699 急 性 肺 损 伤 (acutelunginjury,ali) 常 见 于 机 体 遭 受 严 重 感 染 创 伤 休 克 等 导 致 的 肺 泡 上 皮 细 胞 及 毛 细 血 管 内 皮 细 胞 损 伤, 造 成 弥 漫 性 肺 间 质 及 肺 泡 水 肿, 导 致 急 性 低 氧 性

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1 698 中 国 病 理 生 理 杂 志 ChineseJournalofPathophysiology 2014,30(4): [ 文 章 编 号 ] (2014) N 乙 酰 半 胱 氨 酸 对 H9N2 猪 流 感 病 毒 所 致 急 性 肺 损 伤 小 鼠 的 保 护 作 用 张 瑞 华, 王 存 连, 徐 彤, 魏 东, 徐 明 举, 刘 宝 剑, 王 国 华, 田 树 飞 ( 河 北 北 方 学 院 预 防 兽 医 学 重 点 实 验 室, 河 北 宣 化 ) [ 摘 要 ] 目 的 : 探 讨 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 (NAC) 对 H9N2 猪 流 感 病 毒 所 致 急 性 肺 损 伤 小 鼠 的 保 护 作 用 方 法 : 采 用 BALB/c 小 鼠 建 立 H9N2 猪 流 感 病 毒 诱 导 的 急 性 肺 损 伤 模 型 实 验 小 鼠 在 接 种 病 毒 前 1h 腹 腔 注 射 NAC(10 mg/kg, 稀 释 于 生 理 盐 水 ), 此 后 连 续 使 用 5d 检 测 肺 湿 重 与 干 重 比 变 化, 评 估 肺 水 肿 情 况, 观 察 肺 组 织 的 病 理 学 变 化, 检 测 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 内 炎 症 细 胞 肿 瘤 坏 死 因 子 α(tnf α) 白 细 胞 介 素 6(IL 6) 及 白 细 胞 介 素 1β(IL 1β) 的 变 化, 同 时 检 测 肺 组 织 匀 浆 中 病 毒 的 增 殖 总 超 氧 化 物 歧 化 酶 (T SOD) 和 髓 过 氧 化 物 酶 (MPO) 活 性 以 及 丙 二 醛 (MDA) 含 量 结 果 :NAC 能 降 低 小 鼠 死 亡 率, 延 长 小 鼠 存 活 时 间, 显 著 降 低 肺 组 织 的 病 理 学 变 化 和 肺 水 肿 程 度, 并 能 降 低 巨 噬 细 胞 淋 巴 细 胞 和 中 性 粒 细 胞 等 炎 症 细 胞 的 数 量, 同 时 降 低 TNF α IL 6 IL 1β 和 MDA 的 含 量, 抑 制 MPO 的 活 性 以 及 升 高 T SOD 的 活 性 结 论 :NAC 减 轻 H9N2 猪 流 感 病 毒 诱 导 的 小 鼠 急 性 肺 损 伤, 其 保 护 作 用 可 能 与 减 轻 氧 化 应 激 作 用 和 炎 症 反 应 相 关 [ 关 键 词 ] H9N2 猪 流 感 病 毒 ; 急 性 肺 损 伤 ;N 乙 酰 半 胱 氨 酸 [ 中 图 分 类 号 ] R363 [ 文 献 标 志 码 ] A doi: /j.isn ProtectiveefectofN acetylcysteineonmicewithacutelunginjuryin ducedbyh9n2swineinfluenzavirus ZHANGRui hua,wangcun lian,xutong,weidong,xuming ju,liubao jian, WANGGuo hua,tianshu fei (KeyLaboratoryofPreventiveVeterinaryMedicine,HebeiNorthUniversity,Xuanhua075131,China.E mail:xutong@so hu.com) [ABSTRACT] AIM:ToinvestigatetheefectsofN acetylcysteine(nac)onacutelunginjuryinducedbyh9n2 swineinfluenzavirus(siv)inmice.methods:balb/cmicewereusedtoestablishtheanimalmodelofacutelung injurybynasalinoculationofh9n2siv.themiceweredividedintocontrolgroup(withoutsivinfection),h9n2siv group(inoculationofh9n2siv)andnacgroup(inoculationofh9n2sivpluspretreatmentwithnac).thepulmonary edemawasevaluatedbydeterminingthelungwetweight/dryweight(w/d)ratio.thepathologicalchangesofthelungtis sueswereobserved.theconcontrationsoftnf α,il 1βandIL 6inbronchoalveolarlavagefluid(BALF)weremeas ured.thevirustiter,t