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偶咎赵
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1 肿瘤 211 年 8 月第 31 卷第 8 期 Tumor Vol.31, August 基础研究 Basic Research 713 DOI: /j.issn Copyright 211 by TUMOR 米非司酮抑制前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达过程中糖皮质激素受体的作用张辉1 王玉秋1 张捷2 马春燕2 吕家驹1 山东大学附属省立医院 1. 泌尿外科 2. 中心实验室济南 2521 [ 摘要 ] 目的探讨米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞血管内皮生长因子 vascular endothelial growth factor VEGF 蛋白表达过程中糖皮质激素受体 glucocorticoid receptor GR 信号通路的作用方法采用免疫细胞化学法检测前列腺癌 PC-3 细胞中 GR 的表达情况然后采用 RT-PCR 法检测不同浓度米非司酮作用 48 h 后 PC-3 细胞中 GR mrna 的表达变化并用 ELISA 法检测不同浓度米非司酮作用不同时间以及不同激素作用后 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白表达的变化结果免疫细胞化学检测证实了前列腺癌 PC-3 细胞中存在 GR 的表达进一步用 RT-PCR 法检测发现 5 1 和 5 μmol/l 米非司酮作用 PC-3 细胞 48 h 后 GR mrna 的表达呈逐渐降低趋势其中 5 μmol/l 米非司酮组与未处理对照组差异无统计学意义 P.5 而 1 和 5 μmol/l 米非司酮组与对照组比较差异有统计学意义 P.1 不同浓度的米非司酮作用 PC-3 细胞 48 h 后其 VEGF 的分泌量随着米非司酮浓度的增加而逐渐减少其中 1 μmol/l 的米非司酮组 VEGF 分泌量比对照组下降 48.29% 而 1 μmol/l 米非司酮作用 PC-3 细胞 h 后其 VEGF 的分泌量随着作用时间延长而呈递减趋势其中 48 h 后的 VEGF 分泌量比对照组下降超过 48.23% 差异有统计学意义 P.1 不同激素作用 PC-3 细胞后除米非司酮可减少 VEGF 的表达 P.1 外孕激素可使 VEGF 蛋白的表达水平略有升高而其他激素对 VEGF 蛋白的表达无影响同时地塞米松可以部分阻断米非司酮对 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的抑制作用结论米非司酮抑制前列腺癌细胞分泌 VEGF 蛋白可能是通过 GR 信号通路发挥作用的 [ 关键词 ] 前列腺肿瘤米非司酮受体糖皮质激素血管内皮生长因子类 [中图分类号] R [文献标志码] A [文章编号] (211) Mifepristone inhibits the expression of vascular endothelial growth factor through glucocorticoid receptor signalling pathway in prostate cancer cell line PC-3 ZHANG Hui1, Wang Yu-qiu1, ZHANG Jie2, MA Chun-yan2, LÜ Jia-ju1 1. Department of Urology, 2. Central Laboratory, Provincial Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 2521, China [ABSTRACT] Objective: To investigate the role of glucocorticoid receptor (GR) signalling pathway in the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) inhibited by mifepristone in prostate cancer cell line PC-3. Methods: The expression of GR in prostate cancer cell line PC-3 was determined by immunocytochemical technique. After treatment with different concentrations of mifepristone for 48 h, the expression change of GR mrna was evaluated by using RT-PCR. The expression level of VEGF protein in PC-3 cells was detected by using ELISA after treatment with different concentrations of mifepristone for