) ꎬE mail:jizhouyang@ 163. com. 基金项目 : 河南省科技攻关项目 ( ) 和质检总局科研项目 (2007IK162). 收稿日期 :

郑州大学化学与分子工程学院 ꎬ 河南郑州 450042) 摘要 : 建立了鸡肉及其制品中利巴韦林和磷酸化利巴韦林代谢物总残留量的亲水作用色谱串联质谱分析方法 (HILIC MS / MS)ꎮ 样品采用含 1% (v / v) 乙酸的乙腈超声提取 ꎬ 于

2 第 10 期祝伟霞 ꎬ 等 : 超高效亲水色谱串联质谱法快速检测鸡肉及其制品中的 935 Key words: liquid chromatography tandem mass spectrometry ( LC MS / MS ) ꎻ hydrophilic interaction chromatography ( HILIC) ꎻ dispersion solid phase extraction ( DSPE) ꎻ ribavirinꎻ quick growth chickenꎻ chicken products 利巴韦林 (ribavirin) 是一种广谱抗病毒核苷酸类化合物 ꎬ 能抑制多种核糖核酸 ( RNA) 脱氧核糖核酸 (DNA) 病毒引起的疾病 ꎬ 临床主要用于人类病毒性感冒腺病毒肺炎麻疹甲型肝炎及病毒性脑炎等疾病的治疗 [1] ꎮ 养殖户为了提高肉鸡的抵抗力 ꎬ 缩短养殖周期 ꎬ 违规将人类抗病毒药物利巴韦林移植兽药用 ꎬ 这种非治疗目的的长期用药易使肉鸡产生抗药性 ꎮ 同时因利巴韦林具有较强的致畸效应 ꎬ 鸡肉及其制品中的药物残留还可通过食物链危害人体心脏肾脏等脏器 ꎮ 为了保护消费者的利益 ꎬ 我国农业部第 560 号公告 (2005) 禁止将利巴韦林等抗病毒药物用于畜牧生产过程 ꎮ 在当今的食品安全背景下 ꎬ 建立一种有效检测利巴韦林残留量的方法具有非常重要的现实意义 ꎮ 利巴韦林在生物体内易代谢为磷酸化利巴韦林 ( 50%) [2] ꎬ 目前有关利巴韦林及其代谢物的测定方法主要有分光光度法及液相色谱法 ꎮ 采用分光光度法测定药物含量时 ꎬ 通过添加无机试剂 ꎬ 使药物氧化产生有色物质进行分析 [2ꎬ3] ꎻ 液相色谱紫外检测法 (HPLC UV) 在 207 ~ 235 nm 波长下常用于测定药物血液血浆中利巴韦林的含量 [4-7] ꎻ 为了提高分析灵敏度 ꎬ 液相色谱质谱联用技术开始用于脑组织 [8] 肝脏 [1ꎬ9] 血清 [10] 血浆 [11ꎬ12] [13ꎬ14] 细胞中微量利巴韦林及其代谢物残留量的分析 ꎻ 但以上研究均采用反相色谱技术测定强极性化合物利巴韦林 ꎬ [1] 并且主要应用于药物临床分析中 ꎮ 朱永林等报道了反相色谱技术测定鸡肝中利巴韦林总残留量的分析方法 ꎬ 方法采用苯硼酸固相萃取净化 ꎬ 但该方法 [9ꎬ13ꎬ14] 操作繁琐 ꎮ 据文献报道 ꎬ 在酸性磷酸酶作用下 ꎬ 磷酸化利巴韦林代谢物可完全转化为利巴韦林原药 ꎮ 因此 ꎬ 本实验先采用酸性磷酸酶解离代谢物 ꎬ 然后测定利巴韦林的总残留量 ꎮ 为了解决利巴韦林色谱保留性差的难题 ꎬ 本方法联合采用亲水作用色谱质谱测定技术与简单的固相分散萃取净化技术 ꎬ 建立了一种快速灵敏测定鸡肉及其制品中利巴韦林及其代谢物总残留量的确证方法 ꎮ 1 实验部分 1. 