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笙强
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1 2018 年 7 月 Vol.36 No.7 July 2018 Chinese Journal of Chromatography 643 ~ 650 研究论文 DOI: / SP.J 超高效液相色谱线性离子阱 / 静电场轨道阱质谱法快速检测化妆品中 66 种抗生素李红英 1, 沈华旦 2, 方江济 3, 张静雅 1 1, 丁晓萍 (1. 湖北省药品监督检验研究院, 湖北武汉 ; 2. 湖北中医药大学药学院, 湖北武汉 ; 3. 武汉理工大学化学化工与生命科学学院, 湖北武汉 ) 摘要 : 采用超高效液相色谱线性离子阱 / 静电场轨道阱高分辨质谱法同时测定化妆品中磺胺类沙星类等 66 种抗生素类化合物, 建立了快速筛查数据库和定量分析方法待测物用乙腈超声提取,C18 色谱柱 (100 mm 2 1 mm, 1 8 μm) 分离, 以 0 1% (v / v) 甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱在正离子模式下, 以保留时间和一级母离子精确质量数进行快速筛查, 以高能碰撞诱导解离获得的二级碎片离子精确质量数进行确证结果表明, 化合物的线性关系良好, 线性相关系数 (R 2 ) >0 99; 检出限 (LOD) 为 2~ 4 μg / kg; 定量限 (LOQ) 为 5~ 10 μg / kg; 3 个添加水平 (1LOQ 10LOQ 30LOQ) 的平均回收率为 58 2% ~ 119 1%, 相对标准偏差为 1 03 ~ 11 9% 该方法简便快速定性定量可靠, 适用于化妆品中抗生素类化合物的快速筛查和定量检测关键词 : 超高效液相色谱 ; 线性离子阱 / 静电场轨道阱高分辨质谱法 ; 抗生素 ; 化妆品中图分类号 :O658 文献标识码 :A 文章编号 : (2018) Rapid determination of 66 antibiotics in cosmetics using ultra high performance liquid chromatography linear ion trap / Orbitrap mass spectrometry LI Hongying 1, SHEN Huadan 2, FANG Jiangji 3, ZHANG Jingya 1, DING Xiaoping 1 (1. Hubei Institute for Drug Control, Wuhan , China; 2. School of Pharmaceutical Science, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan , China; 3. School of Chemistry, Chemical Engineering and Life Sciences, Wuhan University of Technology, Wuhan , China) Abstract: A rapid screening and determination method, in conjunction with a database for confirmation, was established based on 66 antibiotic compounds using ultra high performance liquid chromatography linear ion trap / Orbitrap high resolution mass spectrometry ( UPLC LTQ / Orbitrap MS). The analytes were extracted with acetonitrile using ultrasonic extraction. The separation was performed on a C18 column (100 mm 2 1 mm, 1 8 μm) with a gradient elution of 0 1% (v / v) formic acid and acetonitrile. The retention time and accurate mass of the pre cursor ion were used for rapid screening in positive ionization mode, with the fragment ions obtained by higher energy collisional dissociation used for confirmation. The results indicated that each compound showed good linearity with a correlation coefficient of R 2 >0 99. The limits of detection (LODs) were in the range 2-4 μg / kg, and the limits of quantification ( LOQs) were in the range 5-10 μg / kg. The average recoveries at three levels ( 1LOQ, 10LOQ, and 30LOQ) were between 58 2% and 119 1%, and the relative standard deviations ( RSDs) were between 1 03% and 11 9%. The method is simple, rapid, reliable, and accurate, which is suit able for rapid screening and determination of the 66 antibiotic compounds in cosmetics. Key words: ultra high performance liquid chromatography ( UPLC); linear ion trap / Orbitrap high resolution mass spectrometry ( LTQ / Orbitrap MS); antibiotics; cosmetics 收稿日期 : 通讯联系人.Tel:(027) ,E mail:dxp2888@ 126.com.

