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1 兽类学报,2012,32 (4): Acta Theriologica Sinica 牦牛胎儿肺脏发育的形态学研究 杨琨 余四九何俊峰崔燕 ( 甘肃农业大学动物医学院, 兰州 ) 摘要 : 本实验选取 40 份不同胎龄的牦牛肺脏样本, 通过组织学和组织化学的方法对牦牛肺发育过程进行研究, 旨在为发育生物学提供形态学资料 结果表明, 牦牛胚胎肺发育可分为 5 个时期 :(1 ) 胚胎期 (30 ~ 50 d), 胚 胎出现肺芽, 其分支形成主支气管, 进一步分出叶支气管, 上皮均为假复层柱状上皮 ; (2) 假腺期 (50 ~ 120 d), 支气管树发育明显, 末端终蕾结构似腺体, 为假复层柱状上皮 ;(3 ) 小管期 (120 ~ 180 d), 呼吸部发 育明显, 终蕾腺泡样结构消失, 可见多处管状分支, 上皮为单层柱状或单层立方 ; (4) 囊状期 (180 ~ 220 d), 终囊管壁由较厚肺泡隔及原始肺泡组成, 少数原始肺泡上皮分化为扁平的肺泡 Ⅰ 型细胞和立方形的肺泡 Ⅱ 型细 胞 ;(5) 肺泡期 (220 ~ 260 d), 形成肺泡, 大部分上皮细胞分化为扁平的肺泡 Ⅰ 型细胞和立方形的肺泡 Ⅱ 型细 胞 胚胎期和假腺期支气管和终蕾上皮的糖原含量丰富, 从小管期开始, 上皮细胞糖原含量开始急剧减少 之 后的几个时期, 只有导气部个别上皮细胞 PAS 反应呈阳性 实验结果表明 : 牦牛胎儿的肺脏发育的特点与普通 牛的基本相似, 主要不同点是牦牛的囊状期较短, 肺泡期较长, 即牦牛胎儿的肺脏更早发育成熟 关键词 : 牦牛 ; 胎儿 ; 肺 ; 组织学 ; 发育 中图分类号 :Q954 文献标识码 :A 文章编号 : (2012) Morphological study on the lung of the fetal yak YANG Kun,YU Sijiu,HE Junfeng,CUI Yan (College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University, Lanzhou , China) Abstract:Lung tissue from 40 yak fetuses of different age groups were collected to investigate their development process u- sing histological and histochemical methods The aim is to provide morphological data on developmental biology and find the hypoxia adaptive structure of the lung in yak fetus The results showed that the developmental period of yak lung can be divided into five stages (1) Embryologic stage (30-50 days):a lung bud was found Its branches formed into the primary bronchi,and then into the lobar bronchus The bud had the pseudostratified columnar epithelium (2 ) Pseudoglandular stage ( days):the bronchial tree clearly developed and its terminal bud shaped like the gland The bud possessed the pseudostratified columnar epithelium (3 ) Canalicular stage ( days):the respiratory region has rapidly grown,no glandular structure is found in terminal buds There were many tubular branches with the single-walled columnar epithelium or cuboid epithelium (4) Saccular stage ( days):terminal sac (original alveolar)was formed by the ridge of dissepiment,and a few primitive alveoli epithelia differentiated into flat type I alveolar cells and cubical type Ⅱ alveolar cells (5) Alveolar stage ( days):the alveolus was formed Much of the epithelium differentiated into flat type I alveolar cells and cubical type Ⅱ alveolar cells We concluded from the present study that the epithelium of bronchial and terminal buds were full of glycogen in the Embryologic stage and the Pseudoglandular stage,and beginning from the Canalicular stage,the glycogen declined sharply Several epithelium cells in