1 仪器和试剂 API 4000Q 液相色谱串联线性离子阱质谱联用仪 ( 美国 AB 公司 ꎬ 配 Waters 超高效液相色谱仪和电喷雾离子源 )ꎻ T18 涡旋混匀器 ( 德国 IKA 公司 )ꎻ 8210 型水浴超声波装置 ( 日本 Yamato 公司 )ꎻ 日立 5810 型离心机 ( 日本 Hitachi 公司 )ꎻ OA SYS 氮气浓缩仪 ( 美国 Organomation 公司 )ꎮ 利巴韦林标准品 ( 纯度为 99%) 购自美国 Sigma Aldrich 公司 ꎬC 18 键合相填料与 PSA 粉 ( 美国 Agilent 公司 )ꎻ 甲酸 ( 纯度 96%) 和乙腈 ( 色谱纯 ꎬ 美国 Fisher 公司 )ꎻ 酸性磷酸酶 ( 爱尔兰 Megazyme 公司 ꎬ 200 U / ml)ꎬ 其他试剂均为分析纯 ꎻ 水为 Millipore 纯水系统制得的高纯水 ( 18 MΩ cm)ꎮ 待测生鸡肉样品来源于实验室送检的样品 ꎬ 煎炸熟鸡肉样品为市售鸡肉制品 ꎮ 1. 2 标准溶液的配制分别称取按质量折算为 100% 的标准品 10 mg 于 100 ml 容量瓶中 ꎬ 加入甲醇溶解并定容至刻度 ꎬ 该标准储备液的质量浓度为 100 mg / Lꎮ 取标准储备液用乙腈 0 1% 甲酸水溶液 (1 1ꎬ v / v) 稀释为质量浓度为 1 0 mg / L 的质谱调谐溶液 ꎮ 取标准储备液用乙腈配制成质量浓度为 1 0 mg / L 的中间标准工作溶液 ꎮ 1. 3 色谱质谱条件色谱柱 :Waters Amide (100 mm 2 1 mmꎬ 1 7 μm)ꎮ 柱温 :30 ꎮ 流动相 :Aꎬ 乙腈 ꎻBꎬ 0 1% 甲酸溶液 ꎮ 洗脱梯度程序 :0 min (80% A)ꎬ 保持 1 minꎻ 1 ~ 2 5 min (80% A ~ 10% A)ꎬ 保持 2 5 minꎻ 5 ~ 5 1 min (10% A ~ 80% A)ꎬ 保持 3 minꎮ 流速 : 0 3 ml / minꎻ 进样量 :10 μlꎮ 电喷雾离子化方式下正离子电离 (ESI + )ꎻ 雾化气压力 :379 kpa(55 psi)ꎻ 气帘气压力 :172 kpa(25 psi)ꎻ 喷雾电压 :5 500 Vꎻ 去溶剂温度 :550 ꎻ 去溶剂气压力 :345 kpa(50 psi)ꎻ 碰撞气压力 :69 kpa(8 psi)ꎻ 多反应监测 ( MRM) 模式 ꎻ 检测离子对 :m / z / 113 1( 定量 ꎬ 碰撞能量 (CE) 为 15 ev) m / z / 96 1( 定性 ꎬCE 为 43 ev)ꎻ 离子对驻留时间 : 50 msꎻ 去簇电压 ( DP): 50 Vꎻ 碰撞室出口电压 (CXP): 12 5 Vꎻ 射入电压 (EP): 10 Vꎮ 1. 4 样品前处理称取 5 0 g 样品置于 50 ml 离心管中 ꎬ 加入 20 ml 含 1% (v / v) 乙酸的乙腈和 50 μl 酸性磷酸酶 ꎬ 涡旋混匀 3 minꎬ 超声 10 minꎬ 于 37 酶解 60 minꎬ 取出后以 r / min 离心 5 minꎬ 转移上清液 ꎬ 再

疾病 ꎬ 临床主要用于人类病毒性感冒腺病毒肺炎麻疹甲型肝炎及病毒性脑炎等疾病的治疗 [1] ꎮ 养殖户为了提高肉鸡的抵抗力 ꎬ 缩短养殖周期 ꎬ 违规将人类抗病毒药物利巴韦林移植兽药用 ꎬ 这种非治疗目的的长期用药易使肉鸡产