2 644 色谱第 36 卷我国化妆品安全技术规范将抗生素列为禁用物质 [1], 不得在化妆品中添加使用, 但由于其具有杀菌抑菌的功效, 一些不法企业在经济利益的驱使下, 在化妆品配方中非法添加抗生素类物质, 长期使用这些化妆品会导致对抗生素的耐药性, 造成健康隐患 [2,3] 近几年, 尽管国家加大了化妆品中各类禁限用物质的抽检力度, 但一些不法企业为了规避政府监管, 添加不在法定检验方法监测范围内的禁用物质, 在近几年的国家化妆品监督抽检计划中, 本单位多次发现非标准检测方法范围内的禁用物质因此, 建立简便高效可靠的多成分快速检测方法和相应的筛查数据库对化妆品行业的监管和保障消费者的使用安全具有重要的意义目前, 有关化妆品中抗生素类物质的检测方法 [4-7] 主要有高效超高效液相色谱法和液相色谱串联质谱法 ( LC MS / MS) [8-13] LC MS / MS 适用于已知目标物的分析, 在没有标准品和短时间内难以建立检测方法的情况下, 很难快速完成检测同时, 由于 LC MS / MS 检测通量受四极杆扫描速度的限制, 能同时检测的目标物数量有限 [14] 近年来, 兼具离子阱和高分辨质谱平行检测能力的线性离子阱 / 静电场轨道阱高分辨质谱检测系统 ( LTQ / Orbi trap MS) 已在非法添加和残留分析领域得到应用 [15-17] [18] 文献利用 LTQ / Orbitrap MS 对化妆品中一些抗生素的检测方法进行了研究, 但涉及的化合物种类较少, 达不到高通量筛查的目的本研究运用超高效液相色谱高分辨质谱检测系统建立了同时快速筛查化妆品中 66 种抗生素类化合物的分析方法通过 66 种抗生素类化合物的一级精确质量数和二级碎片离子质谱图数据库, 无需对照品即可完成 66 种抗生素化合物的快速筛查和确证此研究提高了日常检验的工作效率和化妆品安全风险监控水平, 对保障监管工作的顺利开展和化妆品的使用安全具有重要意义 1 实验部分 1.1 主要仪器与装置 Thermo U3000 UPLC 液相色谱仪 ( 美国 Ther mo Fisher 公司 ); Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL 组合式高分辨质谱仪 ( 美国 Thermo Fisher 公司 ); Thermo ST16 台式离心机 ( 美国 Thermo Fisher 公司 ); Vortex Genic2 旋涡混合器 ( 美国 Scientific Industries 公司 ); Hyper Sonic DT A 超声波清洗仪 ( 鼎泰恒胜公司 ); 45 位 N EVAP 氮吹仪 ( 美国 Organomation 公司 ); Milli Q A10 超纯水机 ( 美国 Millipore 公司 ); Mettler Toledo 电子天平 ( 梅特勒托利多 ( 上海 ) 公司 ) 1.2 主要材料与试剂甲醇乙腈 ( 色谱纯,Merck 公司 ); 甲酸 ( 色谱纯, 阿拉丁公司 ) 羟基甲硝唑洛硝哒唑羟甲基甲硝咪唑 3 种对照品购于 Witega 公司 ; 硝基咪唑异丙硝唑二甲硝咪唑 3 种对照品购于德国 Dr. Ehrenstorfer 公司, 其他 12 种唑类对照品购于中国食品药品检定研究院 ; 磺胺噻唑磺胺嘧啶磺胺二甲嘧啶磺胺甲氧嗪 4 种磺胺对照品购于中检院, 其他 11 种磺胺类对照品购于德国 Dr. Ehrenstorfer 公司 ; 脱水差向四环素脱水四环素等 14 种抗生素购于中检院 ; 丹诺沙星西诺沙星马波沙星奥比沙星恶喹酸 5 种对照品购于德国 Dr. Ehrenstorfer 公司, 其他 14 种沙星类物质购于中国食品药品检定研究院 1.3 标准溶液的配制分别准确称取各对照品约 20 mg 置于 10 ml 容量瓶中, 唑类和磺胺类化合物用乙腈溶解并定容, 其他化合物用甲醇溶解并定容, 配成约 2 g / L 的单标溶液储备液保存于 -20 的冰箱中临用时, 根据需要逐级稀释成不同质量浓度的系列混合标准溶液 1.4 样品溶液的制备称取 0 5 g 样品置于 10 ml 容量瓶中, 加入乙腈定容至 10 ml, 涡旋 30 s, 超声提取 20 min, 必要时加氯化钠破除乳化, 离心, 上清液过 0 22 μm 滤膜, 注入质谱仪测定 1.5 仪器分析液相色谱条件色谱柱 : UPLC C18 ( 100 mm 2 1 mm, 1 8 μm); 流动相 : 0 1% ( v / v) 甲酸溶液 ( A) 和乙腈 (B); 梯度洗脱程序 :0 ~ 3 min, 10% B ~ 20% B; 3 ~ 6 min, 20% B ~ 25% B; 6 ~ 14 min, 25% B ~ 27% B; 14 ~ 19 min, 27% B ~ 35% B; 19 ~ 29 min, 35% B ~ 65% B; 29 ~ 34 min, 65% B ~ 10% B; 34 ~ 35 min,10% B; 流速 :0 2 ml / min; 进样量 :5 μl; 柱温 : 质谱条件电喷雾离子源 (ESI) 正离子模式 ; 鞘气 ( N 2 ) 和辅助气 ( Ar) 流速分别为 40 和 10 arb ( arbitrary unit); 毛细管温度 300 ; 离子源电压 2 5 kv, 电流