the air conductivity portion were positive for PAS in the later stages The developmental process of lung in yak fetuses is similar to that in cattle,although the yak has a longer saccular stage and a shorter alveolar stage The results suggest that the lung of yak fetus matures even earlier than that of cattle Key words:development;histology;lung;yak fetus(bos grunniens) 伴随着海拔的升高, 空气中的氧气含量会逐渐 减少, 生活在海平面的哺乳动物暴露于高海拔时会 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 ( ) 作者简介 : 杨琨 ( ) 男, 硕士, 主要从事动物组织学与胚胎学的研究. E - mail : @ qq com 收稿日期 : ; 修回日期 : 通讯作者,Corresponding author,e - mail:cuiyan369@ sina com

2 4 期杨琨等 : 牦牛胎儿肺脏发育的形态学研究 347 产生高山病 而生活在海拔 ~ m 高寒地区的牦牛 (Bos grunniens) 在生理 生化和形态学上已获得了适应高原低氧的稳定遗传学特性, 对低氧环境显现出了良好的适应性 通过对不同年龄高原牦牛的肺脏组织结构 肺动脉和支气管动脉的结构特点的研究, 发现低氧对肺动脉内皮细胞 平滑肌细胞和细支气管平滑肌有明显的影响, 表现为内皮细胞增殖明显, 呈立方状, 突入管腔呈栅状排列 ; 平滑肌细胞肥大呈立方状 细胞器显著增多 这种影响在 5 月龄牦牛表现最为显著, 但随着年龄的增长, 低氧对牦牛肺脏结构的影响逐渐减弱 这种结构与年龄相关的变化表明牦牛在生长发育过程中其肺脏逐渐适应了高原低氧的环境 ( 何俊峰等, 2009; 靳新花等,2009; Yang et al,2010; 杨波等,2010; 马兴斌等,2011), 但至今尚未见有关牦牛胚胎期肺脏发育的相关报道 对哺乳动物胚胎期肺脏发育的形态学研究相对较少, 多集中于人 (Streeter,1948; Wells and Boyden, 1954 ; Loosli and Potter,1959; Dunnill, 1962; Sorokin, 1965; O Rahilly and Boyden,1973;Hodson,1977 ; 何素云,1985 ) 和大鼠 (Rattus norvegicus ) (Peter et al,1992;michael et al,1993 ), 其次是绵羊 (Ovis aries) (Daine et al,1981 ) 小鼠 (Mus musculus) (Ank et al,1988 ) 猪 (Sus domesticus) (Baskerville,1976) 家兔 (Procavia capensis) (Wang et al, 1973 ) 豚鼠 (Cavia porcellus ) (Margaret et al,1986) 牛 (Bos gaurus) (Liliana and Donald,1984) 山羊 (Capra hircus) ( 郑月茂等,2005) 等 因此, 本研究运用组织学和组织化学的方法, 首次对牦牛胚胎期肺脏的发育进行研究, 旨在为发育生物学提供形态学资料, 并探索牦牛胎儿肺脏的低氧适应性结构 1 研究方法 1 1 材料从西宁市屠宰场以及甘南州牧场采集 40 例不同胎龄的牦牛肺脏组织样本, 详见表 1 根据当地屠户和养殖户初步了解妊娠天数, 然后参照相关文献提供的顶臀长划分方法对胎龄进一步做出估计 (Liu et al,2010 ) 所有的肺脏在动物死后迅速采集 表 1 采集胎儿数量和胎儿在不同妊娠期的发育状况 Table 1 N umber of yak collected and fetal development in different stage during gestation 妊娠期 ( 天 ) D ays of gestation (day) 胎儿样本量 Number of fetuses collected 顶臀长 (cm) Crown-rump length (cm ) 胎儿重量 (g) Fetal weight (g) ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 方法胎儿肺脏通过 4% 的多聚甲醛固定 妊娠 30 ~ 50 d 胚胎整体固定 ; 妊娠 50 ~ 120 d 取全肺固定 ; 妊娠 120 d 以上取右肺心叶不同部位组织块固定 常规方法制作石蜡切片 ( 厚 4 ~ 5 μm) 由于胎儿样本较嫩, 包埋时适当减少脱水和浸蜡时间, 一般以正常时间的 1 半为宜, 根据妊娠时间长短, 适当增减 整体固定的胎儿羊膜内充满羊水 包埋时在羊膜上开一个 2 ~ 3 mm 小口, 用滤纸将羊水吸干, 连同羊膜包埋, 保证胎儿的体态正常和内脏完整 切片时, 整体包埋的胎儿采取侧身纵切 ; 全肺 包埋的平行或垂直于肺叶水平面切片 采用以下 5 种方法染色 : (1 ) 常规 H E 染色显示一般结构 ; (2 ) Weigert 染色显示弹性纤维 ; (3 ) Masson 三色法染色显示胶原纤维 ; (4 ) PAS 染色显示糖原等多糖类 ;(5 ) 银浸法染色显示网状纤维 2 结果 牦牛妊娠期为 260 ± 20 d, 胚胎肺脏发育始于妊娠 30 d 根据观察结果, 将牦牛胚胎期肺脏的组织发育分 5 个时期 : 胚胎期 (Embryologic stage) 假腺期 (Pseudoglandular stage) 小管期 (Canalic-