3 936 色谱第 31 卷加入 5 ml 含 1% (v / v) 乙酸的乙腈于样品残渣中 ꎬ 涡旋混匀后离心 ꎬ 合并上清液并定容至 30 mlꎮ 加入 10 ml 乙腈饱和的正己烷 ꎬ 液液分配后离心 ꎬ 弃去正己烷层 ꎬ 再加入 10 ml 乙腈饱和的正己烷重复液液萃取操作 ꎮ 吸取 6 ml 样液加至 0 5 g C 18 与 0 5 g PSA 中 ꎬ 涡旋混匀 3 minꎬ 静置 5 min 使样液与填料充分接触 ꎬ 以 r / min 离心 2 minꎬ 转移上清液于另一试管中 ꎬ 氮吹浓缩至 1 mlꎬ 经 0 22 μm 滤膜过滤 ꎬ 供 UPLC MS / MS 测定 ꎮ 2 结果与讨论 2. 1 酶解条件的优化本实验选用阳性鸡肉样品进行酶解条件试验 ꎬ 在未酶解条件下 ꎬ 分别采用 ph g / L 三氯乙酸 ph mmol / L 乙酸铵水含 1% (v / v) 乙酸的水含 1% (v / v) 乙酸的乙腈等溶液进行提取 ꎬ 测定结果见图 1ꎮ 为了测定鸡肉中残留的磷酸化利巴韦林代谢物 ꎬ 本实验选用酸性磷酸酶对样品进行酶解 ꎬ 分别考察了在以上 5 种溶液中的酶解效率 ꎬ 每个试验平行测定 10 次并计算其平均值 ( 见图 1)ꎬ 结果表明采用 ph g / L 三氯乙酸溶液时测定值为 μg / kgꎬ 但采用该溶液时的分析结果稳定性差 ꎬRSD 为 7 7%ꎻ 采用含 1% (v / v) 乙酸的水和含 1% (v / v) 乙酸的乙腈时测定值分别为 μg / kg 和 μg / kgꎬ RSD 分别为 4 8% 和 5 1%ꎮ 实验分别优化了酶解温度 ( ) 和酶解时间 ( min) 对于分析结果的影响 ꎬ 数据表明鸡肉样品中利巴韦林代谢物在 37 下酶解 60 ~ 240 min 测定值相当 ꎬ 为了缩短分析时间 ꎬ 本方法设定酶解条件为 37 酶解 60 minꎮ 2. 2 提取溶剂的选择利巴韦林分子结构中包含氨基羟基等基团 ꎬ 其油水分配系数 log P 为 ꎬ 属强极性水溶性化合物 [10] [9ꎬ10ꎬ14] ꎮ 文献报道生物样品中常用的提取溶剂主要有三氯乙酸溶液乙酸铵溶液 [8] 甲醇二甲基亚砜溶液 [11] Tris 缓冲液 [4] 甲醇 Tris 缓冲液 [13] 乙腈 [15] ꎮ 本方法采用阳性鸡肉样品比较了 50 g / L 三氯乙酸 20 mmol / L 乙酸铵乙腈含 1% (v / v) 乙酸的乙腈作为提取液的效果 ꎬ 结果表明采用以上 4 种溶液提取时测定值无显著差异 ꎬ 结果均在 ~ μg / kg 之间 ꎬ 因此本方法选用含 1% (v / v) 乙酸的乙腈作为提取溶液 ꎮ 2. 3 净化方法的选择生物组织及体液中利巴韦林的净化主要采用固相萃取法 ꎬ 分别为亲水亲脂平衡 ( HLB) 磺酸基强图 1 在不同酶解条件下鸡肉样品中利巴韦林残留量的测定结果 (n = 10) Fig. 1 Analytical results of the total residues of ribavirin and its metabolites in a chicken sample under the different enzymolysis conditions (n = 10) A: ph g / L trichloroacetic acidꎻ B: ph mmol / L ammonium acetateꎻ C: waterꎻ D: 1% (v / v) acetic acid aque ous solutionꎻ E: acetonitrile containing 1% ( v / v) acetic acid. 