3 第 7 期李红英, 等 : 超高效液相色谱线性离子阱 / 静电场轨道阱质谱法快速检测化妆品中 66 种抗生素 μa; 一级质谱质量扫描范围为 m / z 50 ~ 800, 分辨率为 ; 多级质谱采用高能碰撞诱导解离 (HCD) 模式, 依赖一级质谱扫描中的第 1 到第 4 强峰, 分辨率 ; HCD 裂解能量为归一化能量 40% 66 种化合物的质谱分析参数见表质谱数据库的建立在优化的质谱条件下, 对 66 种化合物的混合标准溶液进行测定, 将得到的精确质量数特征碎片离子和保留时间信息输入 TraceFinder 软件, 建立筛查质谱数据库 No. Compound Table 1 表 1 66 种抗生素化合物的 UPLC LTQ / Orbitrap MS 分析参数 Analytical parameters for the 66 antibiotics by UPLC LTQ / Orbitrap MS Retention time / min Precursor ion Theoretical m / z Measured m / z Mass accuracy error / 10-6 Product ions (m / z) 1 naftifine hydrochloride( 盐酸萘替芬 ) C 21 H 22 N , tinidazole( 替硝唑 ) 8.69 C 8 H 14 N 3 O 4 S , , ornidazole( 奥硝唑 ) C 7 H 11 ClN 3 O , metronidazole( 甲硝唑 ) 5.10 C 6 H 10 N 3 O metronidazole benzoate C 13 H 14 N 3 O , ( 苯甲酸甲硝唑 ) 6 clotrimazole( 克霉唑 ) C 22 H 18 ClN , , fluconazole( 氟康唑 ) C 13 H 13 F 2 N 6 O , , ketoconazole( 酮康唑 ) C 26 H 29 Cl 2 N 4 O , , secnidazole( 塞克硝唑 ) 7.53 C 7 H 12 N 3 O , nitroimidazole( 硝基咪唑 ) 3.45 C 3 H 4 N 3 O , , ipronidazole( 异丙硝唑 ) C 7 H 12 N 3 O , , bifonazole( 联苯苄唑 ) C 22 H 19 N , , miconazole nitrate( 硝酸咪康唑 ) C 18 H 15 Cl 4 N 2 O , , , econazole nitrate( 硝酸益康唑 ) C 18 H 16 C l3 N 2 O , , hydroxymetronidazole( 羟基甲硝唑 ) 4.16 C 6 H 10 N 3 O , , dimetridazole( 二甲硝咪唑 ) 6.41 C 5 H 8 N 3 O , ronididazole( 洛硝哒唑 ) 6.63 C 6 H 9 N 4 O , , hydroxy methyl 1 methyl 5.38 C 5 H 8 N 3 O nitroimidazole( 羟甲基甲硝咪唑 ) 19 sulfamonomethoxine 9.84 C 11 H 13 N 4 O 3 S , , ( 磺胺间甲氧嘧啶 ) 20 sulfapyridine( 磺胺吡啶 ) 7.62 C 11 H 12 N 3 O 2 S , , sulfacetamide( 磺胺乙酰 ) 6.13 C 8 H 12 N 2 O 3 S , sulfadimoxine( 磺胺邻二甲氧嘧啶 ) C 12 H 15 N 4 O 4 S , , , sulfamethizole( 磺胺甲二唑 ) 9.76 C 9 H 11 N 4 O 2 S , , sulfisoxazole C 11 H 14 N 3 O 3 S , , ( 磺胺二甲异噁唑 ) 25 sulfisomidine sodium 5.15 C 12 H 15 N 4 O 2 S , , ( 磺胺二甲异嘧啶钠 ) 26 sulfanitran( 磺胺硝苯 ) C 14 H 14 N 3 O 5 S , , , sulfaphenazole( 磺胺苯吡唑 ) C 15 H 15 N 4 O 2 S , , sulfaguanidine( 磺胺胍 ) 2.88 C 7 H 11 N 4 O 2 S , , sulfathiazole( 磺胺噻唑 ) 7.49 C 9 H 10 N 3 O 2 S , sulfadimethoxine( 磺胺二甲氧嘧啶 ) C 12 H 15 N 4 O 4 S , , , sulfadiazine( 磺胺嘧啶 ) 6.68 C 10 H 11 N 4 O 2 S , , sulfamethazine( 磺胺二甲嘧啶 ) 9.24 C 12 H 15 N 4 O 2 S , , , sulfamethoxypyridazine( 磺胺甲氧嗪 ) C 11 H 13 N 4 O 3 S , , ,

