实验方法 <<% 腐败菌的分离纯化 在菌环境下从变质的冷鲜鸡中随机取 5 鸡 腿肉 用菌剪刀剪碎 加到 菌生理盐水中 封口后振荡 取上清液 进行 倍梯度稀 释 选择 个合适的稀释度 每个稀释度做 次重复 倾注于含有不同选择培养基的平板中 培养基的选择 及培养条件见表 表 各菌的选择性培养基及培养条件

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1 食品与发酵工业 * - 1% * %%1%% 冷鲜鸡腿肉中优势腐败菌的分离鉴定及腐败能力研究! 高磊!谢晶!叶藻!张宁!汪逸麟!高忱岳阳 上海海洋大学 食品学院上海%% 摘7要7为了有针对性地控制冷鲜鸡中微生物污染!用平板划线分离和感官评价方法对变质冷鲜 鸡 中 的 优 势 腐 败菌进行分离筛选 再将传统的微生物生理生化鉴定 方 法 与 B!<; 序 列 分 析 方 法 相 结 合!通 过 构 建 系 统 发 育树!对分离筛选出的进行鉴定 最后将各优势 腐 败 菌 重 新 接 种 至 灭 菌 肉 块 于 8 f 贮 藏!分 别 在 第 81 <产 量 因 子 K@oC< 探 讨 各 优 势 腐 败 菌 的 腐败能力 结果表明经选择性培养基 划 线 分 离 和 感 官 评 价 方 法!接 种 肉 块 共 筛 选 得 到 株 优 势 腐 败 菌 即 Bo 和! 鉴 定 结 果 分 别 为 7 * 5 - * E - 1 % % % 5 %! % * % * % 5 -! E 5 进一步研究其腐败特性!接种优势腐败菌的肉块在 8 f贮藏 过程中!通过计算 K@oC<发现 的腐败能力最强!而 o 的腐败能力相对较弱 关键词7冷鲜鸡腿肉分离鉴定腐败菌腐败能力 77% 年中国肉鸡产品的总消费量是 ` 万 占 世 界 比 重 的 `成 为 仅 次 于 猪 肉 的 第 二 大 肉类消费品 - % 近年来动物性流感 U5< 的爆发 致使中国鸡肉消费结构发生了明显变化活禽市场备 受质疑消费者逐渐开始选择购买冷鲜鸡% 但鸡经屠 7材料与方法 i 冷 鲜 鸡 购 于 上 海 农 工 商 超 市 临 港 新 实验所用 城店 冷鲜肉专柜经 1 天冷藏变质后取腿肉% x 8:8;原料 8:;培养基与试剂 f 营养琼脂培养基假单胞 菌 \:\选 择 性 培 养 基 架期% 已有大量研究表明假单胞菌肠热死环 oc!; 肠道菌琼脂 培 养 基B 琼 脂 培 养 基B@;; 丝菌乳酸菌和不动等是导致冷鲜肉腐败的主要 培养基 B; 甘 露 醇 高 盐 琼 脂 精 氨 酸 水 解 酶 培 养 微生物 % 这些较其他微生物生长更 快腐 败 能力 基葡萄糖氧化发酵 培 养 基!青 岛 高 科 技 工 业 园 海 博 更强的微 生 物 被 称 为 优 势 腐 败菌 是对食品腐败 h因此研究冷鲜鸡中优势腐 生物技术有限公司% 变质起主导作用的细菌% 琼脂糖细菌基因组!