2017 年 5 月第 19 卷第 5 期 ModChinMed May2017 Vol 19 No 5 传统中药玄参 (RadixScrophulariae) 是玄参科植物浙玄参 Scrophularia ningpoensishemsl 的干燥根 [1], 性微寒, 味甘苦咸, 归肺胃肾

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验巩
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1 年月第卷第期ＭＣＭＭＶＮ基础研究ＨＰＬＣ法同时测定玄参中个的含量周佳齐红艺四川省食品药品检验检测院四川成都西南大学重庆摘要目的建立ＨＰＬＣ法同时测定玄参中肉桂酸羟甲基糠醛个的含量方法采用ＡＺＯＲＢＡＸＥＸＤＢＣ色谱柱ｍｍｍｍ μｍ柱温为以甲醇甲酸水为流动相梯度洗脱流速为ｍｌｍ进样量 μｌｅｓＩ源ＭＲＭ模式下检测结果羟甲基正离子糠醛质量浓度分别在 μ ｍｌ线性关系良好检出限ＬＯＤ为ｍｌ平均回收率为样品测定结果显示玄参中及含量较高分别为ｍ不同来源的样品中个的含量及各个之间比例存在较大差异结论本实验建立了在ｍ内同时测定玄参中个含量的方法灵敏度高准确度好实验结果可为玄参质量提供参考关键词玄参羟甲基糠醛ＨＰＬＣＳｍＤｍＥＣｍＲＨＰＬＣＺＨＯＵＪＱＩＨＳＩＦＤＣＣＣＳｗＵＣＣＡＯＴｍｍｍｍＲＣｍＭＣｍｗｍＡＺＯＲＢＡＸＥＸＤＢＣｍｍｍｍｍμｍｍｍｍＡｍＢｗｍｗＴｗｗｍｌｍＴｍｗ μｌｄｗｍｍｍＭｍＭＲＭｍｗＴｍｗ μ ｍｌｍＲ μ ｍｌ μ ｍｌ μ ｍｌ μ ｍｌＣ μ ｍｌｍ μ ｍｌ μ ｍｌＴｍｗｍｌＴｗＨＣｗｍｍＲＳＴｗｍｍｍｍＣＴｍｍｋｍＲｗｍＴｍＲＫｗＲＣｍＨＰＬＣ基金项目重庆市科技人才培养创新青年科技人才培养项目ｋ通信作者周佳主管药师硕士研究方向食品药品检验Ｅｍｍ