3 348 兽 类 学 报 32 卷 ular stage ) 囊 状 期 (Saccular stage ) 和 肺 泡 期 个分 支,于 食 管 背 侧 生 长 肺 芽被 间 充 质 细 胞 包 2 1 管长度增加并分出叶支气管,均为假复层柱状非纤 (Alveolar stage) 胚胎期 (妊娠 d) 妊娠 30 d,肺发育起源于喉气管沟末端,肺芽 围,其中一些分化为软骨组织前体 随后,主支气 毛上皮 (图 1D,F) 支气管 周围 没 有弹 性纤 维和 (Lung bud) 由喉气管 (Laryngotracheal) 终 末叶与 肌纤维分布,上皮 细胞 中糖 原颗粒 丰富 (图 1G ) 见主支气管分 支 (图 1A - C,E ) 消 化道 和 呼吸 1 E) 周围的中胚层组织组成 在胚胎侧身纵切面上,可 道覆盖假复层柱状非纤毛上皮 肺芽分叉延长成两 图1 此外,在 血 管 内 观 察 到 有 细 胞 核 的 红 细 胞 (图 胚 胎期 牦牛胎 儿肺脏. 胎 儿整体 固 定 包埋. OV :视 泡;Lu: 肺;H :心; Li: 肝;K :肾. A : 顶臀 长 分别 为 0 8 cm 的 胚 胎 侧身纵 切 面,H E, 20 ;B: 顶臀 长 为 1 6 cm 的 胚 胎 侧 身 纵 切 面,PAS, 18 ; C: 顶 臀 长 为 2 1 cm 的 胚 胎 侧 身 纵 切 面, H E, 16;D :顶 臀长 为 3 2 cm 的胚 胎侧 身 纵 切面,H E, 14; E : 顶臀 长 为 0 8 cm 的胚 胎 侧 身 纵切 面 上, 可 见 主 支 气 管 (M B) 纵 切面, 上皮 为假复 层柱 状 (P CE), 有核 红细 胞 (N RB C),H E, 400 ; F: 顶臀 长 为 3 2 cm 的 胚 胎 侧 身纵 切 面, 主 支 气管分 出 多 个叶支 气管 (LB ),上 皮 均 为假 复 层 柱 状 (PCE), H E, 200; G: 主 支 气 管 (MB ) 上 皮 糖 原 颗 粒比 较 显 著, 为 假复层 柱 状 上皮 (PC E),PA S, 400 Fig 1 The fetal lun g of yaks is in emb ryologic stage. W hol e fetuses were fixed and embedded. O ptic vesicle (OV ),Lung (Lu), Heart (H),L iver (L i), Kidney (K ). A : The crown-rump l ength was 0 8 cm, H E, 20; B: Th e crown - rump l ength was 1 6 cm, PA S, 18; C:Th e crown-ru mp l ength was 2 1 cm, H E, 16; D : The crown-rump length was 3 2 cm, H E, 14; E : The crown-rump length was 0 8 cm,main bronchi (MB), pseudostratified colu mnar epithelium (PC E), nucleated red blood cell (NR BC ), H E, 400 ;F: The crown-rump length was 3 2 cm, lobar bronchus (LB ), pseudostratified columnar epithelium (PCE )H E, 200;G :G lycogen was significan t in the epith elial of main bronchi (M B), ps eudos tratified columnar epithelium (P CE), PAS, 400

4 4期 杨琨等:牦牛胎儿肺脏发育的形态学研究 假腺期 (妊娠 d) 妊娠 50 d,肺已分 叶,为 左二右 四 (图 2A ) 现平滑肌环绕,并伴有动 静脉血管和神经纤维分 布 细支气管及终蕾的上皮细胞由假复层柱状逐渐 气管与食管并行,外有软骨环包裹 (图 2B) 该期 变为单层柱状,胞核呈圆形或椭圆形,多位于细胞 远端断面呈圆型,称终蕾 (Terminal bud),终蕾似 层,部分 细 胞 顶 端有 分 泌 小 泡, 无 杯 状 细 胞 (图 肺的发育以支 气管 树发 育 为主,支 气 管反 复分 支, 顶端,胞质 PAS 染 色 呈 红 色,尤 其 多 见 于 上皮 基 腺泡样结构,故称假腺期 支气管树近端的终蕾有 2 E) 蕾为假复层柱状非纤毛上皮,大部分环绕一层较薄 蕾周围仍有间充质细胞环绕,部分出现弹性纤维 管腔,远端的终蕾管腔较小或无管腔 (图 2C) 终 妊娠 70 d,终蕾管腔增大并且呈分支发育 终 的平滑肌,外有呈同心圆状包绕的间充质细胞,没 妊 有弹性纤维 毛细血管多分布于终蕾及小支气管的 管化加 周围,此 时 的 红 细 胞 由 有 核 变 为 无 核 (图 2D ) 期间肺内 支 气 管 树 迅 速 发 育, 管壁 结 构 也 逐 渐 成 组成 100 d 左右,终蕾发育程,糖原含量 胶原纤维 微减少 胸 多,胸膜缺 出现 差别 血 由间充质 处即将分 为肺小 叶 熟 肺内支气管为假复层柱状非纤毛上皮,周围出 图2 假腺 期牦牛 胎儿 肺脏. 取整肺 固定 包埋, 肺已 分叶, 为 左 二右四. 气管 与食 管并行,外 有软骨 环包 裹. 