4 646 色谱第 36 卷 No. Compound Retention time / min 表 1 ( 续 ) Table 1 ( Continued) Precursor ion Theoretical m / z Measured m / z Mass accuracy error / 10-6 Product ions (m / z) 34 lincomycin( 林可霉素 ) 5.55 C 18 H 35 N 2 O 6 S , epi anhydrotetracycline C 22 H 23 N 2 O , , , ( 脱水差向四环素 ) anhydrotetracycline( 脱水四环素 ) C 22 H 23 N 2 O , , epitetracycline(4 差向四环素 ) 7.41 C 22 H 22 ClN 2 O , , , epichlotetracycline(4 差向金霉素 ) 9.55 C 22 H 24 ClN 2 O , , , methacycline( 美他环素 ) C 22 H 23 N 2 O , , minocycline( 米诺环素 ) 6.54 C 23 H 28 N 3 O , , deoxytetracycline( 多西环素 ) C 22 H 25 N 2 O , , , , oxazocilline( 苯唑西林 ) C 19 H 20 N 3 O 5 S , , , chlortetracycline hydrochloride C 22 H 24 ClN 2 O , , , ( 盐酸金霉素 ) tetracycline hydrochloride 8.41 C 22 H 25 N 2 O , , ( 盐酸四环素 ) 45 demeclocycline( 去甲基金霉素 ) 9.51 C 21 H 22 ClN 2 O , , epioxytetracycline(4 差向土霉素 ) 7.41 C 22 H 25 N 2 O , , , clindamycin( 克林霉素 ) C 18 H 34 ClN 2 O 5 S , , enoxacin( 依诺沙星 ) 7.45 C 15 H 18 FN 4 O , , fleroxacin( 弗罗沙星 ) 7.74 C 17 H 19 F 3 N 3 O , , ciprofloxacin( 环丙沙星 ) 7.94 C 17 H 19 FN 3 O , , , norfloxacin( 诺氟沙星 ) 7.74 C 16 H 19 FN 3 O , , sarafloxacin( 沙拉沙星 ) 9.46 C 20 H 18 F 2 N 3 O , , , flumquine( 氟甲喹 ) C 14 H 13 FNO cinoxacin( 西诺沙星 ) C 12 H 11 N 2 O , , marbofloxacin( 马波沙星 ) 7.37 C 17 H 20 N 4 O 4 F , , , orbifloxacin( 奥比沙星 ) 8.77 C 19 H 21 F 3 N 3 O , , pipemidic acid( 吡哌酸 ) 6.31 C 14 H 18 N 5 O , , nalidixic acid( 萘啶酸 ) C 12 H 13 N 2 O , , danofloxacin( 丹诺沙星 ) 8.33 C 19 H 21 FN 3 O , , pefloxacin( 培氟沙星 ) 7.90 C 17 H 21 FN 3 O , , sparfloxacin( 斯帕沙星 ) 9.68 C 19 H 23 F 2 N 4 O , , lomefloxacin( 洛美沙星 ) 8.25 C 17 H 20 F 2 N 3 O , , oxolinic acid( 恶喹酸 ) C 13 H 12 NO , , levofloxacin( 氧氟沙星 ) 7.75 C 18 H 21 FN 3 O , , difloxacin( 双氟沙星 ) 9.67 C 21 H 20 F 2 N 3 O , , moxifloxacin( 莫西沙星 ) C 21 H 25 FN 3 O , , , 结果与讨论 2.1 样品提取方法的优化本实验选取乳液类化妆品作为典型代表基质, 考察在不同提取溶剂中的提取情况分别考察了乙腈乙腈 2% (v / v) 甲酸水溶液 (3 2,v / v) 甲醇等提取溶剂对乳液类化妆品中 66 种化合物的提取情况, 提取效率通过在 0 5 g 样品中加入 10LOQ(LOQ