different time or different hormones. Results: Immunocytochemical analysis revealed the expression of GR in PC-3 cells. The expression level of GR mrna in PC-3 cells treated with 5, 1 or 5 μmol/l mifepristone exhibited a descending trend. The expression of GR mrna in PC-3 cells treated with 5 μmol/l mifepristone for 48 h was similar to that of the untreated PC-3 cells (P.5), but the expression of GR mrna in PC-3 cells treated with 1 or 5 μmol/l of mifepristone for 48 h was significantly different from that of the untreated PC-3 cells (P.1). The secretion level of VEGF was gradually down-regulated in PC-3 cells treated with 1 μmol/l to 1 μmol/l of mifepristone for 48 h. Mifepristone at 1 μmol/l down-regulated the level of by 48.29%, as compared with that of the untreated PC-3 cells. The level of was gradually [ 基金项目 ] 国家自然科学基金资助项目编号 Correspondence to: LÜ Jia-ju 吕家驹 kyoto231@sina.com Received Accepted

中心实验室济南 2521 [ 摘要 ] 目的探讨米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞血管内皮生长因子 vascular endothelial growth factor VEGF 蛋白表达过程中糖皮质激素受体 glucocorticoid receptor GR 信号通路的作用方法采用免疫细胞化学法检测前列腺癌 PC-3 细胞中 GR

2 714 张辉, 等. 米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞血管内皮生长因子表达过程中糖皮质激素受体的作用 decreased in PC-3 cells treated with 1 μmol/l mifepristone for 24 h to 96 h. Mifepristone treatment for 48 h decreased the level of by 48.23%, which was significantly different from that of the untreated PC-3 cells (P<.1). In PC-3 cells which were treated with different hormones, only mifepristone could reduce the level of (P<.1). However, progesterone could slightly elevate the level of, but the other hormones showed no such effects. Dexamethasone could block the inhibition effect of mifepristone on the level of in PC-3 cells. Conclusion: Mifepristone can inhibit the secreation of VEGF protein in prostate cancer PC-3 cells which may be through GR signalling pathway in vitro. [KEY WORDS] Prostatic neoplasms; Mifepristone; Receptors, glucocorticoid; Vaslcular endothelial growth factors [Tumor, 211, 31 (8): ] 前列腺癌的发病率位居美国男性恶性肿瘤之首, 其死亡率也仅次于肺癌居第 2 位 [1] 近年来, 中国前列腺癌的发病率呈逐年上升趋势米非司酮 (mifepristone) 是一种孕激素受体和糖皮质激素受体 (glucocorticoid receptor,gr) 的拮抗剂, 目前已证实其可以抑制雄激素非依赖性前列腺癌 [2, 细胞的增殖 3], 但具体作用机制还未完全清楚本研究旨在探讨米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞生长过程中血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,vegf) 