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1 第 33 卷第 9 期 Vol33,No9 草业科学 PRATACULTURALSCIENCE 1651G1657 9/2016 DOI: /jissn1001G G0588 张蕊思, 安沙舟, 卡斯达尔努尔旦别克, 施宠高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响草业科学,2016, 33(9):1651G1657 ZhangRS,AnSZ,Kasidaer Nuerdanbieke,ShiCEfectsofhightemperaturetreatmentsonviabilityofEpichloёseedsofElymus dahuricusprataculturalscience,2016,33(9):1651g1657 前植物生产层高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响张蕊思, 安沙舟, 卡斯达尔努尔旦别克, 施宠 ( 新疆农业大学草业与环境科学学院新疆草地资源与生态重点实验室, 新疆乌鲁木齐 ) 摘要 : 为了寻求去除禾草内生真菌的方法, 选用披碱草 (Elymusdahuricus) 为研究材料, 以和 75 高温分别处理披碱草种子和 30d, 研究不同强度高温对内生真菌和宿主活力的影响结果表明,75 处理 20d 能快速有效杀灭披碱草种子的内生真菌, 使种子带菌率从 9317% 显著降到 0(P<005), 所有检测幼苗均不感染内生真菌 ; 同时, 发芽率发芽势发芽指数活力指数和幼苗鲜重分别显著提高 3637% 7394% 5038% 6338% 和 779%, 且在幼苗生长初期对芽和根的生长有促进作用, 芽长根长分别增加 054% 和 1443% 故高温处理是一种理想的去除披碱草种子内生真菌的方法, 同时这一方法也为探索获取不感染内生真菌其它禾草提供了理论依据关键词 : 内生真菌 ; 高温处理 ; 披碱草中图分类号 :S3303;S ;Q94535 文献标志码 :A 文章编号 :1001G0629(2016)9G1651G07 Effectsofhightemperaturetreatmentsonviabilityof EpichloёseedsofElymusdahuricus ZhangRuiGsi,AnShaGzhou,Kasidaer Nuerdanbieke,ShiChong (ColegeofPrataculturalandEnvironmentalScience,XinjiangAgriculturalUniversity,KeyLaboratoryof GrasslandResourcesandEcologyofXinjiang,Urumqi,Urumqi830052,China) Abstract:Inthepresentstudy,hightemperaturetreatments (60,70and75 )wasemployedtoconstruct EpichloёGfreepopulationsofElymusdahuricusTheresultsindicatedthathightemperaturetreatmentscankil EpichloёendophyteintheseedsAfter75 for20daystreatment,theepichloёendophyteinfectedratessigg nificantlydroppedfrom9317% to0% (P<001),andthegerminationrate,germinatingpotential,germinaG tionindex,vitalindexandseedingfresh weightofedahuricusincreasedby3637%,7394%,5038%, 6338% and779%,respectively(p <005)Meanwhile,hightemperatureimprovedhypocotylsandradical growthandthehypocotylsandradicallengthofthetreatedseedlingsincreasedby054% and1443%thereg fore,hightemperatureof75 treatment wasanefective waytoconstructepichloёgfreepopulationsof Edahuricus whichprovidedsomeacademicbasesandreferencesforestablishingepichloёgfreepopulationsof grass Keywords:Epichloё;hightemperaturetreatment;Elymusdahuricus