2 2017 年 5 月第 19 卷第 5 期 ModChinMed May2017 Vol 19 No 5 传统中药玄参 (RadixScrophulariae) 是玄参科植物浙玄参 Scrophularia ningpoensishemsl 的干燥根 [1], 性微寒, 味甘苦咸, 归肺胃肾经 ; 具有凉血滋阴泻火解毒的功效 [2] 玄参中主要含有环烯醚萜苷和苯丙素苷等 [3 4], 具有镇痛消炎抗菌保肝抗氧化免疫调节降血压神经保护等作用 [5 7] 玄参中测定安格洛苷 C 的 HPLC 法已有报道 [8], 但用 HPLC MS/MS 法同时测定玄参中安格洛苷 C 5 羟甲基糠醛 8 个的含量未见报道本实验建立具有高灵敏度高选择性的 HPLC MS/MS 法对玄参中这 8 个进测定, 并测定了不同产地玄参药材的 8 个的含量, 为全面控制玄参质量奠定基础 1 仪器与试剂 1 1 材料 9 批次玄参 ( 产自重庆秀山, 河北, 四川北川雅安巫山宝兴, 贵州河南湖南 ) 经四川省食品药品检验检测院黎跃成主任药师鉴定为玄参正品 1 2 仪器高效液相色谱仪三重四级杆质谱联用仪 (Agi lent , MusHunter 工作站 ); Sartorius CPA225D 型电子天平 ;Mili Q 超纯水仪 ; 超声仪 ( 上海冠特超声仪器公司 ) 1 3 试剂与对照品试剂甲醇超纯水对照品 ( 批号 : , 99 5%) 购自中国食品药品检定研究院, ( 批号 :Must , 95%) ( 批号 :Must , 95%) ( 批号 : Must , 95%) 安格洛苷 C( 批号 : Must , 95%) ( 批号 : Must , 95%) ( 批号 : Must , 95%) 5 羟甲基糠醛 (5 HMF)( 批号 : Must , 95%) 购自成都曼斯特生物科技有限公司 2 方法与结果 2 1 混合对照品溶液的制备精密称定安格洛苷 C 5 羟甲基糠醛 (5 HMF) 对照品适量, 分别置棕色量瓶中, 用 50% 甲醇水溶解并定容至各量瓶中, 得单一对照品储备液精密量取上述各储备液适量, 用 50% 甲醇水配制成混合对照品中间液, 质量浓度为 38 8μg ml μg ml μg ml μg ml -1 安格洛苷 C61 9μg ml μg ml μg ml -1 5 羟甲基糠醛 6 85μg ml -1, 备用 2 2 供试品溶液的制备取各玄参, 粉碎 ( 过三号筛 ), 称取粉末, 精密称定, 置具塞三角瓶中, 精密加入 50% 甲醇水溶液 50mL, 称重, 放置 30min, 超声处理 45min( 功率 300W, 频率 45kHz), 放冷, 再称重, 用 50% 甲醇水溶液补足减失的重量, 过滤, 取续滤液, 过 0 22μm 微孔滤膜, 即得 2 3 色谱条件色谱柱 : Agilent ZORBAX Eclipse XDB C 18 (150mm 4 6mm,5μm); 流动相 :0 05% 甲酸水溶液 (A) 甲醇 (B), 梯度洗脱 (0~5min,60% ~ 60% A;5~8 min,60% ~40% A;8~19 min, 40% ~20% A;19~19 1min,20% ~60% A;19 1~ 22min,60% ~60% A); 流速 :0 6mL min -1 ; 柱温 :35 ; 进样量 :2μL 2 4 质谱条件离子源 : 电喷雾离子源 (ESI); 扫描方式 : 正离子模式 ; 检测方式 : 多反应监测 (MRM) 方式, 干燥气流速 :7 0L min -1, 干燥气温度 :300 ; 毛细管电压 :3500V, 四级杆温度 :100, 检测化合物离子参数见表 1, 对照品及玄参样品的 MRM 总离子流图见图 1, 各化合物的提取色谱图见图线性关系及检测下限考察取 2 1 项下混合对照品中间液适量, 用 50% 甲醇水溶液稀释成系列混合对照品溶液 ( 每个化合物至少测定 5 个浓度水平 ), 照上述方法进行测定, 记录峰面积, 以对照品浓度 (μg ml -1 ) 为横坐标, 以相应的峰面积为纵坐标, 进行线性回归, 计算回归方程同时以信噪比 (S/N)3 1 及 10 1 为基准分别测定各化合物的检出限及定量限, 结果见表 2; 结果表明各化合物在下列质量浓度 ( 见表 2) 范围内线性关系良好, 检出限在 5~50ng ml -1, 定量限在 671

3 2017 年 5 月第 19 卷第 5 期 ModChinMed May2017 Vol 19 No 5 17~167ng ml -1 目标物母离子 m/z 表 1 检测化合物离子参数子离子 m/z 定量离子碎裂电压 /V 碰撞电压 /ev HMF 安格洛苷 C 稳定性试验取 2 2 项下制备的供试品溶液, 室温放置, 分别在 h 进样测定, 记录其峰面积结果各时间段安格洛苷 C 5 羟甲基糠醛峰面积的 RSD 分别为 2 11% 1 95% 2 22% 3 91% 2 15% 1 44% 1 64% 4 01%, 表明供试品在 48h 内稳定 2 7 加样回收试验精密称取已测定含量的玄参样品 ( 样品编号 1) 粉末约 0 1g, 共 9 份, 分别精密加入低中高 3 个水平的单一对照品溶液, 每个浓度 3 份, 按 2 2 项下制备加样回收率测定样品溶液, 进样测定, 记录峰面积, 计算各化合物的平均回收率, 结果见表 3 回收率在 91 33% ~99 78%,RSD% 小于 5 3%, 表明准确度良好 2 8 样品含量测定取各个玄参样品约 0 2g, 精密称定, 按 2 2 项下供试品溶液方法制备, 进样测定, 计算含量, 结果见表 4 注 :1 (2 312min);2 (2 706min);3 5 HMF(2 942min);4 (4 153min);5 (5 301min);6 安格洛苷 C(9 155min);7 (12 011min);8 (13 355min) 图 1 对照品及玄参样品的 MRM 总离子流图 672

