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1 470 南京中医药大学学报 2017 年 9 月第 33 卷第 5 期 J NanjingUnivTraditChinMedVol.33No.4Sep.2017 熟大黄水煎液中化学成分含量测定及其药效学研究 朱慧, 刘晓, 祝婷婷, 汪小莉, 朱晓钗, 蔡宝昌,3* (1. 南京中医药大学药学院, 江苏南京 ;2. 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心, 江苏省中药炮制重点 实验室, 江苏南京 ;3. 南京海昌中药集团有限公司, 江苏南京 ) 摘要 : 目的建立熟大黄水煎液中主要化学成分的含量测定方法并观察其对热毒血瘀模型大鼠的治疗作用 方法采用 Hȳ persilgoldc18 柱, 以 0.1% 磷酸水 (A)- 乙腈 (B) 进行梯度洗脱, 检测波长为 254nm, 柱温 30, 在此条件下进行方法学验证及水煎液样品含量测定 给予热毒血瘀模型大鼠熟大黄水煎剂, 取其腹主动脉血液检测以获得血液流变学参数, 并测定血浆中血栓素 B2(TXB2) 6 酮前列腺素 (6 keto PGF1α) 的含量 结果所建立的含量测定方法在一定浓度范围内线性关系良好, 精密度 重复性 稳定性及回收率均符合相关要求 熟大黄水煎液能显著降低模型大鼠的全血粘度 (P<0.05) 血浆粘度 (P< 0.01) 和血液中纤维蛋白原含量 (P<0.01),TT(P<0.01) 和 PT(P<0.01) 值显著延长, 同时 TXB2 水平显著降低 (P<0.05) 而 6 keto PGF1α 水平显著升高 (P<0.05),TXB2/6 keto PGF1α 含量比值极显著下降 (P<0.01) 被纠正趋向正常 结论该方法简便 准确可靠, 可用于熟大黄水煎液的质量评价与控制 熟大黄能有效改善热毒血瘀模型大鼠血液流变学状态, 促进 PGI2 分泌同时减少 TXA2 的生成, 纠正 TXB2/6 keto PGF1α 比值失衡, 从而改善血管内皮功能并恢复血液循环, 起到活血化瘀的作用 关键词 : 熟大黄 ; 含量测定 ; 高效液相色谱法 ; 热毒血瘀证 ; 血液流变学中图号 :R284.1 文献标志码 :A 文章编号 : (2017) DOI: /j.issn DeterminationoftheRelatedComponentsinPreparedRhubarbDecoctionandItsPharmacodynamicsStudy ZHU Hui 12 LIUXiao 12 ZHUTing ting 12 WANGXiao li 12 ZHUXiao chai 12 CAIBao chang 123* 1 Colegeof Pharmacy Nanjing UniversityofChinese Medicine Nanjing China 2 EngineeringCenterof StateMinistryofEducationforStandardizationofChineseMedicineProcesing NanjingUniversityofChineseMedicine KeyLaboratoryofStateAdministrationofTCMforStandardizationofChineseMedicineProcesing NanjingUniversity ofchinese Medicine Nanjing China 3 Nanjing Haichang Chinese MedicineGroup Corporation Nanjing China ABSTRACT OBJECTIVE TodevelopanHPLC methodfordeterminationofmaincomponentsinpreparedrhubarbdecoction andinvestigateitsefectsonratswithnoxiousheatbloodstasissyndrome METHODS TheanalysiswasperformedonaHȳ persilgoldc18columnwiththemobilephaseof0 1% phosphoricacidsolution A acetonitrile B Thedetection wavelengthwassetat254nmandthecolumntemperaturewas30 Themethodwasvalidatedandthesamplesweredetermined