Correspondingauthor:AnShaGzhou EGmail:xjasz@126com 收稿日期 :2015G10G26 接受日期 :2016G06G13 基金项目 : 新疆农业大学草业科学国家重点学科博士研究生创新基金 (XJCYBG2011G01); 高等学校博士学科点专项科研基金 ( ); 新疆自治区研究生教育创新计划科研创新项目 (XJGRI ) 第一作者 : 张蕊思 (1989G), 女, 河南商丘人, 在读硕士生, 研究方向为草地资源与生态 EGmail: @qqcom 通信作者 : 安沙舟 (1956G), 陕西富平人, 教授, 博导, 博士, 研究方向为草地资源与生态 EGmail:xjasz@126com htp: cykxlzueducn

2 1652 草业科学第 33 卷禾草 - 内生真菌是指在禾草中度过全部或大部分生命周期, 而禾草不显示外部症状的一大类真菌 [1] 自然界中感染内生真菌的植物普遍存在, 真菌和禾草共同形成互惠互利的共生体目前, 国际学术界公认内生真菌可以对宿主植物的生长产生正面影响 [2] 禾草内生真菌能提高宿主植物对营养物质的利用效率, 从而促进植物生长 [3] 研究发现内生真菌 (Epichloё) 可以促进多年生黑麦草 (Lolium perenne) [4] 布顿大麦 (Hordeumbogdani) [5] 圆柱披碱草 (ElymuscyG lindricus) [6] 和醉马草 (Achnatheruminebrians) [7] 的生长另外, 内生真菌在禾草体内产生的生物碱, 致使采食带菌禾草的马牛羊鹿等家畜产生中毒症状 [8] 披碱草 (Edahuricus) 是禾本科披碱草属多年生疏丛型旱中生禾草 [9] 披碱草耐旱耐寒耐碱耐风沙, 先后在河北新疆内蒙古青海等省 ( 区 ) 的牧场草原试验站进行过栽培驯化工作, 被认定为优质高产的饲草国外对披碱草内生真菌的研究主要是对加拿大披碱草 (Ecanadensis) 和佛吉尼亚披碱草 (E virgincus) 的带菌情况进行了调查 [7], 在我国最早关于内生真菌侵染披碱草的报道见于 Nan 和 Li [6], 在检测的 3 份披碱草样品中发现 1 份带菌, 带菌率为 100% 对披碱草所带 Epichloё 属内生真菌的生理生 [10] 物学特性以及共生体的生长光合速率生理特性和对水分胁迫的响应亦作了较系统的研究 [11] 为了阐明内生真菌对宿主植物的作用, 首先必须获得内生真菌感染和非感染的试验植物种群目前去除种子内生真菌的方法主要有杀真菌剂法 [12] 湿热 [13] 法两种方法, 然而, 杀真菌剂的使用存在着农药残留危害其它物种等一系列生态问题, 且不能达到完全去除内生真菌的效果 ; 湿热法虽能有效降低宿主内生真菌带菌率但也不能达到完全去除的效果, 同时对宿 [13] [14] 主植物活力也产生了影响高温处理法被证实是一种可以去除羽茅 (Achnatherumsibiricum ) 种子 [14] 内的内生真菌且对宿主植物无影响的方法, 李夏等研究发现,60 高温处理能有效杀灭羽茅种子中的内生真菌, 当处理时间达到 30d 时, 所有检测幼苗均不感染内生真菌同时高温处理对种子发芽率发芽势和发芽指数均无显著影响, 且在幼苗生长初期对根的生长有促进作用本研究在前人研究基础上采用和 75 3 个高温处理强度, 通过比较不同处理时间条件下宿主植物内生真菌带菌率及其种子萌发率和活力指数, 寻求既能完全有效去除宿主植物种子中内生真菌的活力, 同时又对种子本身活力无影响且对环境友好的杀菌方法 1 材料与方法 11 试验材料试验材料为披碱草, 于 2014 年 8 月在新疆沙湾县鹿角湾 ( N E) 野外采集, 经过镜检以及室内培养后检测带菌率均在 93% 以上, 采集后存放于冰箱中 4 保存每次从中选取大小一致籽粒饱满无破损的披碱草种子为研究对象 12 试验设计在实验室进行预实验时发现 80 高温处理 5d 后披碱草种子已经完全不能发芽, 故试验所采用的最高处理温度为 75 试验共设置 3 个温度梯度 ( ) 和 6 个时间梯度 ( d), 共 18 个处理, 每个处理重复 3 次将存放于冰箱中 4 保存的未经高温处理的种子作为对照 (CK) 13 研究方法 131 种子处理方法种子萌发和幼苗培养试验高温源为 DHGG9240A 电热恒温鼓风干燥箱 ( 共计 3 台 ), 额定电压 220VG50Hz, 输出功率 2470 W 研究采取高温和时间结合的方式, 将试验种子从冰箱取出后均匀摆放在玻璃培养皿 ( 直径为 9cm) 正中央, 后置于干燥箱中, 温度过高可能影响种子的质量, 可在进行高温处理前将种子的含水量降低到 4% 以下 [15] 参照 [15] 宋顺华和郑晓鹰安全有效的阶梯式方法逐步将处理温度从 35 提高至目标温度, 然后再进行阶梯式降温, 即 : 首先将温度调节至 35 处理 24h, 再调节温度至 45 处理 24h, 后将温度调节至所需温度处理相应天数, 