!"#$%&%'% 肝转移是结肠癌患者死亡的主要原因之一约 & 的结肠癌患者存在肝脏转移如何抑制结肠癌肝转移已成为近几年结肠癌研究领域的热点传统的治疗方法包括手术切除药物化疗冷冻治疗等这些方法往往伴随肝脏的损伤近年新城疫病毒 " ( )' 治疗肿瘤作为一种潜在的生物治疗方法已经广泛

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雾危
7 years ago
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1 新城疫病毒对结肠癌肝转移模型小鼠肝内类细胞因子表达的影响梁莹黄盼柳樊晓晖周丹旎宋德志高灵茜赖振屏广西医科大学基础医学院微生物学教研室广西南宁专题报道摘要目的探讨新城疫病毒对结肠癌肝转移瘤小鼠肝组织类细胞因子表达的影响为作用人结肠癌肝转移的免疫效果研究提供实验依据方法取只健康!"# 小鼠随机分为组每组只 $% 组 &' 组组正常对照组建模及给药结束采用!% 法测定肝脏组织上清!&!!! 的浓度比较组间各细胞因子表达差异分析 & 与! 表达水平的相关性结果经治疗后结肠癌肝转移瘤小鼠肝组织表达均不同程度恢复到正常对照组水平即类细胞因子!& 和类细胞因子! 表达显著回升类细胞因子!! 表达显著下降与 &' 组相比组的小鼠肝脏各类细胞因子更趋近于正常对照组小鼠的水平 & 表达水平与! 表达水平相关性检测 $ 有统计学意义结论能促进结肠癌肝转移小鼠的肝组织类细胞因子分泌抑制类细胞因子分泌使其趋近于正常水平且小鼠 & 与! 表达呈正相关主题词新城疫病毒结肠肿瘤肝肿瘤肿瘤转移白细胞介素肿瘤坏死因子小鼠中图分类号 ( 文献标识码文章编号 )*++,-."/.001+* # - #0.00.'0 % ,.1! , #.1 8.#! 9 :.1; 9 $1.'& *.-'.! " #$%&' "&!& #& /# ; # - #0,.00 7.' # ,.1.7 <00.0 <-, - #--1 #1#.1 <.#1, , 0.# 23.<1,.1.<<' <0 0.0 <-, - #--1 #1# 8-,0 &-5 5!"# <.# 1,-<5,.7.,,.1- ;-'30 1=.1 # ;-'3>$% ;-'3&' ;-'3 ;-'3 1, 1-< #-1- ;-' ;.7 <00.0 <.# <-, - #--1 #1# 1, <1.,.1,'; !&3!!1,! '0 <0', 5!% <-,03#.75,.1# # # ?, <-1; ;-'30 1, # &3 1,! ?, 0'0 7-0 # '0.1#0, - 1-< 7.1;,. 1, &'!&31,!.1#0, 1,! 1,!,#0, 4-<3,. &' <1 ;-'3.7 # ;-'3 <- # < #-1- ;-' ! 1, &3 0.;1..#15 #-, $> 4-1#'0.-1 <1 #1 #.75 3-<- 3-,'# # , ,'# # <00.0 <.# <-, -< #--1 #1#1, 70 0 # < # &3 1,!.1 <.# #0,.00 7.'0# < <01-30< <00.0! &3<.# 基金项目广西自然科学基金资助项目广西高等学校立项科研项目!* 广西自然科学青年基金 9*%& 教育部博士导师联合基金项目广西研究生教育创新计划资助项目 :4A 通讯作者樊晓晖教授博士广西医科大学基础医学院微生物学教研室广西南宁市双拥路号 <.12.-'. B#-< 收稿日期 )) 修回日期 ))

2 !"#$%&%'% 肝转移是结肠癌患者死亡的主要原因之一约 & 的结肠癌患者存在肝脏转移如何抑制结肠癌肝转移已成为近几年结肠癌研究领域的热点传统的治疗方法包括手术切除药物化疗冷冻治疗等这些方法往往伴随肝脏的损伤近年新城疫病毒 " ( )' 治疗肿瘤作为一种潜在的生物治疗方法已经广泛用于肿瘤治疗的基 *+ *, 础和临床研究我们课题组前期研究不仅证实 0 )',,-. 体外可以杀伤小鼠结肠癌 / 细胞且证实 )',,-. 体内可抑制结肠癌肝转移模型小鼠肝脏肿瘤的发生和发展贯序 1 治疗对模型鼠生 - 存期的延长及免疫功能的激活均有一定的作用初步证实 )' 抑瘤作用与 )',,-. 上调肝脏的 1 以及提升胸腺指数有关然而 )',,-. 