!! 水 产 学 报 卷 此外 研究表明软体动物中的胰岛素相关多肽主要通过调控蛋白质和糖类的代谢 进而调节软体动物内脏和壳的生长发育 近年 在杂色鲍,( 中 进行了 相关蛋白 & 的研究 结果表明 & 对杂色鲍的幼虫附着变态及成体免疫过程都发挥着重要的作用 在虾夷扇贝 " 中克隆获得了 1" 基因的

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1 第 卷第 期!"# 年 月 水 产 学 报!"!"# 文章编号 "!!!!"#!"#!!& "" #"!""' &'!"'"! 缢蛏 &'! 基因结构及生长性状相关 筛选 谢淑媚 牛东红 阮海灯 王 泽 王 飞 陈世娥 李家乐 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室 上海!"! 摘要 类胰岛素生长因子结合蛋白 是 系统的一部分 主要参与 的运输 定位和生物活性调节 本研究采用 技术和长 技术 克隆了缢蛏 1" 基因的 '# 和 # 全长序列 应用荧光定量 技术分析了缢蛏不同发育时期和不同组织中 1" 的表达特征 并进一步筛选了 1" 基因与生长性状相关的 位点 序列分析表明 缢蛏 1"'# 序列全长 " 1 包括 #: 端非编码区! 1 : 端非编码区 " 1 和开放阅读框 ' # 1 编码 "'' 个氨基酸 该基因含有保守的 端 包含 " 个半胱氨酸残基 其中 " " 个氨基酸为信号肽 属于分泌型蛋白 1"# 全长 " 1 其中包含 " 个内含子 & 1 和个外显子!! 和 # 1 荧光定量 结果显示 1" 在消化腺组织中表达量最高 在缢蛏的稚贝期 1" 呈现高表达 而在其他发育时期表达量低 在 1" 基因中筛选到 ' 个 位点 其中 " 个 位点与缢蛏的壳长和体质量呈显著相关 关键词 缢蛏 类胰岛素生长因子结合蛋白 基因表达 单核苷酸多态性 关联分析中图分类号,& # " 文献标志码 缢蛏 ( 俗称蛏子 属于双壳纲 - - 帘蛤目 "!" 竹蛏科 "! " 缢蛏属 ( 广泛分布于中国 日本和朝鲜等国的沿海地区 埋栖生活 生长快 味道鲜美 营养丰富 具有较高的经济价值 是中国四大海产贝类之一 " 近年来 随着缢蛏的人工繁育技术日趋成熟 养殖产业正在逐步形成 对生长快 养殖周期短的缢蛏品种的需求度越来越高 因此 研究与缢蛏生长发育机制相关的基因 认识其生长调控的分子机制 对缢蛏的良种选育 提高其养殖性能和推动养殖业的发展具有重要意义 类胰岛素生长因子系统!! " ( & ' " 主要由 配体 受体 "'"1 和 及 结合蛋白!! " ( & '!! 1 "! 部分组成 该系统主要介导垂体 生长激素 ( & ' 的促生长作用 与脊 椎动物的生长发育密切相关 在哺乳动物中有 个 它们在 中参与 的运输和 生物活性调节 # 对 配体功能的发挥具有重要作用 的作用机制在脊椎动物中已有大量研究 但在贝类中的研究极少 研究利用人类重组类胰岛素生长因子 " (! "'!!!! " ( & ' " ( " 注射马氏珠母贝 ", & 结果表明 实验组类胰岛素多肽受体!! " " 1"1 ""'"1 的表达量显著提高 壳基质蛋白基因的表达量显著改变 推测贝类中存在某种激素调节通路 能调控贝类的生长发育 研究发现 马氏珠母贝中存在的胰岛素相关多肽 '!!! " " 1"1 " 与其生长 增殖和代谢有关 & 收稿日期!"' " ' 修回日期!"#! " 资助项目 国家 八六三 高技术研究发展计划!" "!'!! 国家自然科学基金 "'& & 上海知识服务平台 6"! 通信作者 牛东红 (! ( " '!

