呼吸之毒理測試方法概述

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2 植 物 病 原 細 菌 及 病 毒 之 分 類 與 鑑 定 張 哲 銘 蘇 秋 竹 前 言 植 物 病 害 (plant disease) 係 指 植 物 形 態 構 造 與 生 理 機 能 發 生 異 常 的 現 象, 而 於 外 表 顯 現 各 種 形 態 的 改 變, 如 壞 疽 腫 大 矮 化 增 生 萎 凋 變 色 腐 敗 與 潰 瘍 等 植 物 病 害 發 生 的 原 因 包 括 非 生 物 及 生 物 因 子, 非 生 物 性 的 因 子 包 括 凍 害 日 燒 乾 旱 藥 害 肥 害 冰 雹 機 械 害 及 環 境 污 染 等 ; 植 物 病 原 則 有 真 菌 細 菌 植 物 菌 質 體 病 毒 類 病 毒 寄 生 性 高 等 植 物 與 線 蟲 六 大 類 別 其 中, 真 菌 病 害 為 最 大 宗 約 佔 50~65% 病 毒 病 害 約 佔 10~20%, 而 細 菌 病 害 約 佔 5-10% 植 病 學 家 進 一 步 提 出 植 物 病 害 三 角 形 (Disease triangle) 理 論, 以 三 角 形 表 示 寄 主 植 物 (host) 病 原 (pathogen) 環 境 (environment) 三 要 素 彼 此 之 作 用, 即 有 利 的 環 境 感 病 植 株 致 病 原 三 個 條 件 同 時 滿 足 才 會 發 病 防 治 策 略 的 擬 定 首 重 於 植 物 病 原 的 鑑 定, 要 能 立 即 抑 制 病 害 散 播 並 預 防 病 害 再 次 發 生 檢 測 人 員 除 了 需 具 備 敏 銳 的 觀 察 力, 還 需 依 照 下 列 步 驟 抽 絲 剝 繭 來 進 行 診 斷, 以 臻 準 確 地 判 斷 病 害 種 類 及 其 致 病 原 :(1) 熟 稔 各 種 植 物, 並 了 解 植 物 的 根 莖 葉 花 及 果 實 的 正 常 生 理 狀 態 (2) 觀 察 植 株 的 病 徵 部 位 是 否 有 昆 蟲 咬 痕 蟲 糞 蟲 卵 孢 子 菌 絲 菌 流 等, 初 步 判 斷 病 原 類 型 並 立 即 採 取 防 治 措 施 (3) 確 認 病 害 所 造 成 的 病 徵 部 位, 並 觀 察 病 徵 的 發 展 狀 況 (4) 瞭 解 病 害 在 田 間 分 布 狀 況 及 傳 播 速 率 植 物 病 原 通 常 有 宿 主 專 一 性, 若 園 區 裡 多 種 植 物 皆 有 類 似 病 徵, 應 為 非 生 物 因 子 所 造 成 需 進 一 步 了 解 植 株 栽 種 環 境 及 管 理 模 式, 以 衡 量 非 生 物 因 子 的 干 擾 (5) 針 對 病 徵 部 位 進 行 病 原 分 離, 並 將 分 離 到 的 病 原 於 適 宜 環 境 下 以 人 工 方 式 接 種 至 健 康 植 株, 觀 察 是 否 能 造 成 同 樣 病 徵, 以 符 合 柯 霍 氏 假 說 (Koch's postulates) (6) 部 分 病 原 無 法 由 人 工 培 養, 如 : 植 物 菌 質 體 病 毒 及 類 病 毒, 便 需 利 用 分 子 鑑 定 技 術 來 確 認 病 原 常 用 的 技 術 包 括 : 酵 素 連 結 免 疫 吸 附 法 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 生 理 生 化 鑑 定 法 聚 合 酵 素 連 鎖 行 政 院 農 業 委 員 會 農 業 藥 物 毒 物 試 驗 所 技 術 專 刊 第 244 號 - 1 -

