482 马 刚, 等 程 序 性 细 胞 死 亡 因 子 4 在 胃 癌 组 织 中 的 表 达 及 临 床 病 理 学 意 义 中 图 分 类 号 R735.2 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2006) 胃 癌 的 发 生 是 一 个 复 杂 的

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1 中华肿瘤防治杂志 ２００６ 年 ４ 月第 １３ 卷第 ７ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ａｐ ２００６ Ｖ １３ Ｎ ７ ４８１ 前沿报道 程序性细胞死亡因子 ４ 在胃癌组织中的 表达及临床病理学意义 马刚１ 刘江１ 张浩１ 董明１ 郑新宇１ 尾崎岩太２ 松桥幸子２ 郭克建１ １ 中国医科大学附属第一医院普外二科 辽宁 沈阳 １１０００１ ２ 日本佐贺大学医学部 代谢内分泌研究室 尾崎岩太 保健管理中心 松桥幸子 日本 ８４９ ８５０１ Ｅｘｐ ｐ ｇ ｍｍｄ ｄ ｈ ４ｄ ｐ ｈ ｇ ｇ ｇ 犕犃犌犪狀犵１ 犔犐犝犑 犻 犪狀犵１ 犣犎犃犖犌犎犪 狅１ 犇犗犖犌犕犻 狀犵１ 犣犎犈犖犌犡犻 狀 狔狌１ 犗狕犪犽 犻犐狑犪 狋 犪２ 犕犪 狋 狊 狌犺犪 狊 犺 犻犛犪 犮 犺 犻 犽 狅２ 犌犝犗犓犲 犻 犪狀１ 犼 １ 犇犲狆犪 狉 狋犿犲 狀 狋狅犳犌犲 狀 犲 狉 犪 犾犛狌 狉犵 犲 狉 狉 狊 狋犃犳犳 犻 犾 犻 犪 狋 犲犱 犎狅 狊狆 犻 狋 犪 犾狅犳犆犺 犻 狀犪犕犲犱 犻 犮 犪 犾犝狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 犲 狀狔犪狀犵１ １ ０ ０ ０ １ 犘 犚 犆犺 犻 狀犪 狔 犉犻 狔 犛犺 ２ 犇犲狆犪狉 狋犿犲狀 狋狅犳犐狀 狋 犲 狉狀犪 犾犕犲犱犻 犮 犻 狀犲 犛犪犵犪犕犲犱犻 犮犪 犾犛犮犺狅 狅 犾 犛犪犵犪８４９ ８５０１ 犑犪狆犪狀 摘要 目 的 探 讨 胃 癌 组 织 中 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔ ｖ ｈｘｐ ｐ ｇ ｍｍｄ ｇ 程 序 性 细 胞 死 亡 因 子 ４ ｐ ｄ ｈ ４ ｄ ｐ ｈ ｇ ＰＤＣＤ４ ｐ ｇ ＰＤＣＤ４ 的 ｍｍｄ ｄ ｈ４ ｇ ＰＤＣＤ４ｘｐ ５ ｈｐ ｍ ｇ 犕犈犜犎犗犇犛 ｇ 表达 及 其 临 床 病 理 学 意 义 方 ｄ ｖ ｄ ｕｖ ｕ ｕｗ ｄ ｄｂｙ Ｗ ｊ 法 应用免疫组织化 学 和 Ｗ ｂ ｗ ｈｐｄｃｄ４ｐ ｂｄｙ ｍｍｕｈ ｈｍ ｕ ｄ ｘｍ ｙｗ 印 迹 杂 交 研 究 方 法 检 测 ６１ 例 胃 ｈｘｐ ＰＤＣＤ４ ６１ｐ ｍｂｄｄｄｐ ｍ ｇ 癌组织中 ＰＤＣＤ４ 的 表 达 观 察 其 ｍｇｗｈ ｈ２６ｐ ｍｈｄｄ ｍ ｇ ｕ Ｃ ｊ 与胃癌临床 病 理 学 参 数 之 间 的 关 犚犈 ＰＤＣＤ４ｘｐ ｗ ｈ ｐ ｈ ｇ ｄ ｗ ｚ ｄ ｙ 系 结果 免 疫 组 化 染 色 显 示 在 犛犝犔犜犛 Ｔｈ ｘｐ ＰＤＣＤ４ ｗ ｗ ５ ｈｇ ｇ ｙ 正 常 胃 组 织 中 阳 性 细 胞 比 例 均 ｕ ｈ ｕ ｕ ｄ ｄｂｙ Ｗ ｂ Ｃｍｐ ｄ 在 ８０ 以 上 ６１ 例 胃 癌 中 ＰＤ ｗ ｈ ｄ ｕｖ ｍ ｇ ｕ ８０ ｐ ｖ ｗ ＰＤＣＤ４ ｘ ｊ ＣＤ４ 低表 达 者 阳 性 细 胞 比 例 ｗ ｈｗ ６１ｇ ｕ ３０ ｐ ｖ ４０ ｐ ３０ 占 ６５ ６ ４０ ６１ 高 表 达 ｈ ２１ ｈ ｐ ｖ ｄ３０ ８０ ｐ ｖ ２１ Ｉ 阳性细胞比例介于 ３０ ８０ ｗ ｂ ｗ ３０ ｄ８０ ｈ ｗ ｍｄ ｄｐ ｙ ｙｄ 者 占 ３４ ４ ２１ ６１ Ｗ ｄｐ ｗ ５７ １ ３３ ３ ｄ９ ６ ｖ ｖ ｐ ｙ Ｈｗ 印 迹 分 析 结 果 显 示 同 癌 旁 正 常 ｈ ｗ ｍｄ ｈ ４０ ｈ ｐ ｖ ｗ ｈ ３０ ｙ 组 织 相 比 所 有 胃 癌 组 织 ＰＤＣＤ４ ｄｐ ｄｐ ｗ ２ ５ ３７ ５ ｄ６０ ｖ ｙｄ ｐ ｙ Ｉ 蛋白表达 均 明 显 下 调 相 关 分 析 ２ ｄ９２ ３ ｈｗ ｄｐ ｖ ｍｄ ｄｐ ｄｐ ６８ ｙ ｙｄ 表 明 ＰＤＣＤ４ 表 达 下 调 或 缺 失 与 ｈ ３０ ｈｗ ｖ ７ ｗ ｄ ｄｐ ｈｗ ｄｐ ｙ７ 肿 瘤 的 不 良 分 化 相 关 犘 ０ ０１ ｖ ｈ ３０ ｄ ｇ ｗｐｄｃｄ４ ｖ ｗ ｄｗ ｈｈ 而与 性 别 年 龄 及 肿 瘤 的 ＴＮＭ ｇ ｇ ｄ 犘 ０ ０１ Ｔｈ ｈ ｗ ＰＤＣＤ４ ｘｐ ｄ ｐｂ 分期 无 关 结 论 ＰＤＣＤ４ 蛋 白 在 ｄ ＴＮＭ ｕ 犆犗犖 ｈ ｐ ｈ ｇ ｐ ｍ ｕｄ ｇ ｘ ｇ 胃 癌 中 多 呈 低 表 达 并 与 胃 癌 的 犆犔犝犛 犐犗犖 Ｐ ｇ ｖ ｄｗ ＰＤＣＤ４ ｇ ｄ ｇｕ 分化程度有 关 在 胃 癌 的 发 生 发 ｗ ｈｈ ｇ ｇ ｄ ＰＤＣＤ４ｍ ｍｐ ｕ ｄｄ ｙｐ ｙ 展过程中起重要作用 ｖ ｐｍ ｇ 中华肿瘤防治杂志 ２ ０ ０ ６ １ ３ ７ ４ ８ １ ４ ８ ４ 犆犺 犻 狀犑犆犪狀犮 犲 狉犘狉 犲狏犜狉 犲犪 狋 ２００６ １３ ７ ４８１ ４８４ 关键词 胃肿瘤 病理学 免疫组织化学 肿瘤蛋白质类 分析 ｐ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｍ ｈ ｐ ｍ ｈ ｇｙ ｍｍｕｈ ｈｍ ｐ ｍｐ ｙ ｙ 基金项目 国家自然科学基金资助 ３０３７１６２５ 通讯作者简介 马刚 男 辽宁沈阳人 博士 主治医师 主要从事消化道肿瘤的临床与基础研究工作 Ｔ ８６ ２４ ２３２５６６６６ ６２３７ Ｅ ｍ ｍｇｇ ｚ ｍ ｍ ｙ ｈ

2 482 马 刚, 等 程 序 性 细 胞 死 亡 因 子 4 在 胃 癌 组 织 中 的 表 达 及 临 床 病 理 学 意 义 中 图 分 类 号 R735.2 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2006) 胃 癌 的 发 生 是 一 个 复 杂 的 多 阶 段 生 物 学 过 程, 受 细 胞 内 多 个 肿 瘤 相 关 基 因 的 调 控, 其 发 生 和 发 展 机 制 尚 未 阐 明 细 胞 的 增 殖 和 凋 亡 与 肿 瘤 的 关 系 一 直 是 肿 瘤 研 究 中 的 热 点 研 究 发 现, 细 胞 凋 亡 抑 制 在 肿 瘤 发 生 和 发 展 中 占 有 重 要 地 位 最 近 有 研 究 表 明, 程 序 性 细 胞 死 亡 因 子 4(programmedceldeath4,PDCD4) 是 一 个 新 发 现 的 与 细 胞 周 期 及 凋 亡 相 关 的 抑 癌 基 因, 肺 癌 组 织 中 PDCD4 的 表 达 明 显 下 降 或 缺 失, 并 与 肺 癌 [1] 的 恶 性 程 度 及 不 良 预 后 有 关 我 们 应 用 免 疫 组 化 和 Western 印 迹 杂 交 检 测 PDCD4 蛋 白 在 胃 癌 组 织 中 的 表 达 情 况, 探 讨 其 与 肿 瘤 的 分 化 程 度 病 理 分 期 等 临 床 病 理 学 参 数 之 间 的 关 系 1 材 料 与 方 法 1.1 标 本 来 源 收 集 中 国 医 科 大 学 附 属 第 一 医 院 2000 年 1 月 ~ 2000 年 12 月 手 术 切 除 的 胃 癌 标 本 61 例, 其 中 26 例 同 时 保 存 癌 旁 正 常 组 织 作 为 对 照 研 究 每 例 标 本 经 4% 甲 醛 固 定, 石 蜡 包 埋, 切 成 4μm 厚 连 续 切 片 备 免 疫 组 化 和 病 理 分 析 用 其 中 有 5 例 胃 癌 及 癌 旁 正 常 组 织 标 本 在 手 术 切 除 后 立 即 取 样, 置 液 氮 中 冷 冻 保 存 61 例 患 者 中, 男 29 例, 女 32 例 年 龄 36~78 岁, 平 均 年 龄 (60.0±11.1) 岁, 中 位 年 龄 61 岁 分 化 程 度 : 高 分 化 腺 癌 13 例, 中 分 化 腺 癌 22 例, 低 分 化 腺 癌 26 例 根 据 1997 年 国 际 抗 癌 协 会 (UICC) 的 TNM 分 期 标 准,Ⅰ 期 15 例,Ⅱ 期 17 例,Ⅲ 期 20 例,Ⅳ 期 9 例 所 有 患 者 术 前 均 未 接 受 放 疗 和 化 疗 1.2 主 要 试 剂 兔 抗 人 PDCD4 多 克 隆 抗 体 由 日 本 佐 贺 大 学 医 学 [2] 部 代 谢 内 分 泌 研 究 室 松 桥 幸 子 教 授 惠 赠 即 用 型 S P 试 剂 盒 3,3 - 二 氨 基 联 苯 胺 (DAB) 试 剂 盒 均 购 自 福 州 迈 新 公 司 1.3 免 疫 组 化 染 色 采 用 SP 免 疫 组 化 方 法, 按 试 剂 盒 说 明 书 进 行 操 作 步 骤 为 石 蜡 切 片 常 规 二 甲 苯 脱 蜡, 梯 度 乙 醇 水 化, PBS 漂 洗 3 次 ; 浸 入 0.3% 过 氧 乙 酸 阻 断 内 源 性 过 氧 化 酶 15 min,pbs 漂 洗 3 次 ; 滴 加 10% 血 清 封 闭 液, 37 孵 育 30 min; 弃 血 清, 滴 加 的 兔 抗 人 PDCD4 多 克 隆 抗 体,4 冰 箱 孵 育 过 夜 ;PBS 漂 洗 3 次, 滴 加 即 用 型 生 物 素 标 记 的 二 抗,37 孵 育 30 min, PBS 漂 洗 3 次 ; 滴 加 即 用 型 SP 溶 液,37 孵 育 30 min,pbs 漂 洗 3 次 后,DAB 显 色 5min, 苏 木 精 复 染 1 min; 常 规 乙 醇 脱 水, 二 甲 苯 透 明, 封 片 每 例 标 本 均 用 PBS 代 替 一 抗 作 阴 性 对 照 1.4 结 果 判 定 标 准 细 胞 质 的 棕 黄 色 颗 粒 着 色 为 阳 性 结 果 每 张 切 片 由 2 名 病 理 科 医 生 双 盲 计 数 至 少 5 个 高 倍 视 野, 阳 性 细 胞 数 30% 视 为 PDCD4 高 表 达 ; 阳 性 细 胞 数 < 30% 为 PDCD4 低 表 达 1.5 Western 印 迹 杂 交 按 下 述 方 法 提 取 冷 冻 保 存 的 5 例 胃 癌 及 癌 旁 正 常 组 织 的 蛋 白 质 适 当 体 积 裂 解 缓 冲 液 [50 mmol/l Tris HCl(pH7.5),150 mmol/l NaCl,5 mmol/l 乙 二 胺 四 乙 酸 (EDTA,pH8.0),1 mmol/l 苯 甲 基 磺 酰 氟 (PMSF),0.1% SDS,1 mg/l 抑 肽 酶,10 μg/ml 抑 胃 酶 肽,10μg/mL 亮 抑 蛋 白 酶 肽,10μg/mL 抑 蛋 白 酶 肽,10μg/mL 大 豆 胰 蛋 白 酶 抑 制 剂 ] 超 声 裂 解 组 织 45s, r/min 离 心 20min, 收 集 上 清 -70 保 存 BCA 定 量 试 剂 盒 测 定 蛋 白 浓 度, 每 泳 道 上 样 40μg 蛋 白, 经 10% 十 二 烷 基 磺 酸 钠 - 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 (SDS PAGE) 电 泳, 电 转 移 至 聚 偏 二 氟 乙 烯 (PVDF) 膜 封 闭 缓 冲 液 [0.1 mmol/l 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 缓 冲 液 盐 水 (TBS),5% 脱 脂 奶 粉,0.1% 吐 温 20] 封 闭, 加 入 稀 释 的 兔 抗 人 PDCD4 抗 体 或 的 β actin 抗 体 4 孵 育 过 夜 稀 释 的 酶 标 二 抗 室 温 孵 育 1h,TBS 洗 净 后, 增 强 化 学 发 光 剂 (ECL) 显 色, 暗 房 中 压 片, 观 察 结 果 1.6 统 计 学 分 析 采 用 SPSS12.0 统 计 软 件 包 进 行 统 计 学 处 理 计 数 资 料 分 析 应 用 配 对 狋 检 验 ;PDCD4 表 达 与 胃 癌 临 床 病 理 学 指 标 间 的 相 关 性 应 用 χ 2 检 验 检 验 水 准 α= 结 果 2.1 PDCD4 蛋 白 在 正 常 组 织 和 胃 癌 中 的 表 达 Western 印 迹 分 析 结 果 通 过 Western 印 迹 法 检 测 了 5 例 配 对 的 胃 癌 及 癌 旁 正 常 组 织 的 PDCD4 蛋 白 表 达 情 况 同 癌 旁 正 常 组 织 相 比, 所 有 胃 癌 组 织 PDCD4 蛋 白 表 达 均 明 显 下 调 ( 图 1,Fig.1) 与 β ac tin 相 对 光 密 度 值 扫 描 分 析 比 较, 癌 组 织 中 PDCD4 蛋 白 条 带 的 吸 光 度 值 明 显 低 于 癌 旁 正 常 组 织, 说 明 胃 癌 组 织 中 PDCD4 表 达 明 显 下 降, 低 于 正 常 组 织 免 疫 组 化 染 色 结 果 免 疫 组 化 染 色 显 示 ( 图 2, Fig.2), 在 正 常 胃 组 织 中, 阳 性 细 胞 比 例 均 80% 在 61 例 胃 癌 组 织 中,PDCD4 表 达 明 显 下 降, 且 表 达 水 平 差 异 有 统 计 学 意 义 :(65.6%)40 例 阳 性 细 胞 数 <30%, 呈 低 表 达 ;(34.4%)21 例 阳 性 细 胞 比 例 介 于 30%~80% (30%~50%,13 例 ;50%~80%,8 例 ) 呈 高 表 达