2 !! 水 产 学 报 卷 此外 研究表明软体动物中的胰岛素相关多肽主要通过调控蛋白质和糖类的代谢 进而调节软体动物内脏和壳的生长发育 近年 在杂色鲍,( 中 进行了 相关蛋白 & 的研究 结果表明 & 对杂色鲍的幼虫附着变态及成体免疫过程都发挥着重要的作用 在虾夷扇贝 " 中克隆获得了 1" 基因的全长序列 研究表明其在虾夷扇贝发育的各时期和在成体的各组织中均广泛表达 且基因中存在 " 个与生长性状相关的 "! 越来越多的研究结果表明 与贝类的生长发育相关 加强对贝类 的研究 有助于为贝类的生长发育以及变态的分子调节机制的研究提供基础支持 缢蛏在我国分布广泛 一年即可性成熟 为研究贝类的生长机制提供了良好的实验条件 目前 在缢蛏中还未见报道 本研究采用 和 ; 等技术探索了缢蛏 1" 基因的结构特征及各发育时期和成体各组织的相对表达特征 筛选了与生长相关的 位点 揭示该基因与缢蛏生长的相关性 研究结果为缢蛏 1" 基因功能的研究及其生长发育的分子调控机制的研究提供理论基础 丰富了双壳贝类 1" 基因信息 为缢蛏良种选育过程中候选基因的进一步筛选提供参考 " 材料与方法 实验材料实验所用缢蛏均在浙江省宁海市长街镇岳井洋缢蛏良种繁殖场采集 随机选取同一批繁殖的 '! 个 " 龄缢蛏进行编号 测量其壳长 #! & 壳宽 " '"!" 壳高 "&##!" 和体质量! " 取外套膜置于无水乙醇中 常温保存 用于筛选生长相关 位点 挑选 个健康的 " 龄缢蛏 分别取外套膜 水管 斧足 鳃 消化腺和性腺组织 放在装有 " 的 "# " &"" 离心管中 ' 保存 缢蛏早期发育阶段的样本分装在装有 " 的 "# " &"" 离心管中 ' 保存 低温运回实验室后 抽除 " 液氮预冷 保存于! 备用 总, 和基因组 的提取参照 1"1 1 " 动物组织总 提取试 剂盒! "! 说明书提取总 "3 琼脂糖凝胶电泳检测 的完整性 用! # 1!!! 检测 的浓度和 #! #! 的比值 保存于! 备用 利用海洋动物组织基因组 # 提取试剂盒! "! 提取 #"3 琼脂糖凝胶电泳检测 # 的完整性 用! # 1!!! 测定 # 的纯度和浓度 保存于! 备用 &'! 基因 模板的合成参照 # '# 1 & '! 8 "!! " 试剂盒操作要求合成 #: " '# 根据 : " " ( " ' 1 " 8 试剂盒使用说明合成 : " '# 用 " ' 1 " 9 "&"' " " 进行反转录 所得的 '# 作为荧光定量 的模板! 保存备用 &'! 片段的获得在缢蛏消化腺 '# 文库中检索到 1" 片段的序列 "" 根据该序列设计上 下游引物并扩增 引物信息见表 " 扩增体系为! " 9 "! " 和 " 各! "! '# 模板 和 " &"" " 反应条件为 '!'! #! &! # 个循环 & "!!' 保存 扩增产物经 "3 琼脂糖凝胶电泳验证后割胶回收 9 "! 并按说明书进行纯化 将回收产物连接至 " 载体 " " 连接 " ( 热激转化 # # 大肠杆菌! "! 挑选 个阳性克隆送交上海生工生物工程有限公司测序 全长及基因组序列的扩增根据获得的 '# 中间片段 分别设计用于 : 和 #: 端扩增的引物 " 和 以稀释 "! 倍后的 '# 为模板 用正向引物 和 " " 进行 : 扩增 体系为 '# " '#! &" 和 " " 各 " "! &", "" # "#! #!"&# " &"" ""' &# 条件为 '!'!!! & "! # 个循环 & "!! 利用反向引物 " 和 进行 #: 扩增 体系包括 '# "# "! # -! " &" # 9 "!!# #! #