5 第 7 期李红英, 等 : 超高效液相色谱线性离子阱 / 静电场轨道阱质谱法快速检测化妆品中 66 种抗生素 647 为 5 μg / kg 或 10 μg / kg) 的混合标准溶液的加标回收率来体现, 结果见图 1 可以看出, 对大多数化合物而言, 乙腈比乙腈 2% (v / v) 甲酸水溶液的提取效率略高, 沙星类化合物用乙腈 2% (v / v) 甲酸水溶液 (3 2,v / v) 的提取效率要稍高 ; 甲醇与乙腈的提取效率变化趋势基本一致, 乙腈的提取效率略高于甲醇综合考虑, 选择乙腈作为提取溶剂提取效率的高低除与提取溶剂有直接的关系外, 超声时间也是一个关键的因素本实验考察了超声时间为 min 对提取效果的影响结果发现, 以乙腈为提取溶剂, 超声提取 15 min, 绝大多数化合物已达最大提取效率 2.2 色谱条件的选择本研究涉及唑类磺胺类沙星类和其他类别抗生素的色谱分离, 参照化妆品安全技术规范 (2015 年版 ) 关于这几类物质的检测要求和日常对这几类物质的检验经验, 采用 C18 柱, 以乙腈和 0 1% 甲酸溶液作为流动相对这几类化合物进行测定乙腈的洗脱能力高于甲醇, 得到的峰形更为尖锐, 加入甲酸可增加离子化效率添加一定浓度的乙酸铵会改善分离度以及提高质谱响应值 [18], 但易在色谱系统结晶和对质谱离子化系统产生影响本实验在不加入乙酸铵的情况下, 通过优化梯度洗脱, 使绝大多数化合物得到较好的分离, 分离度满足实验要求, 各化合物的具体保留时间见表 1, 故最后选择 C18 柱为分离柱, 乙腈和 0 1% (v / v) 甲酸溶液为流动相, 梯度洗脱程序见节各化合物的提取离子色谱图见图质谱条件的选择线性离子阱 / 静电场轨道阱高分辨质谱仪可以提供碰撞诱导解离 (CID) 和 HCD 两种碰撞裂解模式在 CID 模式下, 线性离子阱会产生三分之一质图 1 66 种化合物在不同提取溶剂中的提取效率 Fig. 1 Extraction efficiency of the 66 antibiotics using different solvents The extracted solution was prepared from 0 5 g of sample spiked with mixed standard solution of 66 antibiotics of 10LOQ ( LOQ: 5 μg / kg or 10 μg / kg). Compound Nos. are the same as those in Table 1. Fig. 2 图 2 66 种化合物的提取离子色谱图 Extracted ion chromatograms of the 66 antibiotics

6 648 色谱第 36 卷量数碎片离子的损失 [17,19], 无法得到低质量端碎片, 而 HCD 模式能有效避免 CID 模式的这一缺陷, 产生低质量端碎片离子, 因此, 为了得到比较丰富的二级特征离子碎片并建立筛查数据库, 本研究选择在 HCD 模式下对归一化能量为 25% 30% 35% 40% 和 45% 的二级碎片离子质谱图进行了优化通过对几种碰撞能量下得到的质谱图进行分析发现, 在碰撞能量为 30% 时, 部分化合物产生了较丰富的二级碎片离子 ; 当碰撞能量为 40% 时, 绝大部分化合物可以得到比较丰富的二级碎片离子, 个别化合物如甲硝唑羟甲基甲硝咪唑和氟甲喹只得到较少的碎片离子, 尽管这 3 种化合物的二级碎片离子较少, 但能满足筛查的需要 [20], 综合考虑, 最终选择碰撞能量为 40% 的 HCD 作为二级碎裂模式各化合物的二级碎片离子见表筛查数据库的建立本研究在优化的色谱条件下进样, 通过 LTQ / Orbitrap MS 系统获得 66 种化合物的保留时间精确质量数 (m / z) 及二级特征碎片离子, 将上述信息输入 TraceFinder 软件中, 建立各成分的质谱数据库 [20] 依照欧盟 2002 / 657 号文件对质谱分析方法的规定, LTQ / Orbitrap MS 只需一个母离子和一个子离子即可完成对目标物质的确证 [15] 为了筛选结果的高选择性和可靠性, 本研究选择 2 个以上的二级碎片离子质谱图作为标准参照图对于精确质量数相同的同分异构体化合物, 可通过保留时间进行区分, 如磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺二甲氧嘧啶, 分子式均为 C 12 H 14 N 4 O 4 S, 保留时间分别为 min 和 min; 磺胺二甲异嘧啶和磺胺二甲嘧啶, 分子式均为 C 12 H 14 N 4 O 2 S, 