3 中华肿瘤防治杂志 ２００６ 年 ４ 月第 １３ 卷第 ７ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ａｐ ２００６ Ｖ １３ Ｎ ７ ４８３ ２ ２ ＰＤＣＤ４蛋白表达与胃癌临床病理学指标间的关系 ＰＤＣＤ４ 表达水平在不同年 龄 性 别 及 ＴＮＭ 分 期 的各组间差异无统计 学 意 义 而 在 不 同 分 化 程 度 癌 组 Ｎ 癌旁正常组织 Ｔ 癌组织 织之间差异有 统 计 学 意 义 表 １ Ｔｂ １ ＰＤＣＤ４ 高 图 １ 胃癌及癌旁正常组织中 ＰＤＣＤ４ 蛋白的表达 表达主要见于高分化腺癌 占 胃 癌 高 表 达 者 的 ５７ １ Ｎ ｕ ｕ Ｔ ｕｍ １２ ２１ 而 中 低 分 化 腺 癌 分 别 占 ３３ ３ ７ ２１ 和 Ｆ １ Ｅｘｐ ＰＤＣＤ４ ｇ ｄ ｇ ９ ６ ２ ２１ ＰＤＣＤ４ 低 表 达 患 者 中 高 中 低 分 化 ｕ ｕｂｙ Ｗ ｂ 腺癌分 别 占 ２ ５ １ ４０ ３７ ５ １５ ４０ 和 ６０ ０ ２４ ４０ 在中 低分化腺癌中 ＰＤＣＤ４ 低 表达 者分 别 为 ６８ ２ １５ ２２ 和 ９２ ３ ２４ ２６ 而高分化腺癌仅 有７ ７ １ １３ 为 低 表 达 明 显 低 于 中 低 分 化 腺 癌 ２ 具有统计学意义 ０４８ 和 ２６ ９６６ 犘 ０ ０１ χ １２ 表 １ ＰＤＣＤ４ 蛋白表达与胃癌临床病理学参数的关系 项目 狀 ＰＤＣＤ４ 表达 ２ 值 ３０ ３０ χ 犘值 年龄 岁 ６５ ６５ 性别 男 女 ＴＮＭ 分期 ３６ ３６ １ １３ ３６ ６３ ９ ２３ ３６ ０ １１０ ０ ７４０ ２５ ３２ ０ ８ ２５ ６８ ０ １７ ２５ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 分化程度 １５ １７ ２０ ９ １ 高 ２ 中 １３ ９２ ３ １２ １３ ７ ７ １ １３ ２２ ３１ ８ ７ ２２ ６８ ２ １５ ２２ ２７ ５９１ ０ ０ ０ ０ ２６ ７ ７ ２ ２６ ９２ ３ ２４ ２６ ２９ ３７ ９ １１ ２９ ６２ １ １８ ２９ ０ ３０１ ０ ５８３ ３２ ３１ ２ １０ ３２ ６８ ８ ２２ ３２ ３ 低 总计 ４６ ７ ７ １５ ２９ ４ ５ １７ ３０ ０ ６ ２０ ３３ ３ ３ ９ ５３ ３ ８ １５ ７０ ６ １２ １７ １ ３６３ ０ ７１４ ７０ ０ １４ ２０ ６６ ７ ６ ９ ６１ ３４ ４ ２１ ６１ ６５ ６ ４０ ６１ ２ ｄ２ χ １ ２ ０ ４ ８ 犘 ０ ０ ０ １ 犘 ０ ０ １ ７ １ ｄ３ ６ ９ ６ ６ 犘 １ χ ２ ２ ２ ０ ０ ０ ０ 犘 ０ ０ １ ７ ２ ｄ３ ５ ３ ３ 犘 ０ ０ ３ ３ 犘 ０ ０ １ ７ χ ４ Ｔ ｂ １ ＰＤＣＤ４ ｘｐ ｄ ｐ ｈ ｇ ｈ Ｐ ｍ 狀 ＰＤＣＤ４ｘｐ ２ ｕ ｕ 犘 ｖ χ ｖ ３０ ３０ Ａｇ ｙ ６５ ６５ ３６ ３６ １ １３ ３６ ６３ ９ ２３ ３６ ０ １１０ ０ ７４０ ２５ ３２ ０ ８ ２５ ６８ ０ １７ ２５ Ｓｘ Ｍ ２９ ３７ ９ １１ ２９ ６２ １ １８ ２９ Ｆｍ ３２ ３１ ２ １０ ３２ ６８ ８ ２２ ３２ ０ ３０１ ０ ５８３ ＴＮＭ ｇ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ａ ＰＤＣＤ４ 癌 旁 正 常 胃 组 织 Ｂ ＰＤＣＤ４ 高 分 化 腺 癌 Ｃ ＰＤ Ｄ ＰＤＣＤ４ 低分化腺癌 ＣＤ４ 中分化腺癌 图 ２ 胃癌及癌旁正常组织中 ＰＤＣＤ４ 蛋白的表达 ＳＰ ２００ Ａ ＰＤＣＤ４ ｍｍｕ ｇ ｕ ｕ Ｂ ＰＤＣＤ４ ｍｍｕ ｇ ｗ ｄ ｄ ｕ Ｃ ＰＤＣＤ４ ｍｍｕ ｇ ｍｄ ｄ ｕ Ｄ ＰＤＣＤ４ ｍｍｕ ｙｄ ｇ ｐ ｄ ｕ ｙｄ Ｆ ２ Ｉｍｍｕ ｇ ＰＤＣＤ４ ｇ ｇ ｄ ｕ ｕ ＳＰ ２００ １５ ４６ ７ ７ １５ ５３ ３ ８ １５ １７ ２９ ４ ５ １７ ７０ ６ １２ １７ １ ３６３ ０ ７１４ ２０ ３０ ０ ６ ２０ ７０ ０ １４ ２０ ９ ３３ ３ ３ ９ ７ ６ ９ ６６ Ｇ ｄ Ｗ １３ ９２ ３ １２ １３ ７ ７ １ １３ ｄ１ ｄ ｄ Ｍ ｙ ２２ ３１ ８ ７ ２２ ６８ ２ １５ ２２ ２７ ５９１ ０ ０ ０ ０ ｄ２ ｄ Ｐ ｙ ２６ ７ ７ ２ ２６ ９２ ３ ２４ ２６ ｄ３ ｄ Ｔ ６１ ３４ ４ ２１ ６１ ６５ ６ ４０ ６１ ２ ２ ｄ２ ２ ０ ４ ８ 犘 ０ ０ ０ １ 犘 ０ ０ １ ７ １ ｄ３ ６ ９ ６ ６ 犘 １ χ １ χ ２ ２ ０ ０ ０ ０ 犘 ０ ０ １ ７ ２ ｄ３ ５ ３ ３ 犘 ０ ０ ３ ３ 犘 ０ ０ １ ７ χ ４

4 484 马 刚, 等 程 序 性 细 胞 死 亡 因 子 4 在 胃 癌 组 织 中 的 表 达 及 临 床 病 理 学 意 义 3 讨 论 胃 癌 是 我 国 发 病 率 和 死 亡 率 最 高 的 恶 性 肿 瘤 之 [3] 一 胃 癌 的 发 生 和 发 展 是 一 个 多 因 素 多 阶 段 及 多 基 因 变 异 的 综 合 病 变 过 程, 各 种 基 因 在 肿 瘤 发 生 进 展 的 各 条 生 化 通 路 上 互 相 协 同, 相 互 作 用, 构 成 基 因 的 网 [4] 络 调 控, 共 同 参 与 肿 瘤 的 发 生 PDCD4 基 因 于 1995 年 被 克 隆 成 功, 定 位 于 染 色 体 10q24, 编 码 185 个 氨 基 酸 PDCD4 蛋 白 具 有 多 个 磷 酸 化 位 点, 可 与 蛋 白 激 酶 C 脯 氨 酸 激 酶 酪 氨 酸 激 酶 相 结 合 在 细 胞 发 生 凋 亡 时, 可 见 PDCD4 表 达 上 [5-7] 调 Northern 印 迹 研 究 发 现, 增 殖 前 的 鼠 角 化 上 [8] 皮 细 胞 中 PDCD4 mrna 表 达 高 于 增 殖 后 的 细 胞, 表 明 PDCD4 能 够 抑 制 细 胞 的 增 殖 和 转 化 在 恶 性 转 化 的 鼠 上 皮 细 胞 系 JB6RT101 中,PDCD4 表 达 下 调 ; [9] 而 在 PDCD4 过 度 表 达 者 中 形 成 的 细 胞 克 隆 减 少 上 述 研 究 结 果 说 明,PDCD4 表 达 升 高 能 够 抑 制 肿 瘤 生 长, 故 PDCD4 被 认 为 是 一 种 新 的 肿 瘤 抑 制 基 因 关 于 PDCD4 在 肿 瘤 发 生 过 程 中 的 具 体 环 节 和 作 用 机 制 [10] 尚 不 清 楚 Goke 等 研 究 发 现 PDCD4 可 能 作 用 于 翻 译 启 动 因 子 eif4a 和 eif4g, 抑 制 蛋 白 翻 译, 从 而 在 蛋 白 翻 译 水 平 抑 制 细 胞 生 长 [1] Chen 等 应 用 免 疫 组 化 方 法 研 究 了 124 例 肺 癌 组 织 中 PDCD4 表 达,83% 表 达 下 降 或 缺 失, 这 种 异 常 表 达 与 肿 瘤 的 恶 性 生 物 学 行 为 及 不 良 预 后 密 切 相 关 这 表 明 PDCD4 表 达 下 降 或 缺 失 在 恶 性 肿 瘤 的 发 生 发 展 过 程 中 可 能 起 重 要 作 用 PDCD4 与 胃 癌 生 物 学 特 性 的 关 系 未 见 报 道, 我 们 应 用 免 疫 组 化 方 法 检 测 了 61 例 胃 癌 石 蜡 标 本 中 PDCD4 的 表 达, 同 时 应 用 Western 印 迹 杂 交 方 法 检 测 了 其 中 5 例 冷 冻 保 存 的 新 鲜 胃 癌 及 癌 旁 正 常 组 织 中 PDCD4 蛋 白 的 表 达 情 况 我 们 研 究 显 示 胃 癌 中 PDCD4 表 达 明 显 低 于 癌 旁 正 常 组 织, 表 明 PDCD4 在 胃 癌 的 发 生 发 展 中 起 着 一 定 的 作 用 我 们 在 研 究 中 发 现,PDCD4 表 达 缺 失 与 胃 癌 病 理 分 级 显 著 相 关, 犘 <0.01, 呈 逐 级 递 减 趋 势, 随 着 恶 性 度 增 高, CD4 表 达 程 度 与 胃 癌 临 床 分 期 无 关, 这 可 能 说 明 胃 癌 TNM 分 期 与 PDCD4 无 关, 也 不 排 除 本 组 样 本 量 有 限, 未 能 得 出 阳 性 结 果 我 们 的 研 究 结 果 表 明,PDCD4 在 胃 癌 组 织 中 呈 低 表 达, 特 别 是 与 组 织 学 低 分 化 程 度 有 关 PDCD4 作 为 一 种 抑 癌 基 因, 可 能 在 胃 癌 的 发 病 过 程 中 起 重 要 作 用 参 考 文 献 [1] Chen Y,KnoselT,Kristiansen G,etal.LossofPDCD4ex pressioninhumanlungcancercorrelateswithtumorprogression andprognosis[j].jpathol,2003,200(5): [2] YoshinagaH,MatsuhashiS,FujiyamaC,etal.Novelhuman PDCD4 (H731)geneexpressedinproliferativecelsisexpressed inthesmalductepithelialcelsofthebreastasrevealedbyan anti H731antibody[J].PatholInt,1999,49(12): [3] 李 连 弟, 鲁 凤 珠, 张 思 维, 等. 中 国 恶 性 肿 瘤 死 亡 率 20 年 变 化 趋 势 和 近 期 预 测 分 析 [J]. 中 华 肿 瘤 杂 志,1997,19(1):3-9. [4] 吕 有 勇. 多 基 因 变 异 的 累 积 与 肿 瘤 发 生 发 展 的 关 系 [J]. 中 华 医 学 杂 志,1997,77(11): [5] SoejimaH,MiyoshiO,YoshinagaH,etal.Assignmentofthe programmedceldeath4gene (PDCD4)tohumanchromosome band10q24byinsituhybridization[j].cytogenetcelgenet, 1999,87(1-2): [6] MatsuhashiS,Yoshinaga H,YatsukiH,etal.Isolationofa novelgenefromahumancellinewithpr 28mAbwhichrecog nizesanuclearantigeninvolvedinthecelcycle[j].rescomm Biochem CelMolBiol,1997,1(1): [7] YoshinagaH,MatsuhashiS,AhanekJ,etal.Expressionandi dentificationofh731geneproductin HeLacels[J].ResCom munbiochem CelMolBiol,1997,1(1): [8] Lankat ButgereitB,GokeR.Programmedceldeathprotein4 (pdcd4):anoveltargetforantineoplastictherapy? [J].Biol Cel,2003,95(8): [9] YangHS,KniesJL,StarkC,etal.Pdcd4suppressestumor phenotypeinjb6celsbyinhibiting Ap-1transactivation[J]. Oncogene,2003,22(24): [10] GokeA,GokeR,KnoleA,etal.DUGisanovelhomologueof translationinitiationfactor4gthatbindseif4a[j].biochem BiophysResCommun,2002,297(1): PDCD4 表 达 明 显 下 调, 尤 其 是 中 低 分 化 的 胃 癌,PD CD4 表 达 下 降 更 加 明 显, 提 示 PDCD4 的 表 达 下 降 与 胃 癌 的 发 生 发 展 有 关,PDCD4 可 能 参 与 了 肿 瘤 的 分 化, 从 而 影 响 肿 瘤 的 发 展 过 程 我 们 的 研 究 提 示,PD 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 宋 希 林 )