对转移瘤模型鼠体内肿瘤免疫微环境的影响尚不明确为进一步了解病毒抗肿瘤的相关免疫机制在本实验中我们通过测定各组小鼠肝脏组织上清 /1+&&, 表达水平探讨 )',,-. 作用小鼠结肠癌肝转移肿瘤免疫微环境的变化 & 材料与方法材料与主要试剂 1 级 2" 小鼠 + 只雄性 0 周龄左右体重 *+# 购自广西医科大学动物实验中心接种细胞株为小鼠结肠癌 /3/ 细胞株购自上海研晶商贸有限公司小鼠 /1+ &&, 4 试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司 -*& 日龄 1 级鸡胚购自南宁市良凤江农牧有限公司 1 购自 45 "" 公司 67&+ 培养基购自 89" 公司二甲基亚砜 )7! 戊巴比妥钠购自 #: 公司病毒株的培养与纯化取 1 -*& 日龄鸡胚将 : 病毒稀释液 7&-- 培养基稀释至血凝效价为 &+; 的 )',,-. 尿囊液接种于鸡胚绒毛尿囊腔中温箱孵育 +0 之后移入 + 冰箱中过夜次日收集尿囊液于 + 下 &2: 离心 &: 收集上清液然后于 + 下 02: 离心 : 收集上清液最后于 + 下 2: 离心 & 弃上清液取 &: 含 &4)/ 的重悬沉淀获得病毒原液血. 凝实验测定病毒原液效价用将病毒原液稀释为 &;2: 的工作液置 0 保存备用 1 的配制将 1 粉末溶解于制成 +:#2: 的工作液过滤除菌 + 保存备用使用前于., 混匀建模与分组从 + 只健康 2" 雄性小鼠中随机选出. 只戊巴比妥钠按 +:#2# 经腹腔途径注射麻醉小鼠然后经脾注入 :, 个 2: 浓度的 / 单细胞悬液建立小鼠结肠癌细胞 / 肝转移模型建模小鼠随机分为. 组组 1 组 )',,-. 组余下只为正常对照组各组小鼠的给药治疗从术后当天开始各组处理如下组每天腹腔注射 :2 只连续注射 1 组每天腹腔注射 +:#2: 的 1 :2 只连续注射从第开始每天腹腔注射 :2 只连续注射 )',,-. 组每天腹腔注射 ;2: 的 )',,-. : 2 只连续注射从第开始每天腹腔注射 :2 只连续注射正常对照组每天腹腔注射 :2 只连续注射各组动物笼养条件相同标本取材及细胞因子的 4 法测定标本均取自肝脏右叶同一部位组织 ; 液清洗. 遍去除血迹吸水纸吸去组织表面多余液体电子天平称湿重每份约 :# 置入玻璃匀浆器按 #2: 加入液 + 冰浴下充分匀浆吸取匀浆液低温离心机 +.2: 离心 : 收集上清液 0 保存备用 4 测定方法按照试剂盒说明书进行统计学处理所有实验数据均以均数标准差表示并采用软件进行统计学分析两组间比较用检验进行显著性检验多组间用! 3$!' 方法两指标之间的相关性采用积差相关分析检验水准有统计学意义结果结肠癌 / 肝转移瘤模型小鼠的建立采用脾脏保留法对. 只 2" 雄性小鼠行

3 手术建立肝转移瘤模型小鼠无一手术后死亡于术后第 () 处死小鼠并尸检均可肉眼观察到肝脏处转移瘤的生成成瘤率 (''* $+, 组与正常对照组小鼠肝脏 -.( -. 类细胞因子表达水平的比较与正常对照组比较 $+, 组小鼠肝脏 -.( 类细胞因子 /0-1 的表达明显减少 $'&'(-. 类细胞因子 /0/0(' 的表达明显增加 $'&'( 差异具有统计学意义 - ( 结果表明小鼠结肠癌肝转移瘤的形成可破坏肝脏原始局部微环境 -.-. 细胞比例平衡发生 -. 漂移不同治疗方式对小鼠结肠癌肝转移肝脏类细胞因子表达的影响与 $+, 组比较组小鼠肝脏 -. 类细胞因子 /0-1 表达水平升高 $'&'-. 类细胞因子 /0/0' 表达水平下降 $'&' 差异具有统计学意义 1" 组 -1 表达水平升高 $ '&'/0 表达水平下降 $'&' 差异具有统计学意义 /0/0' 表达水平无明显变化 - 结果表明和 1" 治疗均可激活小鼠的抗肿瘤免疫反应 -.-. 类细胞因子的量均不同程度恢复到正常健康小鼠的水平并且相对于 1" 治疗对小鼠结肠癌肝转移肝组织 -. 类细胞因子 /0-1 表达的促进作用及 -. 类细胞因子 /0/0' 表达的抑制作用更有效促进小鼠肝脏 -. 类细胞因子 /0 的表达与正常对照组比较 $+, 组 1" 组组 /0 依次为 '& '&! & '&! & '&!!"#$%'&'& '&''&!