<;快速抽提试剂盒用于 宰加工运输后在冷藏过程中由于细菌的大量生长 繁殖会导致鸡肉品 质 劣 化从 而 限 制 了 冷 鲜 鸡 的 货 - 5- 败菌的特性对于冷鲜鸡的保鲜具有重要意义% V\扩增的 全 套 试 剂 及 合 成 的 扩 增 引 物 生 工 生 物 本实验选用冷藏变质的冷鲜鸡以其腿肉为研究 工程 上海 股份有限公司 盐酸二甲基对苯二胺 对象先采用平板划线分离和感官评价方法对冷鲜鸡 溶液 U 青岛高科技工业园海博生物技术有 腿肉中的 优 势 腐 败 菌 进 行 分 离 筛 选 再 根 据 菌 落 形 态菌 体 形 态 生 理 生 化 实 验 以 及 B!<; 序 列 分 析对菌株 进 行 鉴 定% 最 后 重 新 将 其 接 种 至 灭 菌 肉 <产量因子 作 为 各 优势 腐 败 菌腐败能力的定量指标进一步研究优势腐败菌的腐 败特性% 限公司 < \ U C U\ 均 为 分 析 纯 国 药 集团化学试剂北京有限公司% 8:B;仪器与设备 D!g[ %=高 压 灭 菌 锅 上 海 申 安 医 疗 器 械 厂 ob %% D 洁 净 工 作 台 苏 净 集 团 苏 州 安 泰 空 气 技 术 有 限 公 司!UV 型 电 热 恒 温 培 养 箱 上 海 一 恒 科 技 有 限 公 司 V V C 电 泳 仪 - ] U O 凝 胶 成 像 仪 C ;! 公 司 第一作者!硕 士 研 究 生 谢 晶 教 授 为 通 讯 作 者 = M! _ E R OR - % 7!%8 年度国家星火计划资助项目%8 d;1%%% 收稿日期!% % 改回日期!% %8 % %!* % *! 18%% 全 自 动 凯 氏 定 氮 仪 丹 麦 :BB 公 司 V\ 扩 增 仪 85 离 心 机 =V V=<!:公 司 %

2 实验方法 <<% 腐败菌的分离纯化 在菌环境下从变质的冷鲜鸡中随机取 5 鸡 腿肉 用菌剪刀剪碎 加到 菌生理盐水中 封口后振荡 取上清液 进行 倍梯度稀 释 选择 个合适的稀释度 每个稀释度做 次重复 倾注于含有不同选择培养基的平板中 培养基的选择 及培养条件见表 表 各菌的选择性培养基及培养条件 1 1 种类培养基培养条件 细菌 营养琼脂 B - 假单胞菌 假单胞菌琼脂 B - 肠 B - 微球菌 * B - 热死环丝菌 * B - 乳酸菌 * B - %% 从上述不同选择培养基的平板中 挑取各种典型生 长的菌落 然后在各自的培养基上反复进行平板划线分 离 得到纯化的单菌落 最后于斜面培养基保存 <<% 优势腐败菌的筛选 将分离纯化的各菌株重新培养至对数期后 用 菌生理盐水制成菌悬液 摇匀 利用血球计数板直接 测定菌液浓度 调整菌液浓度为 E 用菌剪刀将冷鲜鸡腿肉分割成 5 左右大小均匀 的肉块后 先将 酒精喷在其表面 静置 后用 菌水冲洗 再在超净台上用酒精灯对其进行表面灭 菌 然后浸泡于调整过的菌液 后取出放入菌自 封袋中 每种菌株接种个肉块 以个未接种过的肉 块作对照于 B 下贮藏 根据肉块的色泽 黏度 弹性 和气味 每天进行感官评价 将腐败最快的肉块 所接种的菌株作为筛选出的优势腐败菌 对其进行菌 种鉴定并测定该菌对冷鲜鸡腿肉的腐败能力 <<% 优势腐败菌的鉴定 <<<% 观察菌落特征和菌体形态 菌落特征 菌落大小 