最后降低温度至 55 处理 24h 后, 将种子从干燥箱中取出后置于 4 冰箱中保存, 所有处理结束后进行萌发试验 132 种子发芽和幼苗培养试验采用 SPXG300IGG 型光照培养箱进行种子萌发高温处理后及对照种子均用 50% 硫酸软化颖壳 30 min 和次氯酸钠 ( 有效氯浓度 2%) 表面消毒 10~15min, 且浸泡过夜后整齐摆放于内置滤纸 ( 提前用去离子水湿润 ) 直径 9cm 的培养皿中, 于 25 培养箱中黑暗萌发,7d 后设置光照 / 黑暗 8h/16h, 进行培养每天对试验种子的发芽情况进行观察, 并分别统计开始发芽时间和每天发芽数, 以胚根长度超过 2 mm 视为发芽, 连续 4d 没有新的发芽种子后计算最终发芽率 [16] 第 12 天时对萌发生

3 第 9 期张蕊思等 : 高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响 1653 长指标统计后, 将培养皿中的萌发种子转移到 180 mm 125mm 150 mm 的塑料花盆中进行培养, 每天观察耗水状况并及时补加水除杂草等 133 种子带菌率的检测达到预设温度处理后, 对种子先进行预处理 [17], 后进行消毒处理 [15], 之后每个处理随机选取 20 粒种子等距离置于含有 100 mg L -1 链霉素和 100mg L -1 氯霉素的马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (ABPDA 培养基 ) 上, 每 3 个培养皿为一个重复, 每个处理 3 次重复,30d 后统计菌落数并计算带菌率过程中用到漂洗对照印记 ( 迹 ) 对照环境对照 3 种对照参照 [17] 134 种子和幼苗带菌率的检测与验证在种子发芽结束后的第 50 天之后所有的幼苗均长出新的分蘖, 对新生的分蘖逐株进行了镜检检测, 镜检过程中若镜检出一个分蘖带菌则认为此植株带菌 ; 同理, 镜检过程中若未镜检出一个分蘖带菌则认为此植株不带菌另外, 为验证种子带菌率为 0 的处理组植株确实不带菌, 我们还就对照组的幼苗和高温处理组幼苗的叶片和叶鞘进行了内生真菌的分离培养, 以确保验证检测结果的准确性叶片内生真菌的分离培养 : 取待检验新鲜叶片自来水冲洗 4 次后放入 2% 的次氯酸钠溶液中震荡 5 min, 然后至于超净工作中无菌水冲洗 5 次并切成约 1cm 长的片段后进行内生真菌的分离工作, 分离方法同种子内生真菌分离方法镜检使用赵晓静等的光学显微镜法 [18] 14 数据处理及计算方法每天对试验种子的发芽情况进行观察, 分别统计开始发芽时间和每天发芽数, 并计算发芽率发芽势发芽指数和平均发芽天数等指标, 披碱草种子的发芽率 (germinationrate,gr) 发芽势 (germinationpog tential,gp) 发芽指数 (germinationindex,gi) 活力 [19] 指数 (vitalindex,vi), 按照以下公式计算 : 发芽率 = 最终正常发芽的种子粒数 / 供试种子粒数 100%; 发芽势 = 在 7d 内正常发芽的种子粒数 / 供试种子粒数 100%; 发芽指数 (GI)= (Gt/Dt) 式中 :Gt 为在不同时间的发芽数 ;Dt 为相应的发芽日数活力指数 (VI)=GI S 式中 :S 为 12d 内幼苗长度 (mm),gi 为发芽指数试验结束时, 每重复随机选取 10 株, 用精度 001 mm 的数显游标卡尺 ( 日本 Mitutoyo, 型号 500G173) 测量胚芽长胚根长, 用精度为万分之一分析天平称取幼苗鲜重第 30 天时记录每皿带菌种子数并拍照, 根据如下 [20] 公式计算种子内生真菌带菌率 : 带菌率 =( 带菌种子数 / 检测种子总数 ) 100% 15 数据处理与统计分析对所有数据利用 Excel2007 统计和整理, 单因素方差分析和多重比较利用 SPSS200 软件, 并将结果以平均值 ± 标准误形式表示, 最终结果采用 Excel 2007 制图 2 结果与分析 21 高温处理对带菌率的影响随着温度的升高和处理时间的延长, 与对照相比, 内生真菌带菌率显著下降 (P<005)( 图 1), 高温处理对内生真菌的抑制作用逐渐增强 ( 图 2) 带菌率随着温度升高而显著下降的速度由快到慢为 75>70> 60 ; 随着处理天数的延长, 带菌率也明显降低, 其中,60 处理 30d 带菌率降低为 125%;70 处理 20 d 和 75 处理 15d 后内生真菌带菌率分别降低到 351% 和 278%; 之后分别在 25 和 20d 时内生真菌带菌率为 0 图 1 不同处理温度下披碱草种子带菌率的变化 Fig1 Efectsofhightemperaturepretreatmentonthe EpichloёcontaminationrateofEdahuricusseeds 注 : 不同小写字母表示处理间差异显著 (P<005) 图 3 同 Note:Diferentlowercaseleterindicatesignificantdiferenceat005 levelthesameinfig3 22 高温处理对种子萌发的影响与对照相比, 高温处理显著降低了种子含水量 (P<005),60 时种子含水量为 382%~525%, 各处理之间种子含水量无显著差异 (P >005), 但是均显著低于对照 ( 表 1);70 时种子含水量为 294%~ 331%,75 时种子含水量为 228%~358% 但 70 和 75 各处理时间之间无显著差异

