中国中西医结合杂志年月第卷第期 3 & 45$ $ - -' '34$ 4$ 1$ 4 5$ $ & $ 4 '- ' % ' - 2 +$ 4$ $ 0 $ $ -$ 4$ 4$- + %.* 5$ $ $ ' - 1' ' -$ $ $ ' '4$- 5$ 2'

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猛汀易
7 years ago
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1 金匮肾气丸及其拆方对肾阳虚雌鼠卵巢功能的影响龙泳伶李政木摘要目的探讨金匮肾气丸及其拆方补肾阳补肾阴阴阳双补对雌性肾阳虚大鼠卵巢功能的影响方法将!! 只 * 雌性大鼠随机分为正常组模型组补阳组补阴组双补组每组各只除正常组外在大腿内侧肌肉丰厚处消毒后注射氢化可的松! &+),+- 连续天成模后第天起各干预组按 &.) + 灌胃给药每天次补阳组补阳方! +),+ 补阴组补阴方 (! +),+ 阴阳双补组金匮肾气丸 (! +),+ 正常组模型组给予等体积生理盐水连续干预天干预结束后第天眼眶取血 %.* 法检测血清雌二醇 % 孕酮 0 含量计算子宫卵巢脏器指数 1 $ ' -$ 观察病理改变结果双补组肾阳虚雌性大鼠一般状况改善正常模型补阳补阴双补组体重增加分别为!!( # (" ( + 子宫分别为 # ( (!! (! (" &+) + 卵巢分别为 " #(! # &+) + 与模型组比较补阳组及双补组大鼠体重卵巢增加 0! 0 各给药组子宫增加 0! 0 与两个拆方组比较双补组各指标增加 0! 0 补阳组及双补组大鼠 % 0 水平提高 0! 0 正常模型补阳补阴双补组 % 水平分别为 "! (!!2+)&.0 水平分别为 #(!# ""! # +)&. 与两个拆方组比较双补组 % 水平提高 0! 0 与补阴组比较双补组 0 水平提高 0! 与模型组比较双补组各级卵泡数增多病理性囊性卵泡数减少 0 补阳组及补阴组可见初级卵泡次级卵泡成熟卵泡较少双补组各级卵泡总数明显多于补阳组及补阴组 0! 病理性囊性卵泡明显少于补阴组 0! 结论对于肾阳虚证金匮肾气丸及其拆方所代表的不同补肾法均能不同程度改善受损的卵巢功能但单一的补阳法或补阴法效果不佳阴阳双补可提高疗效关键词金匮肾气丸肾阳虚卵巢功能 %33$ *5$ 0 ' - 4 $&6 $- 7$ 2$ 1' ' 8 4 *5$ 9' + $3 $ 8$&' $ 7'4. : ' -. ;5$ +& 05' &' $ 4 $+$ : ' + 5 1$ $ $ $- $ : ' + 5!#! 5 ' *7 6 $ 4 1$ 6 $ 1$ 45$ $33$ *5$ 0 *0 ' $&6 $- $ 2$ 22 $&$ 4 + *5$ ' + 22 $&$ 4 + *5$ ' - 22 $&$ 4 + *5$ ' + ' - *5$ 1' ' $&' $ '4 3 *5$ ' + -$3 $ - &$ *9 * $45-4'!! * 3$ &' $ '4 $ $ ' -& - 1 -$- 4! + 2 $ 45$ &' $ &-$ $ *5$ ' + 22 $&$ $ *5$ 22 $&$ $ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ $' % $24 45$ &' '4 45$ $ $ $ $ 4$ $ '4 45$ -' - $ 3! &+),+ '4 45$ & $ 3 3$& 6 4$ 3 $ 1$ -' 8 & 45$ 45 -' '34$ $ 3 &-$ + '4 $ $ '-& 4$ $- 6 +' 4 +'1'+$ 45-33$ $ 4 $ 2$ '4 45$ - $ 3 &.) +! +),+ *5$ ' + 22 $&$ 4 + $ 2$ (! +),+ *5$ 22 $&$ 4 + $ 2$ (! +),+ *0 $ -' 3 $ 1$ -' % ' 1 &$ 3 &' ' $ ' + 1$ 4 45 $ 45$ &' ' - 45$ &-$ + 2 $ -' 3 $ 1$ -' - ' 45- ' 基金项目国家自然科学基金资助项目! 作者单位广州中医药大学中药学院广州!#! 通讯作者李政木 $!#" %&'!# & (() "(