和 GR 信号通路的作用 1 材料与方法 1.1 实验材料米非司酮购自上海华联制药有限公司 ;Ham s F12 培养液购自美国 Gibco 公司 ; 胎牛血清购自美国 Hyclone 公司 ; 鼠抗人 GR 多克隆抗体免疫细胞化学 SABC 试剂盒和 ELISA 试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司 ;GR 引物序列 ( 上游引物 5 -CGACCAATGTAAACACA TGCT-3 和下游引物 5 -CAGCTAACATCTCGG GGAAT-3 ) 由上海博亚生物技术有限公司合成 ; RT-PCR 试剂盒购自宝生物工程 ( 大连 ) 有限公司 ;CO 2 恒温培养箱购自美国 Thermo Forma 公司 ;DG322 型酶联免疫检测仪购自华东电子管厂 ; 流式细胞仪购自美国 Beckman Coulter 公司 ; IS-22 图像分析仪购自美国 Alpha 公司 1.2 细胞株及细胞培养人前列腺癌 PC-3 细胞株购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所将 PC-3 细胞用含 1% 胎牛血清的 Ham s F12 培养液, 置于 37 CO 2 体积分数为 5% 的恒温培养箱中培养 1.3 免疫细胞化学检测将密度为个 / ml 的 1 μl PC-3 细胞接种于 96 孔板上, 待细胞贴壁后, 用 95% 乙醇溶液固定 3 min, 按照免疫细胞化学 SABC 试剂盒说明书操作, 其中 GR 抗体的工作液浓度以 1 : 8 稀释结果判定标准 : 细胞质呈现棕黄色颗粒为阳性细胞阳性对照样本为卵巢 3AO 细胞涂片 ( 由山东省立医院中心实验室库存, 购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 ), 阴性对照为不加抗体的空白对照 1.4 RT-PCR 实验将密度为个 /ml 的 1 ml PC-3 细胞接种于 1 cm 培养皿中, 用含 1% 胎牛血清的 Ham s F12 培养液培养 24 h 后, 换成含 2% 胎牛血清的培养液, 饥饿 24 h 以达到同步化后, 分别给予 5 1 和 5 μmol/l 米非司酮处理 48 h 预先实验用来自捐献遗体的人正常脑组织作为阳性对照证实正常前列腺癌 PC-3 细胞中表达 GR 基因, 因此本研究中即用未经米非司酮处理的 PC-3 细胞作为阳性对照采用 TRIzol 试剂 ( 美国 Sigma 公司产品 ) 提取 PC-3 细胞中的总 RNA, 按照 RT-PCR 试剂盒说明书操作, 进行反转录以及 PCR 实验 PCR 反应条件为 94 1 min,58 1 min,72 1 min,3 个循环, 最后 72 延伸 1 min PCR 反应产物经 1.5% 琼脂糖凝胶电泳后, 用 Alpha22 图像分析仪进行观察拍照 GR 扩增产物应为 344 bp 1.5 ELISA 检测取密度为个 /ml 的 1 μl PC-3 细胞接种于 96 孔板上, 用含 1% 胎牛血清的 Ham s F12 培养液培养 24 h 后, 换成含 2% 胎牛血清的培养液, 饥饿 24 h 以达到同步化后, 分别给予和 1 μmol/l 米非司酮, 对照组加入.1% 乙醇溶液, 作用 24 ~ 96 h 后吸取上清液, 经离心沉淀后, 取 5 μl 加入测试孔中, 按照 ELISA 说明书操作加入各种试剂, 室温孵育 2 h 酶联免疫仪于 45 nm 波长处读取吸光度 (D) 值, 与同批建立的标准曲线进行对比, 确定培养上清液中 VEGF 蛋白含量每一药物的每个浓度各重复 3 次取 1 μl 密度为个 /ml 的 PC-3 细胞接种于 96 孔板上, 用含 1% 胎牛血清的 Ham s F12 培养液培养 24 h 后, 换成含 2% 胎牛血清的培养液, 饥饿 24 h 以达到同步化后, 分别给予 1 μmol/l 米非司酮 1 μmol/l 雌激素 1

In PC-3 cells which were treated with different hormones, only mifepristone could reduce the level of (P<.1).

3 张辉, 等. 米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞血管内皮生长因子表达过程中糖皮质激素受体的作用 715 μmol/l 孕激素 1 μmol/l 双氢睾酮 1 μmol/l 地塞米松以及 1 μmol/l 米非司酮 + 1 μmol/l 地塞米松 ( 以上激素均为美国 Sigma 公司产品 ), 对照组加入.1% 乙醇溶液, 作用 48 h 后, 用吸管反复吹打吸取培养液, 经离心沉淀后, 取 5 μl 进行 ELISA 检测, 方法同前 1.6 统计学方法采用 SPSS 1. 