保留时间分别为 5 15 min 和 9 24 min 当保留时间无法区分时, 可通过精确质量数和二级碎片离子质谱图进行定性和确证, 如弗罗沙星和诺氟沙星, 保留时间均为 7 74 min, 精确质量数不同, 分别为和若精确质量数相同, 可通过二级碎片离子进一步确证由表 1 的结果可以看出, 本研究得到的数据满足建立筛查数据库的要求 2.5 线性关系和检出限由于化妆品基质比较复杂, 存在一定的基质效应, 为消除和补偿基质效应, 本研究考察了乳液类化妆品基质中各目标化合物的线性关系, 以目标化合物的含量 ( x, μg / kg) 和准分子离子峰面积 ( y) 绘制标准曲线结果表明, 各化合物的线性关系良好, 线性相关系数 (R 2 ) 大于 0 99 根据化妆品安全技术规范 (2015 年版 ) 卫生化学检测方法总则要求, 色谱的检出限 ( LOD) 以 3 倍空白噪声对应的质量或浓度表示由于高分辨质谱的基线噪声非常低, 以 S / N 方法计算出的检出限可能与方法的实际检测值存在差别, 本研究采用基质混合标准溶液逐级稀释方法至仪器能检出的最低含量作为各化合物的检出限定量限约为检出限的 3 倍 66 种抗生素化合物的线性方程相关系数线性范围检出限和定量限见表回收率本研究将以乳液为基质确定的方法用于水剂乳液和膏霜类 3 种基质样品进行回收率试验 3 种基质中分别加入 LOQ 10LOQ 30LOQ 3 种含量的混合标准溶液, 每个水平进行 3 次重复实验, 计算回收率和相对标准偏差 ( RSD) 结果表明, 乳液基质水剂和膏霜基质的加标回收率分别为 58 2% ~ 119 1% 60 0% ~ 117 5% 和 58 8% ~ 116 1%, RSD 分别为 1 03% ~ 11 9% 1 88% ~ 11 6% 和 2 09% ~ 11 9% 上述数据表明水剂和膏霜基质的加标回收率和 RSD 均在乳液基质结果的范围内, 表明这一方法适合水剂和膏霜基质的筛查测定最低回收率较低 ( 数据为 58 2%) 可能与某些抗生素化合物本身 [18] 的性质有关, 得到的回收率范围与文献基本一致 2.7 样品测定本研究所用样品为 2016 年监督抽检的 49 批祛痘类化妆品化妆品卫生技术规范 (2015 年版 ) 甲硝唑的检验方法为高效液相色谱法, 以保留时间和紫外光谱图定性, 用此方法共检出可疑样品 10 批, 由于化妆品基质复杂, 仅通过保留时间和光谱无法准确定性, 易造成假阳性本研究通过测得的精确质量数进行初筛, 确定样品中初筛检出的化合物, 然后将样品中可疑成分的二级碎片离子图和相应对照品的二级碎片离子图进行相似度比较, 若相似度达到 95%, 则确定样品中添加了该化合物采用本研究建立的方法对 10 批可疑样品进行了检测, 其中 2 批样品同时检出甲硝唑 ( 7 2 mg / kg 和 8 2 mg / kg) 和氧氟沙星 (6 0 mg / kg 和 6 3 mg / kg), 1 批样品检出克林霉素 (35 2 mg / kg), 样品中几种检出物质的二级碎片离子图与对照品的相似度均在 95% 以上

7 第 7 期李红英, 等 : 超高效液相色谱线性离子阱 / 静电场轨道阱质谱法快速检测化妆品中 66 种抗生素 649 Table 2 表 2 66 种抗生素化合物的回归方程相关系数线性范围检出限和定量限 Regression equations, correlation coefficients (R 2 ), linear ranges, limits of detection (LODs), and limits of quantification ( LOQs) for the 66 antibiotics Compound Regression equation R 2 Linear range / LOD / Naftifine hydrochloride y = 17550x Tinidazole y = 6380x Ornidazole y = 3893x Metronidazole y = 4052x Metronidazole benzoate y = 6705x Clotrimazole y = 27797x Fluconazole y = 4889x Ketoconazole y = 2365x Secnidazole y = 6821x Nitroimidazole y = 1682x Ipronidazole y = 14523x Bifonazole y = 6784x Miconazole nitrate y = 1830x Econazole nitrate y = 15944x Metronidazole OH y = 1844x Unizole y = 7441x Ronididazole y = 1036x Hydroxy methyl 1 methyl 5 nitroimidazole