2 中国中西医结合杂志年月第卷第期 3 & 45$ $ - -' '34$ 4$ 1$ 4 5$ $ & $ 4 '- ' % ' - 2 +$ 4$ $ 0 $ $ -$ 4$ 4$- + %.* 5$ $ $ ' - 1' ' -$ $ $ ' '4$- 5$ 2'45 + ' 5' +$ $ $ 6 $ 1$- 6 % 4' + 7$ 4 5$ +$ $ ' '4 45$ *5$ ' + ' - *5$ 2 2 $&$ $ $ &2 1$- 5$ 6- $ ' '--$- 6!! 45$ &' ( # 45$ &-$ + 2 (" 45$ *5$ ' + 22 $&$ ( 45$ *5$ 22 $&$ ' - 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ $ 4$ &+) + ' # ( 45$ &' (! 45$ &-$ + 2! ( 45$ *5$ ' + 22 $&$ ! (" 45$ *5$ 22 $&$ ' - 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ $ 1' ' &+) + $ $ " # 45$ &' ( 45$ &-$ + 2! # 45$ *5$ ' + 22 $&$ # 45$ *5$ 22 $&$ ' - # 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ &2' $ $ &-$ $ 6- $ +54 ' - 1' ' $' $- 45$ *5$ ' $&$ ' - 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ ! 0 5$ 4$ $' $- $' 5 &$- '4$ ! 0 &2' $ $ *5$ ' + 22 $&$ ' - 45$ *5$ 22 $&$ ' - $ $' $- 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $ &$ ! 0 5$ % ' - 0 $1$ $' $- 45$ *5$ ' + 22 $&$ ' - 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ ! 0 5$ 4$ 4 3 % 2+)&. ' 45$ &' " 45$ &-$ $ *5$ ' + 22 $ &$ ! 45$ *5$ 22 $&$ ' - (!! 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ $ 4$ )&. ' #(! 45$ &' # 45$ &-$ $ *5$ ' + 22 $&$ " 45$ *5$ 22 $&$ ' - "! # 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ &2' $ $ *5$ ' + 22 $&$ ' - 45$ *5$ 22 $&$ $ % $1$ $' $- 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ ! 0 &2' $ $ *5$ 22 $&$ $ 0 $1$ $' $- 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ ! &2' $ $ &-$ $ 1' ' 3 $ '4 $' 5 4'+$ $' $- ' - 2'45 + ' 3 ' 1' ' 3 $ -$ $' $- 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ $ 2 &' 3 $ $ -' 3 $ ' - &'4 $ 3 $ - 6$ $$ 45$ *5$ ' + 22 $&$ ' - 45$ *5$ 22 $&$ $ 44' &6$ 3 ' $1$ 3 $ $ $ $ 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $ &$ ' 45$ *5$ ' + 22 $&$ ' - 45$ *5$ 22 $&$ ! 5$ &6$ 3 2'45 + ' 3 $ ' 61 $ 45$ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ ' 45$ *5$ 22 $&$ ! 3 *9 * *0 ' $&6 $- $ 2$ - &2 1$ -'&'+$- 1' ' &$ -$+ $$ 4 6$44$ $33$ 4-4 6$ 64' $- 6 *5$ ' + 22 $&$ 4 + &$45- *5$ 22 $&$ 4 + &$45- ' $ *5$ ' + ' - *5$ 22 $&$ 4 + &$45- - $ $1'4$ 45$ $33 ' <%9 7 * + *5$ 0 *5$ ' + -$3 $ 1' ' 3 4 金匮肾气丸来源于东汉末年张仲景所著金匮要略一书是临床应用广效果佳的培补肾阳名方也是体现中医学阴中求阳治疗大法的代表方随着历代医家对金匮肾气丸的不断阐发推广并在临床实践中加减化裁大大发展了该方的适用范围涉及神经内分泌免疫消化循环呼吸泌尿生殖等多个系统涵盖内外妇儿老年病口腔眼耳鼻喉皮肤等多个学科的众多疾病本研究观察了金匮肾气丸及其拆方对肾阳虚雌性大鼠卵巢功能的影响旨在进一步探讨金匮肾气丸治疗肾阳虚证及改善机体生殖机能的功效及作用机制材料与方法实验动物 *08 级 * 雌性大鼠!! 只未孕未产周龄体重 + 由广州中医药大学实验动物中心提供许可证号 *=< 粤