3 期谢淑媚 等 缢蛏 1" 基因结构及生长性状相关 筛选!" -! " 1 " " 9!# "! 引物 # " 引物!# " &"" " "&# 条件为 '!'!! & "! # 个循环 & "!! 将 : 和 #: 所得产物送交上海生工生物工程有限公司测序 表 &'! 序列克隆 荧光定量 (, 及检测 位点的引物 & # ## 5# & (, # # 引物名称 1 " 引物序列 1 ""; "!'"#: : 引物用途 " " 中间片段扩增 " 1 & "! 1 & '! #: ( #: " #: " : : # 全长克隆 & "! ( '!" &# " 荧光定量 " "" 荧光定量 "" " 含 位点的片段扩增 " & "! 1 & '! " 检测 位点 " 1 " 含 位点的片段扩增 & "! 1 & '! 检测 位点 " 1 " 含 位点的片段扩增 & "! 1 & '! 检测 位点 " 1 " ' 含 位点的片段扩增 ' & "! 1 & '! ' 检测 位点 " 1 " 基因组序列的扩增方法是利用获得的全长 '# 序列 根据 的前后! 个碱基序列设计引物 和 扩增内含子 以纯度高且完整的 # 为模板 扩增体系为 # 9! #!" # "! 9! &", 1 # 9 " 各 # 上 下游引物 "! 各!# " &"" ""& &# 扩增条件为 ' #!'! #!! & '! # 个循 环 & "!! 将产物送交上海生工生物工程有限公司测序 荧光定量 (, 用已获得的全长 '# 序列设计荧光定量 的引物 用 & 个 # 倍浓度梯度稀释的 '# #! # " # # # ' # # # 绘制标准曲线 获得扩增效率介于 #3 "!#3 且无非特异性扩增产物的引物 以稀释 "! 倍后的 '# 为扩增模板 根据 7 " 9 9 ; "

4 ! 水 产 学 报 卷 试剂盒 8 操作说明进行相对定量分析 荧光定量 扩增条件为 #! # "! #&! &! '! 个循环 延伸阶段收集信号 从 # 到 # 每个循环增加!# 持续 # 获得解链温度 采集溶解曲线荧光信号 同时使用无酶水代替模板的反应体系做空白对照 生长性状相关 位点筛选和 分型在 " 龄缢蛏中随机选取 个体质量较大的个体 "!!& 和 个体质量较小的个体 #'!# 用 引物扩增 1" 基因 # 全长 反应体系和方法同基因组序列的扩增方法 将扩增产物送交上海生工生物工程有限公司测序 根据测序结果统计单核苷酸突变位点 分型采用 7 质谱检测方法 由上海邃志生物科技有限公司进行检测 具体方法为根据统计的单核苷酸突变位点进行 引物和延伸引物的设计 引物用于扩增含 位点的片段 延伸引物用于延伸该检测 碱基 分型操作第一步 通过多重 扩增目标序列 扩增体系为 #"! #!" "! &" 含 " 9 " 各 # " 多对 引物混合液 "! " " &"" "!# 扩增条件为 ' "#!'! #! & "!'# 个循环 &! 第二步 对扩增后的反应液进行 处理 反应液体系 " &"" ""# "! &"!"& 酶 "! 处理程序 & '!! # #!' 保存 第三步 延伸反应 配制 "9 反应试剂 " &"" "!&## "! "9 &"! "9 "!! 9! 多种延伸引物混合液!!' "9 " "!!'" 加入到上述反应液中 混匀 延伸程序 '! ' # # #! # # 个循环 '! 个循环 &!' 保存 对延伸产物进行树脂纯化 然后进行! 1"!" 1"' 芯片点样 7! " 1 ' 质谱检测 7 软件分析实验结果 从而获得分型数据 6 数据统计与分析实验数据采用平均值 标准差表示 实验结果通过 "&" 软件进行 与生长性状的 关联分析 先对数据做单因素方差分析 若组间有显著差异 再进行 #!'! 多重比较分析 "!!# 时认为差异显著 并用 1 "!" 软件对突变位点进行群体哈迪 温伯格平衡检验 采用 #! 软件将测序所得 : 端和 #: 端的 '# 片段拼接得到 '# 全长 通过!" 