细如针尖 小 中等 大 质地 坚硬 干燥 湿润 边缘形状 整齐 星状 枫叶 状 树叶状等 光滑程度 粗糙 光滑 黏液型 透明 度 透明 半透明 不透明 菌落颜色 通过革兰氏染色 鞭毛染色及芽孢染色 对重新 培养 E - 长势好的单菌落进行显微镜观察 菌 体形态 细胞形态 短杆 长杆及球状等 革兰氏染 色分阴性和阳性 鞭毛的着生部位 周生 侧生和端 生 芽孢的生长位置和情况 <<<% 生理生化试验 年第 卷第 期 总第 期 研究报告 根据 常见细菌系统鉴定手册 和 伯杰细菌 鉴定手册 对各菌株进行氧化酶 过氧化氢酶 葡 萄糖氧化发酵 和精氨酸双水解酶实验 <<<% 的提取 挑取重新培养 E - 的单菌落至液体培养基 中过夜培养 采用细菌基因组 快速抽提试剂盒 直接提取 提取的 作为该菌株的扩增模 板 于 B 保存待下一步实验 <<<%* 的 8 扩增 以提取的 @ 来扩增目的片段 的基因 采用 体系进行 8 扩增 即 8! < 7 < 上 游引物和 下游引物各 及模板 8 扩增程序 为 B 预变性 B 变性 B 退火 B 延伸 进行 个循环 最后 B 延伸 用 缓 冲液配制 琼脂糖凝胶 取 扩增产物进行琼 脂糖凝胶电泳 再用溴化乙锭 对其染色后 在 凝胶成像仪中观察电泳结果并拍摄电泳图谱 每种 菌株均获得长度为 左右的条带 最后将 8 扩增产物委托生工生物工程 上海 股份有限 公司进行测序 <<<% 测序和系统发育树的构建 登陆网站 -!!< < < -<51! h:fxi 5 将测序所得 * 序列与核酸序列数据库中 已知序列进行同源比对 从中选取若干个相似性高的 菌株序列 < 软件 通过邻接法 5-1 ;1 5 做 次随机抽样构建系统发育树 <<% 优势腐败菌腐败能力的测定 将筛选所得的优势腐败菌按照 << 节的方法 制得一定浓度的菌悬液 接种于灭菌的肉块后放入 菌自封袋中 B 贮藏 在第 天时 以未接 种过的肉块作对照 每组各取个肉块测定菌落总 数和挥发性盐基氮 将 产量 因子 作为各优势腐败菌腐败能力的定量指 标 公式如下 观察点 值 初始点 值 观察点菌落总数 初始点菌落总数 <<% 数据分析 序列拼接采用 ** < 序列的分析

3 食品与发酵工业 同源性比较用 \ B@;DT `%`% 系 统 发 育 树 的 构 ``7生理生化实验 建用 =d;`% 软件% 数据采用 次平行试验 的 平 根据食品 微 生 物 鉴 定 图 谱 以 及 常 见 细 菌 系 统 均值结果用平均值和标准偏差表 示曲 线采 用 鉴定手册 - 通过镜检各种菌在显微镜下的菌体形 -V `% 绘 制 利 用 BVBB `% 进 行 差 异 显 著 性 分 态革兰氏染色情况 等结 合 表 的 生 理 生 化 实 验 结 析7%`% 表示显著差异% 果初步 鉴 定 为 假 单 胞 菌 属 B 为 环 丝 菌 属 为葡萄球菌属o 为色属 为肠科% 7结果与讨论 表 B;生理生化实验结果!