《四川动物》2013年第32卷第3期

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晶庄
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1 四川动物年第卷第期ＳＪＺＶＮＤＯＩ９９ｊ麻疯树佛波酯对菜青虫体内几种酶活力的影响刘雪清李文庆李莉卢代华陈放李静四川大学生命科学学院成都长治学院生物科学与技术系山西长治四川省农业科学院植物保护研究所成都摘要麻疯树佛波酯是麻疯树中最主要的毒性成分文章研究了取食麻疯树佛波酯后三龄菜青虫体内的超氧ＯＤ中肠蛋白酶ＣＡＴＰ酶以及蛋白激酶ＣＰＫＣ活力的变化旨在探讨麻疯树佛波酯对菜青虫化物歧化酶Ｓ的杀虫作用机理结果表明取食低浓度的佛波酯刺激菜青虫体内ＳＯＤ活力增加而超过 μ ｍｌ的处理浓度则会使ＳＯＤ活力显著下降麻疯树佛波酯对试虫中肠蛋白酶活力有较强的抑制作用 μ ｍｌ的处理浓度下其比活力显著低于对照组测验Ｐ随着佛波酯浓度增加其抑制作用也增大此外佛波酯对菜青虫神经细胞膜上ＣＡＴＰ的活性也具有明显的抑制作用在一定的浓度范围内菜青虫中肠细胞ＰＫＣ活力随佛波酯处理浓度升高而升高 μ ｍｌ时ＰＫＣ比活力最高达到对照的倍同时胞膜ＰＫＣ胞浆ＰＫＣ比值升高伴在随着明显的质膜转位取食麻疯树佛波酯后试虫中肠细胞ＰＫＣ活力即显著高于对照测验Ｐ活力达到最大值为对照组的倍由于麻疯树佛波酯结构与ＰＫＣ的激活物二酰基甘油ＤＡＧ类似因此能显著激活试虫体内的ＰＫＣＰＫＣ可能是麻疯树佛波酯发挥杀虫作用的重要靶标关键词麻疯树佛波酯菜青虫酶活蛋白激酶Ｃ中图分类号Ｑ９９Ｑ文献标识码Ａ文章编号ＥＰＥｍｊＳＫＥｍＬＰＬＩＵＸｑＬＩＷｑＬＩＬＬＵＤＣＨＥＮＦＬＩＪＣＬＳＳＵＣＣＤｍＢＳＢＣＵＣＳＰＣＩＰＡｍＡＳＣＣＰＳＡＰｗｍＪＩｍｍｍｍＳＯＤｍＣＰＡＴＰｋＣＰＫＣｗｍＴＳＯＤｗｗｗＩｗｗｗ μ ｍｌＡｍＰｗｗ μ ｍｌＰｍｍｗＦｍＣＡＴＰＰＯＰＫＣｍｗｗＰｗＴＰＫＣｗｍＰＫＣ μ ｍｌＩｍｍＰＫＣｍｐｋｃｍｍｍｍＯＰＫＣｗｋｍＴＰＫＣＰＫｗｍｊＰｍｋＣ收稿日期接受日期基金项目国家自然科学基金项目国家十一五科技支撑计划课题ＢＡＤＢ作者简介刘雪清９男硕士研究生研究方向植物天然产物Ｅｍｍ通讯作者ＣＥｍｊｊｍ

2 麻疯树 JatrophacurcasL 为大戟科 Euphorbi aceae 麻疯树属植物, 广泛分布于热带亚热带地区, 在我国贵州四川云南广西广东等省自治区均有分布麻疯树种子大, 结果多, 油脂含量可达到 40% ~60% 因其种子油可作为柴油的替代品, 从而被公认为全世界最有价值的生物能源作物之一麻疯树种子具有较强的毒性, 国内外学者已从中分离到多种毒性物质, 其中麻疯树佛波酯就是其主要毒性物质之一 (Goeletal,2007) 麻疯树佛波酯是佛波醇的二萜酯类化合物, 不仅能导致人畜等温血动物中毒, 而且对软体动物以及昆虫也具有灭杀活性 (Winketal,1997) 李文庆等(2011) 发现麻疯树佛波酯对于菜青虫显示出较强的胃毒拒食和生长抑制等活性目前, 阐明佛波酯对于昆虫杀虫作用机理的研究未见报道本文研究麻疯树佛波酯对菜青虫体内的中肠蛋白酶解毒酶系统中的超氧化物歧化酶神经系统中的 Ca 2+ ATPase 酶以及蛋白激酶 C(PKC) 的影响, 旨在探索麻疯树佛波酯对鳞翅目昆虫的作用机理, 为新型植物性杀虫剂的开发提供依据 1 材料与方法 1 1 材料菜青虫 PierisrapaeL 采自四川省简阳市农田菜地的健康低龄幼虫以新鲜甘蓝叶片饲喂, 挑选发育整齐的 3 龄幼虫供试, 实验前饥饿 2h 佛波酯标准品 (TPA) 购自 Sigma 公司, 纯度 99% 乙腈为液相色谱纯, 水为去离子水, 其余试剂甲醇石油醚正己烷磷酸甲硫氨酸 (Met) 氮蓝四唑 (NBT) 乙二胺四乙酸 (EDTA) 乙二醇二乙醚二胺四乙酸 (EGTA) 苯甲基磺酰氟 (PMSF) 亮抑蛋白酶肽 (Leupeptin) 抑酶肽 (Aprotinin) 胃蛋白酶抑制剂 (PepstatinA) 聚乙二醇辛基苯基醚 (Triton X 100) 核黄素酪蛋白三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 咪唑蔗糖 Folin 酚试剂甲 Folin 酚试剂乙均为国产分析纯 PepTag Non RadioactivePKCAsay 购自 Pro mega 公司,Ca 2+ ATPase 试剂盒购自南京建成生物工程公司麻疯树佛波酯参照李文庆等 (2011) 的方法由本实验室制备, 经 HPLC 鉴定其纯度为 81% 1 2 麻疯树佛波酯对超氧化物歧化酶 (SOD) 的影响试虫处理方法采用浸叶饲喂法麻疯树佛波酯用乙醇稀释成不同浓度 :8μg ml -1,16μg ml -1, 32μg ml -1,64μg ml -1,128μg ml -1, 菜青虫 3 龄幼虫预先饥饿 2h, 再用经不同浓度的佛波酯处理的带毒甘蓝叶片饲喂每浓度 3 个重复, 每重复 10 头幼虫, 对照以乙醇处理叶片饲喂处理后 3h 取供试菜青虫称重, 并置于预冷的研钵中, 加入 3mL 0 05mol/L 的磷酸缓冲液, 冰浴下研磨成匀浆, 匀浆液置于冷冻离心机于 r/min 离心 20 min, 倾出上清液作为酶液, 保存在 4 冰箱内备用 SOD 酶活测定在 Beauchamp 和 Fridovich (1971) 方法的基础上略加改进 3mL 反应体系中包含制备好的酶液 100μL, 蛋氨酸 1500μL, 磷酸缓冲液 (ph7 0), 氮蓝四唑 (NBT)300μL,1μmol/L EDTA 的核黄素 300μL 对照管则以缓冲液代替酶液将上述反应体系混匀后置于 4000lx 日光下进行光化学反应, 反应温度为 20,20min 后用黑暗终止反应, 以暗对照为参比在 560nm 检测吸光度佛波酯在离体条件下对 SOD 酶活影响的测定则将对照组试虫提取的酶原与不同浓度的麻疯树佛波酯共孵育 3h, 检测其酶活的变化 1 3 麻疯树佛波酯对菜青虫中肠蛋白酶的影响参照 1 2 中的浸叶饲喂法处理 3 龄菜青虫, 于处理 24h 后, 每处理组取菜青虫 6 头, 提取中肠蛋白酶酶液酶源的制备参照 Fengneng 等 (1999) 的方法, 将试虫冰冻约 30min, 剪取第二对胸足后至第二对腹足前的部位, 冰浴上迅速解剖出中肠, 浸于预冷的 0 1MPBS 缓冲液 (ph7 4), 清除肠内容物后, 置于含 2mL 同样缓冲液的组织匀浆器匀浆, 匀浆液转移至 EP 管, 10000r/min 于 4 下离心 10min, 上清液用于检测酶活蛋白酶酶活力以 3 组重复的平均值计蛋白酶活性检测参照沙槎云等 (1981) 和刘惠霞等 (1998) 的方法各反应管分别加入底物 :0 5% 酪蛋白溶液 2mL 及酶原 0 5mL,30 水浴反应 20 min, 每管加入 3mL10% 三氯乙酸终止反应, 经 4000r/min 离心 10min, 取上清液 1 0mL, 在 660 nm 处测定 OD 值对照管则在加入酶原之前先加 3 ml10% 三氯乙酸, 其余操作与试验管相同麻疯树佛波酯在离体条件下对中肠蛋白酶活力的影响则取对照组试虫的蛋白酶酶原进行将不同浓度的麻疯树佛波酯的乙醇溶液 10μL 加入反应管内, 待乙醇挥发后, 加入蛋白酶酶原, 于 30 水浴下作用 10min 后, 再添加底物酪蛋白溶液, 并按照上述酶活检测方 355