网站 ( 1!'!! ( - 1 "' & 获得开放阅读框 1"! "! & " 利用 网站 ( 1!'!! ( - ' 进行氨基酸预测 用! 程序 ( 1 ' "- '"! 预测蛋白信号肽 利用 程序 ( 1 " " 预测编码蛋白的理化性质 通过 1" 程序 ( 1 "!" & " #(& ( 分析蛋白的跨膜结构 使用 1"! "' 的! "1 '! 程序 ( 1 " '! "1 '!( 预测蛋白结构域 使用 5 程序 ( 1 " ' ' 进行序列多重比对分析 #! 和邻接法 " (!! " ( 构建系统发育树 荧光定量 相关系数 解链温度等系列参数通过 "!!! (" ' '" 自带软件 " 0! " " 得出后导出至 ' & 9'" 表格以供后续分析 目的基因与内参基因 " 的相对表达量采用 方法计算 根据所得数据 采用 "! 软件绘图 结果 &'! 基因序列分析经 # 软件拼接 缢蛏 1" 基因 '# 全长共 " 1 "!! 登录号 8'#&' 图 " 其 #: 端非编码区长! 1 : 端非编码区长 " 1 开放阅读框 ' # 1 " '# 1 1" 的基因组 # 全长 " 1 "!! 登录号 8'#&' 包括 " 个内含子和个外显子 内含子 & 1 外显子分别为!! 和 # 1 剪切符合 剪接规则 经 推测 1" 基因编码蛋白含 "'' 个氨基酸 理论分子量为 "# 等电点为 呈弱酸性! 的预测结果为 蛋白 端的 " " 个氨基酸构成信号肽结构 经 1"

5 期谢淑媚 等 缢蛏 1" 基因结构及生长性状相关 筛选! 初步推断 该蛋白是非跨膜蛋白 经 网站 "- '" 工具! " '! 程序分析蛋白序列的保守结构域 此蛋白在 ' " 位氨基酸为!! " 保守基序 在 " & 位氨基酸为 保守结构域!!! & 的 个成员!! "!!" " 和 #" 该结构域富含半胱氨酸残基 在 位氨基酸为 ( & ' "'"1! 保守结构域 #&" ' 该结构域为具有与 受体 结合能力的保守基序 图 缢蛏 &'! 基因 全长序列及其氨基酸序列小写字母为非编码区 大写字母为编码区 框中依次为起始密码子 保守基序 00 和 : 端加尾信号 下划线为信号肽区域 灰色阴影部分为 保守结构域 双下划线表示半胱氨酸残基 表示终止密码子! & &'! " " "' "! 11"' " " "! ' " (" :! #:! '! '!"-" & 00! 1 "!!! " " 9("! 1"1 "! ' "; "!'" " " '!"!"("'!"-" "! ( "! ' "!"" " "!! " "!"!"(" "! ' " (" 1 '! 的 端结构高度保守 富含 " 个半胱氨酸的保守位点 '!"-" " 脊椎动物的 00 的保守基序 在缢蛏中表现为 00 图 同源性分析表明 缢蛏 端与人和鼠的 # 端相似度较其他结合蛋白的高 均为 '!3 根据缢蛏 虾夷扇贝 杂色鲍 & 与脊椎动物 的 氨基酸序列构建系统进化树 图 对该进化树的拓扑结构进行了自展检验 1 重复抽样次数为 "!!! 次 结果表明 系统进化树分为两大支 贝类 聚为一支 脊椎动物的聚为一支 这与生物进化的方向一致 脊椎动物的 为一支 " 和 ' 聚为一支 和 # 聚为一支

6 666 ;39 水6产6学6报 0 卷 图 #缢蛏 U O?VA的 J端结构域与其他物种 U O?VA的 J端结构域的氨基酸序列比对 相同和相似氨基酸用相同颜色的阴影表示"其中暗红色 -阴影为半胱氨酸残基?, 3" #JS 5 8, '-'8, 0S ', 1 K; 1', :,( ', 5 U O?VA , 1 B 3L 9 < 0< 3B A ; 0 < A B A< B B 3 < ;9 0 "< 3B 9 NA L 3 A B< ;< M B JN N< 0 B 9 0 表 #用于构建 JP 树的氨基酸序列号 &" #G8, 0 ', 1 K; 1;1 7 0JP 5 基因名称? 33< ; 物种 A I 9 A O 3K< 3M 登录号 O 3K< 3M 31 LAI 虾夷扇贝," ( ( ( V(;3183 LAI8 杂色鲍 (! (539 1 LAI9 牙鲆 71 7" V! LAI 斑马鱼 C, 8; 1 LAI 斑马鱼 C, 95; 1 LAI 斑马鱼 C, LAI5 斑马鱼 C, V! LAI1 斑马鱼 C, LAI 鸡 L, LAI 鸡 L, LAI9 鸡 L, LAI5 鸡 L,- HP: LAI # LAI # LAI # 3330; 1 LAI9 # LAI5 # -951;;30 1 LAI1 # 338; 1 LAI 小鼠 ;,9 ' 33;9 1 9 LAI 小鼠 ;,9 ' 33;9 1 LAI 小鼠 ;,9 ' 33;9 1 LAI9 小鼠 ;,9 ' LAI5 小鼠 ;,9 ' 335; 1 LAI1 小鼠 ;,9 ' -C33;9!" " #!!& ' (, -'

7 期谢淑媚 等 缢蛏 1" 基因结构及生长性状相关 筛选!# 图 基于 7 8 氨基酸序列构建的系统发育树缢蛏 用 标注 建树物种 氨基酸序列号见表! "! # 7 8& 5 (" "! ' " (" &! "!! ''"!! " "( "! &'! 基因的时空表达分析采用实时荧光定量 方法检测了 1" 的相对表达情况 结果表明 1" 在缢蛏成体的消化腺组织中表达水平最高 性腺次之 在外套膜 斧足 水管和鳃组织中只能检测到少量表达 图 ' 在缢蛏胚胎发育的卵裂期也可检测到 1" 的表达 担轮期表达量下降 随着发育的进行 表达量逐渐升高 至单水管期 表达量明显上升 在稚贝期中的表达量达到最高 图 # &'! 的 位点与生长性状的关联分析在缢蛏 1" 基因组 # 中 检测到 ' 个 位点 分别位于基因组 # 的 " " " # " 和 '! 1 位置 对 '! 个缢蛏个体进行 分型 发现 ' 个 位点均发生 突变 " 1 位置的突变检测到 种基因型 其他 个位置的突变检测到两种基因型 表 ' 个位点中 有 个位点符合哈迪 温伯格平衡 通过与生长性状的关联分析表明 " 位点的 基因型个体的壳长大于 基因型的缢蛏个体 "!!# 基因型个体的体质量显著大于 和 基因型的缢蛏个体 "!!# 1" 基因组的其他 个位点的突变与生长性状无显著相关性

8 ! 水 产 学 报 卷 图 缢蛏 &'! 组织分布图 " 外套膜 鳃 斧足 ' 性腺 # 消化腺 水管! 3" &'!! 3 # " " "! " & '! # " -"! 1(! 图 缢蛏 &'! 发育时期表达图 " 卵裂期 担轮期 面盘期 ' 壳顶期 # 匍匐期 单水管期 & 稚贝期!, # &, 3" &'!!! "& # " " """!" 1( " -" " ' - " #'""1! - "! "1 1" " &-"! " 表 缢蛏 &'! 的 位点与生长性状的关联分析 ## # & # #! # " # 位置 ' 基因型 "! 1" 样本量 哈迪 温伯格平衡 " 值 5 "- " 壳长 壳宽 5 壳高 体质量 5 " " "!! "!" # "& " & "!" "&!' " "&!!' #!" " "!! "&##! "! "" "#!!" "! #!#!# " " "!!'" # "&& #! # ' "!! "&#'! " "' "!! & "!!! # " "!! "&##!! ""!! #"#" #& " # "! "&!&& & "!!! & #'! # "!'! "&! # "'' '!!!" "! #'&! "'! "! " "&!