underthiscondition Theabdominalaorticbloodofratswithnoxiousheatbloodstasissyndromewascolectedandtestedto obtainthehemorheologicalparameters Also thetxb2and6 keto PGF1αlevelsinratsplasmaweremeasured RESULTS ThedevelopedHPLC methodshowedgoodlinearitywithincertainconcentrationranges Andtheprecision repeatability stabilityandrecoveryalmettherequirements Comparedwithratsinmodelgroup thewholebloodviscosityatfourshearrates P<0 05 plasmaviscosityp<0 01 andthelevelofplasmafibrinogencontentp<0 01 inthehighdosegroupweresiḡ nificantlydecreasedafterdoing andthett P<0 01 andpt P<0 01 valuesweresignificantlyprolonged Furthermore thelevelsoftxb2 decreased P<0 05 and6 keto PGF1αincreased P <0 05 weresignificantlychanged andtheirratio wascorrectedtobenormal CONCLUSION Themethodwassimple accurateandreliable whichcouldbeusedforquality controlofpreparedrhubarbdecoction Preparedrhubarbcouldimprovevascularendothelialfunctionbymodifyingbloodrheology promotingthesecretionofpgi2 reducingthegenerationoftxa2andrecoveringthebalanceoftxb2 6 keto PGF1α 收稿日期 : ; 修稿日期 : 基金项目 : 江苏省自然科学基金青年项目 ( ); 江苏省高等学校自然科学研究重大项目 (17KJA360006) 作者简介 : 朱慧 (1993-), 女, 江苏南京人, 南京中医药大学 2015 级硕士研究生 * 通信作者 :bccai@126.com

2 朱慧, 等 : 熟大黄水煎液中化学成分含量测定及其药效学研究 第 5 期 471 KEY WORDS Preparedrhubarb Assay HPLC Noxiousheatbloodstasissyndrome Hemorheology 大黄为临床常用中药, 性味苦寒, 具有攻积泻 下 泻火解毒之功效 熟大黄作为大黄的主要炮制 品之一, 经酒蒸法炮制后其苦寒之性变缓, 泻下作用 减轻而活血化瘀之功显著增强 以熟大黄为主药的 组方如大黄 虫丸 下瘀血汤和抵当汤改良方等, 都 具有较好的祛瘀通络生新作用 熟大黄在临床上对 脑出血及上消化道出血均有较好的治疗效果, 小剂 量的熟大黄还可预防妊娠高血压综合征 [1] 现代研 究表明, 血液流变学是对血液的流体力学特性较为 全面地表述, 是血液系统疾病诊断时必要的检测参 数, 能够反映血液及其有形成分的流动与变形规律, 但无法反映机体的复杂病理变化 血浆中血栓素 A2(TXA2) 和前列环素 (PGI2) 的动态平衡对维持血 管紧张性 协调性和溶血机制有重要作用, 二者的比 值失调在冠心病, 动脉粥样硬化和微血管病变等疾 病的发生发展中可能起重要作用, 临床通过检测其 代谢产物血栓素 B2/6 前列腺素 (TXB2/6 keto PGF1α) 的比值代表二者在体内的变化 目前关于 熟大黄活血化瘀作用的研究多采用药物醇提液作为 药效学实验中的给药形式 [2 3], 这与临床实际给药方 式并不相符 综上所述, 根据中医药理论指导结合 药物药性, 本文选择构建大鼠热毒血瘀模型, 并给予 动物熟大黄水煎剂进行治疗, 通过测定熟大黄水煎 液中 6 种主要成分的含量并考察其对热毒血瘀证模 型大鼠的 TXB2/6 keto PGF1α 的影响, 同时辅以血 液流变学相关指标考察, 旨在为临床用药提供科学 