软件进行统计学分析 RT-PCR 半定量结果分析应用单因素方差分析进行比较,ELISA 结果资料应用单因素方差分析和 t 检验进行比较, 各实验重复 3 次, 检验水准 α =.5 2 结果 2.1 前列腺癌 PC-3 细胞中 GR 的表达免疫细胞化学检测结果证实, 前列腺癌 PC-3 细胞中存在 GR 的表达 ( 图 1) A B C Fig.1 Expression of glucocorticoid receptor (GR) in human prostate cancer PC-3 cells (A) confirmed by immunocytochemical analysis ( 4). GR antibody was not used in the blank control group (B). The human ovarian cancer cell line 3AO with GR expression was used as the positive control (C). 图 1 免疫细胞化学法检测证实前列腺癌 PC-3 细胞中存在 GR 的表达 ( 4) 2.2 米非司酮对 GR mrna 表达的影响应用 RT-PCR 技术检测了米非司酮 (5 1 和 5 μmol/l) 处理 48 h 后 PC-3 细胞中 GR mrna 表达的情况结果如图 2 所示,5 μmol/l 米非司酮组的 GR mrna/β-actin mrna 表达比值与未处理对照组比较, 差异无统计学意义 (P >.5); 而 1 μmol/l 和 5 μmol/l 米非司酮组 GR mrna/β-actin mrna 表达比值比未处理对照组明显降低, 差异有统计学意义 (P <.5), 即米非司酮作用 PC-3 细胞 48 h 后 GR mrna 的表达随着药物浓度的增加呈递减趋势 2.3 米非司酮对 PC-3 细胞分泌 VEGF 蛋白的影响 ELISA 检测结果如图 3 所示结果显示, 各组细胞均分泌 VEGF 蛋白 ; 各浓度的米非司酮作用 48 h 后,PC-3 细胞 VEGF 蛋白的分泌量随着米非司酮药物浓度的升高而逐渐降低, 提示米非司酮抑制 VEGF 蛋白的分泌具有浓度依赖性, 其中 1 μmol/l 米非司酮组 VEGF 分泌量降低率达 48.29%; 而 1 μmol/l 米非司酮作用 PC-3 细胞 24 h 时 VEGF 的分泌开始受到明显抑制,VEGF 分泌量下调 24.28%,48 h 后 VEGF 分泌量下调率达 48.23%( 与前面结果一致 ), 提示随着米非司酮作用时间的延长,VEGF 的分泌量逐渐减少, 具有时间依赖性 A B GR β-actin Control Control Mifepristone c B /(μmol L -1 ) Fig.3 Mifepristone inhibits VEGF protein secretion in human prostate cancer PC-3 cells in a concentration- and time-dependent manner detected by ELISA method. The secretion level of VEGF was gradually down-regulated in PC-3 cells treated with 1 μmol/l to 1 μmol/l of mifepristone for 48 h (A). The secretion level of VEGF was gradually decreased in PC-3 cells treated with 1 μmol/l mifepristone from 24 to 96 h (B). * P <.5, ** P <.1, vs the control (n = 3). 图 3 ELISA 法检测不同浓度米非司酮作用不同时间后前列腺癌 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的分泌量变化 GR/β-actin rate/% Control Mifepristone c B /(μmol L -1 ) F i g. 2 T h e e x p r e s s i o n c h a n g e s o f G R m R N A i n human prostate cancer PC-3 cells treated with different concentrations (Lane 1: Treated without mifepristone, as the control;lane 2-4: 5, 1 and 5 μmol/l) of mifepristone for 48 h detected by reverse transcription PCR (RT-PCR). The expression of GR mrna was significantly downregulated in PC-3 cells treated with 1 μmol/l or 5 μmol/l mifepristone. * P <.5, ** P <.1, vs the control (n = 3). 图 2 RT-PCR 检测不同浓度的米非司酮作用前列腺癌 PC-3 细胞 48 h 后 GR mrna 的表达变化 t/h

), 对照组加入.1% 乙醇溶液, 作用 48 h 后, 用吸管反复吹打吸取培养液, 经离心沉淀后, 取 5 μl 进行 ELISA 检测, 方法同前 1.6 统计学方法采用 SPSS 1.