3 常规饲养天实验药物金匮肾气丸组成附子桂枝干地黄山茱萸山药茯苓泽泻牡丹皮广州采芝林药业有限公司提供广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定比例为补阳方组成附子桂枝茯苓泽泻丹皮比例为补阴方组成干地黄山茱萸山药茯苓泽泻丹皮比例为各组药材以清水浸泡 & 煎煮 ( & 分取药液药渣再加水煎煮合并药液双层纱布过滤水浴加热浓缩分别配置成 (!! (! +)&. 水煎液 # 冷藏备用主要试剂及仪器氢化可的松 &+) &. 批号 ( 天津金耀氨基酸有限公司 % %.* 试剂盒批号 % #0 %.* 试剂盒批号 % 武汉俊泰生物技术有限公司苏木素进口分装批号 < 伊红 9 二钠盐 & $ 分装批号北京鼎国生物技术有限公司切片石蜡批号 " # 上海标本模型厂 8 ) 系列电子天平上海民桥精密科学仪器有限公司 0 生物组织自动脱水机 %:# 石蜡包埋机 7! 全自动轮转石蜡切片机 *! 自动染色机德国莱卡公司 =! 型病理图像采集系统日本奥林巴斯公司 7 酶标分析仪美国 79 公司! * 多管架自动平衡离心机赛特湘仪离心机仪器有限公司数显恒温水浴锅江苏金坛市金城国胜实验仪器厂 # 动物模型制备大腿内侧肌肉丰厚处消毒后注射氢化可的松! &+),+- 每天次连续天造模成功标准参考文献造模成功率为 >! 分组及干预方法造模后将大鼠随机分为模型组补阳组补阳方! +),+ 补阴组补阴方 (! +),+ 阴阳双补组双补组金匮肾气丸 (! +),+ 每组只另选取只大鼠作为正常组造模后第天开始灌胃给药药量按体表面积法折算为成人用量! 倍灌胃量 &.) + 每天次正常组模型组给予等体积生理盐水连续干预天 ( 检测指标及方法 (% 0 水平检测干预结束后第天上午乙醚麻醉大鼠眼眶取血! &. )& 离心! & 采用 %.* 法检测血清 % 0 含量实验操作严格按照试剂盒说明书进行 ( 体重变化及子宫卵巢脏器指数 1 $ ' -$ 分别于灌胃干预前后测量各组大鼠体重计算增重情况取血后剪开腹腔快速摘取子宫卵巢剔除脂肪和其他组织分别放入天平精确称量 >? 脏器重量 ) 大鼠体重 > ( 卵巢病理观察称重后将卵巢固定在 > 甲醛溶液中按照病理检验程序进行修剪脱水石蜡包埋切片厚度 & % 染色封片等于 # 倍光镜下观察病理改变统计学方法所以数据以表示采用 *0**! 统计软件处理多组比较采用单因素方差分析两组均数比较用 4 检验 0! 为差异有统计学意义结果各组一般情况比较除正常组外造模后各组均出现反应迟钝活动少喜扎堆畏寒蜷卧拱背耸毛体毛干枯稀疏缺少光泽肛周污染采食量饮水量减少体重下降肉眼未见外生殖器潮湿阴道口变大触之兴奋等动情期反应等肾阳虚症状干预后各用药组大鼠肾阳虚症状均有改善大鼠脱毛现象减少食欲明显提高多尿及畏寒现象有改善双补组肾阳虚症状也渐趋不典型各组大鼠血清 % 0 水平比较表与正常组比较模型组大鼠血浆 % 0 水平降低 0 与模型组比较补阳组及双补组大鼠 % 0 水平提高 0!0 与两个拆方组比较双补组 % 水平提高 0!0 与补阴组比较双补组 0 水平提高 0! 表各组大鼠血清 % 0 水平比较 +),+ % 2+)&. 0 +)&. 正常 #(! 模型 " # 补阳! 补阴 (!! " 双补 (! (!! "! # 注与模型组比较 0! 0 与双补组比较 0! 0 各组大鼠干预前后体重变化子宫卵巢比较表与正常组比较模型组大鼠体重增加缓慢卵巢子宫降低差异均有统计学意义 0 各给药组大鼠干预后体重均有明显增加与模型组比较补阳组及双补组大鼠体重卵巢增加 0!0 各给药组子宫增加 0! 0 与两个拆方组比较双补组各指标增加 0!0