SODactivity,MPOactivityandMDAcontentinthehomogenateofthelungtisuesweredetected. RESULTS:TreatmentwithNACdecreasedthemoralityofinfectedmice,andsignificantlyprolongedthesurvivaltimeof infectedmice.thepathologicalchangesofthelungtisues,thelungw/dratioandthelungindexwererelievedwhensiv infectedthemicetreatedwithnac.treatmentwithnacsignificantlydecreasedtheinfiltrationofinflammatorycelsinclu dingmacrophages,lymphocytesandneutrophilsinthebalf.thelevelsoftnf α,il 6,IL 1βandMDAandtheactivity ofmpowerealsodecreased.treatmentwithnacalsosignificantlyincreasedthet SODactivity.CONCLUSION:The protectiveefectofnacontheacutelunginjurymousemodelisrelatedtosuppresionoftheoxidativestresandinflamma toryresponses. [KEYWORDS] H9N2swineinfluenzavirus;Acutelunginjury;N acetylcysteine [ 收 稿 日 期 ] [ 修 回 日 期 ] [ 基 金 项 目 ] 河 北 省 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 (No.C ); 河 北 省 教 育 厅 自 然 科 学 重 点 项 目 (No.ZD ); 河 北 北 方 学 院 2013 年 自 然 科 学 重 点 项 目 通 讯 作 者 Tel: ;E mail:xutong1969@sohu.com

2 699 急 性 肺 损 伤 (acutelunginjury,ali) 常 见 于 机 体 遭 受 严 重 感 染 创 伤 休 克 等 导 致 的 肺 泡 上 皮 细 胞 及 毛 细 血 管 内 皮 细 胞 损 伤, 造 成 弥 漫 性 肺 间 质 及 肺 泡 水 肿, 导 致 急 性 低 氧 性 呼 吸 功 能 不 全 [1 2], 研 究 认 为 急 性 肺 损 伤 的 死 亡 率 高 达 40% ~60% [3 4] 近 年 来 的 研 究 表 明 流 感 病 毒 可 引 起 严 重 的 肺 部 感 染, 诱 导 急 性 肺 损 伤, 甚 至 发 展 形 成 急 性 呼 吸 窘 迫 征 从 而 引 发 高 死 亡 率, 因 此 感 染 性 因 素 尤 其 是 流 感 病 毒 的 感 染 已 经 成 为 ALI 的 重 要 原 因, 引 起 世 人 的 关 注 研 究 显 示 H9N2 猪 流 感 病 毒 (swineinfluenzavi rus,siv) 感 染 小 鼠 主 要 引 起 呼 吸 道 症 状 以 及 肺 损 伤 为 主 的 病 理 变 化, 具 有 较 强 的 致 病 性 [5] 有 关 其 致 病 机 制 目 前 认 为 主 要 是 内 源 性 炎 症 介 质 如 TNF α 和 IL 1β 为 主 的 炎 症 因 子 的 大 量 释 放, 引 起 间 接 性 损 伤 造 成, 因 此, 抑 制 过 强 的 炎 症 反 应 对 于 缓 解 或 治 疗 流 感 病 毒 引 起 肺 损 伤 可 能 是 潜 在 的 有 效 途 径 之 一 [6] Akaike 等 认 为 活 性 氧 自 由 基 引 起 的 氧 化 应 激 作 用 在 流 感 病 毒 感 染 引 起 肺 损 伤 过 程 中 可 能 发 挥 更 重 要 的 作 用 已 有 研 究 证 实 流 感 病 毒 导 致 肺 损 伤 的 另 一 个 主 要 因 素 是 氧 化 应 激 作 用 [7 9], 因 为 在 流 感 病 毒 感 染 过 程 中 病 毒 诱 导 中 性 粒 细 胞 聚 集, 游 走 至 炎 症 灶, 通 过 吞 噬 脱 颗 粒 和 呼 吸 暴 发 等 反 应 释 放 活 性 氧 自 由 基, 引 起 较 强 的 氧 化 作 用 对 蛋 白 质 脂 质 和 核 酸 产 生 伤 害 作 用, 进 而 导 致 机 体 损 伤 鉴 于 此, 本 研 究 聚 焦 缓 解 肺 损 伤 的 主 要 因 素 即 炎 症 作 用 和 氧 化 应 激 作 用 来 探 究 流 感 病 毒 所 致 肺 损 伤 的 抑 制 剂 研 究 证 实,N 乙 酰 半 胱 氨 酸 (N acetylcysteine,nac) 作 为 一 种 抗 氧 化 剂 用 于 抵 抗 纤 维 素 性 肺 泡 炎 病 人 的 氧 化 损 伤, 同 时 NAC 可 以 通 过 激 活 NF κb 而 引 起 抗 炎 介 质 的 产 生 NAC 用 于 流 感 病 毒 引 起 的 感 染 中 有 一 定 的 治 疗 作 用, 而 且 在 实 验 动 物 模 型 中 NAC 可 以 降 