%<= B; = M %= % % K = %M<% % :8;优势腐败菌的筛选 氧化酶 U % 实验 实验 氧化型产酸 其中在假单胞 菌 琼 脂 培 养 基 中 挑 了 株oC!;培 B 发酵型产酸 养基 8 株B;培养基 株B@;;培 养 基 8 株B 发酵型产酸 o 氧化型产酸 发酵型产酸 将变质冷鲜鸡腿 肉 的 稀 释 液 倾 注 于 含 有 不 同 选 择培养基的平板从中挑取典型生长的菌落共 5 株% 培养基 % 株% 经反 复 划 线 分 离 纯 化 后 制 成 一 定 浓 度 菌株 * :实验 精氨酸双水解酶 实验 的菌悬液接种至新鲜的冷鲜鸡腿肉% 每天进行感官 评价 感 官 可 接 受 性 逐 渐 降 低 发 现 经 菌 株 B o 接 种 过 的 肉 块 感 官 得 分 最 低 腐 败 较 快% ``7优势腐败菌 B!<;的 V\扩增 分别提取 株菌的基因组!<;后以其 总!<; i 其中 和 源自假单胞菌琼脂培养基B 源自 B@;; 为模板 利 用 V\扩 增 其 B!<; 基 因 片 段% 结 果 培养基 源 自 B;培 养 基 o 源 自 oc!;培 养 如图 所示 个样品均获长度在 %% KF 左右的条 基% 第 8 天开始表面光泽外表 湿 润 不 粘 手肌 肉 带最后将 V\扩增 产 物 送 至 生 工 生 物 工 程 上 海 稍有弹性略有异味到第 5 天色泽暗淡呈褐色外表 股份有限公司进行测序% 湿润沾手肌肉失去弹性异味较强肉块已明显腐败% 不同的细菌分解利用糖类脂肪类和蛋 白 质 类物 质 的 x 能力不同因此其代谢产物和腐败能力也不同% 因此f 对筛选出的 株优势腐败菌 Bo 进行菌 种鉴定并测定该菌对冷鲜鸡腿肉的腐败能力% :;优势腐败菌的鉴定 ``7菌落特征和菌体形态 通过革兰氏染色后镜检观察各菌体的形态结构 h 及其在固体培养基上的菌落特征结果见表 % 表 ;菌落特征以及菌体形态 图 7菌株的 B!<;V\电泳图谱!%<= ;% % <% %= = * %*- : `7V\ MF - B!<; - %K % * 菌株 B o 菌落形态 革兰氏 菌体 圆形轻微 隆 起 灰 白 湿 润 半 透明边缘整齐光滑 圆形轻微 隆 起 白 色 湿 润 半 透明边缘整齐光滑 圆形明显 隆 起 淡 黄 湿 润 不 透明边缘整齐光滑 圆形轻微 隆 起 紫 色 湿 润 半 透明边缘整齐光滑 圆形明显 隆 起 白 色 湿 润 不 透明颗粒状光滑 芽孢 鞭毛 ``87系统发育树的构建 染色 形态 情况 情况 将测序所 得 B!<;序 列 与 核 酸 序 列 数 据 库 d 极生 中已知序列进行比对选取相似性高的菌株序列构建 d d 球菌 d 周生 d 周生 系统发育树结果如图 所示% 不难发现! 与沙雷 氏菌属的! E 5 同源性最高 与假单胞菌 属 的 7 * 5 - * E - 同 源 性 最 高 与葡 萄 球 菌 属 的! % * % *同 源 性 最高o 与 色 杆 菌 属 的 % 5 - 同源 性 最 高 B 与 环 丝 菌 属 中 的 1 % % % 5 % 同 源 性 最 高% 7 * 5 - * E - 属于假 单 胞 菌 属 是 食 品 典 型 腐 败 菌% 鸡 肉 在!* % *!