$2'&''' 差异有统计学意义正常对照组 /0 表达水平最高与 $+, 组比较组表达水平升高 $2'&'' 差异有统计学意义而 1" 组无明显变化 13!" 组小鼠肝脏 -1 表达水平与 /0 表达水平的关系无论是正常对照组还是结肠癌肝转移组将所有组别的小鼠肝脏 -1 表达水平与其对应的 /0 表达水平进行相关分析 '&$%'&'' 相关系数有统计学意义 - 提示小鼠 -1 表达水平与 /0 表达水平存在线性正相关相关程度较大!"# ""$!"!"!%$!" &' $ " "$ "$!"! "#$! %&# "' %& %& ( )*+),)-. -/ /-. +-0))-+. '23!2 #0)-/4#+-# 0-#5-# #-#6+-# -/7#-# 8-#/ 8-/ 80-8-# :!"# ""$!"!"!%$!" $#"( ' ";! ";#! %&# "' %& %& 9? )-+)@)- -/0A-0-0B/- +-0)C)-+ )-D#-#) 0+#-)E-+. #-0#-+#. )-- '))+/ /-0#)-. #-<-0. /#-+=0-0. /->/-. #- )-0+ -/ #-/ / $+,!"#$%'&'& /04("! ''' ('' (''' '' '!"#$%&'!"# $%'&' $%'&'(& )!$ $+, 41" *+, %!"!%$!## " - $

4 !"#$%&%'%!" # $ %&'! "# $ %&' ( $! 讨论肿瘤免疫耐受的发生机制是极其复杂的众多的研究发现带瘤机体细胞因子谱的改变是重要的机制之一由于处于肿瘤进展期的患者体内亚群功能抑制和亚群功能亢进机体抗肿瘤免疫应答由型向型转化使得细胞比例失衡表现为类细胞因子 ()) ( 等表达水平下降类细胞因子 (* &,&& +)(, 等表达水平上升我们的研究也得到类似的实验结果结肠癌肝转移小鼠模型中的肝组织中 & 型细胞向型细胞转化细胞因子谱型向肿瘤免疫耐受方向发展经过 -'../ 或 ) 治疗后结肠癌肝转移小鼠肝组织细胞比例发生漂移说明 -'../ 或 ) 能不同程度纠正细胞比例失衡与 ) 相比 -' 的治疗效果更好表现为结肠癌肝转移小鼠用药后肝组织各类细胞因子更接近于正常健康小鼠的水平因此 -'../ 激活机体抗肿瘤免疫的能力优于 ) 我们的研究发现 -'../ 对小鼠结肠 / 癌肝转移有显著抑制作用推测该抑制作用极可能是通过纠正小鼠结肠癌肝转移肝脏局部微环境细胞比例失衡来实现 (. 为. 细胞分泌的特征性细胞因子目前. 细胞的相关研究已经取得了很大进展但关于在肿瘤组织中. 细胞数是否增高一直存在争议例如 ( 等的研究发现结肠癌患者肿瘤组织. 细胞数明显高于自身正常结肠组织的. 细胞且这个比例与患者预后显著相关对于人卵巢癌组织. 细胞的分布研究也存在两种截然不同的结果有研究认为卵巢癌患者肿瘤组织中浸润性 *. 细胞数显著上升而 0 等的实验结果是卵巢癌组织. 细胞数量较少及 (. 表达水平下降而我们的动物实验结果显示结肠癌肝转移小鼠肝脏中 (. 的表达量显著低于正常小鼠肝脏表达量这些不同研究结果的出现一可能是个体的差异所致二可能是随着疾病进展肿瘤浸润性. 细胞和 (. 表达水平发生了改变后者在王建升等的研究中得到了证实即虽然晚期结直肠癌组外周血中. 细胞比例均高于健康对照组但与早期结直肠癌组相比晚期结直肠癌组外周血中. 细胞比例仍然是明显降低王建升等的深入研究也发现结直肠癌肿块内. 细胞及 (. 水平与肿瘤分化程度淋巴结转移情况及 0 分期相关说明. 细胞的分布并不绝对可因肿瘤类别和分期以及检测部位的差异发生改变 ) 表达可促进. 细胞的迁移而. 细胞表达 11*111.1 等趋化因子受体这些受体都可能参与. 细胞. 的迁移并滞留在肿瘤微环境中 (, 是 1 趋化因子受体的配体而肿瘤微环境中的 ) ( 和 (. 又可促进 (, 的分泌. 细胞可通过 1(, 途径向肿瘤组织中的迁移我们的研究结果显示各组小鼠 ) 表达水平与 (. 表达水平正相关经 -'../ 注射后小鼠肝脏中 (. 的表达量有所增加推测 -' 可能通过刺激肝脏肿瘤组织产生 ) 从而募集. 细胞到肿瘤组织中参考文献 & (2"" 10 ))3 0'4 4 5 # ""4 """ ( :,&*,;, # ) # "4 " # #4 5 " ""5!"#$,,/;.*/,*/* 黄川樊晓晖姜艳华等新城疫病毒 -. 对裸小鼠人结肠癌移植瘤的抑制作用中华肿瘤杂志,,/;.*/,*/* + <# "4 " :=(81) 4 4 >,/ " 4 0? 7 (84 4 " :42$,,; 高翠王静马媛媛等新城疫病毒 :=(81) 株与 0?4 (84 株抗肿瘤效果的比较中国肿瘤生物治疗杂志,,;