# #! "&!! # & " '!!" "&#!! "' "' 注 表示基因型样本量 表示基因型频率 5 表示哈迪 温伯格平衡 表示壳长 表示壳高 5 表示壳宽 5 表示体质量 数值均以平均值 标准差表示 与 有显著性差异 "!!# 与 均无显著性差异 "! " &' "! 1"&"; "!' 5 "! 5"! " ; (""! ( ("(" ( 5(" ( 5 " ( (" ( " -"! (" "!! "-!5 (! " '! &" ' ("- " ( 1"' 1! & '! &""! & (( 1"' 1 "!!#! - " ( 1"' 1!! & '! &""! & (( ( 讨论分泌蛋白是在细胞内合成 在胞外发挥生物学作用的蛋白 信号肽是指导蛋白质跨膜转移的氨基酸序列 一般位于分泌蛋白的 端 本实验克隆的缢蛏 1" 基因编码的氨基酸经! 程序分析 端的前 " 个氨基酸为信号肽结构 经 1" 程序分析为非跨膜蛋白 说明该蛋白属于分泌型蛋白 此推测与已知的 的作 " 用方式相符 分泌到细胞外 与 结 合并延长 的半衰期 促进或抑制 的生物活性 " 蛋白质的进化在生物进化的过程中起中心作用 类似结构域出现在不同的蛋白质分子中 推测其可能是来源于共同祖先的基因 "' 脊椎动物中的 有高度同源性 其共同的结构特征 " 个含 " 个 残基的高度保守的 末端区 " 个含 个 残基的 末端保守区和 " 个高度可变的 区 "# 在脊椎动物中 残基形成系列二硫键 端主要与 结合 并使 的部分

9 期谢淑媚 等 缢蛏 1" 基因结构及生长性状相关 筛选!& 氨基酸残基暴露 以便与 结合 "# " 端与 或者 端连接 保持 端与 的结合和稳定 " 区是每个 最独特的区域 它使 的结构和功能有差异 " 缢蛏 成熟肽的 端保守区包含 " 个 氨基酸 与脊椎动物相同 由此推测缢蛏 的 端有与脊椎动物相似的功能 能与 配体结合 并调节其活性 "# 缢蛏 端的 00 保守基序与脊椎动物的 00 稍有差异 且 的 区大部分缺失 端不含甲状腺球蛋白结构域 (! 1" " "1" "& 缢蛏的 结构与虾夷扇贝的相似 "! 贝类 与脊椎动物 在结构上的差异暗示两者之间存在不同的生物学功能 这可能与 蛋白的进化相关 结构域可能是蛋白质进化的一种遗传单位 产生新蛋白的方式之一是结构域的组合 " 推测 的祖先基因可能只有 端保守结构域 在进化的过程中 与甲状腺球蛋白结构域进行组合 产生新的 蛋白 由于两个结构域的折叠需要更大的空间 所以 区变长 随着生物的进化 趋向于专一性和特异性 因此分化出了 " 在脊椎动物中经过长期的进化和演变 分枝出 " 和 随后的基因复制事件使 " 分化出 和 ' 分化出 # " 目前 关于贝类 研究很少 仅在杂色 "! 鲍和虾夷扇贝中有相关报道 在本实验中 对 1" 在缢蛏外套膜 水管 斧足 鳃 性腺和消化腺 个组织中的实时荧光定量分析表明 1" 基因在消化腺中表达量高 在性腺中次之 在外套膜等其他组织中表达量低 推测其与消化腺的功能相关 缢蛏消化腺是合成 分泌消化酶的主要器官 具有很强的细胞吸收和细胞内消 化的功能 还参与无机盐的代谢! 与脊椎动物中肝脏的功能类似 脊椎动物中 有自分泌和旁分泌的功能 但主要在肝脏中合成 并运输到 其他组织中发挥作用 因此 推测缢蛏 作为 的运输蛋白 主要在消化腺中合成 脊 椎动物中肝脏是分泌 " 的主要器官 " 研究表明 成体斑马鱼的 " 只在肝脏中表 达 五条, 和牙鲆 的 在肝脏中表达量最高 ' 此外 " 在牙鲆胚胎发育的各阶段的表达量均处 于较低水平 仅在牙鲆出膜后 及变态前出现高峰 在变态期表达量最高 对牙鲆的变态发育有 重要作用 ' 缢蛏 从受精卵至匍匐期阶段 表达量均处于较低水平 单水管期表达水平明显升高 稚贝期表达水平最高 表明 可能对缢蛏的发育有重要作用 缢蛏 1" 的基因组结构包含 " 个内含子和两个外显子 与生长性状的关联分析表明 " 位点的 基因型的缢蛏体质量和壳长显著大于 基因型 在虾夷扇贝的 1" 中 也检测到了 " 个与体质量和壳长显著相关的突变位点 "! 