4 研究报告 冷藏过程中它由于 更 加 适 应 低 温 的 环 境在 肉 类 上 的作用使蛋白质分解脂肪氧化而引起的微生物的 极易繁殖且具有很 强 的 产 生 氨 等 腐 败 产 物 的 能 力 大量繁殖是造成肉类食品腐败的主要根源% 因此肉 是冷 藏 畜 肉 中 存 在 的 优 势 菌 8 % - %! E 5 中菌落总 数 是 表 示 肉 品 腐 败 程 度 的 一 个 重 要 指 标% 属沙雷氏菌属它是革兰氏阴性菌并兼性厌氧% 主要 图 所示在整个 8 f 贮 藏 过 程 中接 种 肉 块 和 对 照 利用该菌中酶对自 由 氨 基 酸 发 生 脱 羧 基 作 用 而 形 成 组中的菌落总数呈总体增长趋势且接种肉块的菌落 - % 当人 体 摄 入 过 量 生 物 胺 时 可 引 起 疾 病 总数均高于对照组% 其中接种假单胞菌的肉块菌落 如头痛伤寒肺炎肠炎 等 它 也 有 一 定 的 食 物 中 总数增长速度较快其他 8 株腐败菌也有不同程度的 毒危险性因此应严格控制! E 5 的 生 长 繁 增长% 在贮藏末期也 达 到 了 较 高 的 对 数 值各 接 种 殖%! % * % *是 葡 萄 球 菌 属 的 一 块的菌 落 总 数 均 超 过 ` \:* 与 对 照 组 种在自然界中分 布 很 广是 常 见 的 腐 败 菌% 该 菌 主 1` \:* 有 显 著 差 异 7%`% % 贮 藏 前 要起源于禽类本身 - 但在加工运 输等 过 程 中 繁 殖 天菌落总数 增 长 明 显 天 后 开 始 进 入 稳 定 期% 以 机会大 大 增 加% % 5 -属 于 色 上现象表明!食品原 有 的 嗜 冷 菌 在 低 温 贮 藏 期 间会 属广泛分布 在 水 和 土 壤 中% 鸡 肉 表 面 发 黏是 利用蛋白质和营养物质良好地生长菌落总数急剧增 由于色 杆 菌 在 肉 的 表 面 生 长 繁 殖 产 生 黏 液 的 结 加且优势腐败菌的存在会进一步加速冷鲜肉腐败现 果% 在冷藏温度和高湿度下有利于其生长% 同时 象的产生% 但微生 物 因 生 长 环 境 变 差 代 谢 产 物 积 色也能分解冷 鲜 鸡 中 的 某 些 脂 肪 而 加 速 脂 肪 的 累排出毒素 营 养 缺 乏 等 生 长 缓 慢 从 而 进 入 稳 定 氧化作 用 引 起 肉 类 酸 败% 1 % % % 5 % 期% 生物胺 i 是革兰氏阳性兼性 厌 氧 菌在 8 f 下 能 较 快 地 生 长 被认为是冷藏温度 下 引 起 冷 却 肉 腐 败 变 质 的 主 要 微 生物之一 - % 在有氧条件下较高数量 的 热 死 环 丝 fx 菌会产生乙偶姻双 乙 酰甲 基 丁 醇 等 令 人 不 愉 快 的 挥发性代谢产物 8 - % 这些分离出 的 腐 败 菌 是冷 鲜 鸡 繁殖导致冷鲜鸡最终腐败变质% 冷鲜鸡中的优势腐 败菌相对于冷却猪肉来说情况基本一致但乳酸菌 不动以及莫拉 氏 菌 等 常 见 冷却肉腐败菌并未检 出或其对鸡肉的腐败能力不强% h 中常见腐败菌它们 主 要 是 由 于 鸡 在 屠 宰运 输 和 销 售和包装过程中污染且在冷藏过程仍有残存且大量 图 7接种优势腐败菌的灭菌肉块在 8 f贮藏 菌落总数的变化 : `7 K R- E - E - K - R O E O M - - F K O 8 f < 是 指 肉 及 肉 制 品 水 浸 液 在碱性条件下能与水蒸气一起蒸馏出来的总氮量是 评价肉及其制品 新 鲜 度 的 一 项 重 要 指 标% 它 是 由 于 微生物的繁殖使其进入肉的深层组织从而引起的脱 羧脱氨作用导致蛋白质的分解而形成的产物% 在冷 鲜鸡中分解游离出 的 盐 基 氮 类 物 质 主 要 有!伯 胺仲 图 7基于 B!<;序列同源性的菌株系统发育树图 胺叔胺包括 尸 胺 腐 胺 酪 胺 精 胺 氨 等 - % 评 价 : 7VE - -K O - B!<; ar - 标准 - 为!一级鲜度 M* %% 二级鲜度 可食 :B;接种肉块的菌落总数和![\变化 将筛选所得 株 优 势 腐 败 菌 重 新 接 种 至 灭 菌 的 肉块于 8 f贮藏分 别 在 第 81 天 时以 未 接 种过的肉块作对照 \ 每 组 各 取 个 肉 块 测 定 菌 <变化结果见图 和图 8% 肉类食品的腐败 变 质 是 由 肉 中 的 酶 以 及 微 生 物 范围 M* %% 变质肉 M* %% % 在 8f 贮藏期 间 接 种 优 势 腐 败 菌 的 灭 菌 肉 <的 变 化如图 8 所 示 接 种 腐 败 菌 的 肉 块 在 8 f 贮 藏 期 <值逐 渐 增 大 贮 藏 初 <值 变 化 不 明 显% 但到了第 天随着腐败菌的生长繁殖各组肉块 <值明显 增 加 且 均 超 过 了 M* %% 已 超过一级鲜度肉 品 开 始 腐 败 变 质% 到 了 贮 藏 末 期!年第 %卷第 期! 总第!期!