3 法测定酶活力 1 4 麻疯树佛波酯对菜青虫 Ca 2+ ATPase 活力的影响 3 龄菜青虫的处理同 1 2 参考 Feng 等 (1992) 的方法制备菜青虫神经细胞突触体样品处理 3h 后各处理组分别取试虫 15 头, 置于 -20 冰冻 30 min, 剪取头部, 加入到 10 倍体积的 0 05mol/LpH 7 4 的 Tris HCl 缓冲液中, 于冰浴中研磨匀浆匀浆液定容至 1mL/ 头, 于 3000r/min 离心 30min, 取上清液, 保存备用 Ca 2+ ATPase 活力检测参照试剂盒说明书操作 1 5 麻疯树佛波酯对菜青虫中肠 PKC 的影响参照 1 2 中的浸叶饲喂法处理 3 龄菜青虫, 于处理后 6h 提取酶液, 分别测定中肠细胞总 PKC 胞浆 PKC 和细胞膜 PKC 的酶活并检测了麻疯树佛波酯浓度为 64μg ml -1 时, 处理后 3h,6h,12h, 24h 和 48h 试虫中肠细胞总 PKC 胞浆 PKC 和细胞膜 PKC 的酶活 PKC 的提取参考 Walton 等 (1987) 以及项鹏等 (2002) 提取大鼠的神经细胞 PKC 的方法, 并进行改进取菜青虫 10 头, 置于冰上待试虫昏迷后, 在 0~ 4 下迅速解剖出中肠, 置于预冷的 BuferB(0 32 M 蔗糖,5mMTris HCl(pH7 5),120mMKCl,1mM EDTA,1mMEGTA,0 2mMPMSF,1μg ml -1 Le upeptin,1μg ml -1 PepstatinA,1μg ml -1 Apro tinin,0 05% TritonX 100) 缓冲液中漂洗 3 次, 去除肠道内的食物残渣, 再置于含有 2mL 同样缓冲液的匀浆器中, 在冰浴下匀浆至无组织块, 然后在超声波下破碎 20s, 转移至 EP 管中, 于 4 下 3000r/min 离心 15min, 取上清, 于 13000r/min 再离心 60 min, 上清液即为中肠细胞总 PKC 酶液中肠胞浆 PKC 酶液制备按照总 PKC 的制备方法, 只是将 BuferB 缓冲液置换为 BuferA(0 32M 蔗糖,5mM Tris HCl (ph7 5),120mM KCl,1mM EDTA,1mM EGTA,0 2 mmpmsf,1μg ml -1 Leupeptin,1μg ml -1 Pepsta tina,1μg ml -1 Aprotinin) 中肠细胞膜 PKC 制备则是在制备中肠胞浆 PKC 酶液的最后离心沉淀中加入 BuferB, 匀浆研磨, 然后超声破碎 20s, 于 4 下,13000r/min 再离心 60min, 上清液即为中肠细胞膜蛋白 PKC 样品 PKC 活性测定按照 PepTag Non Radioactive PKCAsay 试剂盒说明书进行所有反应均在冰浴上进行, 按照试剂盒反应体系上样琼脂糖凝胶电 356 泳紫外灯下分析结果拍照, 回收已磷酸化荧光条带融化抗凝后在荧光分光光度计上 570nm 处读取 OD 值, 进行 PKC 酶活性的检测 1 6 蛋白质含量测定酶液中蛋白质含量的测定采用 Lowry 法 (Lowry etal,1951), 以牛血清白蛋白为标准蛋白, 在 660 nm 处检测吸光度 1 7 统计分析各处理条件下的酶活力以 3 次重复的平均值计, 用平均值 ± 标准误表示应用统计软件 SPSS 13 0 分析数据, 采用 t 测验检测不同处理的酶活力差异, 显著性水平设置在 α= 结果 2 1 佛波酯对菜青虫超氧化物歧化酶活性的影响取食经不同浓度佛波酯处理的甘蓝叶片后, 菜青虫体内 SOD 活力变化见图 1 处理浓度为 8μg ml -1 时试虫体内的 SOD 活力与对照组差异并不显著 (t 测验,P>0 