5 : 8 1!" #$%&' %%$$ $ $ %$ % &()* * (% '%+,"*&% # $%&' * -%* * *.% (* /01 1 " 马媛媛高翠穆红光等 " 新城疫病毒用于联合抗肿瘤的研究进展," 肿瘤防治研究 0 " * 22* 3*.!" 4!& *! $ (% &!! &&* * 567 &&* * % (* (%$ $ %," 2%!, $ %* %! :" * 23*.* ;!"!*&!!& * 5&$! $$ %$ * *& &*&%$,"!*&! &* '*11100:" 梁伟孙铁民梁仲奎等 " 新城疫病毒对晚期恶性肿瘤的临床应用," 中国综合临床 11100:" ;' -2 ;!" & * ((* *& * * &!* &*&% * $ % % (* , '*<* &!,%*!110090" 周立新余佩武蔡志民等 " 结肠癌患者术后治疗对免疫功能的影响," 重庆医学 " *,* 3* 6;!".(%&! & + '(* &!* &*&% &!!$ &$ ) $ %* * %,",%*! %* =*&! " 宫金伶黄川宋德志等 " 新城疫病毒 80 株对人结肠癌细胞的杀伤作用," 现代肿瘤医学 18 90" * ;' 65>*!"?*') *!% ( $ $$ &!* &*&% &!!$!!* % (* ' 5&$! $$ %$ $ %* 80 %!(*%+ )$% * * ($ (!," '*$,%*! '%+19" 梁莹周丹旎樊晓晖等 " 新城疫病毒 80 株对结肠癌小鼠肝转移的抑制效果及其可能的机制," 中国肿瘤生物治疗杂志 19" 6>* ;2* " '*$.'A.' % * ' -@ * ' &!!!% &%&*( $$$ * $ ' ' &!!!% &%&*( * $ &!*&! $*&*&,"'*$,%*!?((*!+ 9 " 李东复杨贵贞王亮 " 肝癌患者癌组织与外周血 0 :.'A.' 细胞的监测及临床意义," 中国免疫学杂志 9" * -'* 35,!" 6%! * *.'A.' $)$ $ 6 B.!!$ * %'%! )! * $ ' %(%+ ' &!!!% &%&*(,"-%%$$ * 黄萍陈铭声牛杰等 " 原发性肝癌患者.'CA.'C 亚群研究," 现代生物医学进展 9880",6* '*!"? $ $$& ' % %*$$ * %( $ **$$ $ (! * 7> %& * &*&% &!!$ * #$ ((* 90: 0" %+&DE?@*% '* -!" -'* +$ % ) **% ** *& *! * &!*&! %!*&.' &!!$ * ' '(* (% *%*(* 11898" 6 ".' &!!$ * %* 900" 2*,3. ;'* ;!" '*$ &%&! *.& &!!$ * %%$$* &!%&! &*&%," '*$,%*!?((*!+1019::1" 王建升帖彦清张立志等 " 结直肠癌患者外周血.& 细胞在肿瘤进展中的变化," 中国免疫学杂志 1019: :1" 2*,3;'* ;.!" %%! *$ ) * (% *! % *.' &!!$ * &!*& '!&! %( %$ * * $ ' &!%&! &*&%," '*$,%*!!!!% *!&!%?((*! " 王建升张立志帖彦清等 " 结直肠癌患者肿瘤浸润.' 细胞与临床病理特征相关性分析," 细胞与分子免疫学杂志 " 3* %!$& 7*!" 6 $ (%E%!! '(*?%&*.&!! $)$ $ * $ *& )+ #=#," %,?((*!1119: :" %.=$.E(%!" #&% (* #%$$*.' &!!$ )+ 1 $&% %(? ).5>!'*?4$ (! *( % & $ %(! &!!$," *&%*!+119:" 08

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