1654 草业科学第 33 卷图 2 75 高温处理 20d 下披碱草叶片中内生真菌带菌的变化 Fig2 TheleafofEpichloёofEdahuricustreatedbyhightemperatureat75 for20d 表 1 高温处理对种子萌发的影响 Table1

4 1654 草业科学第 33 卷图 2 75 高温处理 20d 下披碱草叶片中内生真菌带菌的变化 Fig2 TheleafofEpichloёofEdahuricustreatedbyhightemperatureat75 for20d 表 1 高温处理对种子萌发的影响 Table1 TheefectsofhightemperaturepretreatmentonthegerminationofEdahuricusseeds 处理种子含水量发芽率发芽势发芽指数活力指数 10 株幼苗鲜重 Treatment Seedmoisture Germination Germination Germination Vigourindex 10seedingfresh content/% rate/% potential/% index weight/g 5d 525±0001b 9423±033abcd 6939±011ab 370±049bcde 0076±0011bcde 0206±0003ab 10d 515±0001bc 8524±007bcdef 6873±006ab 311±020cde 0067±0005cde 0214±0008a 60 15d 451±0002bcd 9792±002ab 8634±006a 371±029bcde 0072±0006bcde 0195±0009ab 20d 403±0004bcde 9344±003abcd 6933±007ab 401±033bcd 0083±0008bc 0207±0004ab 25d 443±0001bcd 9855±001a 7229±001ab 351±009bcde 0075±0003bcde 0213±0003a 30d 382±0002bcde 9333±003abcd 8750±003a 386±020bcd 0082±0006bc 0213±0011a 5d 304±0005de 9753±001ab 4938±004c 379±036bcd 0070±0008cde 0183±0007bc 10d 294±0003de 9792±001ab 8088±001a 386±046bcd 0078±0012bcd 0200±0008ab 70 15d 323±0003de 9409±000abcd 8119±005a 346±046bcde 0071±0007cde 0207±0007ab 20d 331±0004de 9631±000abc 6874±008ab 461±021ab 0099±0004ab 0214±0003a 25d 295±0005de 9762±001ab 5476±016bc 439±057abc 0087±0011abc 0198±0003ab 30d 317±0007de 9032±005abcde 5374±011bc 417±039abc 0070±0006cde 0168±0008cd 5d 252±0003e 9451±003abcd 7269±010ab 380±077bcd 0077±0016bcd 0202±0005ab 10d 358±0003bcde 8245±009def 9191±004a 411±060abc 0084±0012bc 0204±0008ab 75 15d 340±0005cde 9889±001a 8632±004a 528±016a 0110±0003a 0208±0004ab 20d 293±0002de 10000±000a 7421±004ab 414±024abc 0084±0004bc 0203±0005ab 25d 240±0004e 8402±003cdef 484±003d 311±026cde 0049±0005ef 0159±0013d 30d 228±0007e 8000±0046ef 000±0d 244±015e 0041±0003f 0169±0001cd CK 824±0009a 7333±035f 4267±012c 