5 食品与发酵工业 <值均超过 8 M* %% 肉 质 基 本 期间腐败菌 对冷鲜鸡腿肉的腐败能力较强其次 达到腐败 程 度% 其 中 组 < 值 高 达 5`1 是! E 5 和! % * M* %% 其 次 是 组 `85 M* %% 而 o 组 的 % * 而 o 和 B 1 % % % 5 % <值 `5 M* %% 略 高 于 对 照 组 的 8`18 能力相对较弱% 该结 果 可 为 今 后 针 对 性 地 选 择 保 鲜 M* %% 表 明 o % 5 - 分解 剂保鲜冷鲜鸡提供一定理论依据% 肉中蛋白质加速其 氧 化 作 用 不 大腐 败 能 力 较 弱而 7结论 7 * 5 - * E - 利用 肉 中 营 养 物 质 产生较多代 谢产物腐败能力强% 因 此除 了 o 组 实验从变质冷鲜 鸡 的 腿 肉 中 分 离 并 通 过 感 官 评 <值与对照组有显著 价筛得 株优势腐败菌经菌落特征菌体形态生理 差异 7 %`% 说 明 腐 败 菌 的 生 长 繁 殖 是 导 致 生化实验以及 B!<;序列分析 <产生的主要原因% 分 别 鉴 定 为! 7 * 5 - * E - 1 % % % 5 %! % * % * % 5 -! E 5 % 进一步研究表 明 对冷鲜 鸡 腿 肉 的 腐 败 能 力 较 强 其 次 是 和 而 o 和 B 的腐败能力相对较弱% i 参 考 文 献 - 7王茵 `中国肉鸡生产 与 消 费 分 析 - `农 业 展 望 % %! 1 58` 图 87接种优势腐败菌的灭菌肉块在 8f贮藏 - 7TU`<RMK - M O ERM - ] - - R <的变化 fx ; U5< F O TU =C* D- ` % % : `87@ ] K - - E - %8 1 - `E F! ** `E ` - * - R -^ * ERM -N E K - R O E F K O 8f 本研 究 通 过 计 算 < 值 与 菌 落 总 数结 合 定量表示 各 腐败菌的 <产量 因 子 K 7* 腐败能力 % 由 表 8 可 知 接 种 腐 败 菌 值 最 大 `% * % 5 - * E - 的 K h 他 8 株而 接 种 腐 败 菌 M@oC <* \: 明显高于其 <* \: - 1 F1 8 o % 5 - K@oC< 值 最 小 %` * %1 8 ` 1 % % % 5 % - F - E M F M K RF -` R - : O K %%1! 55 1%` 8-7d \C - `@E - M - - F E F K OR - MM O - E - -O R - F -` R - : O K E - - E K ar - - M O E M F R - - R - ` R -O \ R C!%<= D; = - %![7 -@ *%* K = %M<% % \: \: - 7 R : = -! R d C E ] R 1-7 B M! V! F `@E R _ 表 D;各种优势腐败菌的![7 产量因子 初始点菌落 观察点菌落 -O _ `E M! ` % 1 M@oC <* \: % 菌株 总数 j% *总数 j% * - M N - * - R -^ N E5- *! N F * -* 初始点 <值* K@oC< j% 1 * M M M %% - %% - ` 51 \: % B %` % ` ` ` %` 1 % 8 5 o %5 1 % 1 5 %` % E M %% 1! ` - 7孙承锋南庆贤牛 天 贵 `酱 牛 肉 中 腐 败 细 菌 的 分 离 与 鉴定 -`中国食品学报%%! %` 5-7DR-O CC O R O dt`@em K -O ar O - `d E KR -O B;! ; F - VRK E - F -%%%!85 %` 1-7万萍 `食 品 微 生 物 基 础 与 实 验 技 术 - `北 京!科 学 出 版社 %%8! 5` - 7黄林陈全胜张燕华等 `冷却猪肉优势腐败菌分离鉴 定及致腐能力测定 - `食 品 科 学% 8!% 77腐败菌的腐败 能 力 差 异 源 自 其 利 用 肉 中 营 养 物 质产生代谢产物的能力不同% 结果表明在 8 f贮藏!* % *! %` % - 7 C E = - MR M - K `C F M