阳离子 (MCX) 苯硼酸基弱阳离子 (PBA) 与氨基等固相萃取柱 [2ꎬ9ꎬ12ꎬ13] ꎮ 本方法试验了以 50 g / L 三氯乙酸 20 mmol / L 乙酸铵作为提取液进行固相萃取净化时的回收率 ꎬ 结果表明在 HLB 柱上的回收率为 12 4% ~ 31 5%ꎬ MCX 柱为 7 2% ~ 21 6% PBA 柱为 24 6% ~ 43 7%ꎮ 鉴于此 ꎬ 为简化操作 ꎬ 本实验采用 C 18 和 PSA 填料进行分散固相萃取 ꎻ 该方法中 C 18 与样品中的脂溶性杂质结合 ꎬPSA 可有效除去酸性干扰物质 ꎻ 实验结果表明采用该方法净化时利巴韦林的回收率 92%ꎮ 2. 4 色谱条件的优化利巴韦林在 C 18 色谱柱中保留性差 ꎬ 采用该色谱柱分析时 ꎬ 流动相中需含有 90% ~ 100% ( v / v) 的水相 [2ꎬ8ꎬ9ꎬ11ꎬ13ꎬ14] ꎮ 实验考察了 Waters T3 Waters Atlantis C 18 SHISEIDO MG2 SHISEIDO MG3 等几种极性化合物分析柱 ꎬ 结果表明在流动相含 95% 水相的条件下利巴韦林在以上 4 种色谱柱的保留性均差 ꎮ 同时含高比例水相的流动相不利于电喷雾质谱的电离与挥发 ꎬ 利巴韦林在该条件下的检测灵敏度 [15] 低 ꎮ Shou 等采用硅胶柱在乙腈三氟乙酸离子对体系中分离利巴韦林 ꎬ 该方法分析生物体液样品时基质效应超过 50%ꎮ 本方法分别考察了利巴韦林标准溶液在纯硅胶色谱柱与硅胶基质的酰胺亲水色谱柱上的色谱行为 ꎬ 结果表明利巴韦林在纯硅胶柱中聚焦性差 ꎬ 呈双峰 ꎻ 在酰胺亲水柱中色谱保留性强 ꎬ 主要基于离子交换和极性互溶的混合作用力 ꎮ 在该酰胺亲水色谱体系中 ꎬ 水为强洗脱液 ꎬ 乙腈为弱洗溶剂 ꎬ 减少乙腈比例利巴韦林的保留时间缩短 ꎬ 增

4 第 10 期祝伟霞 ꎬ 等 : 超高效亲水色谱串联质谱法快速检测鸡肉及其制品中的 937 加乙腈比例则保留时间延长 ꎬ 同时挥发性溶剂乙腈也可提高质谱的检测灵敏度 ꎬ 因此本方法选用 1. 3 节的色谱条件分离利巴韦林 ꎮ 2. 5 质谱条件的优化由于利巴韦林分子结构中存在易电离的氨基 ꎬ 采用 1 0 mg / L 的质谱调谐溶液在正离子模式下进行母离子全扫描 ꎬ 结果显示化合物获得信号强度较高的 [M + H] + 峰 m / z 245ꎮ 以 [M + H] + 为母离子进行子离子全扫描 ꎬ 获得 m / z 113 m / z 96 和 m / z 133 主要子离子碎片 ꎻ 利巴韦林的 m / z 113 和 m / z 133 碎片主要是由呋喃核糖与三唑氮环断裂形成 ꎬ m / z 96 是由三氮唑羟乙胺中性丢失 NH 3 获得 ( 见图 2)ꎮ 根据 2002 / 657 / EEC 关于确证法 4 个确证点的要求 ꎬ 选取丰度较强干扰较小的两对子离子 m / z 245 / 113 和 m / z 245 / 96 为定性离子对 ꎬ 同时选取信号响应稳定的 m / z 245 / 113 为定量离子对 ꎬ 并优化 DP CE EP CXP 电喷雾电压离子源温度雾化气和气帘气等参数 ꎬ 获得 1 3 节所述的质谱参数 ꎮ 利巴韦林标准溶液空白生鸡肉及加标生鸡肉样品的色谱图见图 3ꎮ 图 2 利巴韦林子离子扫描图与主要裂解方式 Fig. 2 Product scan spectrum and main fragmentation pattern of ribavirin 2. 