在脊椎动物中主要与 结合调控生长和发育 # 而且内含子位点的突变与基 因转录调控有关 # 因此 基因的位点突变有可能会影响到缢蛏 的翻译 结构和功能 进 而对生长性状产生影响 # 1" 的位点突变对缢蛏生长性状的影响机制还有待进一步的研究 参考文献 " 0 6(! " "!" - -" & (! "! ' "!'""!! "" " 徐凤山 张素萍 中国海产双壳贝图志 北京 科学出版社!! "" " 5 5 #! "!!! " ( & '!!! & (! "!! "- " &!!# ' "# # #! 0, " &!! " ( & '!! 1 "!! "! '! "!"! 1 -"! '!!!#"' " '' # '! 8 ( "!!! " ( & '! & ( ' "!'" "!! "!!!' "## "# # #! 1"' &! ("'" "1!"! " &!! 1 "!! &! '!!! "&#" '" #' 6(! " 0 &"' & ( (!"!!! " ( & '! (" ( " " "!" "91"!! ", &! & 1 ' '"! 1(!" " "!" 张立娟 何毛贤 生长激素与胰岛素样生长因子 对马氏珠母贝壳生长形成相关基因表达的影响 热带海洋学报!" " "!" & ( 7! 7 7 " 0 "' "! & '!

10 ! 水 产 学 报 卷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谢雪英 李鑫 曹晨 基于复杂网络的蛋白质结构域组进化分析 生物物理学报!"! " ""'# ""# "# ( 7 "!&" ("!! " ( & '!! 1 "! 1"&! '!""- " "! &" & & "!" " 5 & "&!! 1 "! #"9 "1 "! (" "! "&"'!!! &! '!!! "& ' ''! "& -!"' 8 # # -"! "-! & (" (! 1" "! 1"& "'! -!!! ' &'' &## "! # 0 ' "!! 1 "! ' "! &!'! "! "! 1( '"& ' ' ' 廉德君 许根俊 蛋白质结构与功能中的结构域 生物化学与生物物理进展 "& ' ' ' " " #! ( 1! ( "!" '! & ("!! " ( & '!! 1 "!! " " 1 "! "!" & " "!"! 1 -"! '!!! "##"!"!&!0 0 6("! '! ( " ' "! " -" -" ' & (! & (" " & (!!! & #! 许星鸿 郑家声 缢蛏消化盲囊的组织学与组织化学 水产学报!! & #! """#! -" "# "!! &!'! &!! " ( & '!! 1 "! " '""! & (" ' " & 91" "!! " '!""!'" ' " #! ' " "-" 1 "! "91"!! 1( ' "! &" & (!! 1 "! "! '!!! "' & & & " " "' ' "! "! 1 "!!!! "! & "! #! ", "!"! 1 -"! '!!! "" '' # '6( 5 7"! & '!!!'!! & "! " &" ( # (! ( (! ( '"!! -"!" 翟万 营 牙鲆 " " 基因的克隆及功能研 究 上海 上海海洋大学!" # (!!! -!! &!'! "! 1!!! "!" '! #"-" 1 "! "' ' "

11 期谢淑媚 等 缢蛏 1" 基因结构及生长性状相关 筛选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