y = 2214x Sulfamonomethoxine y = 14001x Sulfapyridine y = 7427x Sulfacetamide y = 164.6x Sulfadimoxine y = 16330x Sulfamethizole y = 3483x Sulfisoxazole y = 4919x Sulfadimidine y = 12262x Sulfanitran y = 582x Sulfaphenazole y = 13448x Sulfaguanidine y = 4134x Sulfathiazole y = 8314x Sulfadimethoxine y = 21870x Sulfadiazine y = 8842x Sulfamethazine y = 13270x Sulfamethoxypyridazine y = 6561x Lincomycin y = 4887x Epi anhydrotetracycline y = 2648x Anhydrotetracycline y = 2030x Epitetracycline y = 1574x Epichlotetracycline y = 1478x Methacycline y = 3678x Minocycline y = 734x Deoxytetracycline y = 1842x Oxazocilline y = 802x Chlotetracycline y = 2055x Tetracycline y = 2494x Demeclocycline y = 1476x Epioxytetracycline y = 1256x Clindamycin y = 7245x Enoxacin y = 10274x Fleroxacin y = 8411x Ciprofloxacin y = 9184x Norfloxacin y = 9040x Sarafloxacin y = 8519x Flumquine y = 14550x LOQ /

8 650 色谱第 36 卷表 2 ( 续 ) Table 2 ( Continued) Compound Regression equation R 2 Linear range / LOD / Cinoxacin y = 6748x Marbofloxacin y = 9634x Orbifloxacin y = 13827x Pipemdilic acid y = 7960x Nalidixic acid y = 16379x Danofloxacin y = 20941x Pefloxacin y = 13524x Sparfloxacin y = 15836x Lomefloxacin y = 12641x Oxolinic acid y = 10602x Levofloxacin y = 11411x Difloxacin y = 7767x Moxifloxacin y = 8144x y: peak area; x: content, μg / kg. LOQ / 3 结论本研究采用乙腈超声提取, 运用高选择性的 Orbitrap 高分辨质谱技术, 同时测定了化妆品中 66 种抗生素化合物, 建立了筛查数据库本工作可以快速准确地筛查确证化妆品中的抗生素类禁用化合物, 大大提高了日常检验的工作效率, 对日常监管检验工作具有非常重要的意义参考文献 : [1] China Food and Drug Administration. Safety and Technical Standards for Cosmetics (2015 Edition). Beijing, 2015 国家食品药品监督管理总局. 化妆品安全技术规范 ( 2015 年版 ). 北京, 2015 [2] Li M H, Kong W J, Yang M H, et al. China Journal of Tradi tional Chinese Medicine and Pharmacy, 2016, 31(6): 2239 李梦华, 孔维军, 杨美华, 等. 中华中医药杂志, 2016, 31 (6): 2239 [3] Zhu L, Liu Y, Zeng S P, et al. Journal of Instrumental Anal ysis, 2016, 35(2): 185 朱俐, 刘洋, 曾三平, 等. 分析测试学报, 2016, 35(2): 185 [4] Chen J, Zheng R, Ji S, et al. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2013, 41(6): 931 陈静, 郑荣, 季申, 等. 