低 季 节 性 流 感 的 死 亡 率 [10] 本 研 究 通 过 H9N2SIV 感 染 小 鼠 建 立 肺 损 伤 模 型, 探 讨 NAC 对 H9N2SIV 诱 导 的 肺 损 伤 小 鼠 的 保 护 作 用 及 其 与 炎 症 反 应 以 及 氧 化 应 激 的 相 关 性 1 材 料 材 料 和 方 法 1.1 病 毒 和 动 物 A/swine/HeBei/012/2008/ (H9N2) 病 毒 由 本 实 验 室 分 离 保 存, 经 中 国 农 业 科 学 院 哈 尔 滨 兽 医 研 究 所 动 物 流 感 重 点 开 放 实 验 室 鉴 定 ;6~8 周 龄 的 SPF 级 BALB/c 小 鼠 购 买 于 北 京 梅 里 亚 通 实 验 动 物 中 心 1.2 主 要 试 剂 总 超 氧 化 物 歧 化 酶 (totalsuperoxide dismutase,t SOD) 丙 二 醛 (malondialdehyde,mda) 和 髓 过 氧 化 物 酶 (myoloperoxidase,mpo) 检 测 试 剂 盒 购 自 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所, 小 鼠 TNF α IL 1β 和 IL 6ELISA 检 测 试 剂 盒 均 为 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 产 品 2 方 法 2.1 实 验 动 物 分 组 与 感 染 150 只 6~8 周 龄 SPF 级 BALB/c 雌 性 小 鼠 随 机 分 成 对 照 (control) 组 H9N2SIV 组 和 NAC 组 (NAC+H9N2SIV), 每 组 50 只 病 毒 的 感 染 方 式 :H9N2 SIV 鸡 胚 尿 囊 液 用 灭 菌 生 理 盐 水 做 5 倍 稀 释 后 鼻 腔 接 种 小 鼠, 接 种 剂 量 为 每 只 0.1mL( 约 含 100MLD 50 ) NAC 给 予 方 式 : 试 验 小 鼠 在 接 种 病 毒 前 1h 腹 腔 注 射 NAC(10mg/kg, 稀 释 于 生 理 盐 水 ), 此 后 连 续 使 用 5d 接 种 后 的 小 鼠 隔 离 饲 养 于 二 级 生 物 安 全 实 验 室, 采 取 自 由 饮 水 和 采 食 2.2 小 鼠 存 活 时 间 每 组 18 只 小 鼠 用 于 各 组 小 鼠 的 存 活 时 间 的 检 测 每 天 观 察 各 组 小 鼠 死 亡 的 只 数, 统 计 死 亡 率, 绘 制 生 命 曲 线, 分 析 NAC 对 感 染 小 鼠 存 活 时 间 的 影 响 2.3 小 鼠 肺 组 织 病 理 变 化 的 动 态 观 察 在 感 染 后 和 14d, 每 组 处 死 5 只 小 鼠, 取 左 肺 的 下 半 部 分 固 定 于 10% 甲 醛 液 内, 经 石 蜡 包 埋, 做 成 4μm 切 片,HE 染 色, 每 只 小 鼠 制 作 2 张 切 片, 每 张 切 片 观 察 5 个 以 上 的 视 野, 观 察 组 织 学 变 化 右 肺 用 于 肺 系 数 肺 湿 重 与 肺 干 重 的 测 定 以 炎 症 细 胞 浸 润 肺 泡 和 间 质 水 肿 为 指 标 进 行 病 理 评 分 0: 无 病 变 ;1: 轻 微 病 变 ;2: 中 度 病 变 ;3: 重 度 病 变 ;4: 非 常 严 重 的 病 理 学 变 化 2.4 感 染 后 小 鼠 肺 指 数 和 肺 湿 重 与 干 重 比 (wet/dry weightratio,w/d) 的 动 态 观 察 在 感 染 后 的 第 2 天 3 天 5 天 7 天 和 14 天, 每 组 各 取 5 只 小 鼠, 分 别 称 量 体 重, 处 死, 称 量 全 肺 湿 重 ; 称 量 右 侧 肺 湿 重 后, 置 于 80 温 箱 中, 直 至 重 量 不 再 变 化 为 止, 称 量 右 肺 的 干 重, 然 后 分 别 计 算 肺 指 数 ( 肺 湿 重 / 体 重 ) 和 W/D, 衡 量 肺 水 肿 的 严 重 程 度 2.5 小 鼠 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 (bronchoalveolarlavage fluid,balf) 内 炎 性 细 胞 的 变 化 在 感 染 后 [11] 和 14d, 采 用 断 颈 方 法 处 死 小 鼠 参 照 Majeski 等 描 述 的 方 法 收 集 BALF: 处 死 小 鼠 后 立 即 剥 离 气 管, 气 管 插 管 后 分 2 次 注 入 4 的 灭 菌 生 理 盐 水, 进 行 支 气 管 肺 泡 灌 洗, 每 次 注 入 0.5mL 反 复 灌 洗 3~4