4 716 张辉, 等. 米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞血管内皮生长因子表达过程中糖皮质激素受体的作用 2.4 其他激素对 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白表达的影响前列腺癌 PC-3 细胞经 1 μmol/l 米非司酮雌激素孕激素或双氢睾酮处理 48 h 后, ELISA 检测结果显示, 雌激素孕激素和双氢睾酮对 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的表达无影响, 反而孕激素对 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的表达略有刺激作用, 但差异尚无统计学意义 (P >.5, 图 4); 米非司酮则可以减少 PC-3 细胞中 VEGF 的表达, 差异有统计学意义 (P <.1, 图 4) 另外, 将地塞米松和米非司酮共同作用 PC-3 细胞后发现,2 药联用也可以抑制 PC-3 细胞中 VEGF 的表达, 但与对照组比较差异尚无统计学意义 (P >.5, 图 4), 提示地塞米松可以部分阻断米非司酮对 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白表达或分泌的抑制作用, 同时米非司酮对 PC-3 细胞的抑制作用可能与 GR 信号通路有关 Control MIF E2 P DHT MIF + DEX DEX F ig.4 T he expression changes of VEGF protein in human prostate cancer PC-3 cells treated with other steroid hormones detected by ELISA method. Only mifepristone (MIF) significantly reduced the VEGF secretion, while progesterone (P) slightly elevated the, other hormones such as estrogen (E2) and dihydrotestosterone (DHT ) showed no effects. Dexamethasone (DEX) blocked the inhibition effect of MIF on the in PC-3 cells. * P <.5, vs the control (n = 3). 图 4 ELISA 法检测各种类固醇激素对前列腺癌 PC-3 细胞分泌 VEGF 蛋白的影响 3 讨论米非司酮是一种类固醇激素受体拮抗剂, 近来研究表明其对许多实体肿瘤具有抗肿瘤的活性 [2-5] 以往研究已证实, 米非司酮可以抑制前列腺癌细胞的体外增殖, 该作用可能是通过下调 bcl-2 和 VEGF 蛋白表达水平来诱导癌细胞凋亡 [2], 但具体机制尚未明确近年来研究发现,VEGF 在实体肿瘤的发生 [6, 发展浸润和转移等生长过程中起重要作用 7], 一方面通过刺激内皮细胞的增生以产生更多的生长因子, 另一方面通过自分泌机制促进肿瘤细胞的生长, 抑制肿瘤细胞凋亡 [7] 本课题组前期研究结果显示, 米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的表达, 主要是抑制了前列腺癌 PC-3 细胞的增殖而引起的, 其在最佳时间最佳浓度时诱导癌细胞的凋亡率为 32.% [2] 而本研究发现, 米非司酮抑制 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的分泌高达 48%, 说明米非司酮也具有抑制前列腺癌 PC-3 细胞自分泌 VEGF 蛋白的作用以往研究证实, 米非司酮可以下调恶性肿瘤细胞中 VEGF 蛋白的表达, 该 VEGF 蛋白位于肿瘤细胞 [8, 的细胞质中 9] ; 而本研究显示, 米非司酮可以下调肿瘤细胞分泌至培养液中的 VEGF 蛋白含量米非司酮是合成的甾体类药物, 对孕激素和糖皮质激素均有拮抗作用以往已经证实, 米非司酮对 PC-3 细胞的抑制作用部分是通过阻断孕酮对 ERK1 /2 的活化, 从而拮抗孕激素受体实现的 [1] [11] Hyder 等研究报道, 米非司酮可以通过拮抗药源性或内源性孕激素对 VEGF 基因及其 mrna 的上调作用, 抑制 VEGF 蛋白生成而 [12] Jenkins 等研究报道, 热休克蛋白 9 通过激活其下游蛋白白细胞介素 -6(interleukin-6,IL-6) 和 VEGF 蛋白的表达, 调整激活 GR 活性, 从而促进癌细胞增殖本研究证实了前列腺癌 PC-3 细胞中存在 GR 蛋白的表达, 且随着米非司酮对 PC-3 细胞的抑制作用,GR mrna 的表达也受到抑制, 并呈浓度依赖性效应, 这说明 GR 通路也参与了米非司酮对 PC-3 细胞的抑制作用所以, 米非司酮抑制 PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的表达及分泌, 不仅仅与拮抗孕激素受体通路有关, 