6 研究报告! 1! ; <!! 1 ;1 1! 1! 1 1 5!!! : < % !!<!!! 1! 1-5 5!1 - -!- ; < 11 -! : < % * 7 5! <* 1 : -!!!!!!!! ! 5-1 ; ; * < % 东秀珠 蔡妙英 < 常见细菌系统鉴定手册 < 北京 科学出版社 < % 1 7<! 1 115: < 1 * 8 -! < < % 刘梦茵 刘芳 诸永志 等 < 草鸡煲中腐败菌的分离鉴定 ; < 食品科学 < % *<11!! 1 1 -:15!! ; <8 1 51!-! 1 :1* < %@ < < 食品卫生微生物学检验菌落总数测定 * %@ < < 肉与肉制品卫生标准的分析方法 * % 李学英 杨宪时 郭全友 等 < 大黄鱼腐败菌腐败能力!* 5 :!! - = ; <!! 1 ; : < % 8-8=! 1 : 5 1! 1! 1 : ; <!! 1 ; : < %*- ;! 8!<-!! 1 1 <1 1! 1! ; < : < % 8 - < 1!1 8 :1!-!! 1 1-1! ;!! 1 ; : < % - * 1 ; ;<! 1-5! -! : 1 5 1! = 1-5! 1! ; <;1 1! 115: < % 李苗云 张秋会 高晓平 等 < 冷却猪肉贮藏过程中腐 败品质指标的关系研究 ; < 食品与发酵工业 的初步分析 ; < 食品工业科技 < < % 中国标准出版社 < 食品卫生检验方法理化部分 < %11 7 * 1 1! 1 1!- 北京 中国标准出版社 < ; 5 C1 5 - : : 5 h:fxi * - 115: *- 5-!: *- 5- -!% 1!1 1! 1 1 1!!1 - -! 5! : 1!1 5! 1! 1! 1! ! 1 :! 1 5!-!! 1-:15!!!- :! :!! 1 -: 1 1 -!! 1 5!- * = : -! - 5!1! B! 1!!- -!! -! 1! 1!1! 1!! 15!-!!-!-!- :!! :!- :!1 1 1! 1!!!1!!- 1 5!: 1! -!-1!-!! 1 1!1 5! 5! ; * ; 1!! % - -! ::! 5! 1 1!-! 1 5!:1;!-! 1 5! 1 5!- 1 5! B 1!1 5!-! -1 % ! 1!! 1 1 5! 1 5!: 年第 卷第 期 总第 期

第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序

第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序 河 南 农 业 科 学 王 兴 涛 罗 俊 滕 蔓 樊 剑 鸣 鄂 巍 禹 斌 刘 力 张 改 平 利 用 技 术 对 河 南 省 某 规 模 化 猪 场 乙 脑 疑 似 病 例 的 种 猪 精 液 进 行 分 析 从 部 分 样 本 中 扩 增 出 与 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 基 因 和 基 因 具 有 高 度 同 源 性 的 预 期 产 物 在 日 龄 乳 鼠 脑 内 接 种 种 猪

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