05) 浓度为 16μg ml -1 时, 菜青虫体内 SOD 活力显著上升, 高达对照组的 1 5 倍左右之后, 其活力急剧下降 64μg ml -1 时,SOD 活力下降趋于平缓与体内测试结果略有不同, 在离体条件下麻疯树佛波酯对 SOD 的活性有一定的抑制活性在 16μg ml -1 时,SOD 活力与对照组差异并不显著 (t 测验,P>0 05), 而在 64μg ml -1 时 SOD 活力下降了 62 51%( 图 1) 图 1 不同浓度麻疯树佛波酯对菜青虫 SOD 酶活性的影响 Fig 1 InfluenceofdiferentdosesofphorbolestersonSODactivity of3 rd instarlarvaofprerisrapae 2 2 佛波酯对菜青虫中肠蛋白酶活性的影响菜青虫取食麻疯树佛波酯处理的甘蓝叶片后, 其中肠蛋白酶活力随浓度的变化情况见图 2 结果

4 四川动物年第卷第期ＳＪＺＶＮ显示佛波酯对中肠蛋白酶活力有较强的抑制作用ｍｌ的处理浓度下其蛋白酶比活力即使在 μ 都显著低于对照组测验Ｐ随着麻疯树佛波酯的处理浓度增加对试虫中肠的蛋白酶活性的抑制作用也增大在离体条件下麻疯树佛波酯对蛋白酶活力同样具有很强的抑制作用各处理浓度都与对照组差异显著测验Ｐ并随着处理浓度增加抑制作用更显著处理浓度为ｍｌ时蛋白酶比活力仅为对照组的９ μ 图不同浓度麻疯树佛波酯对菜青虫ＣＡＴＰ活性的影响ＦＩＣＡＴＰＰＰＫＣ活力随着佛波酯的处理浓度升高而升高麻疯树佛波酯浓度为 μ ｍｌ时ＰＫＣ活力即显著高于对照测验Ｐ但当佛波酯浓度较大时如 μ ｍｌ时ＰＫＣ则出现下降处理浓度为 μ ｍｌ时ＰＫＣ比活力最高达到对照的倍进一步检测中肠细胞胞浆和细胞膜ＰＫＣ活性显示随着麻疯树佛波酯浓度的升高胞浆和胞图不同浓度麻疯树佛波酯对菜青虫蛋白酶活性的影响ＦＩＰ膜上的ＰＫＣ都逐渐增加其中细胞膜ＰＫＣ活力增加 μ ｍｌ时最高达到对照组的倍而显著胞浆ＰＫＣ活力增加不大最高仅为对照的倍佛波酯对菜青虫ＣＡＴＰ活性的影响胞浆ＰＫＣ比值也随着麻疯树佛波酯同时胞膜ＰＫＣ麻疯树佛波酯显著影响菜青虫神经突触体膜的ＣＡＴＰ的活性图取食麻疯树佛波酯后的处理浓度而逐渐上升显示中肠细胞中ＰＫＣ逐渐其比活力显著降低各处理浓度皆与对照组差异显向细胞膜转移即出现转膜现象三龄菜青虫经 μ ｍｌ的佛波酯处理后著测验Ｐ佛波酯浓度为 μ ｍｌ时ＣＡＴＰ酶活力从 μｍＰＩｍ降中肠细胞ＰＫＣ活力随时间变化的结果见表结果至 μｍＰＩｍ降低了约显示随着处理时间的延长中肠细胞ＰＫＣ的活力麻疯树佛波酯对菜青虫中肠ＰＫＣ的影响先显著升高而后降低在处理后其活力就达倍显著高于对照测验Ｐ到对照的不同浓度佛波酯对三龄菜青虫中肠细胞ＰＫＣ在ＰＫＣ的活力达到最大值较对照提高活力的影响见表在一定的浓度范围内中肠细胞表取食不同浓度的麻疯树佛波酯对菜青虫中肠细胞内蛋白激酶Ｃ活力的影响ＴＣＰＫＣｍＰ处理浓度 μ ｍｌ总ＰＫＣ活性ＵｍＣ胞浆ＰＫＣ活性Ｕｍ膜ＰＫＣ活性Ｕｍ胞膜ＰＫＣ胞浆ＰＫＣ９± ± ９± ± ± ± ９± ± ９± ９ ± ９ ± ９± ９ ± ± ± ± ９ ± ９± ± ± ９± ± ± ± 表示测验与对照组差异显著Ｐ下同ＭｍＰｍｗ