3 700 次, 每 只 小 鼠 BALF 的 回 收 率 大 于 80% BALF 用 白 细 胞 稀 释 液 作 1 5 倍 稀 释, 在 血 细 胞 计 数 板 上 进 行 白 细 胞 总 数 计 数 然 后 以 1500r/min 离 心 10min, 获 得 细 胞 沉 渣, 涂 片 固 定, 常 规 瑞 氏 染 色, 光 学 显 微 镜 ( 油 镜 ) 下 计 数 至 少 200 个 细 胞, 并 进 行 淋 巴 细 胞 巨 噬 细 胞 和 嗜 中 性 粒 细 胞 分 类 计 数 2.6 小 鼠 肺 组 织 匀 浆 中 T SOD MPO 和 MDA 的 测 定 按 照 试 剂 盒 使 用 说 明 检 测 小 鼠 肺 组 织 匀 浆 中 T SOD MPO 活 性 和 MDA 的 含 量 2.7 小 鼠 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 内 TNF α IL 1β 和 IL 6 的 检 测 小 鼠 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 内 TNF α IL 1β 和 IL 6 的 检 测 使 用 ELISA 方 法, 按 照 试 剂 盒 使 用 说 明 进 行 2.8 病 毒 滴 度 的 测 定 病 毒 的 滴 定 按 照 参 考 文 [12] 献 进 行 3 统 计 学 处 理 数 据 以 均 数 ± 标 准 差 (mean±sd) 表 示, 使 用 SPSS13.0 统 计 软 件 分 析 病 毒 滴 度 组 间 比 较 采 用 t 检 验, 病 理 评 分 采 用 Kruskal Walis 检 验, 其 余 资 料 采 用 单 因 素 方 差 分 析 后 进 行 Tukey 检 验 比 较, 以 P< 0 05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 结 1 小 鼠 存 活 时 间 分 析 H9N2SIV 组 小 鼠 在 接 种 病 毒 后 的 第 2 天 开 始 死 亡, 到 第 8 天 累 计 死 亡 11 只, 死 亡 率 为 61.11%; 与 之 相 比, 给 予 NAC 后 小 鼠 的 死 亡 率 明 显 降 低, 存 活 时 间 明 显 延 长, 累 计 死 亡 率 为 38.89%, 正 常 组 小 鼠 没 有 死 亡, 见 图 1 Figure1.SurvivaltimeanalysisofH9N2SIV infectedmiceafter treatedwithnac. 果 图 1 NAC 干 预 后 小 鼠 存 活 时 间 变 化 2 病 理 组 织 学 变 化 病 毒 感 染 小 鼠 病 理 组 织 学 变 化 呈 现 明 显 的 肺 部 损 伤 感 染 后 的 第 2 天, 小 血 管 和 小 支 气 管 周 围 间 质 水 肿, 小 支 气 管 管 腔 黏 附 有 脱 落 的 黏 膜 上 皮, 小 支 气 管 周 围 肺 泡 壁 水 肿 炎 症 细 胞 浸 润, 见 图 2A 感 染 后 的 第 3 天, 肺 泡 壁 水 肿 增 厚, 间 质 变 宽, 出 现 间 质 性 肺 炎, 细 支 气 管 黏 膜 上 皮 脱 落, 腔 内 有 脱 落 的 黏 膜 上 皮, 见 图 2B 感 染 后 的 第 5 天, 炎 症 反 性 进 一 步 扩 大, 细 支 气 管 中 有 大 量 的 炎 症 细 胞 浸 润, 最 终 形 成 细 支 气 管 性 肺 炎 细 支 气 管 周 围 也 有 大 量 的 炎 症 细 胞, 呈 现 细 支 气 管 周 围 炎 肺 泡 壁 进 一 步 水 肿 增 厚, 呈 现 弥 漫 性 的 肺 泡 炎, 见 图 2C 给 予 NAC 后, 虽 然 也 呈 现 了 上 述 的 病 理 学 模 式, 但 是 病 理 变 化 明 显 减 轻, 见 图 2D~F 病 理 评 分 结 果 如 图 3, 与 对 照 组 相 比, 病 毒 感 染 组 小 鼠 出 现 明 显 的 炎 症 细 胞 渗 出 肺 泡 和 间 质 水 肿, 给 NAC 后 上 述 病 理 变 化 明 显 减 轻 3 肺 水 肿 的 评 估 3.1 病 毒 感 染 后 肺 W/D 变 化 与 对 照 组 相 比, 病 毒 感 染 组 小 鼠 在 感 染 后 2d 肺 W/D 明 显 增 加 (P< 0 05), 感 染 后 3~7d 显 著 增 加 (P<0 01); 与 病 毒 感 染 组 相 比,NAC 组 小 鼠 给 药 后 3d 肺 W/D 明 显 下 降 (P<0 05), 给 药 后 5d 显 著 下 降 (P<0 01), 但 是 NAC 组 与 对 照 组 相 比 仍 然 具 有 显 著 差 异, 直 至 感 染 后 14d, 各 组 小 鼠 肺 W/D 无 明 显 差 异 (P> 0 05), 见 图 4A 3.2 肺 指 数 变 化 由 图 4B 可 见, 与 对 照 组 相 比, 病 毒 感 染 组 小 鼠 在 感 染 后 2d 的 肺 指 数 明 显 增 加 (P<0 05), 感 染 3~7d 显 著 增 加 (P<0 01); 与 病 毒 感 染 组 相 比,NAC 组 小 鼠 给 药 后 3d 肺 指 数 明 显 下 降 (P<0 05), 给 药 后 5~7d 显 著 下 降 (P<0 01), 但 是 NAC 组 与 对 照 组 相 比 仍 有 显 著 差 异, 直 至 感 染 后 14d, 各 组 小 鼠 肺 指 数 无 明 显 差 异 (P>0 05) 4 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 中 炎 症 细 胞 的 变 化 感 染 后 2~5d, 与 对 照 组 相 比, 病 毒 感 染 组 小 鼠 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 的 细 胞 总 数 巨 噬 细 胞 数 量 中 性 粒 细 胞 数 量 和 淋 巴 细 胞 数 量 显 著 增 加 (P<0 01), 与 之 相 比, 给 予 NAC 之 后 上 述 细 胞 数 量 显 著 降 低 (P<0 01), 说 明 NAC 可 以 有 效 降 低 病 毒 感 染 引 起 的 炎 症 细 胞 增 加 但 是 NAC 组 小 鼠 的 炎 症 细 胞 数 量 和 对 照 组 相 比 仍 有 显 著 差 异, 直 至 感 染 后 14d, 各 组 小 鼠 的 炎 症 细 胞 数 量 无 显 著 差 异, 见 图 5