5 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2006 年 4 月 第 13 卷 第 7 期 CHINJCANCERPREV TREAT,April2006,Vol.13 No 上 海 市 真 如 镇 居 民 肿 瘤 KAP 调 查 分 析 流 行 病 学 史 玲 1, 方 黎 1, 周 宪 珍 1, 李 晨 曦 1, 张 薇 2, 欧 周 罗 3 1. 上 海 市 普 陀 区 长 征 地 段 医 院 (WHO 癌 症 研 究 合 作 中 心 社 区 肿 瘤 防 治 基 地 ), 上 海 上 海 市 肿 瘤 研 究 所, 上 海 复 旦 大 学 附 属 肿 瘤 医 院, 上 海 InvestigationandanalysisofcancerKAPamongresidentsinZhenruTown,Shanghai 犛 犎 犐 犔 犻 狀 1 犵, 犉 犃 犖 犌 犔 犻 1, 犣 犎 犗 犝 犡 犻 犪 狀 狕 犺 犲 狀 1, 犔 犐 犆 犺 犲 狀 狓 犻 1, 犣 犎 犃 犖 犌 犠 犲 犻 2 3, 犗 犝 犣 犺 狅 狌 犾 狌 狅 1. 犆 犺 犪 狀 犵 狕 犺 犲 狀 犵 犖 犲 犻 犵 犺 犫 狅 狉 犺 狅 狅 犱 犎 狅 狊 狆 犻 狋 犪 犾, 犘 狌 狋 狌 狅 犇 犻 狊 狋 狉 犻 犮 狋, 犛 犺 犪 狀 犵 犺 犪 犻, 犛 犺 犪 狀 犵 犺 犪 犻 , 犘. 犚. 犆 犺 犻 狀 犪 2. 犛 犺 犪 狀 犵 犺 犪 犻 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犐 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲, 犛 犺 犪 狀 犵 犺 犪 犻,200032, 犘. 犚 犆 犺 犻 狀 犪 3. 犜 狌 犿 狅 狉 犎 狅 狊 狆 犻 狋 犪 犾 狅 犳 犉 狌 犱 犪 狀 犝 狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 狔, 犛 犺 犪 狀 犵 犺 犪 犻 , 犘. 犚. 犆 犺 犻 狀 犪 摘 要 目 的 : 了 解 上 海 市 真 如 镇 居 民 关 于 肿 瘤 的 知 识 态 度 和 行 为 (knowledge,atitudes andpractices,kap), 为 进 一 步 开 展 社 区 肿 瘤 防 治 工 作 提 供 参 考 方 法 : 采 用 整 群 抽 样 方 法, 以 真 如 镇 2 个 居 委 30~70 岁 的 常 住 居 民 为 对 象, 由 经 过 专 业 培 训 的 医 生, 使 用 统 一 调 查 问 卷 进 行 入 户 调 查 组 间 率 的 比 较 采 用 χ 2 检 验 结 果 : 本 次 研 究 共 调 查 2695 人, 有 效 问 卷 2610 份 男 女 比 例 为 , 平 均 年 龄 (53.04±8.70) 岁 恶 性 肿 瘤 家 族 史 阳 性 率 为 22.18%; 吸 烟 率 为 26.62%; 饮 酒 率 为 10.34% 居 民 的 KAP 水 平 与 年 龄 学 历 肿 瘤 家 族 史 和 性 别 相 关, 差 异 具 有 统 计 学 意 义, χ 2 =24.91, 犘 结 论 : 在 社 区 肿 瘤 防 治 过 程 中, 针 对 不 同 KAP 水 平 的 人 群 有 必 要 采 用 不 同 的 方 法, 从 而 有 效 地 普 及 防 癌 抗 癌 知 识, 降 低 癌 症 的 发 病 率 与 死 亡 率, 提 高 居 民 的 生 命 质 量 充 分 利 用 社 区 大 众 传 媒, 并 争 取 各 部 门 的 协 作 也 是 非 常 重 要 的 此 外, 本 调 查 结 果 显 示 恶 性 肿 瘤 家 族 史 阳 性 率 高 达 22.18%, 可 见 恶 性 肿 瘤 已 经 和 正 在 对 社 区 居 民 健 康 与 生 命 构 成 重 大 威 胁, 必 须 引 起 各 级 医 务 人 员 和 全 社 会 的 高 度 关 注 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2006,13(7): [ 犃 犅 犛 犜 犚 犃 犆 犜 ] 犗 犅 犑 犈 犆 犜 犐 犞 犈 :Across sectionalinvestigationfor cancerknowledge,atitudesandpractices(kap)wasconducted amongresidentsinzhenrutownofshanghaiinordertoprovide basicinformationforfuturecancerprevention and controlin community. 犕 犈 犜 犎 犗 犇 犛 :Residentsaged30to70yearsintwo communities were randomly selected from Zhenru Town of Shanghaibyusingclustersampling.Information wascolected bytrainedinterviewers.χ 2 test wasappliedindataanalysis. 犚 犈 犛 犝 犔 犜 犛 :Atotalof2695peoplewereinvestigated,and2610 questionnaires were valid.theratio of maletofemale was ,andtheaverageagewas53.04±8.70.Thepercenta gesofpositivefamilyhistories,smokingcigareteanddrinking alcoholwere22.18%,26.62% and10.34%respectively.canc erkapswerestatisticalysignificantdiferentinvariousgroups classifiedbyage,education,sexorfamilyhistoryofcancer. 犆 犗 犖 犆 犔 犝 犛 犐 犗 犖 犛 :Weshoulddrawupdiferentstrategiesfordiferent objectivesduringcancerpreventionandcontrolinthefuturesoasto improveperceptionrateofcancerknowledge,decreasecancerinci denceandmortalityandtoenhancethelifequality.itisalsoimpor tanttomakefuluseofcommunitymassmediaandseekcooperation withdiferentdepartments.cancerbeingthreateningthepeople's healthandlife,notonlymedicalpersonnelbutalsothewholesociety shouldpaymuchatentiontocancerprevention. 犆 犺 犻 狀 犑 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犘 狉 犲 狏 犜 狉 犲 犪 狋,2006,13(7): 关 键 词 肿 瘤 / 流 行 病 学 ; 市 区 人 口 ; 数 据 收 集 [ 犓 犈 犢 犠 犗 犚 犇 犛 ] neoplasms/epidemiology;urbanpopulation;datacolection 中 图 分 类 号 R730.1 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2006) 基 金 项 目 上 海 市 科 学 技 术 委 员 会 资 助 项 目 ( ), 上 海 市 医 学 重 点 社 区 项 目 建 设 计 划 资 助 (AB ), 上 海 市 普 陀 区 卫 生 系 统 优 秀 学 科 带 头 人 培 养 计 划 资 助 通 讯 作 者 简 介 史 玲, 女, 上 海 人, 副 主 任 医 师, 主 要 从 事 内 分 泌 疾 病 及 恶 性 肿 瘤 的 社 区 防 治 工 作 Tel: E mail:shiling2000@citiz.net

6 486 史 玲, 等 上 海 市 真 如 镇 居 民 肿 瘤 KAP 调 查 分 析 近 年 来, 恶 性 肿 瘤 已 成 为 严 重 危 害 我 国 人 民 健 康 和 生 命 的 主 要 疾 病 在 各 类 死 因 的 疾 病 谱 中 恶 性 肿 瘤 位 居 第 一 ( 城 市 ) 二 位 ( 农 村 ) [1] 全 死 因 死 亡 中 有 1/5 死 于 癌 症, 而 且 全 球 肿 瘤 的 发 病 率 和 死 亡 率 目 前 仍 呈 上 升 趋 势 因 此, 控 制 肿 瘤 已 成 为 全 球 性 的 卫 生 战 略 重 点 之 一 为 顺 利 开 展 肿 瘤 防 治 工 作 提 供 必 需 的 资 料, 上 海 市 长 征 地 段 医 院 和 上 海 市 肿 瘤 研 究 所 合 作 开 展 了 课 题 社 区 肿 瘤 防 治 适 宜 技 术 的 研 究 以 期 通 过 此 项 工 作 的 开 展, 提 高 居 民 因 症 就 诊 率, 达 到 肿 瘤 三 早 降 低 发 病 率 和 死 亡 率 的 目 的 1 对 象 与 方 法 1.1 研 究 对 象 上 海 市 真 如 镇 2 个 居 委 会 ( 真 如 西 村 居 委 真 西 一 居 委 )30~70 岁 的 常 住 居 民 (8310 人 ) 1.2 调 查 内 容 及 方 法 采 用 整 群 抽 样 方 法, 抽 取 2 个 居 委 常 住 居 民 2700 人, 由 经 过 专 业 培 训 的 医 生 用 统 一 问 卷 ( 由 市 肿 瘤 研 究 所 设 计 ) 进 行 入 户 调 查 内 容 主 要 包 括 基 本 情 况 生 活 方 式 恶 性 肿 瘤 知 信 行 (KAP) 及 获 得 肿 瘤 知 识 的 途 径 等 方 面 其 中, 肿 瘤 相 关 知 识 部 分 包 括 : 恶 性 肿 瘤 病 因 ( 吸 烟 饮 酒 染 发 饮 食 习 惯 生 活 习 惯 环 境 污 染 和 遗 传 等 ) 早 期 症 状 ( 便 血 痰 血 鼻 血 和 吞 咽 困 难 等 ) 常 见 肿 瘤 的 检 查 方 法 (AFP X 线 钼 靶 等 ) 和 肿 瘤 预 防 措 施 ( 改 善 饮 食 习 惯 改 良 生 活 方 式 等 ) 1.3 统 计 学 方 法 分 组 间 率 的 比 较 采 用 χ 2 检 验, 应 用 SPSS11.0 统 计 软 件 包 差 异 有 统 计 学 意 义, 犘 结 果 2.1 一 般 情 况 本 次 共 调 查 了 2700 人, 收 回 调 查 问 卷 2695 份, 符 合 要 求 的 2610 份 其 中, 男 1266 人, 女 1344 人, 比 例 为 平 均 年 龄 (53.04±8.70) 岁 ;30~39 岁 166 人 (6.36%) 40~49 岁 763 人 (29.23) 50~59 岁 1052 人 (40.31%) 和 60~70 岁 629 人 (24.10%) 文 化 程 度 构 成 : 小 学 及 以 下 227 人 (8.70%), 初 中 高 中 或 中 专 1993 人 (76.36%), 大 学 及 以 上 390 人 (14.94%); 恶 性 肿 瘤 家 族 史 阳 性 者 579 人 (22.18%) 2.2 恶 性 肿 瘤 相 关 行 为 情 况 1) 饮 食 习 惯 : 被 调 查 者 中, 有 64.27% 经 常 吃 新 鲜 蔬 菜 水 果,6.3% 吃 腌 制 食 物,5.5% 经 常 吃 油 炸 物, 54.0% 偏 油 或 重 油 2) 生 活 习 惯 : 被 调 查 者 中, 有 吸 烟 史 者 695 人 (26.62%); 每 天 饮 酒 者 278 人 (10.34%); 经 常 参 加 体 育 锻 炼 的 仅 有 727 人 (27.87%) 2.3 恶 性 肿 瘤 相 关 知 识 认 知 情 况 统 计 分 析 表 明, 居 民 的 恶 性 肿 瘤 KAP 水 平, 有 随 年 龄 和 文 化 程 度 增 高 而 增 加 的 趋 势, 有 肿 瘤 家 族 史 的 高 于 无 肿 瘤 家 族 史 的, 女 性 高 于 男 性 ( 表 1,Tab.1) 总 的 来 看, 被 调 查 者 肿 瘤 相 关 知 识 知 晓 率 较 低 对 肿 瘤 的 一 般 知 识 有 所 了 解, 知 晓 率 99% 的 可 信 区 间 为 (68.50%,73.12%), 其 中 知 识 点 霉 变 腌 制 食 物 易 致 癌 知 晓 率 较 高 达 (91.16%,94.20%), 肿 瘤 检 测 方 法 的 知 晓 率 较 低, 肿 瘤 早 期 症 状 的 知 晓 率 中, 食 管 癌 最 高 3 讨 论 3.1 不 同 年 龄 组 人 群 的 KAP 水 平 从 各 年 龄 组 肿 瘤 KAP 水 平 来 看,30~39 岁 组 最 低,50~59 岁 组 相 对 较 高 由 此 可 以 推 断 50~59 岁 人 群 已 经 认 识 到 肿 瘤 的 危 害 及 健 康 的 重 要 性, 正 有 意 识 地 提 高 肿 瘤 知 识 水 平, 注 意 生 活 方 式 而 30~39 岁 的 青 年 人, 他 们 虽 然 对 恶 性 肿 瘤 的 危 险 因 素 早 期 症 状 有 所 了 解, 但 防 治 意 识 较 淡 薄, 可 能 认 为 自 己 还 年 轻, 不 关 心 尚 未 发 生 的 健 康 问 题 在 所 有 问 题 中, 各 组 对 肿 瘤 的 早 期 检 查 手 段 知 晓 率 均 最 低 说 明 在 以 后 肿 瘤 防 治 工 作 中, 要 加 强 中 青 年 的 健 康 教 育, 并 要 加 强 专 业 性 的 肿 瘤 知 识 宣 教 力 度 3.2 不 同 文 化 程 度 人 群 的 KAP 水 平 从 各 学 历 层 次 肿 瘤 KAP 水 平 来 看, 随 着 文 化 程 [2] 度 增 高 而 增 高, 与 上 海 有 关 调 查 研 究 一 致, 与 天 津 市 [3] 的 调 查 不 很 一 致 说 明 提 高 居 民 的 文 化 水 平, 是 进 行 肿 瘤 防 治 的 一 项 必 要 而 有 效 的 措 施 3.3 不 同 性 别 人 群 的 肿 瘤 KAP 水 平 总 体 来 看, 女 性 的 肿 瘤 KAP 水 平 略 高 于 男 性, 但 差 异 多 无 显 著 性 仅 乳 腺 癌 早 期 检 查 方 法 (X 线 钼 靶 ) 的 知 晓 率, 男 女 差 异 有 统 计 学 意 义 提 示 我 们 在 乳 腺 癌 防 治 专 业 知 识 培 训 方 面, 重 视 女 性 工 作 的 同 时, 更 要 加 强 男 性 的 协 助 防 治 意 识 3.4 有 无 肿 瘤 家 族 史 人 群 的 肿 瘤 KAP 水 平 有 肿 瘤 家 族 史 的 人 群, 仅 对 肿 瘤 病 因 食 管 癌 早 期 症 状 及 乳 腺 癌 检 查 方 法 知 晓 率, 明 显 高 于 无 家 族 史 者, 但 在 生 活 方 式 饮 食 习 惯 等 方 面, 并 不 优 于 后 者 说 明 前 者 耳 濡 目 染 亲 人 的 病 情 后, 虽 然 有 意 识 地 关 心 肿 瘤 知 识, 但 尚 未 意 识 到 他 们 就 是 肿 瘤 的 高 危 人 群 提 示 我 们 在 肿 瘤 防 治 工 作 中, 更 要 加 强 这 些 高 危 人 群 的 工 作