276±041de 0051±0007def 0188±0016abc 注 : 不同小写字母表示差异显著 (P<005) Note:Diferentlowercaseletersindicatesignificantdiferenceat005level 高温处理提高了披碱草种子发芽率, 促进了种子萌发 60 时, 随着处理天数的增加发芽率升高幅度高低不齐, 但与对照相比整体呈现显著上升趋势 (P< 005)70 和 75 时, 随着处理天数的增加发芽率呈现先降低后升高再降低的有规律的变化趋势, 分别在处理 10 和 20d 时发芽率达到最大值 20d 时的发芽率大小为 75>70>60, 但 3 个温度之间无显著差异 (P>005); 当处理天数超过 25d 时, 各温度的发芽率会出现不同程度的下降趋势, 下降幅度大小为 :75> 70>60, 但处理时间为 30d 时, 发芽率仍高于对照 ( 表 2) 这表明, 在一定的高温处理强度范围内, 低温长时或短时高温对发芽率有促进作用, 随着处理强度的加大这种促进作用逐渐减弱 60 高温处理较对照显著 (P<005) 提高了种子发芽势,60 各时间处理之间无显著差异 (P > 005), 随着处理天数的延长, 发芽势整体呈现上升变

5 第 9 期张蕊思等 : 高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响 1655 化趋势 ;70 和 75 时, 随着处理天数的增加发芽势呈现先升高后降低的变化趋势 :70 处理 15d 发芽势最高 ;75 处理 10d 发芽势上升且达到最大值, 但随着处理时间的延长, 发芽势下降幼苗鲜重也呈现类似的变化 60 时各处理发芽指数与对照无显著差异 (P> 005)70 时处理时间短于 20d 时与对照无显著差异, 超过 20d 时则显著高于对照 (P <005), 此后, 发芽指数随着处理时间的延长逐渐降低 75 时, 随着处理天数的增加发芽指数呈现先升高后降低的变化趋势 : 处理 15d 时发芽指数显著增加且达到最大值 (P<005) 活力指数也呈现类似的变化 23 高温处理对幼苗生长的影响高温处理后芽长的变化 ( 图 3):60 时芽长随处理天数的延长逐渐增长 ;70 和 75 时, 芽长随着处理时间的延长均出现先升高后降低的变化, 处理 15d 时芽长达到最大值高温可以促进芽生长, 这种促进作用的程度大小随温度的变化为 60>70>75 高温处理后根长的变化 ( 图 3):60 时各处理的根长与对照相比都有所增加, 无明显规律 70 时根长随着处理时间的延长呈现先增加后降低的变化趋势, 处理 15d 时根长达到最大值 75 时根长随着处理天数的延长也呈现先增加后降低的变化趋势,70 处理 5d 时根长达到最大值图 3 不同高温处理强度下的幼苗芽长和根长 Fig3 ThehypocotylslengthandradicallengthofEdahuricusseedlingstreatedby hightemperatureatdiferenttime 3 讨论 60 时种子含水量为 382%~525%, 发芽率均高于对照, 表明此区间种子含水量促进种子萌发 70 时种子含水量为 294%~331%,75 时种子含水量为 228%~358%70 处理 10d 发芽率显著高于对照 (P <005),20d 发芽率达到最大值,25 和 30d 时发芽率相比最大值有所下降但仍显著高于对照 ;75 处理 10d 发芽率显著高于对照 (P <005), 20d 发芽率达到最大值,30d 时发芽率有所下降但仍略高于对照 (P >005), 表明此区间种子含水量对发芽率无抑制作用本研究中 60 高温处理在所有处理时间内和 70 在处理时间 25d 和 75 在处理时间 20d 对披碱草种子的发芽率发芽势发芽指数和活力指数以及生物量均无影响且能提高发芽参数, 说明适当的高温 [21] 处理可以促进种子萌发, 这与 Dayamba 等发现热激对禾本科物种的发芽参数无负影响的结论是一致的本研究发现,60 处理时间 30d 70 和 75 处理时间 20d 对披碱草种子根长和芽长无影响且能促进芽长和根长, 说明适当高温处理可以起到促进生 [22] 长的作用, 这与张百俊等对西葫芦 (CucurbitapeG po) 种子进行不同温度和时间的干热处理时发现的高温处理能提高种子的发芽势并促进幼苗生长的结论是一致的综合高温处理对披碱草种子活力影响来看, 适当高温处理可以促进披碱草种子的萌发和幼苗的生 [14] 长, 这与李夏等发现 60 高温处理羽茅种子对种子发芽率发芽势和发芽指数均无显著影响且在幼苗生长初期对根的生长有促进作用的结论是一致的大量研究逐渐表明, 环境条件对内生真菌的影响要大于对宿主的影响不同储藏条件下, 温度和种子含水量的控制对保持黑麦草 (Lolium perenne) 内生真菌的活力都是十分重要的, 内生真菌比种子对高温更敏感 [23] 在较低温度条件下内生真菌和种子的活力都较高, 而在高温高湿条件下内生真菌和植物种子活力下降都很快, 但对内生真菌的影响更大 [24] 本研究