分析化学, 2013, 41(6): 931 [5] Qian Y F, Jia C P. Guangzhou Chemical Industry, 2016, 44 (10): 150 钱叶飞, 贾昌平. 广州化工, 2016, 44(10): 150 [6] Zhang L T, Huang S Y, Yang X, et al. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2015, 34(12): 1403 张林田, 黄少玉, 杨晞, 等. 分析试验室, 2015, 34(12): 1403 [7] Lu J, Pang Y J, Li Y B, et al. Chinese Journal of Chroma tography, 2012, 30(6): 641 陆军, 庞燕军, 李彦博, 等. 色谱, 2012, 30(6): 641 [8] Jian L H, Zheng R, Zhong J Q, et al. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2014, 33(12): 1459 简龙海, 郑荣, 钟吉强, 等. 分析试验室, 2014, 33(12): 1459 [9] Meng Q, Zheng R, Wang K. Chinese Journal of Health Labo ratory Technology, 2016, 26(6): 784 孟茜, 郑荣, 王柯. 中国卫生检验杂志, 2016, 26(6): 784 [10] Zhang Y H, Li L L, Wang H M. Chinese Journal of Health Laboratory Technology, 2017, 27(18): 2600 张燕惠, 李玲玲, 王红梅. 中国卫生检验杂志, 2017, 27 (18): 2600 [11] Wu C S, Zhang J L, Qiao Y L, et al. Chinese Chemical Let ters, 2011, 22(3): 334 [12] Liu Y, Zhang F, Chang Y, et al. Chinese Journal of Phar maceutical Analysis, 2017, 37(9): 1693 刘颖, 张帆, 常艳, 等. 药物分析杂志, 2017, 37(9): 1693 [13] Lin L, Zhang Y, Tu X K, et al. Chinese Journal of Chroma tography, 2015, 33(3): 275 林黎, 张毅, 涂小珂, 等. 色谱, 2015, 33(3): 275 [14] Luo H T, Huang X L, Wu H Q, et al. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2017, 45(9): 1381 罗辉泰, 黄晓兰, 吴惠勤, 等. 分析化学, 2017, 45(9): 1381 [15] Niu Z Y, Luo X, Wang F M, et al. Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 2016, 37(3): 201 牛增元, 罗忻, 王凤美, 等. 质谱学报, 2016, 37(3): 201 [16] Li X W, Shen B H, Jiang Z, et al. Journal of Forensic Med icine, 2012, 28(1): 44 李晓雯, 沈保华, 江峥, 等. 法医学杂志, 2012, 28(1): 44 [17] Li Z Y, Wang F M, Niu Z Y, et al. Chinese Journal of Chro matography, 2014, 32(5): 477 李兆永, 王凤美, 牛增元, 等. 色谱, 2014, 32(5): 477 [18] Wang F M, Niu Z Y, Luo X, et al. Journal of Food Safety and Quality, 2014, 5(12): 3911 王凤美, 牛增元, 罗忻, 等. 食品安全质量检测学报, 2014, 5(12): 3911 [19] Skrabáková Z, O Halloran J, van Pelt F N A M, et al. Rapid Commun Mass Spectrom, 2010, 24 (20): 2966 [20] 2002 / 657 / EC. Official Journal of the European Communi ties, 2002, L221: 8

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.