7 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2006 年 4 月 第 13 卷 第 7 期 CHINJCANCERPREV TREAT,April2006,Vol.13 No 组 别 年 龄 ( 岁 ) 狀 表 1 不 同 年 龄 学 历 性 别 和 家 族 史 人 群 肿 瘤 知 识 知 晓 率 比 较 (%) 病 因 预 防 传 染 环 境 污 染 遗 传 霉 变 食 物 吸 烟 新 鲜 蔬 菜 水 果 食 管 癌 早 期 症 状 大 肠 癌 肝 癌 ~ AFP 检 查 方 法 乳 腺 癌 ~ X 线 钼 靶 30~ ~ ~ ~ 有 症 状 去 医 院 χ 2 值 犘 值 学 历 小 学 及 以 下 初 高 中 大 学 及 以 上 χ 2 值 犘 值 性 别 男 性 女 性 χ 2 值 犘 值 家 族 史 有 无 χ 2 值 犘 值 合 计 % 注 : 合 计 为 2610 人 对 某 个 问 题 的 总 知 晓 率 Group Age(years) Tab.1 Comparisonofcognitiveratesamongdiferentages,educationlevels,genderandfamilyhistories(%) 狀 InfectionPolution Inherit ance Cause& Precaution Moldy food Vegetables Smoking andfruit Earlysymptom Esophagus Intestinal cancer cancer Examinemethod Livercaner Breastcaner ~AFP ~Xray Goto hospital χ 2 value 犘 value Educationlevel Primaryschool Middleschool University χ 2 value 犘 value Gender Male Female χ 2 value 犘 value Familyhistory Positive Negative χ 2 value 犘 value Total(%) 犖 狅 狋 犲 :Thetotalmeansthecognitiveratetoaquestionamong2610people.

8 488 任 培 状, 等 围 领 式 结 肠 造 口 术 及 临 床 应 用 报 告 研 究 还 发 现, 居 民 中 存 在 一 定 的 不 良 生 活 习 惯 和 也 是 非 常 重 要 的 此 外, 本 调 查 结 果 显 示 恶 性 肿 瘤 家 生 活 方 式, 如 吸 烟 酗 酒 和 不 良 的 饮 食 习 惯 体 育 锻 炼 族 史 阳 性 率 高 达 22.18%, 可 见 恶 性 肿 瘤 已 经 和 正 在 [4] 较 少 等 而 这 些 不 良 行 为 与 肿 瘤 发 生 有 密 切 关 系 对 社 区 居 民 健 康 与 生 命 构 成 重 大 威 胁, 必 须 引 起 各 级 让 人 费 解 的 是, 有 80.35% 的 吸 烟 者 明 知 吸 烟 可 能 致 医 务 人 员 和 全 社 会 的 高 度 关 注 癌, 还 不 愿 戒 烟 参 考 文 献 综 上 所 述, 我 们 从 不 同 性 别 年 龄 文 化 程 度 及 家 族 史 的 角 度 分 析 后, 得 知 居 民 对 肿 瘤 一 般 知 识 有 所 了 [1] 万 德 林. 临 床 肿 瘤 学 [M]. 北 京 : 科 技 出 版 社,2002:3-4. [2] 刘 艳, 董 秀 珍, 杨 敏, 等 解, 且 73.04% 居 民 的 防 癌 知 识 来 源 于 广 播 电 视,. 上 海 市 长 宁 区 居 民 肿 瘤 相 关 知 识 态 度 行 为 的 调 查 [J]. 中 国 健 康 教 育,2004,20(8): % 居 民 是 从 书 报 杂 志 上 获 得,60.12% 居 民 希 望 [3] 钱 碧 云, 王 庆 生, 夏 小 明, 等. 天 津 市 居 民 对 肿 瘤 知 识 认 知 程 度 的 从 社 区 宣 传 品 再 获 得 健 康 知 识, 与 广 东 的 相 关 的 调 查 调 查 分 析 [J]. 中 国 慢 性 病 预 防 与 控 制,2002,10(6): [5] 结 果 相 近 大 部 分 研 究 对 象 对 出 现 肿 瘤 症 状 时 的 态 [4] 么 鸿 雁, 陈 辉, 吕 美 霞, 等. 行 为 生 活 方 式 对 恶 性 肿 瘤 发 病 影 响 的 度 比 较 积 极,81% 的 人 选 择 立 即 去 医 院 就 诊 而 对 致 综 合 分 析 [J]. 中 国 公 共 卫 生,2003,19(4): [5] 陈 维, 钟 锋, 李 根 源, 等 肿 瘤 的 某 些 因 素 预 防 措 施 和 检 查 方 法 的 知 晓 率 较 低. 广 东 省 梅 州 城 区 居 民 对 癌 症 知 识 认 知 与 需 求 的 调 查 分 析 [J]. 肿 瘤 防 治 杂 志,2004,11(1): 因 此, 在 社 区 肿 瘤 防 治 过 程 中, 针 对 不 同 KAP 水 平 的 人 群 有 必 要 采 用 不 同 的 方 法, 从 而 有 效 地 普 及 防 癌 抗 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : 癌 知 识, 降 低 癌 症 的 发 病 率 与 死 亡 率, 提 高 居 民 的 生 命 ( 编 辑 : 范 开 席 ) 质 量 充 分 利 用 社 区 大 众 传 媒, 并 争 取 各 部 门 的 协 作 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 櫒 围 领 式 结 肠 造 口 术 及 临 床 应 用 报 告 短 篇 论 著 病 案 报 道 任 培 状 1, 任 华 丽 2, 肖 琼 1, 王 少 林 1, 王 春 梅 1 1. 乳 山 市 中 医 院 外 科, 山 东 乳 山 乳 山 市 疾 病 控 制 中 心 检 验 科, 山 东 乳 山 关 键 词 结 直 肠 肿 瘤 / 外 科 学 ; 结 肠 造 口 术 ; 自 体 皮 瓣 ; 围 领 式 中 图 分 类 号 R 文 献 标 识 码 D 文 章 编 号 (2006) 为 了 最 大 限 度 减 少 直 肠 癌 行 Miles 手 术 传 统 结 肠 造 口 的 并 发 症, 使 患 者 术 后 有 效 控 制 大 便 次 数, 使 人 工 肛 门 器 携 带 方 便, 减 少 粪 便 污 染, 减 轻 结 肠 造 口 周 围 皮 肤 炎 症, 更 好 地 避 免 造 口 狭 窄, 我 们 自 行 设 计 开 展 自 体 皮 瓣 围 领 式 结 肠 造 口 术, 应 用 于 临 床 效 果 良 好, 无 明 显 并 发 症, 易 被 患 者 接 受, 便 于 管 理 1 临 床 资 料 1.1 一 般 资 料 1998 年 12 月 1 日 ~2004 年 12 月 9 日, 收 集 因 直 肠 癌 行 Miles 手 术 围 领 式 造 口 术 38 例,( 其 中 乳 山 市 人 民 医 院 11 例, 乳 山 市 中 医 院 27 例 ), 男 20 例, 女 18 例 年 龄 32~78 岁, 平 均 年 龄 68.2 岁 术 后 病 理 确 诊 腺 癌 34 例, 黏 液 腺 癌 3 例, 未 分 化 癌 1 例 1.2 造 口 手 术 方 法 造 口 位 置 采 用 传 统 乙 状 结 肠 造 口 位 置, 以 造 口 处 为 中 心, 划 2 个 半 径 分 别 为 3 及 1.5cm2 个 同 心 圆 ( 图 1A) 中 的 虚 线, 经 同 心 圆 划 一 水 平 线, 在 轴 线 上 向 两 直 角 切 口 线 作 一 s 形 通 讯 作 者 简 介 任 培 状, 男, 山 东 乳 山 人, 副 主 任 医 师, 主 要 从 事 外 科 肿 瘤 的 研 究 工 作 Tel: E mail:rszyyrpz@126.com 切 口, 该 线 与 皮 肤 小 园 分 别 交 点 g h, 按 实 线 切 开 皮 肤 及 皮 下 组 织, 切 至 腹 直 肌 前 鞘, 修 剪 游 离 皮 瓣 皮 下 多 余 脂 肪 组 织, 在 预 造 口 处 腱 膜 中 点, 切 除 一 直 径 3cm 圆 形 腱 膜, 钝 性 分 开 腹 直 肌, 切 开 腹 膜, 将 造 口 结 肠 拉 出, 将 结 肠 与 腹 膜 及 腹 直 肌 前 鞘 间 断 缝 合 固 定, 外 露 造 口 结 肠 4~5cm( 图 1B); 将 游 离 皮 瓣 a d b g 对 端 间 断 缝 合,e h f c 对 端 缝 合 形 成 环 状 围 领, 切 口 两 端 点 V Y 成 形 缝 合, 直 至 环 形 皮 瓣 边 缘 并 间 断 缝 合, 将 造 口 结 肠 多 余 部 分 切 除, 使 结 肠 长 度 较 皮 领 高 1cm, 将 结 肠 黏 膜 下 层 与 围 领 皮 肤 边 缘 1 号 丝 线 间 断 缝 合, 完 成 造 口 ( 如 图 1C), 形 成 高 起 皮 肤 之 井 口 式 造 口, 结 肠 腔 内 以 油 纱 圈 添 压, 外 部 由 纱 布 环 形 包 扎 1.3 结 果 全 组 患 者 均 获 随 访, 随 访 时 间 为 术 后 6 个 月 ~5 年, 平 均 随 访 时 间 3.8 年 术 后 无 皮 瓣 坏 死 病 例, 无 造 口 皮 肤 感 染 发 生, 造 口 皮 瓣 均 Ⅰ 期 愈 合 其 中 1 例 患 者 造 口 结 肠 部 分 坏 死 约 1cm 2cm, 经 换 药 后, 皮 瓣 皮 下 纤 维 化 而 未 行 其 他 特 殊 处 理 排 便 次 数 由 每 日 4~5 次 逐 渐 减 少, 至 术 后 3 个 月, 基 本 达 到 每 日 排 便 1~2 次, 而 且 有 规 律 性, 排 便 感 觉 良 好 全 组 病 例 均 反 映 造 口 佩 带 接 便 器 方 便, 无 明 显 造 口 周 围 皮 炎 发 生, 清 洗 方 便 无 渗 血 ( 下 转 第 511 页 )