依据并进一步探讨大黄经过酒蒸炮制后发挥活血化 瘀作用的分子机制 1 材料 1.1 药材 大黄药材购于南京海昌中药有限公司 ( 四川, 批 号 :140510), 经生药学鉴定为蓼科植物药用大黄 RheumofioinaleBail 的干燥根及根茎, 依 2015 年版 中国药典 大黄项下测定均符合规定 熟大 黄 : 参考 2015 年版 中国药典 附录 Ⅱ D 及相关文 献, 取生大黄片 ( 厚度约 2~4mm), 加入酒水 ( 黄酒 水 =1 1) 拌勾, 闷润 1.5h, 置笼屉内, 隔水蒸 24 h, 取出于 60 下烘干 每 100g 药材, 加黄酒 30g 及水 30g, 蒸至内外均呈黑色, 依 2015 年版 中国药 典 熟大黄项下测定均符合规定 [4] 1.2 试药 大黄酸 大黄素 芦荟大黄素 大黄酚及大黄素 甲醚对照品 ( 成都曼斯特生物科技有限公司, 批号 : MUST ), 分析纯磷酸 ( 上海凌峰化学试剂有限公 司 ), 色谱级甲醇 (CNW, 上海安谱实验科技股份有 限公司 ) 脂多糖 ( 北京 BIOSHARP 有限公司 ), 盐 酸肾上腺素注射液 ( 天津金耀药业有限公司 ),0.9% 氯化钠注射液 ( 江苏强生生物科技有限公司 ), 复方 丹参滴丸 ( 天津天士力制药股份有限公司 ), 水合氯 醛 ( 国药集团化学试剂有限公司 ), 一次性使用静脉 血样采集针 ( 山东省成武县医用制品厂 ), 一次性使 用静脉血样采集容器 ( 添加肝素钠, 生产批号 : , 江苏康捷医疗器械有限公司 ), 凝血四项 试剂盒 ( 北京世帝科学仪器有限公司 ), 大鼠血栓素 B2 大鼠 6 酮前列腺素 ELISA 试剂盒 ( 南京金益柏 生物科技有限公司 ) 1.3 实验仪器 LC 2010A 高效液相色谱仪 ( 日本 Shimadzu), AG 285 型十万分之一天平 ( 瑞典 METTLER TO- LEDO), 超纯水仪 ( 美国 Milipore),SL16R 离心机 ( 美国 Thermo) 白鸽 TGL 16G 高速离心机 ( 上海 安亭科学仪器厂 ), 众驰 ZL1000i 血液流变仪 ( 北京 众驰伟业科技发展有限公司 ), 世帝 LG PABER 1CH 血凝仪 ( 北京世帝科学仪器有限公司 ), ELx800 全自动酶标仪 ( 美国 BioTek 仪器有限公 司 ) 1.4 实验动物 SPF 级 SD 大鼠 30 只, 雄性, 体质量 (250±20) g, 实验动物生产许可证号 :SCXK( 浙 ) 大鼠随机分为空白组, 模型组, 阳性药组, 熟大黄低 剂量组及熟大黄高剂量组, 每组 6 只, 实验前适应性 饲养一周, 大鼠自由饮水, 进食标准大鼠饲料, 温度 (22±2), 湿度 40%~60% 2 方法 2.1 水煎液中主要成分的含量测定 熟大黄药液的制备取熟大黄饮片适量, 加 入 10 倍量水浸泡 30min 后武火煮沸, 文火保持微 沸 30min, 滤过 药渣再加入 8 倍量水按相同方法 煎煮, 将煎液滤过, 合并两次滤液 [5] 供试品溶液的制备取 1mL 熟大黄水煎 液, 加入 4mL 甲醇, 充分混合后高速离心 (13000r/

3 472 南京中医药大学学报 2017 年 9 月第 33 卷第 5 期 min,10min), 吸取上清液过 0.45μm 微孔滤膜, 得 供试品溶液 对照品溶液的制备分别精密称取没食子 酸 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚及大黄素甲 醚对照品适量于容量品中, 加甲醇定容至刻度, 摇匀 得到浓度为 : 没食子酸 3mg/mL 芦荟大黄素 53.2 μg/ml 大黄酸 50μg/mL 大黄素 65μg/mL 大黄酚 62.7μg/mL 大黄素甲醚 54μg/mL 的各对照品 母液 精密量取各对照品母液至容量瓶中, 加甲醇 定容至刻度摇匀, 配制成含有没食子酸 139.5μg/ ml, 芦荟大黄素 8.01μg/mL, 大黄酸 28μg/mL, 大 黄素 8μg/mL, 大黄酚 5.99μg/mL 及大黄素甲醚 2.4μg/mL 的混合对照品溶液, 并用甲醇分别稀释 2 倍 4 倍 8 倍 12 倍得到系列浓度的混标溶液 色谱条件色谱柱 :C18 反相 HPLC 柱 (Hȳ persilgold,250 mm 4.6 mm,5μm,thermo); 流动相 :0.1% 磷酸水 (A) 乙腈 (B); 柱温 :30 ; 流 速 :1.0mL/min; 检测波长 :254nm; 进样量 :20μL; 梯度洗脱 :0~8min,5% B;8~20min,5% ~40% B;20~35min,40%~75% B;35~45min,75% B; 45~60min,5% B 方法学考察对所建立的方法进行方法学 考察, 具体包括 : 线性 精密度 准确度 重复性和稳 定性 样品测定根据 项下平行制备 3 份熟 大黄供试品溶液, 按照 项下的色谱条件进行 六种成分的含量测定 2.2 药效学实验 熟大黄药液的制备按 项下方法制备 熟大黄水煎液,60 减压浓缩至高剂量 0.5g/mL, 低剂量 0.2g/mL 以备用 [6] 阳性药复方丹参滴丸的制备取复方丹参 滴丸数粒, 研磨后加纯水制配成 0.9g/mL 的阳性对 照药液 血浆样品采集通过首日腹腔注射脂多糖 (2mg/kg), 次日上下午 ( 间隔 4h) 各皮下注射一次 0.1% 盐酸肾上腺素 (0.6mg/kg) 复制大鼠热毒血瘀 模型, 并检测各项指标以确认造模结果 空白组大 鼠则按以上方案同时注射等量生理盐水 造模成功 后, 分别给空白组和模型组灌胃给与纯水, 阳性药组 灌胃给与复方丹参滴丸溶液 (90mg/kg), 熟大黄低 剂量组灌胃给与熟大黄煎剂 (2g/kg), 熟大黄高剂 量组灌胃给与熟大黄煎剂 (5g/kg) 各组于灌胃 0.5h 后腹腔注射 10% 水合氯醛 (0.3mL/100g) 麻 醉, 腹主动脉取血约 3mL, 置于添加了枸橼酸钠的 采血管中 样品采集与药效指标检测取 400μL 全血 测试各切变率下的全血粘度, 剩余全血于 3000r/ min 离心 10min, 取上清血浆, 吸取 400μL 进行血 浆粘度检测, 剩余血浆用于以下指标的检测 依照试剂盒说明书操作, 仪检测获得凝血酶时 间 (TT) 凝血酶原时间 (PT) 及血浆中纤维蛋白原 (FIB) 含量 血栓素 B2 (TXB2) 6 酮前列腺素 (6 keto PGF1α) 的含量测定采用 ELISA 法, 严格按照试剂 盒说明书操作步骤进行, 采用酶标仪测吸光度 A 值, 通过标准曲线计算获得样品中含量, 测定波长为 450nm 数据处理数据统计使用 SPSS17.0 软件进 行统计, 计量资料采用 x±s 表示, 组间分析用单因 素方差分析法 3 结果 表 1 6 种成分的标准曲线 3.1 水煎液中主要成分的含量测定 线性关系考察精密吸取 项下系列浓 度的混标溶液进样 20μL, 取峰面积为纵坐标, 浓度 为横坐标, 计算得到各成分回归方程 线性范围及相 关系数, 详见表 1 分析物回归方程线性范围 /( μg ml -1 ) r 2 没食子酸 Y=19568X ~ 芦荟大黄素 Y=110255X ~ 大黄酸 Y=92012X ~ 大黄素 Y=59391X ~ 大黄酚 Y=98040X ~ 大黄素甲醚 Y=55029X ~

4 朱慧, 等 : 熟大黄水煎液中化学成分含量测定及其药效学研究 第 5 期 精密度考察精密吸取 项下对照品溶液 20μL, 连续进样 6 次 记录没食子酸 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚和大黄素甲醚的峰面积, 计算其 RSD 分别为 2.89% 1.44% 1.51% 1.47% 1.21% 1.17%, 表明仪器精密度良好 重复性考察按 项下平行制备 6 份熟大黄供试品溶液, 进样测试并获得没食子酸 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚和大黄素甲醚的含量, 计算其 RSD 分别为 0.50% 2.53% 0.61% 2. 68% 1.28% 2.06%, 表明该液相方法的重复性好 稳定性考察取同一份熟大黄供试品溶液, 分别于制备后 h 各进样 20μL, 计算没食子酸 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚和大黄素甲醚峰面积的 RSD 分别为 1.13% 2.90% 2. 23% 1.53% 1.34% 2.99%, 表明供试品在 24h 内稳定 加样回收率考察精密量取熟大黄水煎液 0.5mL, 采用加样回收率方法法 (1 1 加入 ), 除精密加入 4.5mL 甲醇外, 其余均按 项下方法制备溶液, 进样 20μL 计算得没食子酸 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚及大黄素甲醚的平均加样回收率分别为 101.0% 102.7% 101.6% % 103.0% 98.10%,RSD 分别为 2.43% 0.68% 2.60% 1.00% 0.21% 2.12% 样品测定结果在实验条件下进样, 得混合对照品及熟大黄供试品测定的典型色谱图 ( 图 1) 1. 