3 反 應 (polymerase chain reaction, PCR), 通 常 以 此 三 種 方 式 互 相 輔 助 使 用, 以 確 認 病 原 菌 之 種 或 病 原 型 (pathovar) 對 於 眾 多 的 植 物 病 原 鑑 定 方 法 應 有 所 選 擇, 但 是 要 用 在 檢 疫 上, 不 管 選 用 何 種 檢 測 方 法, 就 要 合 乎 (1) 快 速 (2) 正 確 (3) 簡 便 三 個 要 件, 本 文 將 針 對 植 物 病 原 中 的 細 菌 及 病 毒 之 分 類 鑑 定 作 一 概 述 植 物 病 原 細 菌 細 菌 通 常 為 單 細 胞, 有 桿 狀 球 形 橢 圓 形 螺 旋 形 絲 形 或 逗 點 形 等, 其 中 植 物 之 病 原 細 菌 多 半 為 桿 狀 居 多 大 約 有 180 餘 種 的 細 菌 可 以 造 成 植 物 病 害, 大 多 數 的 植 物 病 原 細 菌 具 有 3-7 根 鞭 毛, 因 而 可 以 自 由 的 游 動 ; 若 無 鞭 毛 者, 則 不 能 移 動 除 了 部 分 自 營 細 菌 外, 多 數 細 菌 皆 為 異 營 生 活, 在 寄 主 植 物 體 內 以 寄 生 型 態 存 活 並 增 殖, 而 部 分 病 原 以 腐 生 方 式 存 在 植 物 體 或 土 壤 中, 並 可 培 養 於 人 工 合 成 培 養 基 植 物 病 原 細 菌 可 存 活 於 土 壤 枝 條 種 子 及 昆 蟲 體 表 或 體 內, 並 經 由 雨 水 飛 濺 種 子 昆 蟲 風 農 具 及 根 的 接 觸 等 進 行 傳 播 植 物 病 原 細 菌 所 引 起 之 植 物 病 害, 其 病 徵 與 真 菌 所 引 起 的 病 徵 相 類 似, 常 見 之 病 徵 有 葉 斑 葉 枯 葉 燒 萎 凋 軟 腐 腫 瘤 等 但 是 由 細 菌 所 引 起 的 植 物 病 害, 切 下 罹 病 組 織 並 滴 一 小 水 滴 於 其 上, 在 光 學 顯 微 鏡 下 可 觀 察 到 大 量 細 菌 於 切 口 處 湧 出 分 離 出 病 原 細 菌 後, 就 要 開 始 鑑 定 和 分 類 的 工 作 由 於 細 菌 的 細 胞 壁 主 要 成 份 不 同, 植 物 病 原 細 菌 之 鑑 定 先 利 用 革 蘭 氏 碘 液 進 行 染 色, 將 細 菌 分 成 革 蘭 氏 陽 性 菌 及 革 蘭 氏 陰 性 菌 兩 大 類 接 著 依 Laboratory Guide for identification of Plant Pathogenic Bacteria 所 述 進 行 菌 落 型 態 培 養 特 性 生 理 生 化 特 性 病 原 性 測 定 脂 肪 酸 圖 譜 蛋 白 質 圖 譜 及 核 酸 特 性 等 測 試 結 果 ( 圖 1), 便 可 推 測 出 該 未 知 菌 種 名 若 出 現 之 某 些 結 果 不 符 合 資 料 的 情 況 發 生, 可 進 一 步 應 用 分 子 技 術 來 進 行 親 緣 分 析 此 病 原 菌 之 病 原 型 引 起 植 物 病 害 的 細 菌 主 要 為 下 列 幾 屬 ( 圖 2), 其 中 屬 於 革 蘭 氏 陰 性 菌 為 : (1) 農 桿 菌 屬 (Agrobacterium): 為 桿 狀 細 胞, 具 有 1~4 根 周 生 鞭 毛, 不 產 生 氣 體 及 酸, 不 分 解 明 膠, 生 長 於 含 炭 水 化 合 物 的 培 養 基, 可 產 生 豐 富 的 多 醣 黏 膜, 菌 落 無 色, 圓 滑 型 菌 體 存 於 根 圈 及 土 中, 若 侵 入 植 物 根 和 莖, 於 植 物 的 根 冠 樹 幹 或 枝 條 修 剪 處 產 生 肥 大 瘤 腫, 其 寄 主 範 圍 相 當 廣 泛, 至 少 可 危 害