5 表 2 取食麻疯树佛波酯后菜青虫中肠细胞内蛋白激酶 C 活力变化 Table2 ChangesofPKCactivitiesinmidgutcelsafterthe3 rd larvaofpierisrapaeingestedphorbolester 处理时间 (h) 总 PKC 活性 (U/mgprotein) 胞浆 PKC 活性 (U/mgprotein) 膜 PKC 活性 (U/mgprotein) 胞膜 PKC/ 胞浆 PKC ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±0 21 Control 0 86± ± ± ±0 12 了 4 4 倍处理后 24h, 蛋白激酶 C 活力开始降低检测胞浆 PKC 和胞膜 PKC 的酶活结果也显示, 胞膜上 PKC 活力随处理时间延长升高显著,3h 时即显著高于对照, 最高可达对照的 3 08 倍 ; 而胞浆中 PKC 活力在处理后 6h 才显著高于对照, 最高仅为对照的 1 95 倍胞膜 PKC/ 胞浆 PKC 比值的结果也显示 PKC 有明显的转膜现象, 显示出麻疯树佛波酯对菜青虫中肠 PKC 有明显的激活作用, 并随时间变化 3 讨论外源有毒物质进入生物体后, 对生物体影响是多方面的我们前期的研究显示麻疯树佛波酯对菜青虫表现出明显的拒食活性以及胃毒活性 ( 李莉等, 2010; 李文庆等,2011), 推断出其对菜青虫可能具有多种作用方式, 对神经消化保护酶系统均有一定的影响本文研究检测了取食麻疯树佛波酯后 3 龄菜青虫体内多种酶活性的变化, 旨在一定程度上阐明麻疯树佛波酯对菜青虫的杀虫机理超氧化物歧化酶 (SOD) 是生物体内普遍存在的防御氧化损伤的重要保护酶, 起到保护生物机体的作用 ( 李周直等,1994) 许多植物次生代谢物质对昆虫 SOD 活性都具有不同的影响杨振德等 (2006) 研究了苦豆草生物碱对分月扇舟蛾体内消化酶和保护酶活性的影响, 结果显示处理 5h 后, SOD 活性显著高于对照, 并表现出前期升高, 随后降低的趋势与之类似, 本文研究发现菜青虫取食麻疯树佛波酯后 SOD 活性也随佛波酯浓度的增加而出现先增加再下降的变化, 而在离体条件下检测却未出现这种变化推测试虫可能在低浓度麻疯树佛波酯胁迫下会产生大量自由基,SOD 的活性在自由基的诱导下活性也随之升高, 以清除过量的自由基 ; 当佛波酯浓度过大时, 产生的大量活性氧中间体已超出了菜青虫机体清除的能力, 使菜青虫自身的防卫能力迅速下降,SOD 的合成受到抑制, 因而对机体 358 内自由基的清除能力减弱, 从而引起昆虫发病甚至死亡 ; 也可能是由于菜青虫体内自由基增多, 自由基的产生和清除之间失去了平衡, 从而使 SOD 活力急剧下降中肠蛋白酶是昆虫体内的主要消化酶系, 其活性的升高或者降低直接影响其对食物的吸收和利用当昆虫体内蛋白酶受影响后, 会导致昆虫消化功能失调, 代谢紊乱, 并且易受环境中其它不利因素的影响, 严重时导致昆虫死亡 ( 张兴, 赵善欢, 1992) 李静等(2005) 研究从麻疯树中提取的麻疯树萜醇 Ⅰ 发现其对家蚕中肠蛋白酶活性有较强的抑制作用本文研究发现, 菜青虫取食麻疯树佛波酯后, 对其中肠蛋白酶有较强的抑制作用, 并随浓度的增大而降低, 其无论离体条件下和活体的抑制作用都很显著李文庆等 (2011) 报道了麻疯树佛波酯对菜青虫具有较强的胃毒活性, 本文研究结果显示麻疯树佛波酯对试虫中肠蛋白酶活性的显著抑制可能是其强烈的胃毒活性的主要原因 Ca 2+ ATPase 主要分布在细胞质膜线粒体内膜内质网样囊膜动物肌肉细胞肌质网膜上, 在神经系统的细胞质膜和内质网膜的含量尤其丰富它通过调节细胞内 Ca 2+ 浓度从而调节细胞运动肌肉收缩生长分化等诸多生理功能 (Clementi& Mel dolesi,1996;faveroetal,1998) Doherty(1984) 认为许多药物毒杀昆虫的机理可能是破坏了细胞内 Ca 2+ 的调节功能所致, 但具体方式目前尚不清楚李静等 (2005) 研究显示, 取食麻疯树萜醇 Ⅰ 后菜青虫体内 Ca 2+ ATPase 和 Ca 2+ Mg ATPase 的活性都有一升高的阶段高平 (2001) 研究显示, 瑞香狼毒素 B 对 Ca 2+ Mg ATPase 的活力呈现双相效应, 当瑞香狼毒素 B 或 Ca 2+ 浓度较低时, 能提高激活 Ca 2+ Mg ATPase 的水解活力, 反之则表现为显著的抑制而本文研究发现, 低浓度的麻疯树佛波酯处理即可显著降低对菜青虫 Ca 2+ ATPase 活性, 而随着处理浓度升高, 其活性下降变缓麻疯树佛波酯对试虫脑

