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3 ! 第"期 赵! 睿 等 亲和色谱中配基的筛选与应用 进行筛 选 的 寡 核 苷 酸 库 组 合 化 学!"#$%& (")% * #$ "%!+,#%-(). 合成肽库或小分子库 # - 杆菌内繁殖后再进 行 下 一 轮 筛 选 得 到 亲 和 力 更 高 以及酶解蛋白 的克隆体 经多次 亲和吸 附6洗脱6扩增 的 步骤可 形成的小肽库等 当 然 也 可 以 利 用 数 目 巨 大 的 天 以将筛选 出 的 载 有 外 源 多 肽 的 噬 菌 体 进 行 高 倍 扩 然 库 如微生物代谢 物 天 然 药 物 提 取 物 等 但 因 增 然后经 345 测 定 便 可 以 方 便 地 确 定 所 筛 选 目的物的结构确定较为困难 故目前报道较少 出的多肽的序列 #& 例如 作者 实验室 以所 建立的!! 上述方法中 源 于 生 物 化 学 方 法 的 噬 菌 体 展 示 甲型流感病毒融合肽高效柱亲和色 谱体系 对 78 噬 和 /0102 技术因巧妙地利用了生物学放大功能 尤 菌体 & 肽库及 9# 噬菌体 #( 肽库 进行了 亲 和 配 基 为引人注目 丝状噬菌体是一种可感染大肠杆菌的 筛选 通过 轮筛选 及 345 测 序 得 到 了 一 组 对 甲 病毒 系由外壳蛋白包裹 345 组成 直径约 & &# 型流感病 毒 有 较 强 结 合 力 的 活 性 多 肽 其 中 一 个 长度约 #!# 通过基因工程的方法 可以将外源蛋 #( 肽 的 序 列 为 : *61.-69,(6;*.6: *6;*.6: *6<.-6 白或多肽展示于其外壳蛋白上 见图 # 如 果 在 基 <.-65)=6/,)65)=6;*.6<.-6;*. 该多 肽 与 固 定 化 融 因操作时 引 入 一 段 无 规 345 序 列 则 可 在 其 相 应 合肽之间的解离常 数 为 #) *$ + #%, ( #"* > 1 表 现 出 外壳蛋白上插入 一 段 随 机 变 化 的 融 合 肽 这 样 等 了较明显的亲和 力 "# 这 一 方 法 不 需 要 特 殊 的 仪 于构建了一个随机多肽库 当对目标蛋白进行筛选 器设备 相 对 简 单 方 便 但 缺 点 是 筛 选 过 程 比 较 繁 时 便可得到亲 和 力 较 高 的 克 隆 体 将 其 引 入 大 肠 琐 流程较长 图! " 丝状噬菌体的示意图!"#$! " %& ()*+"&,"(-./ * /"0*)( *#( %- # A")!" ), $"C( 7%D,!"@%,- "& "&,,&8 "7 )(%!*, &8 (+, "& (+, "(+,),&8B!! /0102 技 术 可 用 于 筛 选 与 目 标 分 子 特 异 性 结 且具有很好的组织 通 透 性 因 而 有 望 取 代 抗 体 分 子 合的寡核苷酸 即 所 谓 核 酸 适 #,) 寡 成为新的 治 疗 和 诊 断 工 具 /0102 技 术 不 仅 在 生 核苷酸因自身链上 碱 基 分 子 间 的 相 互 作 用 很 容 易 形 成 特 定 的 空 间 结 构 如 大 小 形 状 各 异 的 发 卡 + %)@%& 假 和 凸 环 $C*=, 等 它们有可 能 与 任 何 分 子 适 配 而 产 生 特 异的相互作用 在进行 /0102 筛选之前 需首先建 立一个 具 有 适 当 长 度 的 大 容 量 随 机 单 链 345 文 库 可直接使用此 文 库 进 行 筛 选 亦 可 令 其 转 录 为 核糖核 酸 I45 文 库 后 再 以 靶 分 子 对 其 进 行 筛 选 以适当的方法分离被亲和吸附 的 I45 或 345 分子 经 洗 脱 富 集 后 以 反 转 录6聚 合 酶 链 反 应 J<I 技术或 J<I 直接进行扩增 然后进行下一轮 筛选 这样 经多轮 筛 选 后 即 可 筛 选 出 对 靶 分 子 具 有高亲和力的 I45 或 345 分 子 测 序 分 析 后 便 可 以得到目标 配 基 即 核 酸 适 体 见 图 " /0102 技 术合成简便 库容 巨 大 分 子 多 样 性 好 可 以 通 过 生 物学方法进行放大 和 扩 增 筛 选 出 的 核 酸 适 体 稳 定 性好 且易于进行 进 一 步 的 化 学 加 工 标 记 与 修 饰 此外 由于适体分子的分子质量较小 没有免疫原性 图 # " 核酸适体的体外筛选程序!$!"#$ # "!" #$%& 3(0(&+".1 3& ()(./ *4+*)(53!$ E%&8,)- 7") -@,!%7%! ( )=,(- ), -,@ ) (,8 7)"# +C=, ) &6 8"#%F,8 *%$) ). $. -,@ ) (%&= (, (" (+, ( )=,(B?+, $"C&8 #"*,!C*,- ), ),=,&,) (,8 $. #@*%7%! -,- 7") (+, &,G( -,*,!(%"&!.!*,B

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