9 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2006 年 4 月 第 13 卷 第 7 期 CHINJCANCERPREV TREAT,April2006,Vol.13 No 实 验 研 究 活 体 兔 肌 肉 组 织 微 波 固 化 后 病 理 学 变 化 的 实 验 研 究 邹 汉 青, 王 水, 林 红 军, 张 智 弘, 刘 晓 安, 彭 晓 静 南 京 医 科 大 学 第 一 附 属 医 院 普 外 科, 江 苏 南 京 Experimentalstudyonpathologicalchangesofrabbitmusclebymicrowavecoagulation 犣 犗 犝 犎 犪 狀 狇 犻 狀 犵, 犠 犃 犖 犌 犛 犺 狌 犻, 犔 犐 犖 犎 狅 狀 犵 犼 狌 狀, 犣 犎 犃 犖 犌 犣 犺 犻 犺 狅 狀 犵, 犔 犐 犝 犡 犻 犪 狅 犪 狀, 犘 犈 犖 犌 犡 犻 犪 狅 犼 犻 狀 犵 犉 犻 狉 狊 狋 犃 犳 犻 犾 犪 狋 犲 犱 犎 狅 狊 狆 犻 狋 犪 犾 狅 犳 犖 犪 狀 犼 犻 狀 犵 犕 犲 犱 犻 犮 犪 犾 犝 狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 狔, 犖 犪 狀 犼 犻 狀 犵 , 犘. 犚. 犆 犺 犻 狀 犪 摘 要 目 的 : 观 察 冷 循 环 微 波 固 化 活 体 兔 棘 突 旁 肌 肉 组 织 病 理 改 变 过 程, 以 探 讨 该 技 术 用 于 治 疗 体 表 肿 瘤 及 其 他 实 体 瘤 的 可 行 性 方 法 :28 只 新 西 兰 白 兔 经 超 声 引 导 下 冷 循 环 微 波 固 化 棘 突 旁 肌 肉 后, 分 别 于 术 后 和 120d 处 死 后 取 固 化 组 织 行 病 理 组 织 学 检 查, 并 分 别 于 实 验 前 及 实 验 后 1 周 采 静 脉 血 行 血 常 规 及 生 化 检 查 结 果 :1d 后 固 化 组 织 仅 表 现 为 轻 微 的 细 胞 形 态 改 变 ;7d 后 细 胞 形 态 学 改 变 显 著, 固 化 组 织 周 边 慢 性 炎 症 明 显, 巨 噬 细 胞 淋 巴 细 胞 浸 润 ;30d 后 固 化 组 织 慢 性 炎 症 更 加 显 著, 周 边 纤 维 组 织 增 生, 肉 芽 肿 形 成, 并 向 固 化 中 心 浸 润 发 展 ;120d 后 固 化 区 纤 维 增 生 显 著, 炎 症 细 胞 消 失, 固 化 坏 死 肌 细 胞 逐 步 消 失 实 验 动 物 微 波 固 化 前 后 血 常 规 及 肝 肾 功 能 等 指 标 检 查 均 未 见 异 常 结 论 : 冷 循 环 微 波 克 服 了 以 往 微 波 治 疗 的 拖 尾 现 象, 固 化 肌 肉 组 织 逐 渐 被 纤 维 脂 肪 组 织 取 代, 且 固 化 灶 以 外 组 织 无 明 显 病 理 形 态 改 变, 血 液 学 检 查 未 见 异 常, 为 微 波 临 床 治 疗 提 供 了 理 论 依 据 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2006,13(7): [ 犃 犅 犛 犜 犚 犃 犆 犜 ] 犗 犅 犑 犈 犆 犜 犐 犞 犈 :Tostudythepathologicalchanges ofrabbitparaspinousmusclethermalyablatedwithpercutaneous water cooled microwave. 犕 犈 犜 犎 犗 犇 犛 :Twenty eightrabbitsun derwent water cooled microwavecoagulationin paraspinous muscleunderultrasonicguide.thetreatedmusclewasexamined pathologicalyfrom1dayto120daysafterablation.routineand biochemicalbloodtests wereexamined1 weekbeforeandafter theexperiment. 犚 犈 犛 犝 犔 犜 犛 :Onedayafterthetreatment,onlymild alterationofcelular morphology wasfound,and7daysafterthe treatment,themyocytedestructionwasprominent,andtheinflamma tioncels werecomposedpredominantlyofhistocytesandlympho cytes.thirtydaysafterthetreatment,theinflammatoryborderwas obvious,whichwascomposedoffibroblastsandhistocytes.onehun dredandtwentydaysafterthetreatment,nosignificantinflammatory responsewasfoundandthemusclewasreplacedbyfibrousandadi posetissues.theroutineandbiochemicalbloodtestswerenormal. 犆 犗 犖 犆 犔 犝 犛 犐 犗 犖 犛 :The water cooled microwavecoagulationdoesnot leaveatrailinthecoagulationareaasbefore.inthelongterm,the musclecoagulatedisreplacedbyfibrousandadiposetissues,whichis notseeninmusclesoutofthefocus.theexperimentprovidesabasis fortheclinicalapplicationofmicrowave. 犆 犺 犻 狀 犑 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犘 狉 犲 狏 犜 狉 犲 犪 狋,2006,13(7): 关 键 词 动 物, 实 验 ; 肿 瘤 / 病 理 学 ; 微 波, 兔 [ 犓 犈 犢 犠 犗 犚 犇 犛 ] animals,laboratory;neoplasms/patholgy;microwaves,rabbits 中 图 分 类 号 R73-36 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2006) 乳 腺 纤 维 瘤 及 其 他 体 表 肿 瘤 是 常 见 病 和 多 发 病, 一 经 诊 断, 绝 大 多 数 采 用 手 术 方 法 加 以 治 疗 近 年 来, 由 于 审 美 观 念 的 巨 大 转 变 和 微 创 外 科 不 断 取 得 进 基 金 项 目 江 苏 省 卫 生 系 统 重 点 人 才 基 金 (135 工 程 ) 第 一 作 者 简 介 邹 汉 青, 男, 江 苏 兴 化 人, 硕 士, 主 要 从 事 乳 腺 癌 的 基 础 与 临 床 研 究 工 作 Tel: E mail:switch2003@163.com 通 讯 作 者 简 介 王 水, 男, 江 苏 溧 阳 人, 博 士, 博 士 生 导 师, 教 授, 主 任 医 师, 主 要 从 事 乳 腺 及 甲 状 腺 疾 病 基 础 与 临 床 研 究 工 作 Tel: E mail:ws0801@hotmail.com 展, 传 统 的 治 疗 理 念 和 方 法 正 发 生 变 化 微 波 热 疗 是 微 创 治 疗 的 方 法 之 一, 由 于 价 格 相 对 较 低, 操 作 较 为 简 便, 越 来 越 受 到 关 注 但 该 法 是 否 可 以 用 于 体 表 肿 瘤 的 治 疗, 治 疗 后 病 理 改 变 如 何 及 对 机 体 有 无 影 响 等, 目 前 尚 不 清 楚 为 此, 我 们 采 用 动 物 实 验 的 方 法 进 行 观 察, 由 于 体 表 肿 瘤 动 物 模 型 建 立 困 难, 故 选 择 肌 肉 模 拟 体 表 肿 瘤 进 行 微 波 固 化, 并 长 期 连 续 做 病 理 学 观 察, 结 果 报 道 如 下 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料

10 ４９０ 邹汉青 等 活体兔肌肉组织微波固化后病理学变化的实验研究 １ １ １ 实验对象 健康新西兰白 兔 ２８ 只 南京 农科 院提供 体质量 ２５００±４００ ｇ １ １ ２ 实验设备 冷循环微波治疗仪 南京亿高微波 系统工程有限 公 司 生 产 的 ＥＣＯ １００ 增 强 型 微 波 治 疗 系统 技术指标 微波频率 ２４５０±１０ ＭＨＺ 输 出 功 率 ０ １５０ Ｗ 可连续调节 输出方式为脉冲微波 １ ２ 实验方法 用３ 戊巴比妥钠 １ｍＬ ｋｇ 静脉注射 待动物麻 醉后俯卧位固 定 剃去背 部体毛 在 Ｂ 超引导下 经 皮 穿刺将冷循环微波针 置 入 棘 突 旁 肌 肉 内 针 尖 距 表 皮 约 ９ｍｍ 先打 开 冷 循 环 开 关 数 秒 后 打 开 微 波 治 疗 图 １ 固化病灶肉眼观 Ｆ １ Ｇ ｐｐ ｇｕ ｇ 开关 功率 ３０ Ｗ 治疗时间 １ｍ 固化病灶中心位 于 皮 下 约 ８ ｍｍ 处 分 别 于 固 化 后 １ ７ ３０ 和 １２０ｄ 处死 后切取固化组 织 均 以 ４ 甲 醛溶液固定 石蜡包埋 切 片 Ｈ Ｅ 染 色 光 镜 行 病 理 组织学检查 各组动物在实验前和处理１ 周后各抽取静脉血检查 血常规 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 尿素氮 肌酐和血糖 １ ３ 统计学方法 采用配对狋 检 验 所 有 检 验 的 显 著 性 水 平 取 ０ ０５ 双侧 使用 ＳＰＳＳ１０ ０ 软件进行统计学分析 ２ 结果 图 ２ 固化后 １ｄＨＥ 切片 ＨＥ ４００ Ｆ ２ Ｈｍ ｘｙ ｄ ｇ １ｄｙ ｇ ｇｕ ＨＥ ４００ ２ １ 病理结果 术后 １ｄ表现 ９ 例固化病灶肉眼可见局部出现类 球形苍白色凝固灶 约 ２ ５ｍ １ ８ｍ １ ４ｍ 中心 为针道 周 围 有 暗 红 色 充 血 区 与 正 常 组 织 分 界 明 显 图 １ Ｆ １ 光镜下改变 不 显 著 主 要 表 现 为 部 分 细 ｇ 胞形态的改变 肌细胞 横纹紊乱 消失 细 胞肿胀 胞质 空泡化 细胞核固缩 淡染 图２ Ｆ ２ 术后７ｄ表现 ｇ ４ 例固化病灶光镜下 病 灶与周边正 常 组 织 间 慢 性 炎 症 显著 大量巨噬 细 胞 淋巴细胞浸 润 纤维 组织增 生 细 胞形态破 坏 明 显 肌 细 胞 排 列 紊 乱 细 胞 空 泡 化 核 固 缩 消失 图３ Ｆ ３ 术后３０ｄ表现 ５ 例固化病灶光 ｇ 图 ３ 固化后 ７ｄＨＥ 切片 ＨＥ ２００ Ｆ ３ Ｈｍ ｘｙ ｄ ｇ ７ｄｙ ｇ ｇｕ ＨＥ ２００ 镜下病灶周边慢性炎症带显著 大量巨噬细胞吞噬坏死 肌细胞 淋巴细胞和纤维组织增生 包绕 局部可 见肉 芽 肿形成 出现钙化点 图 ４ Ｆ ４ 术后 １２０ｄ 表现 １０ ｇ 例固化病灶光镜下慢性炎症较前 减轻 巨 噬细胞 淋巴 细胞消失和 固 化 病 灶 被 纤 维 组 织 包 裹 部 分 横 纹 肌 消 失 脂肪 纤维组织增生取代 图 ５ Ｆ ５ ｇ ２ ２ 不良反应观察 观察期间实验动 物 皮 肤 均 无 红 肿 水 疱 和 破 溃 等 不良反应发生 各项 实 验 室 检 查 实 验 前 后 数 据 无 明 显 变化 犘 ０ ０５ 表 １ Ｔｂ １ 固 化 部 位 早 期 肿 胀 明 显 １ 个月后局部可触及明显硬结 ３ ４ 个月后扪诊无 异常发现 图 ４ 固化后 ３０ｄＨＥ 切片 ＨＥ ２００ Ｆ ４ Ｈｍ ｘｙ ｄ ｇ ３０ｄｙ ｇ ｇｕ ＨＥ ２００