肺 内支气 管分 支数 代,断面 呈 圆 型,称 终蕾. A :整肺 水平切 面, 气管 (T), 支气管 (B),食 管 (E),肺动 脉 (PA), 左肺 (LL), 右肺 (RL ), H E, 10;B: 支气 管 (L B), 终蕾 (TBu ), H E, 100 ; C: 气 管 上 皮 为 假 复 层 柱 状 上 皮 (PC E ), 软 骨 (Ca ), 肺 静 脉 (PV ), 肺动 脉 (PA),H E, 无核红 细胞 (RBC ) 200;D :终 蕾为 假复层 柱状 上 皮 (PCE), 肌 层 (M L), 毛 细血 管 (BC ), 无 核红细 胞 (RB C),H E,间 充质 细胞 (MC) 40 0;E :细支 气 管 (B) 为假复 层柱状 上皮 (PCE),终 蕾 (TBu), 间充质 细 胞 (M C),毛细 血管 (B C),PA S, 400 Fig 2 The fetal lun g of yaks in the pseudogland ular stage. The whole lun g w as fixed and embedded, there were two lobes in the left and four i n the righ t. The bron chu s branched repeatedly and t he s ection w as ci rcular and identified as terminal b ud. A :Horizont al section of fe- tal lung. Trachea (T ),bron chu s (B), esophagus (E),pulmonary artery (PA ), left lun g (LL ), right l ung (RL ), H E, 10 ; B: B ronchus (B ), terminal bud (T Bu ), H E, 100; C:T he tracheal epithelial was ps eud os tratified columnar epithelium (P CE ), cartilage (C a),pulmonary vein (PV ), pulmonary artery (PA ), red blood cell (R B C), H E, 200; D : The terminal bud was pseudostrat ified columnar epitheli um (PCE ), muscular l ayer (ML ), blood capillary (BC ) red blood cell (RBC ) mesenchymal cell (M C), H E, 40 0; E: The bronchiol e was pseudostrat ified column ar epithelium (PC E ), terminal bud (TBu ), mesenchymal cell (M C), bl ood capillary (BC ),P AS, 400 胞

5 兽 类 小管期 (妊娠 d) 学 报 32 卷 小叶 结 缔 组 织 逐 渐 包 被 不 全, 肺 小 叶 形 态 消 失 妊娠 d,为 小 管 期初 期, 以 呼吸 部 (图 3B ) 肺实质与初 期描 述 的基 本相 同,终 蕾的 典型的 肺 小 叶 结构 (图 3A ) 终 蕾 腺 泡 样结 构 消 大导气管上皮出现纤毛,部分上皮细胞糖原含量丰 发育为主,肺实质显著增加,结缔组织发达,出现 失,管壁变薄,管腔增大,从假复层柱状上皮逐渐 变为单层柱状或立方上皮 终蕾上皮细胞数量和糖 原含量明显减少,细胞排列高低不等,胞核多位于 顶端,周围间质细胞的同心圆状排列结构消失,呈 弥散排列 (图 3 C,D) 终 末细支 气管 为单层 柱状 上皮,具有较薄且完整的肌层,部分上皮细胞顶端 有分泌小泡,PAS 反应呈阳性 (图 3 E,F) 妊娠 160 d 开始,为小管期末 期,由于肺 内可 见多处管状分支,故 称为小 管期 (图 3G,H) 肺 基膜弹性纤维更加明显 小支气管和细支气管等较 富 (图 3I) 小支气管周围包 裹薄层平 滑肌并 伴有 软骨 片 (图 3K ) 血 管 化 进 一 步 加 剧,肺 动 脉 内 弹性 膜 明 显, 中 膜 有 多 层 弹 性 纤 维 环 绕 (1 10 层) (图 3J), 外膜 胶原 纤 维 散在 分 布 (图 3K ) 结缔组织增加,导致胸膜增厚,主要是胶原纤维和 少量弹性 纤维 在 小 管期 末,开始 形 成原 始肺 泡, 上皮细胞属于 未分 化的 立 方上 皮,胞 核相 对较 大, 呈圆形或椭圆形

6 4 期杨琨等 : 牦牛胎儿肺脏发育的形态学研究 351 图 3 小管期牦牛胎儿肺脏. A 和 B 分别是小管期的早期和晚期, 该期特点是小叶间结缔组织 (I) 由多变少, 终蕾 (TBu) 演变为分支的管状结构. A : 肺小叶 (PL ) 结构明显, 小叶间结缔组织 (I ), 细支气管 (B), 终蕾 (TBu) 变为管状结构, 肺动脉 (PA ), 肺静脉 (PV ),H E, 32;B: 肺小叶 (PL ) 结构不明显, 小叶间结缔组织 (I), 细支气管 (B ), 终蕾 (TBu) 变为管状结构, 肺动脉 (PA ), 肺静脉 (PV), H E, 32 ;C: 管状结构的终蕾 (TBu) 之间有大量的间质细胞 (IC),PA S, 400;D : 终蕾 (TBu) 腺泡结构消失, 细胞核位于顶端, 为单层立方上皮 (SCE ), 间质细胞 (IC ), 糖原较丰富. PAS, 1 000; E: 终末细支气管 (TB ) 为单层柱状上皮 (SCE ), 平滑肌层 (SML) 明显, 肺静脉 (PV), H E, 400;F : 终末细支气管 (TB) 上皮为单层柱状上皮 (SCE), 部分细胞顶端有分泌小泡 (SV) 基膜 (BM ), PAS, 1 000;G : 呼吸部迅速发育, 肺内可见多处终蕾 (T Bu ) 的管状分支 (Tu), 间质细胞 (IC ),PA S, 400; H: 部分终蕾 (TBu) 有肌层 (M L), 管状分支 (T u) 明显, 糖原含量降低, 间质细胞 (IC), PAS, 400; I: 小支气管 (B) 为假复层柱状纤毛上皮 (PCCE), 上皮糖原颗粒丰富, 肺静脉 (PV ), 平滑肌层 (SM L),PA S, 400;J: 肺内较大肺动脉 (PA) 内弹性膜 (IEM), 弹性纤维 (EF ) 明显, 胶原纤维 (CF ),Weigert-Van Gieson, 400; K: 细支气管 (B) 周围伴有软骨片 (C) 以及较大的肺动脉 (PA ), 胶原纤维 (CF), 终蕾 (TBu), Masson 三色染色 ( 亮绿 ), 200 Fig 3 The fetal lung of yaks in the canalicular stage. A is early canal icular period and B is late canalicular period, the characteri stic of the terminal bud is in the form of a tubular structure with more branches. A: The structure of pulmonary lobule (PL)is obvious,interlobular connective tissue (I), the bronchial,(b),the terminal bud (TBu)turns into a tubular structure,the pulmonary artery (PA), pulmonary vein (PV),H E, 32 ;B: The structure of pulmonary lobules (P L)is obvious,interlobular connective tissue (I),the bronchial (B), the terminal bud (TBu)turns into a tubular st ructure,the pulmonary artery (PA ), pulmonary vein (PV), H E, 32; C : There are many interstitial cel l (IC ) between the terminal bud (TBu)with the tubular structure, PAS, 400; D: The acinus structure of terminal bud (TBu)disappears,the nuclei are located in the top, the epithelium is simple cuboidal epithelium (SCE), the interstitial cells (IC)have rich glycogen. PAS, 1 000;E: The terminal bronchiole (TB)has si mple columnar epithelium (SCE),smooth muscle layers (SML )are obvious, pulmonary vein (PV ), H E, 400; F: The terminal bronchiole (TB)has simple columnar epithelium (SCE),there are secretory vesicles (SV )in the top some cells, the basement membrane (BM ), PAS, 1 000;G :T he respiratory region grows rapidly,the tubular branch (Tu)of terminal bud (TBu) can be seen in the lungs,the interstitial cells (IC), PAS, 400;H: Some terminal buds (TBu)have muscle layers (ML ), the tubular branch (Tu)is obvious, glycogen levels are low, the interstitial cells (IC),PAS, 400 ;I:The bronchiole (B)has pseudostratified ciliated columnar epithelium (PCCE), the glycogen in the epithelium is rich, pulmonary vein (PV), smooth muscle layers (SML), PAS, 400; J: The larger pulmonary artery (PA )in lungs,the elastic fiber (EF )is obvious and collagen fiber (CF )is rich,internal elastic membrane (IEM )Weigert, 400 ;K :The bronchiole (B)is surrounded by cartilage (C)and larger pulmonary artery (PA ),the collagen fiber (CF)of pulmonary artery is rich,terminal bud (TBu),Masson s trichrome method (light green), 囊状期 ( 妊娠 180 ~ 220 d) 妊娠 180 ~ 220 d, 呼吸部为主要发育区域, 导气部进一步完善 此时期, 胎肺几乎被原始肺泡占满, 原始肺泡称终囊 (Terminal sac) ( 图 4A,B) 终囊由较厚肺泡隔及单层立方的原始肺泡上皮细胞构成, 管腔不规则 有少数的原始肺泡上皮细胞分化为扁平的肺泡 Ⅰ 型细胞和立方形的肺泡 Ⅱ 型细 胞 呼吸性细支气管由终末细支气管分出并开口于终囊 细支气管部分上皮细胞顶端具有分泌小泡, 经 PAS 染色呈强阳性 ( 图 4C), 管腔周围弹性纤维和胶原纤维明显 此期, 毛细血管增多, 间质中结缔组织减少 胸膜间充质细胞与结缔组织细胞连接, 使胸膜增厚 图 4 囊状期牦牛胎儿肺脏. 