同时存在部分拮抗 GR 的作用 ; 但具体哪一种拮抗作用为主, 还需要进一步研究证实本研究发现, 在与其他类固醇激素进行比较时, 仅米非司酮对前列腺癌 PC-3 细胞分泌 VEGF 蛋白有抑制作用 ; 而地塞米松和米非司酮分别以及共同作用于 PC-3 细胞发现, 地塞米松对前列腺癌 PC-3 细胞 VEGF 蛋白也存在抑制作用, 但其抑制作用不显著, 二者共同作用时显示地塞米松阻断部分米非司酮对 PC-3 细胞分泌 [13] VEGF 蛋白的抑制作用 Yan 等研究报道, 米非司酮对前列腺癌 DU-145 细胞的抑制增殖作用存在时间和剂量依赖性, 进一步研究证实其细胞中存在 GR 的表达, 提示 GR 信号通路可能参与米非司酮抑制前列腺癌细胞增殖作用, 该通路主要是通过减少热休克蛋白 9 和 IL-6 蛋白表达而发挥作用的, 说明米非司酮对前列腺癌的抑制作用与 GR 信号通路有关, 这与本研究结果相一致 [14] Schneider 等研究同样证实, 米非司酮抑制子宫内膜癌 RL95-2 细胞株在体外的增殖作用, 其机制可能是通过阻断了 GR 与热休克蛋白解离以及 GR 与 DNA 的结合, 从而抑制 GR 的活性, 最终使癌细胞的增殖被抑制米非司酮下调 VEGF 蛋白的机制可能与低氧诱导因子 -α(hypoxia inducible factor-α, HIF-α) 激活蛋白 -1(activator protein-1,ap-1) 和核因

PC-3 细胞中 VEGF 蛋白的表达略有刺激作用, 但差异尚无统计学意义 (P >.5, 图 4); 米非司酮则可以减少 PC-3 细胞中 VEGF 的表达, 差异有统计学意义 (P <.

5 张辉, 等. 米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞血管内皮生长因子表达过程中糖皮质激素受体的作用 717 子 -κb(nuclear factor κb,nf-κb) 途径有关 AP-1 和 NF-κB 转录因子可以通过调节细胞增殖凋亡和血管生成相关基因的表达来促进前列腺癌的发生和进展 [15] 在前列腺癌中 NF-κB 蛋白的表达可以特异性调节 Bcl-2 cyclin D1 和 VEGF 等蛋白的表达 [16] [17] Xu 等研究表明, 前列腺癌 PC-3 C4 细胞中莱菔硫烷 (sulforaphane, 主要是从十字花科蔬菜中提取的一种具有强抗癌作用的植物化学活性物质 ) 可以有效抑制 NF-κB 的转录活性, 而 NF-κB 蛋白调节的 VEGF cyclin D1 和 Bcl-X L 等基因表达也相应降低 [18] Pallares 等研究发现, 在前列腺癌细胞中存在 VEGF 及其受体 1(Flt-1) 和受体 2(KDR) 表达, 提示肿瘤细胞分泌的 VEGF 不仅以旁分泌方式刺激血管内皮细胞增殖, 诱导新生血管形成, 也可作为自分泌因子通过直接作用于肿瘤细胞自身的 VEGF 受体, 而促进肿瘤细胞的生长或迁移, 抑制细胞凋亡此前本课题组已研究发现, 米非司酮可减少前列腺癌细胞中 VEGF 蛋白的表达 ; 本组研究显示, 米非司酮也可以减少前列腺癌细胞自分泌 VEGF 蛋白的量, 从而抑制癌细胞 [5] 的增殖 Li 等研究报道, 米非司酮可减少胃癌 MKN-45 细胞在裸鼠体内肺转移病灶数目, 降低肿瘤组织内 VEGF 蛋白和微血管密度的表达, 从而减少新生血管的生成总之, 本研究结果表明, 米非司酮抑制前列腺癌 PC-3 细胞在体外的增殖作用与 GR NFκB 调节 VEGF 蛋白途径有着密切相关性 [ 参考文献 ] [1] JEMAL A, TIWARI R C, MURRAY T, et al. Cancer statistics, 24[J]. CA Cancer J Clin, 24, 154(1): [2] 张辉, 吕家驹, 高庆贞, 等. 米非司酮诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞凋亡的实验研究 [J]. 中华外科杂志, 26, 44(6): [3] 于靖, 邹海峰, 裴天仙, 等. 程序性细胞死亡蛋白 5 在米非司酮诱导前列腺癌细胞凋亡中的协同作用 [J]. 肿瘤, 21, 3(7): [4] CHECK J H, SANSOUCIE L, CHERN J, et al. Mifepristone treatment improves length and quality of survival of mice with spontaneous lung cancer[j]. Anticancer Res, 21, 3(1): [5] LI D Q, WANG Z B, BAI J, et al. Effects of mifepristone on invasive and metastatic potential of human gastric adenocarcinoma cell line MKN-45 in vitro and in vivo[j]. World J Gastroenterol, 24, 1(12): [6] HYDER S M, HUANG J C, NAWAZ Z, et al. Regulation of vascular endothelial growth factor expression by estrogens and progestins[j]. Environ Health Perspect, 2, 18(Suppl 5): [7] FERRER F A, MILLER L J, LINDQUIST R, et al. Expression of vascular endothelial growth factor receptors in human prostate cancer[j]. Urology, 1999, 54(3): [8] 田兴松, 吴国君, 周文红, 等. 