11 中华肿瘤防治杂志 ２００６ 年 ４ 月第 １３ 卷第 ７ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ａｐ ２００６ Ｖ １３ Ｎ ７ ４９１ 学 ＮＡＤＨ 染色 可从一定程度上加以辨别 ６ 近来出现 １ 的免疫组化 Ｃｙ ｋ ８ ８检测亦常用于乳腺癌组织固 化后细胞活性的鉴别 ７ 我们观察到慢性期固化灶仅表 现为部分横纹肌的消失 局部纤维组织增生取代 而大部 分肌细胞仍表现为凝固性坏死 并没有完全吸收 考虑可 能系病灶体积比较大 观察时间仍不够充分的原因所致 本实验所形成固化灶中心距表皮约 ８ｍｍ 呈类球形 约 且肌肉导电率与皮下脂肪组织 ２ ５ｍ １ ８ｍ １ ４ｍ 较好的模拟了乳腺肿瘤等体表肿瘤所处环境 微 类似 图 ５ 固化后 １２０ｄＨＥ 切片 ＨＥ ４００ 无１例出现局部皮肤红肿 水疱和破溃等副反 波处理后 Ｆ ５ Ｈｍ ｘｙ ｄ ｇ １２０ｄｙ ｇ ＨＥ ４００ ｇｕ 表 １ 实验前后主要实验室检查结果比较 狓 ±狊 狀 １２ 项目 实验前 实验后 狋值 白细胞 ０２５±３ ５８６ １０ ７６７±３ ８８５ １ ６２７ １ ０９Ｌ １ ９ 血糖 Ｌ ５ ｍｍ ９０３±１ ７４６ ４ ８７３±１ ４０９ １ ３４７ 谷草转氨酶 Ｕ Ｌ ４６ ５１７±２５ ２０９４４ ６３３±１５ ０２９ ０ ３００ 谷丙转氨酶 Ｕ Ｌ ３５ ８０８±１４ １６４３６ ００２±２１ １７４ ０ ０２９ 尿素氮 Ｌ ６ ｍｍ ０８３±１ ８７７ ６ ９０１±０ ７３４ １ ６４４ 肌酐 Ｌ ６４ ４０８±１３ １１１７０ ９００±１４ ３１９ ２ ０１８ μｍ 犘值 ０ １３２ ０ ２０５ ０ ７７０ ０ ９７７ ０ １２９ ０ ０６９ 应 同时形态上 固化部位早期肿胀明显 界限不清 １个 月后局部可触及硬结 境界较前清晰 但范围较前明显缩 小 ３ ４个月后扪诊无异常发现 从而为微波治疗乳腺肿 瘤等体表肿瘤安全性提供了理论依据 既往微波治疗时 高杆温 不仅限制了单点凝固范围 增加了皮肤灼伤发 而且有 拖尾 现象 影响固化形态 肿瘤多为类圆 生率 形 拖尾 现象加大了非肿瘤组织的损伤 我们采用冷 循环微波刀 固化组织成椭圆形 克服了 高杆温 这一缺 点 微波治疗取代手术治疗的关键在于必须破坏全部的 Ｔｂ １ Ｒ ｕ ｕ ｄｂ ｈｍ ｂ ｄ ｐ ｄ 狓 ±狊 狀 １２ ｘｐ ｍ ｐ 形成足够的固化坏死范围 同时不能损伤周围 肿瘤细胞 正常组织 我们的研究证实了微波固化造成实验对象凝 Ｉ ｍ Ｐ ｘｐ ｍ Ｐ ｘｐ ｍ 狋ｖ ｕ ０２５±３ ５８６ １０ ７６７±３ ８８５ １ ６２７ １ ０９Ｌ １ ９ ＷＢＣ Ｌ ５ Ｇ ｕ ｍｍ ９０３±１ ７４６ ４ ８７３±１ ４０９ １ ３４７ ＡＳＴ Ｕ Ｌ ４６ ５１７±２５ ２０９４４ ６３３±１５ ０２９ ０ ３００ ＡＬＴ Ｕ Ｌ ３５ ８０８±１４ １６４３６ ００２±２１ １７４ ０ ０２９ Ｌ ６ ｍｍ ０８３±１ ８７７ ６ ９０１±０ ７３４ １ ６４４ Ｕ Ｌ ６４ Ｃ ４０８±１３ １１１７０ ９００±１４ ３１９ ２ ０１８ μｍ 犘 ｖ ｕ ０ １３２ ０ ２０５ ０ ７７０ ０ ９７７ ０ １２９ ０ ０６９ 固性坏死明确 从继发慢性炎症 巨噬细胞 淋巴细胞浸 肉芽肿形成 到慢性期炎症逐步消失 纤维组织增生 润 取代固化坏死组织 同时固化灶外周正常组织没有波及 观察期间 实验动物无局部并发症 各项检验指标差异均 无统计学意义 提示微波固化可安全有效地应用于临床 ３ 讨论 治疗 肿瘤热疗 或 称 温 热 治 疗 经 实 验 证 明 在 ４３ 单 独 参考文献 加热肿瘤细胞 ６０ｍ 可以破坏肿瘤细胞 并且随着 加 热温度的提高 所需加热时间大大缩短 当温度提高至 ６０ １００ 细 胞 发 生 迅 速 的 蛋 白 凝 固 及 不 可 逆 损 伤 １ Ａｈｍ ｄ等 ２ 提出组织生物学效应 热量等式 组 织凝固坏死 热量沉积 局部组织相互作用 热量损 失 肿瘤热疗包括微波 射频 聚焦超声和激光治疗等 相对于其他疗法 微波主要优势在于 局部热疗效率高 均衡性好 ３ 且单针固化范围大 固化形态可控制 固化 治疗时间短 具有 价 格 优 势 患 者 易 于 接 受 等 ４ 目 前 对于微波残留固化组织连续性病理组织学观察 多应 用 于肝脏 胰腺等的实验研究 ５ 而肝细胞具有可再生性 可能对实验结果产生影响 故本实验将不可再生的横纹 肌作为研究对象 为微波固化应用于临床 如子宫肌瘤 前列腺增生 平滑肌瘤等脏器疾病提供理论依据 在实验中我们观察到早期固化组织病理组织学变化 并不显著 仅表现为轻微细胞形态改变 提示临床应用时 １ Ｇ ｄｂ ＤｕｐｕｙＤＥ Ｉｍｇ ｄｄｒｄ ｑｕ ｇｓｎ ｇｕ ｙｔｕｍ ｇ ｄｐｐ ｕ Ｐ Ｉ Ｊ ＪＶ Ｉ ｖ Ａｂ Ｃｈ Ｒｄ ２００１ １２ ９ １０２１ １０３２ ２ Ａｈｍｄ Ｍ Ｇ ｄｂ ｍ ｂ ｈ ｐｙ ｈｐ ｇｓｎ Ｔｈ ｕ ｍ Ｊ ＪＶ Ｉ ｖｒｄ ２００２ １３ ９ Ｓｕｐ ２３１ ２４３ ｐ ３ 王丽英 宋作顺 曹成海 等 经皮 微 波 固 化 联 合 无 水 酒 精 注 射 治 疗原发性肝癌 Ｊ 肿瘤防治杂志 ２００２ ９ ５ ５３３ ５３４ ４ 郑云 李锦清 张亚奇 等 超声引 导 经 皮 气 冷 微 波 固 化 在 活 体 猪 肝的实验研究 Ｊ 癌症 ２００４ ２３ ６ ６０９ ６１３ ５ 王石林 箪冀平 李路平 等 植 入 型 微 波 固 化 犬 胰 的 研 究 Ｊ 中 华实验外科杂志 １９９６ １３ １ ４５ ６ Ｉ ｚ ｚ Ｆ Ｔｈｍ Ｒ Ｄ Ｐ Ｒｄ ｑｕ ｙｂ ｗ ｈｐ ｍ ｍ ｐ ２６ｐ ｐ ｙｂ Ｊ Ｃ ２００１ ９２ ８ ２０３６ ２０４４ ７ Ｂ ｍ ＫＪ Ｄｗ Ｋ Ａ ｄｌ Ｐ ｈ ｇ ｈｇ ｈ ｐｙ ｇｂ ｍ Ｊ Ａｍ Ｊ Ｓｕ １８２ ４ ３８４ ３８８ ｇ ２００１ 可能会让人误认为治疗不彻底 仍存在局部肿瘤组织残 即虽然组织已经灭活 余 该现象被称之为 鬼影现象 但形态上 ＨＥ 染色很难与活体组织区分 采用酶组织化 收稿日期 ２００５ ０９ １５ 修回日期 ２００６ １２ １５ 编辑 魏玲

12 高海德 等 榄香烯对小鼠瘤株 Ｈ Ａ２ ｐ 化疗的影响 ４９２ 实验研究 榄香烯对小鼠瘤株 Ｈ Ａ２ ｐ 化疗的影响 高海德１ 张佩禹２ 赵荣宇３ 陈宏生１ 邢状杰１ 柳宗林１ １ 大连大学附属中山医院普外一科 辽宁 大连 １６０００１ ２ 大石桥市中心医院普外科 辽宁 大石桥 １１５００１ ３ 大连医科大学附属第一医院普外二科 辽宁 大连 １６００２７ Ｅ ｍ ｈｍ ｈｐｙ ｍｕ ｈｐ ｍｈ Ａ２ ｐ 犌犃犗 犎犪 犻 犱犲１ 犣犎犃犖犌犘犲 犻 狔狌２ 犣犎犃犗犚狅狀犵 狔狌３ 犆犎犈犖 犎狅狀犵 狊 犺犲狀犵１ 犡犐犖犌犣犺狌犪狀犵 犻 犲１ 犔犐犝犣狅狀犵 犾 犻 狀１ 犼 １ 犇犲狆犪 狉 狋犿犲 狀 狋狅犳犌犲 狀 犲 狉 犪 犾犛狌 狉犵犲 狉狔 犣犺 狅 狀犵 狊 犺犪狀犃犳犳 犻 犾 犻 犪 狋 犲犱 犎狅 狊狆 犻 狋 犪 犾 犇犪 犾 犻 犪狀犝狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 犾 犻 犪狀１６０００１ 犘 犚 犆犺 犻 狀犪 狔 犇犪 ２ 犇犲狆犪狉 狋犿犲狀 狋狅犳 犌犲狀犲 狉犪 犾犛狌狉犵犲 狉狔 犆犲狀 狋 犲 狉犎狅 狊狆犻 狋 犪 犾狅犳 犇犪 狊 犺 犻 犻 犪狅 犇犪 狊 犺 犻 犻 犪狅１１５００１ 犘 犚 犆犺 犻 狀犪 狇 狇 ３ 犇犲狆犪 狉 狋犿犲 狀 狋狅犳犌犲 狀 犲 狉 犪 犾犛狌 狉犵犲 狉狔 犉犻 狉 狊 狋犃犳犳 犻 犾 犻 犪 狋 犲犱 犎狅 狊狆 犻 狋 犪 犾 犇犪 犾 犻 犪狀犕犲犱 犻 犮 犪 犾犝狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 犾 犻 犪狀１６００２７ 犘 犚 犆犺 犻 狀犪 狔 犇犪 摘要 目 的 观 察 榄 香 烯 对 小 鼠 肝 细 胞 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔ ｂ ｈ ｖ ｙ 癌 的 治 疗 作 用 为 临 床 肝 癌 的 治 疗 提 供 理 ｍ ｍ ｂｙｂ ｖ ｇ ｈ ｈ ｐｕ Ｅ ｍ 论依据 方法 做 荷 瘤 小 鼠 动 物 模 型 癌 瘤 Ｔｈｐｈ ｍ ｕ ｗ ｄ ｇ ｕｍ ｍ 犕犈犜犎犗犇犛 ｊ 内 多 点 多 次 注 射 给 药 用 ＲＴＰＣＲ 方 法 测 ｄ ｕｍ ｄ ｇ ｕｍ ｍ ｄ ｐ ｍｙ 其 多 药 耐 药 基 因 ｍｕ ｄ ｕｇ ｍ ｄ ｈ ｄ ｍ ｇｘｐ ｍｕ ｄ ｕｇ ｍｄ １ 的表 达 同 时 观 察 抑 瘤 率 肿 瘤 ｇ ｈ ｍｄ １ ｂｙｒｔｐｃｒ ｇ ｈ ｂ ｕｍ ｐ ｇ 坏死 情 况 和 小 鼠 死 亡 率 结 果 荷 瘤 组 ｇｙ ｕｍ ｄ ｍ 犚犈犛犝犔犜犛 Ｅｘｐ ｙ ｍ ＬＴ 化疗组 Ｃ 榄 香 烯 组 Ｅ 和 化 疗 药 ｍｄ １ ｄ ｇ ｕｍ ｇ ｕｐ ＬＴ ｈｍ ｈ ｐｙｇ ｕｐ Ｃ Ｅ 榄香 烯 组 ＣＥ 的 ｍｄ １分别为 ９２ ９ ｍｇ ｕｐ Ｅ ｈｍ ｈ ｐｙ Ｅ ｍ ｇ ｕｐ ＣＥ ｗ １００ ０ １４ ３ 和 １４ ３ 其 中 Ｅ ＣＥ 与 １００ ０ １４ ３ １４ ３ ｐ ｖ ｈ ｗ ９２ ９ ｙｄ ＬＴ 的 ｍｄ １ 比 较 犘 ０ ０５ ＬＴ ｂ ｗ Ｅ ＣＥ ｄｌｔ 犘 ０ ０５ ｂ ｗ ｇ ４２ ９ 与 Ｃ ８５ ７ 的 ｍｄ １比较 ０５ Ｉ ｈ ｂ ｕｍ Ｃ Ｅ ＬＴ ｄｃ 犘 ０ 犘 ０ ０５ Ｃ Ｅ 和 ＣＥ 抑 瘤 率 分 别 为 ＣＥ ｗ ３５ ２７ ２ ４１ ８ ｐ ｖ ｈ ｗ ｙｄ ３５ ２７ ２ 和 ４１ ８ 与 ＬＴ 比 较 犘 ｍｐ ｄｗ ｈｌｔ 犘 ０ ０５ Ｔｈｍｕ ｍ ｇ ０ ０５ Ｃ Ｅ 和 ＣＥ 的 死 亡 率 分 别 为 １５ Ｃ Ｅ ＣＥ ｗ １５ １０ ５ ｐ ｖ ｈ ｙｄ １０ 和 ５ 与 ＬＴ ４０ 比 较 犘 ０ ０５ ｗ ｍｐ ｄｗ ｈｌｔ ４０ 犘 ０ ０５ ｇ 病理示 ＣＥ 肿瘤坏死明显 大体见 肿 瘤 腐 肉 Ｔｈ ｕｍ ｗ ｕ ｄ ｇｄ ｈｍ ｗ ｍ 状 色晦暗 质软 小鼠生存活跃 结 论 瘤 犐犗犖犛 Ｔｈ ｘｐ ｈ ｈ ＣＥ 犆犗犖犆犔犝犛 ｇ 株 Ｈ Ａ２ ｐ 的 ｍｄ １的自然表达率为 ９２ ９ Ｔｈｖ ｘｐ ｍｄ １ Ｈ ｍｄ １ Ｈ Ａ２ ｐ ９２ ９ 化 疗 使 ｍｄ １ 强 表 达 增 加 榄 香 Ａ２ ｐ ｄｗ ｈｈｍ ｈ ｐｙ Ｅ ｍ ｖ ｍｄ １ｇ 烯可降低 ｍｄ １的表达并有良好的抗肿瘤 ｄ ｖ ｋ ｇ ｕｍ ｂｙ ｄ ｍ ｖｂｙ 的作用 与化疗药合用抗肿瘤作用更佳 ｍｂ ｇ ｗ ｈｈｍ ｈ ｐｕ ｇ 中华肿瘤防治杂志 ２００６ １３ ７ ４９２ ４９４ 犆犺 犻 狀犑犆犪狀犮 犲 狉犘狉 犲狏犜狉 犲犪 狋 ２００６ １３ ７ ４９２ ４９４ 关键词 肝肿瘤 药物疗法 油类 挥发 基因 ＭＤＲ 小鼠 ｄ ＭＤＲ ｍ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｖ ｐ ｍ ｕｇ ｈ ｐｙ ｖ ｇ 中图分类号 Ｒ７３５ ７ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７３ ５２６９ ２００６ ０７ ０４９２ ０３ １ ２ ｍｕ ｄ ｕｇ 癌 细 胞 的 多 药 耐 药 ＭＤＲ 影 响 了 化 疗 的 进 行 榄 香 烯 具 有 抗 肿 瘤 的 作 瘤小鼠的 多 药 耐 药 基 因 ｍｕ ｄ ｕｇ ｇ ｍｄ １ 的表达 率 抑 瘤 率 肿 瘤 的 病 理 及 死 亡 率 探 讨 用 ３ 我们采用肿瘤内多点多次注射给药 观察 ４ 组荷 榄香烯的抗肿瘤效果 通讯作者简介 高 海 德 男 辽 宁 大 石 桥 人 博 士 副 主 任 医 师 主要从事肝癌治疗的研究工作 Ｔ ８６ ４１１ ８２０３６６８８ Ｅ ｍ ｄ １２６ ｍ ｇｈ １ 材料与方法 １ １ 动物及瘤株