6 1656 草业科学第 33 卷中内生真菌的带菌率随着处理天数的延长或处理温度的增加而不断显著降低 (P<005),75 处理 20d 时带菌率也已显著下降到 0, 所有检测幼苗以及分蘖均为无菌, 而且对种子的发芽活力及生长均无影响, 这说明适当高温处理是可以实现完全去除种子内的内生真 [14] 菌而又不影响种子活力的目的这与李夏等研究发现 60 高温处理羽茅种子 30d 能有效杀灭种子内的内生真菌的结论是相似的, 本研究中 60 处理 30d 能有效降低但并不能完全去除披碱草种子内的内生真 [25] 菌, 这可能与种子自身特性有关董晓飞等的研究也表明, 干热处理既可在一定程度上杀灭表面菌又不影响种子的生活力目前, 国内去除禾草内生真菌的方法总结起来有杀菌剂法水浴湿热法和高温干热法, [26] 姚祥等研究甲基托布津和苯醚甲环唑两种内吸性杀菌剂对中华羊茅 (Festucasinensis) 种传内生真菌的影响时发现, 甲基托布津稀释 300~500 倍浸泡种子 8 h 为剔除中华羊茅种传内生真菌的最佳方法 ; 张金 [13] 锋研究结果表明, 垂穗披碱草 (Enutans) 种子 60 水浴 20min 处理杀灭内生真菌效果较好, 但由于其对发芽率的影响及种子活力的影响, 该方法适用于种子量丰富的情况下虽然前人也曾用高温干热法对种子内生真菌进行过去除试验, 但试验中所采用温度过于单一, 为了弥补这一缺点, 本研究采用和 75 3 个温度进行 d 的持续高温时间, 结果表明,75 处理 20d 能有效完全杀灭披碱草种子内生真菌而又不影响种子活力 4 结论本研究发现,75 处理 20d 能快速有效杀灭披碱草种子内的内生真菌, 使带菌率降为 0, 所有 75 处理 20d 的幼苗检测均为无菌, 适当高温处理适当时间可以促进种子的萌发活力所以, 高温处理是一种有效杀灭披碱草种子内生真菌的方法, 同时这一方法也为探索获取不感染内生真菌禾草提供了理论依据参考文献 References: [1] SiegelM R,LatchGC M,BushLP,FanninFF,RowanDDFungalendophyteGinfectedgrasses:AlkaloidaccumulationandaG phidresponsejournalofchemicalecology,1990,16(12):3301g3315 [2] 张玉平披碱草 - 内生真菌共生体生物学与生理学特性的研究兰州 : 兰州大学博士学位论文,2007 ZhangYPBiologicalandphysiologicalcharacteristicsofElymusdahuricus-Heotyphodium endophytesymbiontphdthesis Lanzhou:LanzhouUniversity,2007(inChinese) [3] MalinowskiDP,AloushG A,BeleskyDPLeafendophyteNeotyphodiumcoenophialum modifiesmineraluptakeintalfesg cueplantandsoil,2000,227:115g126 [4] LatchGC M,HuntW F,MusgraveDREndophyticfungiafectgrowthofperennialryegrassNewZealandJournalofAgriculG tureresearch,1985,28:165g168 [5] 南志标内生真菌对布顿大麦草生长的影响草业科学,1996,13(1):16G18 NanZBEfectsofacremoniumendophyteonthegrowthofHordeumbodganiPrataculturalScience,1996,13(1):16G18(in Chinese) [6] NanZB,LiCJNeotyphodiuminnativegrassesinChinaandobservationsonendophyte/hostinteractionsIn:PaulV H,DapG prichp D(eds)Proceedingsofthe4thInternationalNeotyphodium/GrassInteractionsSymposiumGermanySoest,2000: 41G50 [7] Vinton M A,HopkinsA AEndophyticfungiinCanadawildryeinnaturalgrasslandsJournalofRange Management,2001, 54(4):390G395 [8] 南志标, 李春杰禾草 - 内生真菌共生体在草地农业系统中的作用生态学报,2004,24(3):605G616 NanZB,LiCJRoseofthegrass-Neotyhodium