6 线性范围方法检出限和定量限分别在空白鸡肉煎炸熟鸡肉制品中添加标准工作溶液 ꎬ 使其含量分别为 μg / kgꎬ 按 1 4 节方法处理后测定 ꎬ 分别以定量离子对的峰面积 ( Y) 对含量 ( Xꎬ μg / kg) 进行线性回归计算 ꎬ 结果表明在 1 0 ~ μg / kg 内线性关系良好 ꎬ 线性方程分别为 Y = X ( 相关系数 ( r) = ) ( 鸡肉 ) 和 Y = X ( r = ) ( 煎炸熟鸡肉 )ꎮ 以信噪比 (S / N) 3 确定方法的检出限 ( LOD )ꎬ 以 S / N 10 确定方法的定量限 (LOQ)ꎬ 得到利巴韦林的 LOD 为 1 0 μg / kgꎬ LOQ 为 5 0 μg / kgꎮ 图 3 利巴韦林标准溶液阴性鸡肉阳性鸡肉样品及鸡肉加标样品的 MRM 色谱图 Fig. 3 MRM chromatograms of ribavirin standardꎬ positive chicken sampleꎬ negative chicken sampleꎬ and chicken sample spiked with 5 0 μg / kg standard 2. 7 回收率和精密度取空白生鸡肉煎炸熟鸡肉样品添加 3 个水平的标准工作溶液 (1 LOQ 2 LOQ 4 LOQ) 进行回收率试验 ꎮ 每个添加水平平行测定 10 次 ꎬ 方法的回收率范围及相对标准偏差 (RSD) 见表 1ꎮ 2. 8 实际样品的分析采用本方法对 28 个送检鸡肉样品进行分析 ꎬ 共检出阳性结果 19 个 ꎬ 其结果见表 2ꎮ

子全扫描 ꎬ 获得 m / z 113 m / z 96 和 m / z 133 主要子离子碎片 ꎻ 利巴韦林的 m / z 113 和 m / z 133 碎片主要是由呋喃核糖与三唑氮环断裂形成 ꎬ m / z 96 是由三氮唑羟乙胺中性丢失 NH 3 获得 ( 见图 2)ꎮ 根据 2002 / 657

5 938 色谱第 31 卷表 1 利巴韦林在鸡肉煎炸熟鸡肉样品中的回收率与精密度 (n = 10) Table 1 Recoveries and precisions ( RSDs) of ribavirin spiked in chicken and cooked fried chicken samples (n = 10) Spiked / Recovery range / % RSD / % Chicken Cooked fried chicken Chicken Cooked fried chicken Chicken Cooked fried chicken 表 2 实际鸡肉样品中利巴韦林的检测结果 Table 2 Determination results of ribavirin in real chicken samples No. Found / No. Found / ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND: not detected. 3 结论建立了一种同时定性与定量测定鸡肉及其制品中利巴韦林及其代谢物总残留量的分析方法 ꎬ 方法的各项参数经验证后均符合相关法规要求 ꎮ 由实际样品测定结果可以看出目前我国养殖业确实存在滥用利巴韦林抗病毒药物的现象 ꎬ 兽药监管部门需制定相应措施 ꎬ 以确保人们的食品安全 ꎮ 参考文献 : [1] Zhu Y Lꎬ Shao D Jꎬ Jiang T Mꎬ et al. Chinese Journal of Veterinary Drug ( 朱永林 ꎬ 邵德佳 ꎬ 蒋天梅 ꎬ 等. 