13 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2006 年 4 月 第 13 卷 第 7 期 CHINJCANCERPREV TREAT,April2006,Vol.13 No Balb/c 纯 系 小 鼠, 鼠 龄 6~8 周, 体 质 量 18~20 g, 雌 雄 各 半 ; 小 鼠 腹 水 型 肝 癌 低 转 移 株 Hca A2/p 由 大 连 医 科 大 学 病 理 教 研 室 提 供 1.2 主 要 试 剂 及 药 品 mdr1 引 物 内 参 引 物 mrna 提 取 及 反 转 录 试 剂, 均 由 宝 生 物 公 司 合 成 ; 榄 香 烯 由 大 连 金 港 制 药 有 限 公 司 生 产, 多 柔 比 星 丝 裂 霉 素 由 浙 江 海 正 制 药 公 司 生 产, 异 搏 停 由 山 西 省 大 同 第 二 制 药 厂 生 产 1.3 治 疗 的 实 施 及 标 本 制 取 取 传 代 7d Hca A2/p 的 Balb/c 小 鼠 腹 水, 分 离 肿 瘤 细 胞, 加 入 Hank s 液 稀 释 成 5 10 个 细 胞 /ml, 取 100 只 纯 系 Balb/c 小 鼠 于 右 前 肢 皮 下 每 只 接 种 0.2 ml, 合 个 细 胞 / 只, 第 6 天 均 可 见 肿 瘤 生 长 良 好, 肉 眼 可 见, 随 机 取 肿 瘤 组 织 镜 下 观 察, 证 实 为 原 肝 癌 细 胞 株 细 胞,80 只 荷 瘤 小 鼠 随 机 均 分 为 4 组, 当 日 开 始 用 1 ml 注 射 器 予 肿 瘤 中 心 及 边 缘 多 点 注 射 药 物, 药 液 均 为 0.5mL 各 组 用 药 种 类 剂 量 日 期 及 取 标 本 时 间 ( 表 1,Tab.1), 按 用 药 后 24h 为 第 7 天, 以 次 类 推, 记 录 各 组 小 鼠 死 亡 的 日 期 及 数 量 表 1 注 药 种 类 和 剂 量 及 制 取 标 本 的 时 间 组 别 (Group) Tab.1 Kindofdruganditsquantityofinjection,dateofinjectionandsamplemaking 药 物 种 类 及 剂 量 (Kindofdruganditsquantity) 药 物 注 射 日 期 (Dateofinjection) 标 本 制 作 日 期 (Dateofsamplemaking) LT NS 0.5mL Mitomycinum C 0.025mg C Adriamycin 0.125mg E Elemene 0.5mL CE Mitomycinum C Adriamycin Elemene 0.025mg 0.125mg 0.5mL 局 部 移 植 瘤 生 长 抑 制 率 脱 颈 处 死 后, 每 只 小 鼠 称 重 及 切 取 全 瘤 称 重, 取 1 cm 3 肿 块 备 测 mdr1, 其 余 部 分 浸 泡 于 4% 甲 醛 中, 抑 瘤 率 按 下 列 公 式 计 算 : 抑 瘤 率 (%)= 对 照 组 平 均 瘤 重 - 治 疗 组 平 均 瘤 重 对 照 组 平 均 瘤 重 100% 1.5 每 组 随 机 各 取 三 个 标 本 做 病 理 放 大 镜 下 摄 片, 分 析 病 理 变 化 1.6 各 组 mdr1 的 mrna 表 达 随 机 取 各 组 存 活 小 鼠 14 只 测 mdr1 的 mrna 的 表 达 情 况, 其 中 LT 组 第 26 天 死 亡 的 2 只 小 鼠 按 存 活 的 计 算,RNA 的 提 取 cdna 的 合 成 PCR 扩 增 及 电 泳 PCR 产 物 均 按 试 剂 说 明 书 进 行 通 过 扫 描 计 算 机 处 理 得 出 各 标 本 mdr1/controlcdna 比 值, 结 合 电 泳 中 荧 光 条 带 强 弱, 将 mdr1/controlcdna 比 值 分 为 : 1)mdr1/controlcDNA<0.1 以 (-) 表 示 ;2) 比 值 在 0.1~1 可 见 mdr1 阳 性 带 但 较 弱 用 (+) 表 示 ;3) 比 值 在 1.0 以 上 用 (++) 表 示 1.7 统 计 学 处 理 计 量 资 料 采 用 方 差 分 析 狇 检 验 和 计 数 资 料 采 用 Chi Square 过 程 的 非 参 数 检 验, 在 软 件 SSPS12.0 上 进 行 检 验 水 准 α= 结 果 2.1 各 组 mdr1 表 达 情 况 瘤 株 Hca A2/p 的 mdr1 的 自 然 表 达 率 占 92.9% 化 疗 使 mdr1 的 强 表 达 率 增 加 榄 香 烯 单 独 或 其 和 化 疗 药 同 时 应 用, 瘤 株 的 mdr1 表 达 率 均 有 明 显 的 降 低 ( 表 2,Tab.2) 2.2 各 组 小 鼠 肿 瘤 的 体 质 量 及 抑 瘤 率 榄 香 烯 和 化 疗 药 单 独 应 用 均 能 抑 制 肿 瘤 的 生 长, 但 2 种 药 同 时 应 用 抑 制 肿 瘤 的 生 长 效 果 更 加 显 著, 各 组 小 鼠 体 质 量 的 变 化 不 显 著 ( 表 3,Tab.3) 2.3 肿 瘤 病 理 LT 组 : 肿 瘤 细 胞 密 集 成 团, 间 质 甚 少, 癌 细 胞 异 形 性 明 显, 核 大, 核 胞 比 例 失 调, 深 染, 染 色 质 不 均, 核 分 裂 多 见, 可 见 病 理 性 核 分 裂 相, 未 见 明 显 肿 瘤 细 胞 坏 死 E 组 C 组 镜 下 可 见 癌 细 胞 不 同 程 度 的 变 性 坏 死 CE 组 : 大 体 见 肿 瘤 色 晦 暗, 呈 腐 肉 状, 镜 下 见 癌 细 胞 数 量 明 显 减 少 变 性 和 坏 死, 胞 质 肿 胀 红 染 疏 松, 出 现 大 小 不 等 的 空 泡, 胞 核 肿 胀 溶 解 裂 解 碎 裂 和 固 缩, 大 量 细 胞 核 消 失, 少 量 中 性 粒 细 胞 坏 死 2.4 用 药 后 各 组 小 鼠 死 亡 日 期 及 只 数 化 疗 药 物 和 榄 香 烯 同 时 应 用 明 显 降 低 了 荷 瘤 小 鼠 的 死 亡 率 各 组 小 鼠 具 体 死 亡 的 日 期 及 只 数 ( 表 4, Tab.4) 组 别 (Group) 表 2 各 组 mdr1 表 达 情 况 Tab.2 Expressionofmdr1indiferencegroups (-) (+) (++) 阳 性 率,% (Positive,%) LT C E CE 犘 <0.05 狏 狊, 犘 <0.05 狏 狊 ; 犘 <0.05 狏 狊 ; 犘 <

14 494 高 海 德, 等 榄 香 烯 对 小 鼠 瘤 株 Hca A2/p 化 疗 的 影 响 0.05vs ; ++ 犘 <0.05 狏 狊 ++. 表 3 各 组 小 鼠 肿 瘤 的 体 质 量 及 抑 瘤 率 的 变 化 Tab.3 QuantityoftumerandmiceandInhibitionrateoftumor 组 别 (Group) 小 鼠 重 量 (Quantityof mouse,g) 肿 瘤 重 量 (Quantityof tumer,g) LT 19.8± ±0.23 抑 瘤 率,% (Inhibitionrate oftumor,%) E 20.1± ± C 19.7± ± CE 20.2± ± 犘 <0.05vs, 犘 <0.05vs, 犘 <0.05vs ; 犘 < 0.05vs, 犘 <0.05vs. 组 别 (Group) 表 4 用 药 后 各 组 小 鼠 死 亡 日 期 ( 狀 ) Tab.4 Dateofdeadmiceafterinjection( 狀 ) 小 鼠 死 亡 日 期 (Dateofdeadmice) 死 亡 率,% (Mortality,%) LT 11(2) 13(3) 14(1) 26(2) 40 C 14(2) 25(1) 15 E 13 (1) 24(1) 10 CE 20(1) 5 犘 <0.05vs. 犘 <0.05vs. 犘 <0.05vs. 3 讨 论 MDR 的 形 成 是 肿 瘤 细 胞 免 受 药 物 攻 击 的 最 有 效 防 御 机 制, 其 形 成 机 制 很 复 杂, 其 中 以 mdr1 及 其 编 码 蛋 白 pgp 高 表 达 的 研 究 最 为 重 要,pgp 为 单 向 药 物 能 量 依 赖 外 排 泵, 它 可 将 肿 瘤 细 胞 内 的 化 疗 药 物 排 出 细 胞 外, 致 细 胞 内 药 物 浓 度 下 降, 因 而 肿 瘤 细 胞 耐 药, 也 就 影 响 了 临 床 肿 瘤 化 疗 的 进 行, 近 几 年, 中 药 应 用 于 逆 [4,5] 转 多 药 耐 药, 榄 香 烯 的 作 用 尤 其 得 到 了 肯 定, 榄 香 烯 是 从 中 药 莪 术 中 提 取 的 抗 癌 药, 临 床 观 察 其 对 恶 性 肿 瘤 有 较 好 的 疗 效 和 较 小 的 不 良 反 应, 对 肿 瘤 细 胞 的 DNA,RNA 和 蛋 白 的 合 成 均 有 明 显 的 抑 制 作 用, 防 止 肿 瘤 细 胞 从 S 期 进 入 G 2 M 期, 降 低 肿 瘤 的 分 裂 增 值, 并 诱 导 其 凋 亡, 而 其 逆 转 mdr1 作 用 尚 存 在 争 议 王 [6] 宝 成 等 采 用 肝 癌 细 胞 株 BEL 7402 对 榄 香 烯 能 否 促 进 mdr1 的 产 生 及 对 产 生 MDR 肿 瘤 细 胞 的 生 长 抑 制 作 用 进 行 了 研 究, 发 现 榄 香 烯 与 肿 瘤 细 胞 mdr1 表 达 关 系 不 大, 对 已 产 生 MDR 肿 瘤 细 胞 仍 有 抑 制 作 用, 未 能 使 敏 感 株 诱 发 mdr1 的 高 表 达 化 疗 药 与 榄 香 烯 合 用 作 用 于 K562 及 K562/Dom 证 实 榄 香 烯 在 多 柔 比 星 较 高 浓 度 情 况 下 有 逆 转 mdr1 作 用, 且 有 浓 度 和 时 间 依 赖 性 我 们 的 实 验 LT 组 的 mdr1mrna 表 达 率 为 92.9%, 既 然 小 鼠 和 瘤 株 均 同 一 来 源 理 论 上 应 为 100%, 分 析 可 能 为 操 作 误 差 或 存 在 变 异 等 尚 须 探 讨 榄 香 烯 单 独 在 体 内 应 用 测 其 mdr1 mrna 表 达 率 为 14.3% 与 LT 组 92.9% 差 异 有 统 计 学 意 义, 提 示 榄 香 烯 单 独 应 用 即 可 诱 使 mdr1 逆 转, 而 CE 组 的 mdr1 与 C 组 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义, 进 一 步 证 实 榄 香 烯 有 逆 转 mdr1 的 作 用 另 外 观 察 E 组 的 抑 瘤 率 27.2% 死 亡 率 10% 这 两 个 指 标 与 LT 组 比 较 都 有 明 显 差 异, 与 离 体 细 胞 培 养 结 论 相 一 致, 证 明 榄 香 烯 单 独 应 用 就 有 良 好 的 抗 肿 瘤 的 作 用 从 病 理 上 看,C 组 E 组 和 CE 组 肿 瘤 都 有 坏 死 情 况, 但 CE 组 肿 瘤 坏 死 的 严 重, 同 时 CE 组 的 抑 瘤 率 较 C 组 E 组 有 差 异, 虽 说 三 组 的 死 亡 率 没 有 明 显 差 异, 但 也 提 示 榄 香 烯 和 化 疗 药 联 合 应 用 抗 肿 瘤 的 效 果 好 也 有 文 章 报 道 低 浓 度 榄 香 烯 促 进 肝 癌 细 胞 凋 亡, 高 浓 度 加 速 肝 癌 细 胞 坏 死 综 上 所 述, 榄 香 烯 和 化 疗 药 联 合 应 用 有 良 好 的 抗 肿 瘤 效 果 参 考 文 献 [1] JulianoR L,Ling V A.Surfaceglycoprotein modulatingdurg permcablilityinchinesehumsterovarycelmutants[j].bioch BiophysActa,1976,455: [2] FojoA K,VedaDJ,SlamonDG,etal.Expressionofmultidrug resistancegeneinhumantumorsandtissues[j].natlacadsci USA,1987,84:265. [3] 李 学. 榄 香 烯 及 5 氟 脲 嘧 啶 生 化 调 节 方 案 治 疗 胃 肠 道 腺 癌 临 床 疗 效 观 察 [J]. 中 日 友 好 医 院 学 报,2004,18(1):6-9. [4] 冯 正 权, 郭 勇, 朱 宁 希. 复 方 三 根 制 剂 逆 转 多 药 耐 药 实 验 研 究 [J]. 中 国 肿 瘤,2003,12(6):370. [5] 张 慧 珠, 杨 林, 任 雪 鸣. 中 药 活 性 成 分 逆 转 肿 瘤 细 胞 多 药 耐 药 作 用 的 体 外 筛 选 [J]. 华 北 煤 炭 医 学 院 学 报,2003,5(5):265. [6] 王 宝 成, 郭 军, 狄 剑 时. 榄 香 烯 乳 剂 与 肿 瘤 多 药 耐 药 的 基 础 研 究 [J]. 中 国 肿 瘤 临 床,1996,23 (2): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 刘 翠 玲 )