4 71 F 2 T p f m HE 2 A B dc H9N2S I V p2d 3d d5d f p v y D E df NAC p B k w w fd p fm p m d B k w d m f m b dv G y w w f mm y f b b G dh p 图 2 HE染色观察小鼠肺脏组织病理学变化 F 3 L j y f m M ±S D 5 P 1v P 5 P 1v H9N2S I V 图 3 小鼠肺组织的病理学评分 F 4 L w w d yw A d w w b d yw B f m M ±S D 5 P 5 P P 5 P 1v H9N2S I V 1v 图 4 小鼠肺湿重与干重之比以及肺湿重与体重之比

5 702 Figure5.Totalcelcounts(A),neutrophils(B),macrophages(C)andlymphocytes(D)inBALF.Mean±SD.n=5. P< 0 05, P<0 01vscontrol; ## P<0 01vsH9N2SIV. 图 5 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 中 炎 症 细 胞 总 数 及 中 性 粒 细 胞 巨 噬 细 胞 和 淋 巴 细 胞 数 量 5 小 鼠 肺 组 织 匀 浆 中 T SOD 活 性 MPO 活 性 及 MDA 含 量 的 变 化 如 图 6 所 示, 病 毒 感 染 组 小 鼠 与 对 照 组 相 比, 肺 组 织 匀 浆 MPO 活 性 从 感 染 后 第 2~7 天 逐 渐 升 高, 并 呈 现 显 著 差 异 (P<0 01); 与 病 毒 感 染 组 相 比, NAC 组 小 鼠 给 药 后 MPO 活 性 明 显 降 低, 第 2~7 天 出 现 极 显 著 差 异 (P<0 01), 但 与 正 常 组 相 比 仍 有 显 著 差 异 与 对 照 组 相 比, 病 毒 感 染 组 小 鼠 MDA 含 量 从 第 2 天 开 始 出 现 显 著 差 异 (P<0 05), 感 染 后 3~7dMDA 含 量 极 显 著 升 高 (P<0 01); 给 予 NAC 后,NAC 组 小 鼠 和 感 染 组 相 比 显 著 降 低 (P<0 01), 但 与 正 常 组 相 比 仍 有 显 著 差 异 T SOD 活 性 的 变 化 与 MDA 和 MPO 的 变 化 趋 势 相 反, 即 感 染 后 2~7d 感 染 组 小 鼠 肺 组 织 匀 浆 的 T SOD 显 著 低 于 对 照 组 (P<0 01); 给 予 NAC 后 开 始 回 升,2~3d 差 异 显 著 (P<0 05),5~7d 差 异 极 显 著 (P<0 01), 但 与 正 常 组 相 比 仍 有 显 著 差 异 直 至 感 染 后 的 第 14 天, 各 组 间 的 MPO T SOD 和 MDA 无 显 著 差 异 6 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 中 TNF α IL 1β 和 IL 6 的 变 化 与 对 照 组 相 比, 病 毒 感 染 组 小 鼠 在 感 染 2~7d 后 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 中 TNF α IL 1β 和 IL 6 显 著 升 高 (P<0 01); 给 予 NAC 后,NAC 组 小 鼠 IL 1β 和 IL 6 在 第 2 天 便 出 现 明 显 下 降 趋 势 (P<0 05),3~ 7d 显 著 下 降 (P<0 01), 与 之 相 比 较,TNF α 在 2~ 7d 始 终 有 显 著 差 异 (P<0 01), 说 明 NAC 可 以 显 著 降 低 由 H9N2 流 感 病 毒 诱 导 的 炎 症 因 子 的 升 高 ; 尽 管 如 此,NAC 小 鼠 与 对 照 组 相 比 在 2~7d 仍 然 有 显 著 差 异 ; 直 至 感 染 后 的 第 14 天, 各 组 间 的 显 著 差 异 才 基 本 消 失, 见 图 7 7 病 毒 滴 度 病 毒 滴 定 结 果 如 图 8 所 示, 感 染 H9N2 流 感 病 毒 后 第 5 天, 小 鼠 的 肺 组 织 匀 浆 中 病 毒 滴 度 可 达 到 8 15log 10 EID50,NAC 可 以 显 著 降 低 病 毒 的 滴 度 (P<0 01), 说 明 NAC 可 以 抑 制 肺 组 织 中 流 感 病 毒 的 增 殖 讨 论 流 感 病 毒 引 起 的 呼 吸 道 疾 病 在 全 球 引 发 较 高 的 发 病 率 和 死 亡 率, 目 前 对 抗 流 感 的 主 要 策 略 是 使 用 抗 病 毒 药 物 和 疫 苗 接 种, 但 由 于 流 感 病 毒 的 抗 原 变 异 和 跨 种 属 重 组, 其 预 防 作 用 并 不 确 切, 而 使 用 流 行 毒 株 生 产 疫 苗 的 空 白 期 太 长, 历 史 上 流 感 的 3 次 大 流 行 说 明 : 流 感 一 旦 爆 发, 没 有 足 够 的 时 间 使 用 流 行 毒 株 制 备 疫 苗, 因 此 在 流 感 爆 发 以 后, 首 当 其 冲 的 依 然 是 抗 流 感 病 毒 的 药 物, 因 此 抗 流 感 病 毒 药 物 的 研 究 越 来 越 受 到 普 遍 重 视