终囊管壁由较厚的隔膜突出形成, 管腔不规则. A : 终囊 (TS), 肺动脉 (PA ), 小叶间隔 (IS), H E, 400 ;B: 终囊 (TS) 为立方上皮 (CE), 部分原始上皮细胞分化为扁平的肺泡 Ⅰ 型细胞 (ⅠA C) 和立方形的肺泡 Ⅱ 型细胞 (ⅡAC), H E, 1 000; C: 细支气管 (B) 为假复层柱状纤毛上皮 (PCCE), 部分上皮细胞顶端具有分泌小泡 (SV ), 纤毛 C, 平滑肌层 (SML ),PA S, Fig 4 The fetal lung of yaks in the saccular stage. The terminal sac was formed by the thick septa, and its lumen was not regul ar. A : Terminal sac (TS), pulmonary artery (PA ), interlobular septum (IS ), H E, 400 ;B: Terminal sac (TS), cuboidal epithelium (CE),part of the primitive alveoli epithelium differentiated into flattened type I alveolar cells (Ⅰ AC) and cuboid type II alveolar cells (ⅡA C),H E, ;C: The bronchiole was pseudostratified ciliated columnar epithelium (PCCE ), part of epithelial cel ls had secretory vesicles (SV )on top,muscular layer (SML),PA S, 1 000

7 兽 类 肺泡期 (妊娠 d) 妊娠 220 d 开始进入肺泡期,呼 吸部在此 阶段 迅速 发 育, 分 化 出 肺 泡 管 肺 泡 囊 肺 泡 (图 5 A) 肺泡隔变薄,靠近隔膜顶端 的结 缔组织 和弹 性纤维增多,在间隔中起支撑作用 肺泡由原始肺 泡发育而来,数量迅速增多,大部分原始肺泡上皮 学 32 卷 报 终末细支 气 管 以 及 呼吸 性 细 支 气 管 Masson 三 色 染色观察到终末细支气管及其伴行血管等有胶原纤 维分 布 (图 5H ) 血 管 肺 泡隔 以 及 肺 泡 管开 口 的结节 状 膨 大 部 弹 性 纤 维 比 较 明 显 (图 5I, J ) 胸膜具有成年牦牛的组织结构特点 妊娠 260 d 左右,胎儿即将出 生 肺实质 区域 细胞分化为扁平的肺泡Ⅰ型细胞和立方形的肺泡Ⅱ 的肺泡化加剧肺泡Ⅰ型和Ⅱ型细胞继续增多,肺泡 型细胞,只有少数未分化的立方上皮 (图 5B) 肺 隔变 薄, 其 内 有 弹 性 纤 维 网 状 纤 维 分 布 (图 泡周围的间质 组织 逐渐 被 纤维 母细 胞 巨 噬细 胞 毛细血管以及较薄的网状纤维代替 较大的导气管 上皮中观察到大量杯状细 胞分 布 (图 5 C,D ) 终 5 L) 此时,胎儿的 肺脏已 逐步 发育 完善,具 备产 后呼吸的条件 通过对囊状期和肺泡期的肺动脉观察,发现肺 末细支气管和呼吸性细支气管管腔上皮衬以完整的 动脉的中膜肌层明显增厚,平滑肌细胞肥大,并且 单层柱状或立方上皮,有时柱状和立方两种细胞同 微动脉仍具有单层平滑肌细胞环绕 肺动脉的血管 时出现,一 些 上 皮 细 胞胞 质 PAS 反 应 呈 阳 性,另 内皮细胞增殖明显,呈立方状并突入管腔,形成栅 血管化十 分显 著,可 见动 静 脉常 伴 随细 支气 管 尤为明显 (图 5H,K) 一些 细胞 顶 端 分 泌 泡呈 阳 性 (图 5F, G ) 此 期, 状排列,细胞大 宽 圆,较小的肺动脉内皮细胞

8 4 期杨琨等 : 牦牛胎儿肺脏发育的形态学研究 353 图 5 肺泡期牦牛胎儿肺脏, 开始形成肺泡. A : 呼吸性细支气管 (R B), 肺动脉 (P A), 肺泡管 (AD ), 肺泡囊 (AS),H E, 400; B: 肺泡管 (AD ), 肺泡囊 (AS), 扁平的 Ⅰ 型肺泡上皮细胞 (ⅠA C), 立方的 Ⅱ 型肺泡上皮细胞 (ⅡA C), 毛细血管 (BC),H E, ; C: 支气管 (B ) 为假复层柱状纤毛上皮 (PCCE), 气管腺 (TG ), 杯状细胞 (GC ), 平滑肌层 (SML ),P AS, 400; D: 叶支气管 (LB), 假复层柱状纤毛上皮 (PCCE), 大量杯状细胞 (G C), 平滑肌层 (SML ), H E, 400;E : 细支气管 (B) 为假复层柱状纤毛上皮 (PCCE), 肌层 (M L), 纤毛 (C ), PAS, 1 000; F: 终末细支气管 (BT ), 上皮为单层柱状 (SCE), 肌层 (M L ),P AS, ;G : 终末细支气管 (TB ), 单层柱状上皮 (SCE), 分泌小泡 (SV ), PAS, ; H: 终末细支气管 (T B), 肺动脉 (PA ), 胶原纤维 (CF), 肺泡 (A), Masson 三色 ( 苯胺蓝 ), 400 ;I: 肺动脉 (PA ), 内弹性膜 (IEM ) 弹性纤维 (EF ) 明显, 胶原纤维 (CF), 肺泡 (A ),Weigert-Van Gieson, 400; J: 终末细支气管 (TB), 呼吸性细支气管 (RB ), 肺动脉 (PA), 肺静脉 (PV ), 肺泡管 (AD ), Weigert-V an G ieson, 200;K : 终末细支气管 (TB), 肺动脉 (PA ), 平滑基层 (SM L ), 内皮细胞 (EC ),H E, ;L : 终末细支气管 (TB), 肺动脉 (PA), 肺泡隔网状纤维 (RF ) 