4 科 588 屬 1,193 種 以 上 的 植 物, 例 如 : 番 茄 癌 腫 病 玫 瑰 癌 腫 病 甘 蔗 癌 腫 病 等 (2) 假 單 胞 桿 菌 屬 (Pseudomonas): 長 桿 狀, 多 為 單 極 多 鞭 毛 或 雙 極 多 鞭 毛, 嚴 格 好 氧, 呼 吸 代 謝 而 不 發 酵 醣 類 在 固 體 培 養 基 上 之 菌 落 為 白 色, 有 些 菌 產 生 螢 光 色 素 或 紅 藍 黃 綠 等 水 溶 性 色 素 屬 於 土 棲 性 或 水 棲 性, 大 部 分 的 菌 種 可 侵 害 植 物, 造 成 葉 斑 青 枯 萎 凋 等 病 徵, 例 如 : 胡 瓜 細 菌 性 斑 點 病 番 茄 細 菌 性 葉 斑 病 楊 桃 細 菌 性 斑 點 病 蘭 花 褐 斑 病 等 (3) 黃 單 胞 桿 菌 屬 (Xanthomonas): 長 桿 狀, 單 極 鞭 毛, 嚴 格 好 氧, 在 固 體 培 養 基 上 產 生 不 溶 性 濃 厚 黃 色 素, 有 粘 膜, 在 碳 水 化 合 物 培 養 基 上 粘 膜 尤 多 本 屬 均 為 植 物 病 原 菌, 感 染 植 物 的 葉 莖 及 果 實, 形 成 葉 斑 潰 瘍 黑 腐 等 病 徵 寄 主 範 圍 廣 泛, 可 感 染 具 有 重 要 經 濟 價 值 的 穀 類 蔬 菜 果 樹 及 花 卉 等 至 少 392 種 被 子 植 物, 包 含 124 種 單 子 葉 及 268 種 雙 子 葉 植 物 例 如 : 水 稻 白 葉 枯 病 十 字 花 科 黑 腐 病 番 茄 及 甜 椒 細 菌 性 斑 點 病 柑 桔 潰 瘍 病 大 豆 葉 燒 病 等 (4) 歐 氏 桿 菌 屬 (Erwinia): 桿 狀, 具 有 2~8 根 周 生 鞭 毛, 菌 落 成 白 色 圓 形 或 不 規 則, 為 兼 性 厭 氧 菌, 能 醱 酵 多 種 碳 水 化 合 物 會 分 解 果 膠 酸 鹽 (pectate), 可 在 固 體 培 養 基 上 舖 一 層 酸 鹽, 做 成 選 擇 性 培 養 基 可 引 起 植 物 壞 疽 萎 凋 及 軟 腐, 產 生 惡 臭, 例 如 : 蔬 菜 細 菌 性 軟 腐 病 胡 瓜 細 菌 性 萎 凋 病 蘭 花 細 菌 性 軟 腐 病 等 (5) 木 質 桿 菌 屬 (Xylella): 桿 狀, 好 氧, 具 有 波 浪 狀 細 胞 壁, 為 營 養 苛 求 細 菌, 無 法 培 養 於 一 般 性 培 養 基, 於 PD2 固 體 培 養 基 之 菌 落 為 乳 白 色 圓 形 突 起 菌 體 存 在 於 植 物 木 質 部 的 導 管 裡 增 殖 而 堵 圔 了 水 份 的 輸 送, 受 害 植 株 出 現 葉 緣 焦 枯 提 早 落 葉, 嚴 重 時 造 成 植 株 死 亡 可 危 害 梨 葡 萄 柑 桔 苜 蓿 咖 啡 杏 仁 及 李 等 多 種 經 濟 作 物, 引 起 葡 萄 皮 爾 斯 病 桑 葉 枯 黃 夾 竹 桃 葉 焦 枯 病 苜 蓿 矮 化 咖 啡 細 菌 性 葉 焦 枯 及 台 灣 特 有 的 葉 緣 焦 枯 病 革 蘭 氏 陽 性 菌 包 括 : (1) 棒 桿 菌 屬 (Clavibacter): 細 小 桿 狀, 有 時 略 為 變 曲 或 呈 棍 棒 狀, 一 般 不 運 動, 不 抗 酸, 屬 於 好 氧 或 兼 性 厭 氧, 碳 水 化 合 物 的 代 謝 兼 有 呼 吸 和 發 酵 兩 種 方 式 可 存 在 於 土 壤 中 或 植 物 殘 餘 物 上, 造 成 馬 鈴 薯 輪 腐 病 番 茄 潰 瘍 病 及 甘 蔗 矮 化 病 (2) 鏈 黴 菌 屬 (Streptomyces): 鏈 絲 菌 好 氧, 絕 大 部 分 腐 生, 其 基 質 菌 絲 不 斷 裂, 氣 - 3 -

5 生 菌 絲 部 分 分 化 成 直 形 柔 曲 鉤 環 狀 孢 子 絲, 成 熟 的 孢 子 絲 生 成 鏈 狀 的 分 生 孢 子, 故 名 鏈 絲 菌 菌 落 較 小 而 緻 密, 表 面 呈 粉 狀 絨 狀, 並 有 多 種 顏 色 其 代 謝 過 程 中, 產 生 的 次 級 代 謝 產 物 可 作 為 抗 生 素 常 見 於 土 壤 及 腐 爛 植 物 中, 可 引 起 馬 鈴 薯 瘡 痂 病 圖 1. 不 同 屬 植 物 病 原 細 菌 鑑 定 流 程 圖 - 4 -