6 703 Figure6.TheMPOactivity(A),MDAcontent(B)andT SODactivity(C)inlungtisuehomogenates.Mean±SD.n=5. P< 0 05, P<0 01vscontrol; # P<0 05, ## P<0 01vsH9N2SIV. 图 6 小 鼠 肺 组 织 匀 浆 中 T SOD 活 性 MPO 活 性 及 MDA 含 量 的 变 化 Figure7.ThechangesofTNF α(a),il 6(B)andIL 1β(C)inBALF.Mean±SD.n=5. P<0 05, P<0 01vscontrol; # P<0 05, ## P<0 01vsH9N2SIV. 图 7 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 中 TNF α IL 1β 和 IL 6 含 量 的 变 化

7 704 胱 氨 酸 的 研 究 结 果 一 致 综 上 所 述,N 乙 酰 半 胱 氨 酸 作 为 一 种 有 效 的 抗 氧 化 剂 能 够 对 H9N2SIV 诱 导 的 小 鼠 急 性 肺 损 伤 产 生 保 护 作 用, 究 其 原 因 可 能 与 减 轻 氧 化 应 激 作 用 和 炎 症 作 用 相 关, 提 示 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 在 预 防 和 减 轻 H9N2SIV 诱 导 的 肺 损 伤 具 有 潜 在 的 应 用 前 景 [ 参 考 文 献 ] Figure8. ReplicationofH9N2SIV inthelungsofthemice. Mean±SD.n=5. # P<0 05, ## P<0 01vsH9N2 SIV. 图 8 小 鼠 肺 组 织 中 病 毒 滴 度 的 变 化 研 究 证 实 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 在 出 血 引 起 的 急 性 肺 损 伤 和 肾 损 伤 [13] 内 毒 素 引 起 的 肺 损 伤 [14] 高 压 所 致 的 肺 部 炎 症 [15] [16] 脂 多 糖 引 起 的 小 鼠 肺 损 伤 和 光 [17] 气 导 致 的 肺 损 伤 中 均 具 有 显 著 的 抗 炎 和 抗 氧 化 作 用 本 研 究 通 过 H9N2SIV 感 染 小 鼠 建 立 肺 损 伤 模 型, 给 予 N 乙 酰 半 胱 氨 酸, 探 讨 氧 化 应 激 和 炎 症 作 用 与 其 对 H9N2SIV 诱 导 的 小 鼠 肺 损 伤 保 护 作 用 的 相 关 性 结 果 表 明 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 可 以 有 效 抑 制 肺 组 织 中 病 毒 的 增 殖, 减 轻 肺 组 织 的 病 理 学 变 化, 同 时 可 以 显 著 降 低 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 中 白 细 胞 总 量 巨 噬 细 胞 嗜 中 性 粒 细 胞 和 淋 巴 细 胞 数 量, 另 外,N 乙 酰 半 胱 氨 酸 显 著 降 低 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 中 TNF α IL 6 和 IL 1β, 说 明 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 使 肺 组 织 对 炎 症 因 子 前 信 号 的 刺 激 反 应 减 弱, 最 终 使 TNF α 和 IL 1β 表 达 减 少, 缓 解 了 肺 组 织 的 损 伤 研 究 表 明 在 细 胞 培 养 物 中 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 可 以 减 轻 流 感 病 毒 所 致 的 炎 症 因 子 的 表 达 以 及 细 胞 的 死 亡 [18], 证 实 了 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 可 以 通 过 减 少 炎 症 细 胞 和 炎 症 因 子 来 减 轻 流 感 病 毒 所 致 的 小 鼠 肺 损 伤 但 是 有 研 究 证 实 在 流 感 病 毒 感 染 引 起 的 ALI/ARDS 过 程 中 除 了 TNF α 