丰富, 肺泡 (A), 网状纤维银浸染色, 400 Fig 5 The fet al lung of yaks in the alveolar stage. The alveolus is formed. A:Respiratory bronchiol e (R B), pulmonary artery (PA),alveolar duct (AD ),aveolar sac (AS),H E, 400 ;B:Al veolar duct (AD ), aveolar sac (AS ),flattened type I alveolar cells (Ⅰ AC ), cuboid type Ⅱ alveolar cells (Ⅱ AC ), blood capillary (BC ), H E, 1 000; C :The bronchus epithelial was pseudostrat ified ciliated columnar epithel ium (PCCE),tracheal gland (TG),many goblet cells (G C),muscular layer (ML), PAS, 400; D: Lobar bronchus (LB),pseudostratified ciliated columnar epithelium (P CCE),many goblet cells (GC ),smooth muscular layer (SML ), H E, 400 ;E:The bronchiole (B)epithelial was pseudostratified ciliated columnar epithelium (PCCE),smooth muscular layer (SML),cilium (C ), PAS, ;F:T he Bronchioli terminales s (BT)epithelial was simple columnar epithelium (SCE), muscular layer (ML), PAS, 1 000; G: Terminal bronchiole (TB ), simple columnar epithelium (SCE),secretory vesicle (SV ), PAS, 1 000; H: Terminal bronchiole (TB ), pulmonary artery (P A),collagenous fiber (CF ), alveolar (A ),Masson s trichrome (aniline blue), 400; I: Pulmonary artery (PA), internal elastic membrane (IEM ), elastic fibers (EF ), collagenous fiber (CF),alveolar (A ), Weigert, 400 ;J: Terminal bronchiole (TB ), respiratory bronchiole (R B), pulmonary artery (PA ), pulmonary vein (PV ), alveolar duct (AD ), Weigert, 200; K: Terminal bronchiole (TB ),pulmonary artery (PA ),smooth muscle layer (SML ), endothelial cell (EC),H E, ;L: Terminal bronchiole (TB ), pulmonary art ery (P A ), reticular fibre (RF ), alveolus (A ), G omori s, 讨论 牦牛是高原特种动物, 生活在海拔 m 以上高寒地区 本文对牦牛胚胎的肺脏发育进行了研究, 通过实验观察将其发育过程划分为 5 个时期即 : 胚胎期 假腺期 小管期 囊状期和肺泡期 将牦牛与几种哺乳动物的胎儿时期肺脏发育状况进行比较 (Hodson,1977 ), 结果列于表 2 由表 2 可以看出 : 牦牛和人的囊状期差异明显, 其他时期在起止时间和发育程度上差异较小 山羊和绵羊是同科动物, 但是肺脏发育的时期划分和发育程度都不同, 囊状期尤为明显 ; 牦牛和牛也是同科动物, 其肺脏发育过程却无明显的区别 部分报道中, 将人和绵羊的肺脏发育过程划分为 4 个时期, 没有提出囊状期的概念 (Daine et al,1981; 何素云,1985) 牦牛与普通牛 山羊等有蹄动物的胎肺发育相似, 它们都分为 5 个时期 ( 胚胎期 假腺期 小管期 终囊期 肺泡期 ), 各个发育时期牦牛和普通牛的胶原纤维 弹性纤维和糖原等变化情况也类似 虽然, 牦牛与普通牛的妊娠时间相近, 但是牦牛进入肺泡期的时间比普通牛要早大约 20 d 气血屏障是指肺泡内氧气与肺泡隔毛细血管内血液携带二氧化碳间进行气体交换所通过的结构 它包括肺泡表面液体层 Ⅰ 型肺泡细胞及基膜 薄层结缔组织 毛细血管基膜及连续内皮 囊状期的原始肺泡壁比肺泡期的肺泡壁厚, 即其气血屏障比肺泡期的厚, 这样就增加了气体交换的难度 牦牛比普通牛更早从囊状期进入肺泡期, 其气血屏障更早发育完善, 该现象可能与低氧适应性密切相关 妊娠末期, 牦牛肺泡发育基本成熟, 肺泡大部分上皮细胞分化为扁平的肺泡 Ⅰ 型细胞和立方形的肺泡 Ⅱ 型细胞, 只有少数未分化的立方上皮细胞 人的肺泡数量在出生时为 0 24 亿, 只有 8 % 的肺泡发育成熟,8 岁时为 2 8 亿 大鼠 小鼠 家兔出生时, 肺内仍有大量的囊状结构, 未形成肺泡 (Dunnill,1962) 由此可见, 牦牛胎儿出生时肺脏发育更为成熟 研究结果表明 (Sorokin,1965 ), 牦牛肺脏的发育与人一样, 开始采用离心的方式, 从肺门部到周边, 胚胎期阶段最明显 ; 而后期肺泡化过程是向心的, 从周边部到肺门 因此, 牦牛肺脏的成熟是一个动态的过程, 单个胎肺中不同区域的发育程度不同 在肺泡期, 亦可以观察到囊状期 小管期的组织结构 此期肺门部各级支气管 血管等结构发育较成熟, 边缘区域肺泡化较明显 PAS 染色体现不同时期胎儿肺内糖原含量的变化情况 Sorokin ( ) 观察到, 凡肺内糖原减