4 年月第卷第期ＭＣＭＭＶＮ图玄参中个化合物的提取色谱图表玄参中种化合物的回归方程线性范围检出限定量限回归方程线性范围ｍｌ μ 检出限ｍｌ定量限ｍｌＹＸＹＸＹＸＹＸＹＸＹＸＹＸＹＸ表玄参中种化合物的加样回收试验结果样品中含量 μ 对照品添加量 μ 测得量 μ 回收率ＲＳＤ

5 年月第卷第期ＭＣＭＭＶＮ表续样品中含量 μ 对照品添加量 μ 测得量 μ 回收率ＲＳＤ表不同来源玄参中个含量珋± ｍ产地重庆秀山 ± ± ± ± ± ± ± ± 河北 ± ± ± ± ± ± ± ± 四川北川 ± ± ± ± ± ± ± ± 四川巫山 ± ± ± ± ± ± ± ± 贵州 ± ± ± ± ± ± ± ± 四川宝兴 ± ± ± ± ± ± ± ± 河南 ± ± ± ± ± ± ± ± 四川雅安 ± ± ± ± ± ± ± ± 湖南 ± ± ± ± ± ± ± ± 讨论ＨＰＬＣ法同时测定玄参中个成分较ＨＰＬＣ法的优势玄参药材中含有多种杂质较多用ＨＰＬＣ法测定个色谱分离难度较大如果强行分离分析时间会长达ｍ以上并且选择性较ＨＰＬＣ法差如果加上过多净化步骤操作繁琐费时容易造成损失回收率下降用ＨＰＬＣ法可以同时分析玄参中个提取离子流图几乎看不到任何其他物质的干扰分析时间短ｍ内回收率高适用于上述的同时测定质谱条件的选择化合物在质谱中以ＭＮ或ＭＮＨ存在在甲酸作用下供试液呈酸性正模式下有助样品离子化对甲酸浓度进行考察发现灵敏度差距不大最终选择甲酸水溶液作为流动相甲醇提取条件的优化考察不同提取溶剂甲醇甲醇水甲醇水甲醇水水不同提取方式加热回流ｍ和提取超声及提取时间次数次最终确定称取药材粉末甲醇水溶液提取ｍｍｌ分两次提取用为最佳提取条件参考文献国家药典委员会中华人民共和国药典一部Ｓ北京中国医药科技出版社肖培根新编中药志Ｍ北京化学工业出版社胡瑛瑛黄真玄参的化学及药理作用研究进展浙江中医药大学学报邹臣亭杨秀伟玄参中一个新的环烯醚萜糖甙化合物中草药李静陈长勋高阳等玄参提取物抗炎与抗动脉硬化作用的探索时珍国医国药ＧＷＬＣＣＸＷＱＥＣｍＲｍＰｍｚＳＸＸＺＺＹＨＭＰＴＰＭＰＰｍｍｍＪＮｍ张雪梅王瑞安睿等ＨＰＬＣ同时测定玄参中种的含量中国中药杂志ＣＧＣＸＤＣＨＳｍｍＲｍｍｗＣＪＮＭ收稿日期

不同基源石斛属植物不同来源商品石斛

不同基源石斛属植物不同来源商品石斛徐蓓杨莉陈崇崇王峥涛徐珞珊建立黄草类石斛的薄层色谱定性鉴别方法采用薄层色谱法考察不同基源石斛及商品药材中专属性成分联苄类化合物毛兰素石斛酚杓唇石斛素和三羟基甲氧基联苄的薄层色谱行为对石斛药材进行定性鉴别通过种不同基源的石斛及批商品石斛的薄层色谱鉴别证明此方法专属性强操作简单重复性好为石斛的鉴别提供了一种准确有效的新方法本方法可用于黄草类石斛的鉴别为中药石斛的质量标准研究提供科学依据

2017 年 5 月第 19 卷第 5 期 ModChinMed May2017 Vol 19 No 5 传统中药玄参 (RadixScrophulariae) 是玄参科植物浙玄参 Scrophularia ningpoensishemsl 的干燥根 [1], 性微寒, 味甘 苦 咸, 归肺 胃 肾

2017 年 5 月第 19 卷第 5 期 ModChinMed May2017 Vol 19 No 5 传统中药玄参 (RadixScrophulariae) 是玄参科植物浙玄参 Scrophularia ningpoensishemsl 的干燥根 [1], 性微寒, 味甘苦咸, 归肺胃肾