6 圖 2. 常 見 的 植 物 細 菌 病 害 :(1) 玫 瑰 癌 腫 病 (Agrobacterium tumefaciens) (2) 甘 藍 黑 腐 病 (Xanthomonas campestris) (3) 楊 桃 細 菌 性 斑 點 病 (Pseudomonas syringae) (4) 馬 鈴 薯 瘡 痂 病 (Streptomyces scabies) (5) 葡 萄 皮 爾 斯 病 (Xylella fastidiosa) (6) 文 心 蘭 細 菌 性 軟 腐 (Erwinia carotovora) 植 物 病 原 病 毒 病 毒 是 由 核 酸 分 子 (DNA 或 RNA) 與 蛋 白 質 構 成 的 外 殼 所 組 成 的 生 命 體, 無 法 由 光 學 顯 微 鏡 觀 察 到 病 毒 顆 粒 的 型 態 可 分 成 不 對 稱 形 及 對 稱 形 兩 大 類, 不 對 稱 形 的 病 毒 顆 粒 有 短 桿 狀 長 桿 狀 及 鎗 彈 型, 亦 有 絲 狀 者 ; 至 於 對 稱 形 的 病 毒 顆 粒, 通 常 是 由 等 邊 三 角 形 所 組 成 的 20 面 體, 其 形 狀 為 球 形 植 物 病 毒 必 須 藉 由 傷 口 才 能 進 入 植 物 體 內, 且 必 須 在 寄 主 的 細 胞 內 才 能 生 存 繁 殖 因 此, 植 物 病 毒 需 經 由 昆 蟲 或 其 他 節 肢 動 物 土 壤 中 的 線 蟲 與 低 等 真 菌 攜 帶 病 毒 的 種 子 與 營 養 繁 殖 器 官 及 機 械 工 具 等 方 法 傳 播 病 毒 感 染 寄 主 植 物 後, 干 擾 寄 主 細 胞 代 謝 作 用, 致 使 寄 主 細 胞 無 法 正 常 的 生 長 而 出 現 病 徵 一 種 病 毒 可 能 感 染 一 種 或 數 種 植 物 ; 同 樣 的, 一 種 植 物 也 可 能 被 一 種 或 數 種 不 同 病 毒 所 感 染, 稱 之 為 複 合 感 染 病 毒 複 合 感 染 可 能 產 生 拮 抗 作 用 (antagonistic effect), 如 菸 草 植 株 內 的 嵌 紋 病 毒 會 抑 制 馬 鈴 薯 病 毒 Y 的 增 殖 ; 另 一 種 則 為 增 效 作 用 (synergistic effect), 兩 種 病 毒 同 時 存 在 時, 會 造 成 較 嚴 重 的 危 害, 如 馬 鈴 薯 病 毒 X 和 病 毒 Y, 兩 者 單 獨 感 染 時 僅 造 成 馬 鈴 薯 輕 微 嵌 紋 褐 斑, 但 兩 者 同 時 感 染 時 則 花 葉 均 嚴 重 皺 縮 作 物 病 害 診 斷 通 常 以 肉 眼 觀 察 病 徵 來 加 以 判 斷, 病 毒 為 害 作 物 除 了 隨 著 病 毒 - 5 -

7 種 類 及 為 害 部 位 的 不 同, 所 表 現 的 病 徵 差 異 也 大 感 染 初 期 中 期 與 後 期 的 病 徵 皆 有 所 不 同 外, 亦 受 季 節 環 境 條 件 如 日 照 溫 度 濕 度 營 養 等 影 響 病 毒 所 造 成 的 病 徵 甚 複 雜, 一 般 於 葉 片 上 出 現 的 病 徵 最 為 明 顯, 但 亦 有 莖 果 實 或 根 的 病 徵 明 顯 者 植 物 病 毒 病 害 幾 乎 均 屬 於 系 統 性 感 染 病 害, 造 成 全 株 出 現 系 統 性 病 徵 出 現 病 徵 主 要 為 嵌 紋, 於 葉 片 或 果 實 上 夾 雜 著 淺 綠 色 黃 色 及 正 常 綠 色 相 嵌, 或 花 瓣 上 夾 雜 白 色 與 正 常 花 色 依 變 色 程 度 及 形 式 之 不 同, 可 分 為 斑 駁 嵌 紋 脈 綠 嵌 紋 漣 葉 嵌 紋 皺 縮 葉 嵌 紋 綠 泡 凸 起 嵌 紋 等 不 同 嵌 紋 型 態 此 外, 葉 片 上 無 斑 點 存 在 並 均 勻 的 黃 化 葉 脈 透 化 