4 "!# $ (" 中国中西医结合杂志!$ 年 % 月第 $$ 卷第 % 期 &'()*+! ',-.!$! 0-1 $$! 20!% 表!$各组大鼠干预前后体重变化!子宫) 显多于补阳组及补阴组 $H O "! "3 %! 病理性囊性卵泡明显少于补阴组$H O "! "3 %, 卵巢 ( 比较$$M %J % $CADC% L 正常模型用药前后体重变化$C% 子宫 ( $8CA#""C% 卵巢 ( $8CA#""C% $3#" %#!# 3!! #N$#5 $!# 4 %!#5!! #% %%# $4 #55#" % %# 补阳!#%3 补阴!3!! % 4 #N#$ "" 双补 %3!4#5 %#!#!!! #3N#% % $!3# " %5 #3! % 4!$# " %5 "!! #%!#N %N# # $ 5 %$#$!! $$注# 与模型组比较!!H O "3!!!H O & 与双补组比较! "H O "3! ""H O 讨$$论金匮肾气丸来源于东汉末年张仲景所著 ' 金匮要略( 一书!其创制与广泛应用! 体现了中医学 * 善补阳者!必于阴中求阳+ 理论! 对补阳学说的理论发展有重大意义, 该方由干地黄) 山药) 山茱萸) 泽泻) 丹皮) 茯苓)桂枝)附子八味药组成! 组方严谨! 配伍独特! 其中六味滋阴!桂附温和!以大量滋阴补肾药配伍少量温阳 5 $各组大鼠卵巢病理) 卵泡总数) 病理性囊性卵泡数比较$ 表 $! 图 # % $ 正常组可见多个黄体组织及不同发育阶段的卵泡! 颗粒细胞呈多层! 形态完整! 排列整齐!卵泡膜细胞呈梭形排列!未见囊性扩张, 模型组可见大量原始卵泡!少见初级卵泡)次级卵泡和成熟卵泡! 卵泡囊性扩张! 颗粒细胞层数明显减少! 颗粒细胞排列疏松!泡膜细胞层明显增厚!少量卵巢内有黄体组织, 双补组可见大量初级卵泡和次级卵泡! 但成熟卵泡及黄体较空白组少!与模型组比较!各级卵泡数增多!颗粒细胞层数明显增加!形态完整!排列整齐!泡膜细胞层明显变薄!黄体组织数明显增多!病理性囊性卵的桂枝)附子!从阴引阳!滋阴之虚以生气!助阳之弱以化水!使温阳而有生化之源! 从而 * 少火生气 +! 鼓舞肾中真阳, 原方是张仲景为治疗 * 脚气上入! 少腹不仁+!* 短气有微饮 +! * 虚劳腰痛! 少腹拘急! 小便不利+!* 消渴+!* 妇人转胞 + 五种病症而设 -5., 近年来! 许多专家和学者开展了大量肾气丸相关的实验及临床研究!但都集中在肾气丸对雄性动物模型的干预效果! 临床观察也主要集中在对男性生殖机能的调节作用方面!较少涉及对雌性动物及女性生殖机能调控方面的研究, * 肾天癸冲任胞宫 + 是中医妇科学有关女性生殖的核心理论!中医学用肾阴肾阳充盛与相对泡数减少$H O "! %, 补阳组及补阴组可见初级卵泡)次级卵泡!成熟卵泡较少, 双补组各级卵泡总数明平衡协调理论来阐述肾对女性生殖功能的作用! 这与表 $$各组大鼠卵泡总数)病理性囊性卵泡数比较$$ 个! M %J % 脑垂体卵巢轴+ 理论基本一致, 本实验根据张仲 $ CADC% L 正常模型补阳!# %3 补阴!3 双补 %3 各级卵泡总数! # 3 %!# 4 病理性囊性卵泡数现代医学对女性生殖内分泌调节机制的认识与 * 下丘景* 善补阳者! 必于阴中求阳! 则阳得助而生化无穷 + 的补阳思想!结合中医学补泻理论将金匮肾气丸进行 "!! $# # % # 拆方研究!通过观察其对肾阳虚雌鼠卵巢功能的影响! 3 % 4" N# N# 5 % $"!# $ % 5! $# 5 % 3" 脑垂体甲状腺轴的角度对肾气丸进行了拆方 N % N!! % 4!! $$注#与模型组比较!!H O "3!!!H O &与双补组比较! "H O "3 初步探讨 * 阴中求阳 + 的配伍机理, 郭凯等 -3. 从下丘研究! 提示补阳组) 补阴组) 阴阳双补组均可提高肾阳虚小鼠 )$ ))5 水平!而补阳组)补阴组作用较弱!认为 $$注#G )\ 为正常组&&)> 为模型组&7)V 为补阳组&X)_ 为补阴组&()' 为双补组& G )&)7)X)( 为放大 5" 倍& \ )>)V)_)' 为放大 5"" 倍&横向箭头所指为各级卵泡&纵向箭头所指为颗粒细胞图 #$各组大鼠卵巢病理图片$$ _7%