没食子酸 ;2. 芦荟大黄素 ;3. 大黄酸 ;4. 大黄素 ;5. 大黄酚 ;6. 大黄素甲醚图 1 混合对照品溶液 (A) 及样品 (B) 测定的高效液相色谱图按 项下方法制备供试品溶液, 测定熟大黄水煎液中没食子酸 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚及大黄素甲醚的按生药量记平均含量分别为 (2.641±0.015) (0.094±0.001) (0.387±0.003) (0.120±0.002) (0.109±0.002) (0.034±0.001) mg/g 3.2 药效实验结果 对血液流变学的影响与空白组相较, 模型组大鼠 4 种切变率下的全血粘度 血浆粘度和纤维蛋白原含量均极显著增高 (P <0.01), 同时凝血酶原时间 (PT) 和凝血酶时间 (TT) 极显著延长 (P < 0.01), 显示热毒血瘀模型复制成功 与模型组相较, 熟大黄低剂量组在 5s -1,30s -1,200s -1 切变率下的全血粘度明显降低 (P <0.05), 血浆粘度明显下降 (P <0.05),TT 值显著升高 (P <0.05), 但 1 s -1 切变率下的全血粘度和血浆中纤维蛋白原含量均无显著变化,PT 值不增反降 (P <0.05), 结果表明低剂量的熟大黄的具有一定的活血化瘀作用但疗效欠佳 ; 熟大黄高剂量组能极显著降低 1s -1,5s -1, 30s -1 切变率下的全血粘度 (P <0.01), 显著降低 200s -1 切变率下的全血粘度 (P <0.05), 同时血浆粘度 血浆中纤维蛋白原的含量极显著降低 (P < 0.01),TT 和 PT 时间有效延长 (P <0.05), 提示高剂量的熟大黄在改善热毒血瘀大鼠血液流变性方面的作用更佳, 且治疗效果接近阳性药复方丹参滴丸, 详细结果见表 2~3 表 2 各组大鼠全血黏度的影响 ( x±s,mpa s,n=6) 组别 1s -1 5s -1 30s s -1 空白组 16.09± ± ± ±0.18 模型组 22.41±2.03 ** 9.82±0.73 ** 5.61±0.39 ** 4.18±0.29 ** 熟大黄低剂量组 20.06± ±0.36 # 5.04±0.18 # 3.88±0.16 # 熟大黄高剂量组 18.20±1.21 # # 8.29±1.54 # # 4.77±0.97 # 3.64±0.60 # 阳性药组 18.36±0.62 # # 8.32±0.38 # # 4.89±0.30 # # 3.72±0.27 # 注 : 与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01; 与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01

5 474 南京中医药大学学报 2017 年 9 月第 33 卷第 5 期 表 3 对各组大鼠血浆黏度 TT PT 及纤维蛋白原的影响 ( x±s,n=6) 组别 血浆黏度 /(mpa s) TT/s PT/s FIB/(g L -1 ) 空白组 1.23± ± ± ±0.09 模型组 1.48±0.09 ** 28.05±5.49 ** 10.63±1.83 * 4.54±0.35 ** 熟大黄低剂量组 1.34±0.07 * 34.93±2.20 # 9.92±0.48 # 4.19±0.23 熟大黄高剂量组 1.28±0.10 ## 35.47±3.40 ## 13.22±0.92 ## 3.75±0.54 ## 阳性药组 1.30±0.04 ## 33.15±1.28 # 11.80±0.78 # 3.54±0.40 ## 注 : 与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01; 与模型组比较,#P<0.05,##P< 各组大鼠 TXB2 及 6 keto PGF1α 的含量比较 法为水煎, 但目前已有的研究多集中于熟大黄醇提 采用内毒素结合盐酸肾上腺素造模后, 与空白组相较, 模型组大鼠血浆中的 TXB2 含量显著增加 (P <0.01),6 keto PGF1α 的表达显著下降 (P <0.01), TXB2/6 keto PGF1α 的比值明显高于正常水平 (P< 0.01), 提示血小板聚集, 黏附功能增强, 热毒血瘀模型复制成功 采用熟大黄水煎剂治疗后, 低剂量组的 TXB2 及 6 keto PGF1α 含量与模型组相较, 