矮 化 叢 生 簇 葉 壞 疽 輪 紋 等 也 屬 於 系 統 性 感 染 之 病 徵 有 些 病 毒 感 染 作 物 後, 寄 主 外 觀 並 不 顯 現 病 徵, 且 與 健 康 者 難 以 區 別, 稱 之 為 潛 伏 性 感 染 (Latent infection) 而 造 成 潛 伏 感 染 的 此 類 病 毒, 稱 之 為 潛 居 性 病 毒, 如 馬 鈴 薯 病 毒 S 在 克 尼 伯 品 種 上 之 感 染 屬 之 另 外, 某 些 病 毒 感 染 後, 由 於 外 界 環 境 因 素 的 影 響, 如 高 溫 低 溫 日 照 或 養 份 等 因 子, 一 度 出 現 病 徵 後 又 消 失, 恢 復 如 同 健 康 狀 者, 此 種 情 況 叫 病 徵 隱 避, 但 病 毒 尚 存 在 於 作 物 體 中, 一 旦 環 境 條 件 適 合 再 出 現 病 徵 植 物 病 毒 與 其 他 病 原 菌 間 差 異 極 大, 除 形 態 及 大 小 外, 其 他 如 化 學 組 成 物 理 構 造 感 染 方 式 在 寄 主 體 內 的 複 製 過 程 及 運 行 傳 播 方 法 及 病 徵, 皆 極 不 相 同 因 此, 在 1970 年 代 David Baltimore 基 於 病 毒 mrna 的 生 成 機 制 提 出 一 套 新 的 病 毒 分 類 法, 稱 之 為 巴 爾 的 摩 分 類 法 (Baltimore classification) 病 毒 基 因 組 可 以 是 單 鏈 或 雙 鏈 的 RNA 或 DNA, 可 以 有 也 可 以 沒 有 反 轉 錄 酶 而 且, 單 鏈 RNA 病 毒 可 以 是 正 義 (+) 或 反 義 (-) 這 一 分 類 法 將 病 毒 分 為 7 類 : 第 一 類 是 雙 鏈 DNA 病 毒 ( 如 腺 病 毒 皰 疹 病 毒 痘 病 毒 ) 第 二 類 是 單 鏈 DNA 病 毒 (+)DNA( 如 小 DNA 病 毒 ) 第 三 類 是 雙 鏈 RNA 病 毒 ( 如 呼 腸 孤 病 毒 ) 第 四 類 是 (+) 單 鏈 RNA 病 毒 ( 如 微 小 核 糖 核 酸 病 毒 披 蓋 病 毒 ) 第 五 類 是 (-) 單 鏈 RNA 病 毒 ( 如 正 黏 液 病 毒 炮 彈 病 毒 ) 第 六 類 是 單 鏈 RNA 反 轉 錄 病 毒 ( 如 反 轉 錄 病 毒 ) 第 七 類 是 雙 鏈 DNA 反 轉 錄 病 毒 ( 如 肝 病 毒 ) 針 對 各 種 病 毒 所 引 起 的 病 害, 其 診 斷 過 程 通 常 以 肉 眼 觀 察 病 徵 的 表 現 加 以 判 斷, 倘 若 尚 難 加 以 確 定 則 從 簡 單 的 解 剖 由 內 部 症 狀 加 以 診 斷, 再 無 法 確 定 就 要 以 植 物 接 種 嫁 接 組 織 化 學 染 色 血 清 反 應 分 離 純 化 病 毒 電 子 顯 微 鏡 觀 察 或 - 6 -

8 進 行 聚 合 酶 連 鎖 反 應 等 分 子 檢 測 加 以 論 證 結 語 植 物 病 害 的 檢 測 鑑 定 為 防 治 病 害 之 重 要 關 鍵, 包 括 從 傳 統 的 型 態 鑑 定 生 理 生 化 鑑 定 至 分 子 鑑 定, 均 占 有 一 席 之 地, 然 而 如 何 活 用 各 項 檢 測 鑑 定 技 術 而 能 快 速 且 準 確 得 到 結 果, 則 是 每 個 研 究 人 員 需 仔 細 思 考 的 課 題 本 文 提 供 植 物 病 原 細 菌 及 植 物 病 原 病 毒 的 鑑 定 方 針, 希 望 提 供 植 物 防 檢 疫 人 員 診 斷 病 害 的 依 據, 進 而 提 出 有 效 防 治 策 略 - 7 -