米非司酮对乳腺癌细胞增殖与凋亡的作用机制 [J]. 山东大学学报 : 医学版, 28, 46(5): [9] 田兴松, 周文红, 吴国君, 等. 米非司酮对乳腺癌动物模型肿瘤生长抑制的实验观察 [J]. 中华医学杂志, 28, 88(8): [1] 高庆贞, 吕家驹, 尉立京, 等. 孕酮和米非司酮对前列腺癌 PC-3 细胞作用机理的研究 [J]. 中华泌尿外科杂志, 26, 27(5): [11] HYDER S M, CHIAPPETTA C, STANCEL G M. Pharmacological and endogenous progestins induce vascular endothelial growth factor expression in human breast cancer cells[j]. Int J Cancer, 21, 92(4): [12] JENKINS B D, PULLEN C B, DARIMONT B D. Novel glucocorticoid receptor coactivator effector mechanisms[j]. Trends Endocrinol Metab, 21, 12(3): [13] YAN T Z, JIN F S, XIE L P, et al. Relationship between glucocorticoid receptor signal pathway and androgen-independent prostate cancer[j]. Urol Int, 28, 81(2): [14] SCHNEIDER C C, GIBB R K, TAYLOR D D, et al. Inhibition of endometrial cancer cell lines by mifepristone (RU 486)[J]. J Soc Gynecol Investig, 1998, 5(6): [15] TISCHER E, MITCHELL R, HARTMAN T, et al. The human gene for vascular endothelial growth factor. Multiple protein forms are encoded through alternative exon splicing[j]. J Biol Chem, 1991, 266(18): [16] CRISPEN P L, UZZO R G, GOLOVINE K, et al. Vitamin E succinate inhibits NF-kappaB and prevents the development of a metastatic phenotype in prostate cancer cells: implications for chemoprevention[j]. Prostate, 27, 67(6): [17] XU C, SHEN G, CHEN C, et al. Suppression of NF-kappaB and NF-kappaB-regulated gene expression by sulforaphane and PEITC through IkappaB alpha, IKK pathway in human prostate cancer PC-3 cells[j]. Oncogene, 25, 24(28): [18] PALLARES J, ROJO F, IRIARTE J, et al. Study of microvessel density and the expression of the angiogenic factors VEGF, bfgf and the receptors Flt-1 and FLK-1 in benign, premalignant and malignant prostate tissues[j]. Histol Histopathol, 26, 21(8): [ 本文编辑 ] 张俊彦

癌的发生和进展 [15] 在前列腺癌中 NF-κB 蛋白的表达可以特异性调节 Bcl-2 cyclin D1 和 VEGF 等蛋白的表达 [16] [17] Xu 等研究表明, 前列腺癌 PC-3 C4 细胞中莱菔硫烷 (sulforaphane, 主要是从十字花科蔬菜中提取的一种具

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