6 细胞 Ca 2+ ATPase 活力的抑制作用可能是其较强的拒食活性的原因蛋白激酶 C(PKC) 是广泛存在于真核细胞内的重要的信号转导分子, 是一种 Ca 2+ 和磷脂依赖性激酶, 通过催化多种靶蛋白发生磷酸化反应, 完成细胞对外源性信号的应答 PKC 主要以非活性形式存在于胞浆部分, 以活性形式结合于细胞膜当胞内 PKC 激活时, 会发生质膜转位 PKC 的活化有多条途径, 最主要的途径是接受外来信息后产生二酰基甘油 (DAG), 二脂酰甘油再活化 PKC Azi 等 (2005) 报道佛波酯是 DAG 的相似物, 能够产生类似于 DAG 的 PKC 激活作用本文研究从麻疯树种子中提取了佛波酯并检测了其对菜青虫中肠细胞 PKC 活力的影响, 结果表明麻疯树佛波酯与 DAG 一样, 能激活昆虫中肠细胞的 PKC, 并使之发生质膜转位菜青虫取食了低浓度的麻疯树佛波酯后, 中肠细胞 PKC 活性会显著升高, 具有明显的浓度效应和时间效应, 处理浓度在 64μg ml -1 时, 菜青虫的中肠 PKC 活力相对对照组提高了 2 34 倍 ; 且在处理 3h 后 PKC 活性即显著升高,12h 后其活性达到最大值, 较对照组提高了 4 4 倍同时我们的研究还发现取食麻疯树佛波酯后, 中肠细胞膜 PKC 比例明显增高, 大量有活性的 PKC 结合在细胞膜上, 即出现明显的质膜转位本文研究的结果表明, 麻疯树佛波酯具有类似于 DAG 的功能, 蛋白激酶 C 可能是麻疯树佛波酯杀虫活性作用的重要靶标可能正是由于麻疯树佛波酯对中肠细胞 PKC 的激活, 引起细胞内蛋白的磷酸化修饰改变, 从而使蛋白质的结构与功能发生改变, 导致中肠细胞功能紊乱, 最终导致菜青虫死亡 4 参考文献高平杀蚜活性物质瑞香狼毒素分离纯化结构鉴定及对昆虫毒性作用机理的研究 [D]. 四川大学. 李静, 颜钫, 何文兴, 等麻疯树萜醇 Ⅰ 对家蚕的毒性及作用机理研究 [J]. 农药学学报,7(1):29~34. 李莉, 李文庆, 卢代华, 等麻疯树萜醇 I 的杀虫活性及其对菜粉蝶幼虫 PKC 的影响 [J]. 四川大学学报,47(6):1402 ~1406. 李文庆, 李静, 李莉, 等麻疯树种子中佛波酯的提取及对菜青虫的杀虫活性 [J]. 应用与环境生物学报,17(4):532~536. 李周直, 沈慧娟, 蒋巧根, 等几种昆虫体内保护酶系统活力的研究 [J]. 昆虫学报,37(4):399~403. 刘惠霞, 董育新, 吴文君苦皮藤素 V 对东方粘虫中肠细胞及其消化酶活性的影响 [J]. 昆虫学报,41(3):258~262. 沙槎云, 白成, 温洁粘虫肠道蛋白酶在苏云金杆菌肯尼亚变种 7407 晶体致病中的作用 [J]. 昆虫学报,24(3):237~243. 项鹏, 邱明均, 杜泽丽, 等八肽胆囊收缩素对大鼠大脑皮质神经细胞 PKC 活性的影响 [J]. 华西医科大学学报,33(1):72. 杨振德, 朱麟, 赵博光, 等苦豆草生物碱对分月扇舟蛾体内消化酶和保护酶活性的影响 [J]. 北京林业大学学报,1:79~83. 张兴, 赵善欢川楝素对菜青虫体内几种酶系活性的影响 [J]. 