差异均无统计学意义,TXB2/6 keto PGF1α 含量比值有明显下降 (P<0.05); 随着给药剂量的增加, 高剂量组的 TXB2 含量明显低于模型组 (P <0.05),6 keto PGF1α 的含量较模型组有显著增加 (P <0.05), TXB2/6 keto PGF1α 的比值较模型组可见极显著下降 (P<0.01) 并趋向正常值 但治疗效果仍不及阳性药, 阳性药组的 TXB2 6 keto PGF1α 含量及其比值较模型组均有极显著性差异 (P<0.01), 详细结果见图 2 回流法, 缺乏实际的临床指导意义 故本文建立同时测定熟大黄水煎液中 5 种蒽醌及没食子酸含量的 HPLC 方法, 以反映水煎液中相关成分的实际含量, 以期从主要功效组分的角度指导临床合理用药 传统中医认为热毒炽盛, 阴伤络损是热毒血瘀证的基本病理变化, 热毒和血瘀二者相互作用密不可分, 温邪化毒, 深入营血, 营阴暗耗从而煎熬血液成瘀 ; 热毒迫血妄行, 出血留著而成瘀 ; 热毒内攻阻 [8] 滞气机, 气滞而血瘀 单独采用内毒素或盐酸肾上腺素造模, 大鼠存活率较低且药效指标变化甚微, 模型构建欠佳 实验最终采用腹腔注射内毒素模拟外感热毒的过程, 刺激大鼠下丘脑体温调节中枢产生发热反应并激活凝血机制, 引起微循环障碍和血液流变异常, 导致弥漫性血管内凝血, 同时结合皮下注射盐酸肾上腺素, 诱导血小板聚集, 末梢血管收 [9] 缩, 增加模型大鼠的血液黏度 造模后的大鼠饮 食量明显减少, 不喜活动, 毛色黯淡, 眼睛分泌物增 加, 检测相关指标可见, 与空白鼠相较全血黏度与血 浆黏度均显著升高,TT,PT 时间显著缩短, 同时 FIB 含量显著增加, 体内 TXB2/6 keto PGF1α 比值失 衡, 表明热毒血瘀模型构建成功 TXA2 和 PGI2 主要是由血小板及血管内皮细胞 分别合成而来的一对作用相反的花生四烯酸衍生 物 TXA2 是强烈的血管收缩剂和促血小板聚集剂, 注 : 与空白组比较,**P<0.01; 与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01 x±s,n=6 能够促进血栓的生成 ;PGI2 的作用与之相反, 能有效 图 2 各组大鼠 TXB2 6 keto PGF1α 及其比值的影响 抑制血小板局部聚集并扩张血管, 从而抵抗血栓的 4 讨论熟大黄中主要成分是蒽醌类化合物,2015 年版 形成 ; 二者既是血小板活化的特异性指标, 又是内皮损伤的指标 在正常血液中,TXA2/PGI2 的比值保 中国药典 以大黄酸 大黄素 芦荟大黄素 大黄素 [4] 甲醚及大黄酚作为其质量控制的指标成分 除蒽醌类成分外, 熟大黄中没食子酸的含量也较高, 且有文献指出没食子酸与保护血管改善微循环作用相 [7] 关, 故本文综合 5 种蒽醌及没食子酸作为检测指标 熟大黄被应用于临床治疗时最常采用的提取方 持相对平衡, 从而维持适当的冠脉张力和血管内环境, 有效防止血栓的形成, 维持血液流动状态, 保持 [10 11] 血管畅通, 是机体控制正常出血的机制 但二者的性质均极不稳定难以直接测定, 易迅速降解转化为稳定的 TXB2 和 6 keto PGF1α, 故目前均以其代谢产物作为间接判断其浓度的指标 但通过已有文

6 朱慧, 等 : 熟大黄水煎液中化学成分含量测定及其药效学研究 第 5 期 475 献调研, 熟大黄对热毒血瘀模型大鼠 TXB2/6 keto PGF1α 系统的影响至今尚未见相关报道, 故本文通过检测其代谢产物 TXB2/6 keto PGF1α 的比值以反映体内 TXA2/PGI2 的比值变化, 探明熟大黄对热毒血瘀证的治疗效果并进行作用机制 结果表明, 通过内毒素结合盐酸肾上腺素造模后, 模型大鼠血浆中 TXB2 含量的显著降低及 6 keto PGF1α 水平的显著升高均表明机体的血管内皮细胞受损, 血管强烈收缩, 血小板聚集从而促使血瘀情况加重, 体内 TXA2/PGI2 比值的相对平衡被打破 给予高剂量的熟大黄煎剂治疗, 能有效减少 TXB2 的合成释放, 增加 6 keto PGF1α 的生成表达, 使得体内 TXB2/6 keto PGF1α 的比值显著降低并趋向正常值, 通过抑制血小板聚集 改善血管内皮功能, 达到活血化瘀的作用 参考文献 : [1] 巩海涛, 王雁群, 贺广彬, 等. 大黄虫丸抗栓作用及机理的研究 [J]. 药学研究,2002,21(4): GONG HT,WANGYQ,HEGB,etal.StudyonantithromboticefectandmechanismofDahuangZhechongPil[J].JPharmaceutRes,2002,21(4): [2] 隋峰, 闫美娟, 李燕, 等. 