中国兽药杂志 )ꎬ 2008ꎬ 42(7): 22 [2] Bosch M Eꎬ Ruiz S A Jꎬ Rojas F Sꎬ et al. J Pharm Biomed Analꎬ 2007ꎬ 45: 185 [3] Sastry C S Pꎬ Naidu P Yꎬ Lakshmi C S Rꎬ et al. Talantaꎬ 1998ꎬ 47: 85 [4] D Avolio Aꎬ De Nicolò Aꎬ Simiele Mꎬ et al. J Pharm Biomed Analꎬ 2012ꎬ 66: 376 [5] Loregian Aꎬ Scarpa M Cꎬ Pagni Sꎬ et al. J Chromatogr Bꎬ 2007ꎬ 856: 358 [6] Li S Gꎬ Jin L Sꎬ Wang Yꎬ et al. Chinese Journal of Veterina ry Drug ( 李树纲 ꎬ 金录胜 ꎬ 汪洋 ꎬ 等. 中国兽药杂志 )ꎬ 2012ꎬ 46(6): 30 [7] Aydogmus Z. Anal Sciꎬ 2011ꎬ 27: 277 [8] Zironi Eꎬ Gazzotti Tꎬ Lugoboni Bꎬ et al. J Pharm Biomed Analꎬ 2011ꎬ 54: 889 [9] Yeh L Tꎬ Nguyen Mꎬ Lourenco Dꎬ et al. J Pharm Biomed Analꎬ 2005ꎬ 38: 34 [10] van der Lijke Hꎬ Alffenaar J W Cꎬ Kok W Tꎬ et al. Talantaꎬ 2012ꎬ 88: 385 [11] Li W Kꎬ Luo S Yꎬ Li S Yꎬ et al. J Chromatogr Bꎬ 2007ꎬ 846: 57 [12] Kromdijk Wꎬ Pereira S Aꎬ Rosing Hꎬ et al. J Chromatogr Bꎬ 2013ꎬ 919 / 920: 43 [13] Meléndez Mꎬ Rosario Oꎬ Zayas Bꎬ et al. J Pharm Biomed Analꎬ 2009ꎬ 49: 1233 [14] Yeh L Tꎬ Nguyen Mꎬ Dadgostari Sꎬ et al. J Pharm Biomed Analꎬ 2007ꎬ 43: 1057 [15] Shou W Zꎬ Bu H Zꎬ Addison Tꎬ et al. J Pharm Biomed Analꎬ 2002ꎬ 29: 83

1 Cooked fried chicken 79. 5-102. 5 8. 2 表 2 实际鸡肉样品中利巴韦林的检测结果 Table 2 Determination results of ribavirin in real chicken samples No. Found / No. Found / 1 18. 8 15 23. 8 2 5.

中国软科学年第期!!!

中国软科学年第期!!! 山寨模式的形成机理及其对组织创新的启示山寨模式的形成机理及其对组织创新的启示陶厚永李燕萍骆振心武汉大学经济与管理学院武汉大学中国产学研合作问题研究中心湖北武汉北京大学经济研究所光华天成博士后工作站北京本