昆虫学报,35(2):171~177. AziAngelo,OscoboinikDaniel,HenseyCarm,etal.2005.Theprotein kinasecfamily[j].febs,208:547~587. BeauchampCO,FridovichI.1971.Superoxidedismutase:Improvedas saysandanasayapplicabletoacrylamidegels[j].anlebiochem, 44:276~287. ClementiE,MeldolesiJ.1996.PharmacologicalandfunctionalProper tiesofvoltage dependentca 2+ channels[j].celcalcium,19:269~ 279. DohertyJD.1984.Insecticidesafectingiontransport,internationalency clopediaofpharmacologyandtherapeutics[m].(editedbymatsunura F).Pergamonpres,Oxford,113:432~452. FangnengH,KunYZ,LawrentL,etal.1999.Comparisonofmidgut proteinasesinbacilusthruingiensis susceptibleand resistanteuropean cornborerostrinianubilalis[j].pesticbiochem Physiol,65:132 ~139. FaveroTG,ColterD,HooperPF,etal.1988.Hypochlorousacidinhib itsca 2+ ATPasefrom skeletalmusclesarcoplasmicreticulum[j].j ApplPhysiol,84:425~430. FengGL,JacquesRM,ClarkJM.1992.Suppresionofpyrethroidde pendentmeurotransmiterreleasefrom synaptosomesofknockdownre sistanthousefliesunderpulseddepolarizationconditionduringcontinu ousperfusion[j].pesticbiochemphysiol,42(1):64~77. GoelG,MakkarHPS,FrancisG,etal.2007.Phorbolesters:Struc ture,biologicalactivity,andtoxicityinanimals[j].intjtoxicol,26: 279~288. LowryOH,ResebroughNJ,FarAL,etal.1951.Proteinmeasurement withtheforlinphenolreagent[j].biolchem,193:265~275. WaltonGM,BerticsPJ,HudsonLG.1987.A three steppurification procedureforproteinkinasec:characterizationofthepurifiedenzyme [J].AnalBiochem,161(2):425~437. WinkM,KoschmiederC,SauerweinM,etal.1997.Phorbolestersof Jatrophacurcasbiologicalactivitiesandpotentialapplications[A].In: GubitzGM,MitelbachM,TrabiM(Eds).BiofuelsandIndustrial ProductsfromJatrophacurcas[M].Dbv,Graz:160~