associationinpastoralagriculturesystemsactaecologicasinica,2004,24 (3):605G616(inChinese) [9] 徐瑞, 南志标, 周雁飞, 李春杰披碱草内生真菌共生体中麦角生物碱的组织分布与季节动态草业学报,2012,21(3):84G92 XuR,NanZB,ZhouYF,LiCJDistributionandseasonaldynamicsofergotalkaloidsinElymusdahuricus-endophyticfunG gussymbiontactaprataculturaesinica,2012,21(3):84g92(inchinese) [10] ZhangY P,NanZBGerminationandseedlingantiGoxidativeenzymesofendophyteGinfectedpopulationsofElymusduhuriG

7 第 9 期张蕊思等 : 高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响 1657 cusunderosmoticstressseedscienceandtechnology,2010,38:522g527 [11] ZhangYP,NanZBGrowthandantiGoxidativesystemschangesinElymusdahuriusisafectedbyNeotyphodium endophyte undercontrastingwateravailabilityjournalofagronomycropscience,2007,193:377g386 [12] 朱敏杰, 张丽红, 任安芝用丙环唑杀除羽茅内生真菌南开大学学报,2013,46(2):88G93 Zhu MJ,ZhangLH,RenAZEliminatingtheendophyticfungiinAchnatherumsibiricum bypropiconazoleactascientiarumg Naturalium UniversitatisNankaiensis,2013,46(2):88G93(inChinese) [13] 张金锋水分胁迫下内生真菌对垂穗披碱草种内竞争的影响兰州 : 兰州大学硕士学位论文,2013 ZhangJFEfectsoffungalendophyteonintraspecificcompetitionofElymusnutans under waterstressmasterthesis Lanzhou:LanzhouUniversity,2013(inChinese) [14] 李夏, 韩荣, 任安芝, 高玉葆高温处理构建不感染内生真菌羽茅种群的方法探讨微生物学通报,2010,37(9):1395G1400 LiX,HanR,RenAZ,GaoYBUsinghighGtemperaturetreatmenttoconstructendophyteGfreeAchnatherumsibiricumMicroG biologychina,2010,37(9):1395g1400(inchinese) [15] 宋顺华, 郑晓鹰干热灭菌处理技术一种防治种传病害的有效方法蔬菜,2008(10):41 SongSH,ZhengX YDryheatsterilizationprocessingtechnology Anefectivewayofpreventionandcontrolofakindof spreaddiseasesvegetables,2008(10):41(inchinese) [16] 曾霞, 王彦荣, 胡小文垂穗披碱草种子的萌发适宜温度及温度阈值草业科学,2011,28(6):89G92 ZengX,WangY R,HuX WResearchonseedgerminationoptimumtemperatureandtemperaturethresholdofElymusnuG tansprataculturalscience,2011,28(6):89g92(inchinese) [17] 王志勇, 刘秀娟植物内生菌分离方法的研究现状贵州农业科学,2014,42(1):152G155 WangZY,LiuXJResearchstatusonseparation methodsofplantendophytesguizhouagriculturalsciences,2014,42(1): 152G155(inChinese) [18] 赵晓静, 王萍, 李秀璋, 古丽君, 李春杰内生真菌在禾草体内的分布特征草业科学,2015,32(8):1206G1215 ZhaoXJ,WangP,LiXZ,GuLJ,LiCJDistributioncharacteristicsofEpichloёendophyteinGramineousgrassesPrataculG