9 參 考 文 獻 1. 詹 富 智 盧 耀 村 陳 慶 忠 2011 植 物 檢 疫 病 毒 偵 測 技 術 植 物 重 要 防 檢 疫 病 害 診 斷 鑑 定 技 術 研 習 會 專 刊 ( 二 ) 2. 孫 守 恭 1988 植 物 病 理 學 通 論 藝 軒 圖 書 出 版 社 台 北 3. 蘇 秋 竹 徐 世 典 1998 在 台 灣 由 Pseudomonas syringae 引 起 之 楊 桃 細 菌 性 葉 斑 病 植 病 會 刊 7:215 ( 摘 要 ) 4. Agrios, G. N Introductory Plant Pathology. 4th ed. Academic Press, New York, NY. 5. Agrios, G. N Plant Pathology, 5th ed. Chapter 12. Academic Press, New York, NY. 6. Riley, M.B., M.R. Williamson, and O. Maloy Plant disease diagnosis. The Plant Health Instructor. 7. Schaad N. W., Jones, J. B., and Chun, W Laboratory Guide for Identification of Plant Pathogenic Bacteria. 3rd ed. APS press,minnesota. 8. Su, C. C., Chang, C. J. Yang, W. J. Hsu, S. T., Tzeng, K. C. Jan, F. J. and Deng, W. L Specific characters of 16S rrna gene and 16S-23S rrna internal transcribed spacer sequences of Xylella fastidiosa pear leaf scorch strains. European Journal of Plant Pathology, 132 (2) pp Su, C.C., Chang, C. J. Chang, C. M. Shih, H. T. Jan, F. J. Kao, C. W. and Deng, W. L Pierce's disease of grapes in Taiwan: Isolation, cultivation, and pathogenicity of Xylella fastidiosa. Journal of Phytopatholgy 161(6): Temin, H.M., Baltimore, D RNA-directed DNA synthesis and RNA tumor viruses. Adv. Virus Res. 17:

10 藥 毒 所 專 題 報 導 發 行 人 : 費 雯 綺 發 行 所 : 行 政 院 農 業 委 員 會 農 業 藥 物 毒 物 試 驗 所 地 址 : 臺 中 市 霧 峰 區 舊 正 里 光 明 路 11 號 網 址 : 電 話 : (04) 總 編 輯 : 陳 妙 帆 編 輯 委 員 : 蔣 永 正 蘇 文 瀛 何 明 勳 曾 經 洲 蔡 韙 任 徐 慈 鴻 展 售 書 局 : 1. 國 家 書 店 松 江 門 市 / 臺 北 市 松 江 路 209 號 1 樓 (02) 網 路 書 店 / 2. 五 南 文 化 廣 場 / 臺 中 市 中 山 路 6 號 (04) 網 路 書 店 / 印 刷 : 中 英 打 字 印 刷 行 地 址 : 南 投 縣 草 屯 鎮 中 正 路 587 之 4 號 電 話 : 中 華 民 國 104 年 1 月 出 版 定 價 : 新 台 幣 30 元 GPN: ISSN: ( 平 裝 ) 著 作 財 產 權 人 行 政 院 農 業 委 員 會 農 業 藥 物 毒 物 試 驗 所 欲 利 用 本 書 全 部 或 部 份 內 容 者, 須 徵 求 著 作 財 產 權 人 同 意 - 9 -

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