5 此结果可用中医学阴阳互根理论加以解释笔者所在课题组前期研究表明补阴药能促进补阳药有效成分的析出从而提高补阳效果同时补阴药能够增强下丘脑垂体肾上腺皮质轴功能发挥补阳药温补效果 ( 同时发现肾气丸组方中的三泻药物茯苓泽泻丹皮与补阳药物附子桂枝补阴药物干地黄山茱萸山药相互配伍有利于药物有效成分的析出 " 本实验选用目前国内较为经典的氢化可的松复制肾阳虚证动物模型造模后大鼠的一系列症状与中医肾阳虚证有很多相似之处如反应迟钝活动少喜扎堆畏寒蜷卧拱背耸毛体毛干枯稀疏缺少光泽肛周污染采食量饮水量减少体质量下降肉眼未见外生殖器潮湿阴道口变大触之兴奋等动情期反应等说明模型复制成功而肾气丸补阳组及阴阳双补组均能明显改善肾阳虚症状增加体重表明两组药物对肾阳虚证大鼠有一定保护作用而阴阳双补组对其治疗效果更明显研究表明肾阳虚型不孕患者存在卵巢子宫的血供不良而妊娠者的卵巢血流灌注和 % 水平明显增高随着卵泡不断发育 % 分泌量持续升高发育为成熟卵泡时卵巢动脉舒张期血流丰富此时 % 水平迅速上升达峰值诱发排卵本研究发现与模型组比较阴阳双补组卵巢色泽红润子宫外观粗大发紫卵巢和子宫重量均增加卵泡各级数目明显增多卵泡明显增大表面见较多黄体病理性卵泡减少子宫肌层明显增厚子宫内膜腺体增加同时双补组血清 % 明显升高说明阴阳双补组有效提高了卵巢性激素分泌的基础水平增强了卵巢功能使氢化可的松所致肾阳虚型排卵障碍大鼠的卵巢功能明显改善 0 是由卵巢黄体分泌的一种天然孕激素为维持妊娠所必需血清 0 的水平可以反映卵巢的功能本实验表明双补组能明显提高肾阳虚模型大鼠的血清 0 水平使大鼠卵巢功能得以恢复适当浓度的血清 0 进一步促进了卵泡发育从而促进了排卵本实验结果提示肾气丸及其补阳拆方补阴拆方均能一定程度上改善肾阳虚模型雌性大鼠一般症状提高体重及子宫卵巢脏器指数提升血清 % 0 水平改善病理性卵巢的形态但其治疗效果以阴阳双补组最佳进一步提示针对肾阳虚证单纯补阳补阴效果不明显阴阳双补可提高疗效初步阐释了肾气丸阴中求阳的配伍理论希望可以为临床治疗肾阳虚证提供一定的参考依据在未来进一步研究中可在本实验基础上对各治疗组进行不同疗效开展实验全面结合补泻理论进行拆方增加单纯补阳组和补阴组进一步观察三泻药对于药效的影响作用参考文献张智儒肾气丸的后世发展及临床运用中国民间疗法杂志 " ( 陈英华孙琪欧阳轶强等肾阳虚证动物模型造模方法综述中国医药学报 ( 陈奇主编中药药理研究方法学北京人民卫生出版社 "" # 曲淑芹探讨方药证候在临床上重中之重金匮肾气丸临床应用认识中国中医药现代远程教育 "! (! 郭凯徐蓉俞伟等金匮肾气丸对肾阳虚动物模型影响的拆方研究中医药学报 ( 汪玉梅林晓冰李政木等从肾气丸配伍规律中谈阴中求阳的实质新中医 # # # 高洁李政木黎同明等从拆方肾气丸对肾阳虚模型大鼠 0 轴的影响初探阴中求阳配伍机理四川中医!! 李政木陈炜璇卓廉佳等肾气丸阴中求阳配伍对桂皮醛含量的影响时珍国医国药 " ( ( " 李政木卓廉佳陈炜璇等肾气丸阴中求阳配伍对丹皮酚含量的影响时珍国医国药 "!!! 周莉亓蓉梁莹等不孕症患者卵巢血流灌注与临床妊娠的研究中国优生与遗传杂志 "!! ( 宋帮丽傅春华黄金丽等通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕大鼠下丘脑垂体卵巢轴的影响成都中医药大学学报 " # #! 收稿修回

中草药

中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (

中国中西医结合杂志 年 月第 卷第 期 3 & 45$ $ - -' '34$ 4$ 1$ 4 5$ $ & $ 4 '- ' % ' - 2 +$ 4$ $ 0 $ $ -$ 4$ 4$- + %.* 5$ $ $ ' - 1' ' -$ $ $ ' '4$- 5$ 2'

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