turalscience,2015,32(8):1206g1215(inchinese) [19] 葛庆征, 张卫国, 张灵菲, 卫万荣温度对垂穗披碱草种子萌发的影响草业科学,2012,29(5):759G767 GeQZ,Zhang W G,ZhangLF,WeiW REfectsoftemperatureonthegerminationofElymusnutansseedsPratacultural Science,2012,29(5):759G767(inChinese) [20] 孔瑞芳苏丹草 (Sorghumsudanense) 种带真菌及其防治兰州 : 兰州大学硕士学位论文,2009 KongRFSeedbornefungiofsudangrass(Sorghumsudanense)andtheircontrolMasterThesisLanzhou:LanzhouUniversiG ty,2009(inchinese) [21] DayambaSD,Tigabu M,SawadogoL,OdenPCSeedgerminationofherbaceousandwoodyspeciesoftheSudaniansavannaG woodlandinresponsetoheatshockandsmokeforestecology & Management,2008,256(3):462G470 [22] 张百俊, 杨和连, 陈碧华, 陈英照干热处理对西葫芦种子发芽及幼苗生长的影响甘肃农业大学学报,2006,41(3):132G134 ZhangBJ,YangL H,ChenBH,ChenYZEfectsofdryheattreatmentonseedgerminationandseedlinggrowthofsummer squashjournalofgansuagriculturaluniversity,2006,41(3):132g134(inchinese) [23] Rolston M P,HareM D,MooreK K,Christensen MJViabilityofLolium endophytefungusinseedstoredatdiferentmoisg turecontentsandtemperaturesnewzealandjournalofexperimentalagriculture,1986,14(3):297g300 [24] GundelPE,MartínezGGhersaM A,GaribaldiLA,GhersaC MViabilityofNeotyphodium endophyticfungusandendophyteg infectedandnoninfectedlolium multiflorum seedsbotany,2009,87(1):88g96 [25] 董晓飞, 李明, 姜英, 郭春莲, 姚勇干热处理对番茄种带病菌的防治效果山西农业科学,1998,26(1):49G51 DongXF,LiM,JiangY,GuoCL,YaoYThestudyofcontrolefectofdryGheattreatmentontheseedcarriedfungiandbacG teriaintomatojournalofshanxiagriculturalsciences,1998,26(1):49g51(inchinese) [26] 姚祥, 李秀璋, 朱小晓, 李春杰两种杀菌剂对中华羊茅种传内生真菌的影响草业科学,2013,30(10):1517G1522 YaoX,LiXZ,ZhuXX,LiCJEfectsoftwofungicidesonNeotyphodium seedgbornefungalendophyteoffestucasinensis PrataculturalScience,2013,30(10):1517G1522(inChinese) ( 责任编辑苟燕妮 )

第期黄雪莲等响应面优化绿色木霉菌培养基材料与方法菌种仪器与试剂菌种的活化单因素试验响应面优化试验优化工艺的验证数据处理结果与分析

第期黄雪莲等响应面优化绿色木霉菌培养基材料与方法菌种仪器与试剂菌种的活化单因素试验响应面优化试验优化工艺的验证数据处理结果与分析第卷第期年月食品与生物技术学报响应面优化绿色木霉菌培养基黄雪莲于新仲恺农业工程学院轻工食品学院广东广州利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化通过测量不同营养条件下绿色木霉菌落生长直径研究其生物学特性在单因素实验的基础上选定葡萄糖添加量丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量个因素进行中心组合实验建立二次回归方程并应用响应面分析法进行优化结果表明绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