不同炮制法对大黄活血化瘀作用影响的比对研究 [J]. 中药药理与临床,2012,28(6): DUOF,YAN MJ,LIY,etal.Comparisionoftheactionson bloodstasisofrhubarb with diferentprepared methods[j]. PharmacolClinChin MaterMed,2012,28(6): [3] 赵玲. 生 熟大黄活血化瘀作用及长期毒性的比较研究 [D]. 成都 : 成都中医药大学,2015. ZHAOL.Thestudyoncomparingbloodcirculationandlong termtoxicity ofrhubarb andstewedrhubarb[d].chengdu: ChengduUniversityofChineseMedicine,2015. [4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 [S]. 北京 : 中国医药科技出版社,2015. ChinaPharmacopoeia Commitee.Chinese Pharmacopoeia[S]. Beijing:Chinapharmaceuticaltechnologypress,2015. [5]ZHU TT,WU LI,WANG XL,etal.InvestigationonrelationshipsbetweenchemicalspectrumandbioefectofpreparedrhubarbdecoctioninratsbyUPLC ESI Q TOF MSmethodcoupled withgraycorrelationanalysis[j].jfunctfood,2017,31: [6] 陈奇. 中药药理研究方法学 [M]. 北京 : 人民卫生出版社,2011. CHEN Q.MethodologyonChineseMedicinalPharmacology[M]. Beijing:People'smedicalpublishinghouse,2011. [7]KANG N,LEEJH,LEE WW,etal.Galicacidisolatedfrom Spirogyrasp.improvescardiovasculardiseasethroughavasorelaxantand antihypertensive efect[j].environment Toxicol Pharmacol,2015,39, [8] 杨威, 张学进, 郭勇. 热毒血瘀证与炎症相关性研究进展 [J]. 中华中医药学刊,2010,28(10): YANG W,ZHANGXJ,GUO Y.Researchprogressofcorrelationbetweentoxic heat blood stasissyndromeandinflammation [J].ChinArchTraditChin Med,2010,28(10): [9] 梁爱华, 丁晓霜, 李文, 等. 血瘀证与血栓形成病证结合动物模型的研究 [J]. 中国中药杂志,2005,30(20): LIANG AH,DINGXS,LIW,etal.Developmentofananimal modelofbloodstasissyndromeandthrombosis[j].chinajchin MaterMed,2005,30(20): [10] 孙静, 温成平, 曹灵勇, 等. 解毒祛瘀滋肾拆方对狼疮样小鼠肾 TXB2/6 keto PGF1α 的影响 [J]. 浙江中医杂志,2010,45(6): SUNJ,WENCP,CAOLY,etal.Efectsofseparatedrecipes of"jiedu QuyuZishenDecoction"on TXB2/6 keto PGF1αin lupoid mice model[j].zhejiangjtraditchin Med,2010,45 (6): [11] 陈春, 杨天伦.TXA2/PGI2 与心血管疾病 [J]. 现代生物医学进展,2008,8(11): CHENC,YANG TL.TXA2/PGI2andcardiovasculardisease [J].ProgrModBiomed,2008,8(11): ( 编辑 : 董宇 )

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