和 IL 6 发 挥 作 用 外, 可 能 存 在 其 它 更 重 要 的 机 制 [19], 氧 化 应 激 作 用 在 流 感 所 致 的 肺 损 伤 中 具 有 重 要 的 作 用 [20 21] 本 研 究 通 过 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 对 急 性 肺 损 伤 小 鼠 氧 化 应 激 作 用 的 影 响 来 探 讨 其 对 流 感 病 毒 所 致 小 鼠 肺 损 伤 的 保 护 作 用, 结 果 表 明 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 可 以 降 低 肺 组 织 匀 浆 中 MPO 活 性 和 MDA 含 量, 并 且 可 以 使 T SOD 活 性 回 升, 说 明 在 流 感 病 毒 诱 导 的 小 鼠 肺 损 伤 中, 除 了 炎 症 因 子 发 挥 一 定 的 作 用 之 外, 氧 化 应 激 是 又 一 个 不 可 忽 视 的 因 素, 而 且 N 乙 酰 半 胱 氨 酸 可 以 通 过 减 少 氧 化 应 激 作 用 来 减 轻 流 感 病 毒 所 致 的 小 鼠 肺 损 伤, 本 研 究 结 果 和 已 有 的 N 乙 酰 半 [1] BernartGR.Acuterespiratorydistressyndrome:ahistor icalperspective[j].am JRespirCritCareMed,2005, 172(7): [2] BernartGR,ArtigasA,Brigham KL,etal.TheAmeri can EuropeanConsensusConferenceon ARDS: defini tions,mechanisms,relevantoutcome,andclinicaltrial coordination[j].amjrespircritcaremed,1994,149 (3Pt1): [3] LondonL,MajeskiEI,PaintliaMK,etal.Respiratory reovirus1/linductionofdifusealveolardamage:amodel ofacuterespiratorydistressyndrome[j]. Exp Mol Pathol,2002,72(1): [4] HudsonLD,SteinbergKP.Epidemiologyofacutelungin juryandards[j].chest,1999,116(1suppl):74s 82S. [5] ZhangRH,CuiHY,XuMJ,etal.Molecularcharacter izationandpathogenicityofswineinfluenzah9n2subtype virusa/swine/hebei/012/2008/(h9n2)[j].actavir ol,2011,55(3): [6] AkaikeT,NoguchiY,IjiriS,etal.Pathogenesisofin fluenzavirus inducedpneumonia:involvementofbothni tricoxideandoxygenradicals[j].procnatlacadscius A,1996,93(6): [7] ImaiY,KubaK,NeelyGG,etal.Identificationofoxida tivestresandtol likereceptor4signalingasakeypath wayofacutelunginjury[j].cel,2008,133(2): [8] BeataK,EliseMM,Wiliam J,etal.Nrf2protectshuman alveolarepithelialcelsagainstinjuryinducedbyinfluenza Avirus[J].RespirRes,2012,13(1): [9] OdaT,AkaikeT,HamamotoT,etal.Oxygenradicalsin influenza inducedpathogenesisandtreatmentwithpyran polymer conjugated SOD [J]. Science, 1989, 244 (4907): [10] UngheriD,PisaniC,SansonG,etal.Protectiveefectof N acetylcysteineinamodelofinfluenzainfectioninmice [J].IntJImmunopatholPharmacol,2000,13(3): [11] MajeskiEI,PaintliaMK,LopezAD,etal.Respiratory reovirus1/linductionofintraluminalfibrosis,amodelof bronchiolitisobliteransorganizingpneumonia,isdepend