9 354 兽类学报 32 卷 表 2 胎肺不同时期发育阶段的时间划分 ( 天 ) Table 2 Onset and range of times for fetal lung - development stages (days) 动物 Animal 假腺期 Pseudoglandular 小管期 Canalicular 囊状期 Terminal sac 人类 Human 家兔 Rabbit 绵羊 Sheep 山羊 G oat 大鼠 Rat 牛 Bovine 牦牛 Y ak 少区域, 有关三羧酸循环的酶活性增加, 糖原供给胎儿肺组织中上皮增殖所需的能量 (Sorokin, 1965) Kikkawa (1971 ) 认为糖原分解与表面活性物质的形成有关 实验过程中发现牦牛胎儿肺脏胚胎期的支气管上皮细胞内糖原颗粒丰富 ; 假腺期各级支气管和终蕾上皮的糖原含量也十分显著 从小管期开始, 各级支气管和终蕾上皮细胞的糖原含量开始急剧减少 之后的几个时期, 只有导气部个别上皮细胞 PAS 反应呈阳性 总之, 胎儿肺内细胞糖原含量的变化反映了糖酵解反应的程度, 当细胞内糖原含量丰富时, 说明糖酵解反应速度缓慢 ; 当细胞内糖原含量急剧减少时, 说明糖酵解反应速度大幅加快, 即上皮细胞正在迅速增殖 此外, 还观察到 2 种 PAS 呈阳性反应的导气部上皮细胞 : 一种顶端具有分泌小泡且 PAS 呈阳性, 另一种顶端无分泌泡但胞质呈阳性, 这两种细胞与成年牦牛肺脏的 Clara 细胞和杯状细胞结构及 PAS 反应结果相似, 但不能确定, 将进一步做电镜和免疫组化研究进行定性 Heath 等 (1984) 报道了成年牦牛肺动脉是薄壁的 肺小动脉无中膜肌层, 牦牛的肺动脉内皮细胞大 宽 圆, 与低氧敏感牛的内皮细胞不同 但是, 对 1 日龄,5 月龄及成年牦牛的肺脏进行研究, 发现不同年龄段的肺动脉中膜肌层均有不同程度的增厚现象, 并非 Heath 等 (1984) 报道的成年牦牛肺动脉没有增厚 肺动脉的血管内皮细胞增殖明显, 呈立方状并突入管腔, 形成栅状排列, 细胞大 宽 圆, 且较小的肺动脉尤为明显 以上结构特点在 5 月份最为突出, 随着年龄的增长逐渐减弱 ( 何俊峰等,2009; 靳新花等,2009;Yang et al, 2010; 马兴斌等,2011) 本实验通过对囊状期和肺泡期的肺动脉观察, 发现胎儿肺动脉的中膜肌层 明显增厚, 平滑肌细胞肥大, 并且微动脉仍具有单层平滑肌细胞环绕 胎儿肺动脉的血管内皮细胞同样呈立方状突入管腔, 与出生后牦牛血管内皮细胞类似 综上所述, 牦牛的肺动脉肌层增厚以及内皮细胞变大并突入管腔的结构特点从胎儿到成年均有体现 胎儿在母体内并未进行呼吸, 却已经形成了低氧的适应性结构, 说明该结构特点的形成是受基因调控的 牦牛对低氧环境表现出了良好的适应性, 其机理需要进一步研究 参考文献 : Ank A W, Ten H O,Jacqueline A, Caroline J M Ultrastructural features of type II alveolar epithelial cell in early embryonic mouse lung. Anat Rec,221 : Baskerville A Histological and ultrastructural observation on the development of the lung of the fetal pig. A cta Anat, 95 : Daine G, Alcorn T, Michael A, John E M, Peter M R A morphologic and morphometric analysis of fetal lung development in the sheep. Anat Rec,201: Dunnill M S Postnatal growth of the lung. Thorax,17: Heath D, William D, D ickinson J The pulmonary arteries of the yak. Cardiovasc Res,18 : He J F,Yu S J,Cui Y Characteristics of lung structure in different age plateau yak. Chinese Journal of Animal and Veterinary Sciences,40 (5): (in Chinese) Hodson W A D evelopment of the L ung. New York: Marcel Dekker Inc. 6. Jin X H,Cui Y, He J F,Yang B Microstructural observation on pulmonary artery in adult yak. Chinese Veterinary Science, 39 (03 ): (in Chinese ) Liliana E Z, Donald E W Prenatal development of the bovine lung. Zbl Vet Med C Anat Histol Embryol,13:1-14. Liu B,Cui Y,Yang B,Fan J F,Zhao Z W,Yu S J Morphometric analysis of yak placentomes during gestation. The Anatomical

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