8 705 entontlymphocytes[j].amjpathol,2003,163(4): [12] XuT,QiaoJ,ZhaoL,etal.Efectofdexamethasoneon acuterespiratorydistressyndromeinducedbytheh5n1 virusinmice[j].eurrespirj,2009,33(4): [13]LeeJH,JoYH,KimK,etal.EfectofN acetylcysteine (NAC)onacutelunginjuryandacutekidneyinjuryin hemorhagicshock[j].resuscitation,2013,84(1): [14]LimaTrajanoET,SternbergC,CaetanoM,etal.Endo toxin inducedacutelunginjuryisdependentuponoxida tiveresponse[j].inhaltoxicol,2011,23(14): [15] ChavkoM,AdeebS,AhlersST,etal.Atenuationof pulmonaryinflammationafterexposuretoblastoverpres surebyn acetylcysteineamide[j].shock,2009,32 (3): [16] MitsopoulosP,OmriA,AlipourM,etal.Efectivenesof liposomaln acetylcysteineagainstlps inducedlunginju riesinrodents[j].intjpharm,2008,363(1 2): [17]JiL,LiuR,ZhangXD,etal.N acetylcysteineatenuates phosgene inducedacutelunginjuryviaup regulationof Nrf2expresion[J].InhalToxicol,2010,22(7): [18]GeilerJ,MichaelisM,NaczkP,etal.N acetyl L cyste ine(nac)inhibitsvirusreplicationandexpresionofpro inflammatorymoleculesina549celsinfectedwithhighly pathogenich5n1influenzaavirus[j].biochempharma col,2010,79(3): [19]BartramU,SpeerCP.Theroleoftransforminggrowthfac torβinlungdevelopmentanddisease[j].chest,2004, 125(2): [20]HanSN,MeydaniS.Antioxidants,cytokines,andinflu enzainfectioninagedmiceandelderlyhumans[j].jin fectdis,2000,182(suppl1):s74 S80. [21] AkaikeT.Roleoffreeradicalsinviralpathogenesisand mutation[j].revmedvirol,2001,11(2): 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 櫆 国 际 心 脏 研 究 会 (ISHR) 中 国 分 会 ( 第 十 二 届 ) 暨 中 国 病 理 生 理 学 会 心 血 管 专 业 委 员 会 ( 第 十 五 届 ) 学 术 大 会 第 一 轮 通 知 国 际 心 脏 研 究 会 (InternationalSocietyforHeartResearch,ISHR) 中 国 分 会 ( 第 十 二 届 ) 暨 中 国 病 理 生 理 学 会 心 血 管 专 业 委 员 会 ( 第 十 五 届 ) 学 术 大 会 拟 于 2014 年 8 月 14~18 日 在 哈 尔 滨 召 开 大 会 主 题 是 学 科 交 叉, 促 进 转 化 (BlendofDisci plines,boostoftranslation) 大 会 将 充 分 展 示 国 内 外 心 血 管 领 域 在 基 础 和 转 化 方 面 的 最 新 研 究 成 果, 并 邀 请 国 内 临 床 专 家 及 海 外 心 血 管 领 域 的 知 名 学 者 参 加 此 次 大 会 期 间 拟 召 开 中 国 病 理 生 理 学 会 心 血 管 专 业 委 员 会 全 体 委 员 会 议, 并 成 立 转 化 医 学 工 作 委 员 会 会 议 采 用 大 会 特 邀 报 告 专 题 报 告 分 组 报 告 等 形 式 进 行 交 流 会 议 还 将 进 行 青 年 优 秀 论 文 和 优 秀 壁 报 评 选 论 文 摘 要 请 直 接 在 中 国 病 理 生 理 学 会 网 站 (htp:// 投 稿, 截 止 时 间 :2014 年 4 月 30 日 24:00 地 址 : 哈 尔 滨 市 南 岗 区 学 府 路 194 号 哈 尔 滨 医 科 大 学 生 理 学 馆 二 楼 病 生 教 研 室 ( 邮 编 :150081) 联 系 人 : 杨 力 明 ( ); 田 振 ( ) 传 真 : 大 会 专 用 电 子 邮 箱 :ishrchina2014@126.com 会 议 官 方 网 址 :htp://

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