15 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2006 年 4 月 第 13 卷 第 7 期 CHINJCANCERPREV TREAT,April2006,Vol.13 No 热 休 克 蛋 白 70 和 90α 在 人 胃 癌 组 织 中 表 达 及 其 与 胃 癌 生 物 学 行 为 的 关 系 临 床 研 究 张 剑 军 1, 徐 惠 绵 1, 阎 影 1, 王 振 宁 1, 赵 宜 良 2, 张 涛 2, 赵 岩 2 1. 中 国 医 科 大 学 附 属 第 一 医 院 肿 瘤 科, 辽 宁 沈 阳 辽 宁 省 肿 瘤 医 院 外 三 科, 辽 宁 沈 阳 Expressionofheatshockprotein70andheatshockprotein90αingastriccancerandits relationtobiologicalbehaviorsofgastriccarcinoma 犣 犎 犃 犖 犌 犑 犻 犪 狀 犼 狌 狀 1, 犡 犝 犎 狌 犻 犿 犻 犪 狀 1, 犢 犃 犖 犢 犻 狀 1 犵, 犠 犃 犖 犌 犣 犺 犲 狀 狀 犻 狀 1 犵, 犣 犎 犃 犗 犢 犻 犾 犻 犪 狀 2 犵, 犣 犎 犃 犖 犌 犜 犪 狅 2 2, 犣 犎 犃 犗 犢 犪 狀 1. 犇 犲 狆 犪 狉 狋 犿 犲 狀 狋 狅 犳 犗 狀 犮 狅 犾 狅 犵 狔,1 狊 狋 犃 犳 犳 犻 犾 犻 犪 狋 犻 狅 狀 犎 狅 狊 狆 犻 狋 犪 犾, 犆 犺 犻 狀 犪 犕 犲 犱 犻 犮 犪 犾 犝 狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 狔, 犛 犺 犲 狀 狔 犪 狀 犵 , 犘. 犚. 犆 犺 犻 狀 犪 2. 犇 犲 狆 犪 狉 狋 犿 犲 狀 狋 狅 犳 犛 狌 狉 犵 犲 狉 狔 犜 犺 犻 狉 犱, 犔 犻 犪 狅 狀 犻 狀 犵 犘 狉 狅 狏 犻 狀 犮 犲 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犎 狅 狊 狆 犻 狋 犪 犾, 犛 犺 犲 狀 狔 犪 狀 犵 犛 犺 犲 狀 狔 犪 狀 犵 , 犘. 犚. 犆 犺 犻 狀 犪 摘 要 目 的 : 研 究 热 休 克 蛋 白 70 和 90α 在 人 胃 癌 组 织 和 正 常 黏 膜 组 织 中 的 表 达, 探 讨 其 表 达 与 胃 癌 生 物 学 行 为 的 关 系 方 法 :41 例 胃 癌 组 织 和 相 应 的 正 常 黏 膜 组 织 分 别 行 免 疫 组 织 化 学 染 色 和 RT PCR 检 测, 分 析 检 测 结 果 结 果 : 热 休 克 蛋 白 70 和 90α 在 胃 癌 组 织 中 表 达 分 别 为 75.6% (31/41) 和 80.5% (33/41), 明 显 高 于 正 常 黏 膜 组 织 中 的 表 达, 在 分 化 较 差 的 肿 瘤 类 型 中 表 达 分 别 为 85.2% 和 88.9%, 高 于 分 化 较 好 的 肿 瘤 类 型, 在 淋 巴 结 转 移 阳 性 的 病 例 中 分 别 为 82.8% 和 86.2%, 高 于 淋 巴 结 转 移 阴 性 的 病 例, 在 TNM 分 期 Ⅲ Ⅳ 期 的 病 例 中 表 达 分 别 为 80.6% 和 83.9%, 高 于 其 他 分 期 结 论 : 热 休 克 蛋 白 70 和 90α 在 胃 癌 组 织 中 明 显 表 达 升 高, 且 在 晚 期 的 病 例 中 表 达 高 于 相 对 较 早 期 的 病 例, 与 胃 癌 的 生 物 学 行 为 有 关 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2006,13(7): [ 犃 犅 犛 犜 犚 犃 犆 犜 ] 犗 犅 犑 犈 犆 犜 犐 犞 犈 :Toassesstheexpressionsofheatshock protein70andheatshockprotein90αingastriccancerandnormalmu cosa,andtodeterminetheirrelationtobiologicalbehaviorsofgastric carcinoma. 犕 犈 犜 犎 犗 犇 犛 :Immunohistochemicalstaining and RT PCR wereperformedin41casesofgastriccancerandnormalmucosaforthe expressionsofhsp70and90α,andtheresultswereanalysised. 犚 犈 犛 犝 犔 犜 犛 :Thepositiveexpressionratesof HSP70 and HSP90α were 75.6% (31/41)and80.5% (33/41)ingastriccancer,respectively, theywerehigherthanonesinmucosa,thepositiveexpressionratesof HSP70and90αinpoordiferentiationcancerwere85.2% and88.9%, respectively,higherthanonesingooddiferentiationcancer.theposi tiveexpressionratesofthemingastriccancerwithlymphnodemetaste siswere82.8% and86.2%,respectively,higherthanonesingastric cancerwithoutlymphnodemetastesis.thepositiveexpressionratesof themin Ⅲ,Ⅳ stage were80.6% and83.9%,respectively,higher thanonesinotherstages. 犆 犗 犖 犆 犔 犝 犛 犐 犗 犖 犛 :TheexpressionsofHSP70 and HSP90αincreaseingastriccancer,andthey werehigherinad vancedstagetumorthanonesinearlystagetumor,andthey were closelyrelatedtothebiologicalbehaviorsofgastriccarcinoma. 犆 犺 犻 狀 犑 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犘 狉 犲 狏 犜 狉 犲 犪 狋,2006,13(7): 关 键 词 胃 肿 瘤 / 病 理 学 ; 热 休 克 蛋 白 质 70; 热 休 克 蛋 白 质 90; 免 疫 组 织 化 学 [ 犓 犈 犢 犠 犗 犚 犇 犛 ] stomachneoplasms/pathology;heatshockproteins70;heatshockproteins90;immunohistochemistry 中 图 分 类 号 R735.2 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2006) HSP 是 广 泛 存 在 于 生 物 体 的 应 激 蛋 白, 在 应 激 条 件 下,HSP 在 细 胞 体 内 迅 速 选 择 性 积 聚 热 休 克 蛋 白 第 一 作 者 简 介 张 剑 军, 男, 辽 宁 沈 阳 人, 副 主 任 医 师, 博 士, 主 要 从 事 胃 肿 瘤 的 研 究 工 作 Tel: E mail:zhangj70@hotmail.com 通 讯 作 者 简 介 徐 惠 绵, 男, 辽 宁 海 城 人, 博 士, 教 授, 主 任 医 师, 主 要 从 事 胃 肠 道 肿 瘤 的 研 究 工 作 [1] 根 据 其 相 对 分 子 质 量 大 小 通 常 被 分 为 4 个 家 族, HSP90 HSP70 HSP60 及 小 HSP, 另 有 相 对 分 子 质 量 在 (100~110) 10 3 的 大 分 子 HSP 由 于 HSP 参 与 蛋 白 折 叠 转 运 机 体 免 疫 和 细 胞 凋 亡 等 多 种 生 理 功 能 因 此, 热 休 克 蛋 白 至 今 仍 是 研 究 热 点 之 一 本 实 验 研 究 热 休 克 蛋 白 70 90α 在 人 类 胃 癌 组 织 中 的 表 达, 为 热 休 克 蛋 白 70 90α 在 胃 癌 的 治 疗 中 应 用 提 供 理 论 基 础 Tel:

16 496 张 剑 军, 等 热 休 克 蛋 白 70 和 90α 在 人 胃 癌 组 织 中 表 达 及 其 与 胃 癌 生 物 学 行 为 的 关 系 1 材 料 与 方 法 1.1 标 本 来 源 标 本 来 源 于 辽 宁 省 肿 瘤 医 院 外 二 科 2001 年 6 月 ~2002 年 6 月 手 术 切 除 的 新 鲜 标 本 41 例 41 例 患 者 中, 男 29 例, 女 12 例 年 龄 40~78 岁, 中 位 年 龄 64.7 岁 全 部 病 例 均 经 手 术 治 疗, 手 术 后 病 理 资 料 处 理 按 日 本 胃 癌 规 约 标 准 及 国 际 胃 癌 TNM 分 期 标 [2] 准 胃 癌 手 术 切 除 标 本 在 肿 瘤 生 长 良 好 无 坏 死 区 域 取 材 2 块, 另 在 距 离 肿 瘤 最 远 的 黏 膜 组 织 取 材 2 块, 肿 瘤 组 织 和 正 常 黏 膜 组 织 各 1 块 -80 冰 箱 保 存 用 于 RT PCR 检 测 另 1 块 组 织 经 多 聚 甲 醛 固 定 过 夜, 常 规 石 蜡 包 埋, 切 片 厚 度 5μm 1.2 主 要 试 剂 Trizol( 美 国 Invitrogen),Taq 酶 ( 日 本 TaKaRa), RT PCR 试 剂 盒 购 于 大 连 宝 生 物 有 限 公 司, 免 疫 组 化 用 鼠 抗 人 热 休 克 蛋 白 70 单 克 隆 抗 体 免 疫 组 化 用 兔 抗 人 热 休 克 蛋 白 90α 多 克 隆 抗 体 及 即 用 型 SABC 免 疫 组 化 染 色 试 剂 盒 均 购 自 武 汉 博 士 德 公 司 1.3 RT PCR 检 测 用 Trizol 试 剂 从 组 织 中 提 取 总 RNA, 以 RNA 为 模 板, 将 RNA 逆 转 录 成 cdna: 反 应 条 件 为 :42 60 min,95 5 min 灭 活 逆 转 录 酶,4 5 min 然 后 以 cdna 为 模 板 进 行 PCR 扩 增 反 应 条 件 为 95 预 变 性 5min,94 1min,53 1min,72 2min, 循 环 次 数 为 25 次, 最 后 72 延 伸 5min, 以 β actin 为 相 应 内 对 照 引 物 序 列 及 片 段 长 度 如 下 :HSP70, 上 游 5 T GCCCGCCTACTTCAACGA 3, 下 游 5 CCGCGT GATGGACGTGTAG 3, 片 段 长 度 461bp;HSP90, 上 游 5 GTCTGGGTATCGGAAAGCAAG 3, 下 游 5 GTGAGGGTTGGGGATGATGTC 3, 片 段 长 度 303 bp; β actin, 上 游 5 GATTGCCTCAGGACAT TTCTG 3, 下 游 5 GATTGCTCAGGACATTTCT G 3, 片 段 长 度 690bp PCR 扩 增 产 物 在 3% 琼 脂 糖 凝 胶 中 电 泳, 凝 胶 自 动 成 像 分 析 系 统 测 定 每 条 DNA 扩 增 带 的 光 密 度 值, 靶 基 因 DNA 扩 增 带 光 密 度 与 内 参 照 β actin 扩 增 带 光 密 度 的 比 值 (e/c) 作 为 靶 基 因 mrna 表 达 水 平 的 半 定 量 指 标 1.4 免 疫 组 化 检 测 按 试 剂 盒 说 明 书 操 作, 全 部 切 片 由 2 位 有 经 验 的 病 理 医 师 观 察 并 诊 断 HSP70 90α 阳 性 染 色 结 果 为 胞 质 内 棕 黄 色 颗 粒, 依 据 阳 性 细 胞 百 分 比 作 为 判 定 标 准,<10% 为 阴 性 (-), 10% 为 阳 性 (+) 1.5 统 计 学 处 理 采 用 SPSS11.0 软 件 进 行 χ 2 检 验 和 配 对 狋 检 验 统 计 学 分 析 犘 0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 2 结 果 2.1 免 疫 组 织 化 学 结 果 热 休 克 蛋 白 70 90α 在 胃 癌 组 织 中 的 表 达 多 为 阳 性 甚 至 强 阳 性, 阳 性 率 分 别 为 75.6% (31/41) 和 80.5%(33/41), 而 在 癌 旁 组 织 中 多 为 阴 性 或 弱 阳 性, 没 有 强 阳 性, 阳 性 率 只 为 29.3% (12/41) 和 41.5% (17/41), 差 异 有 统 计 学 意 义, 犘 <0.01 热 休 克 蛋 白 70 90α 在 未 分 化 型 癌 中 的 表 达 高 于 分 化 型, 淋 巴 结 转 移 阳 性 的 病 例 中 表 达 高 于 淋 巴 结 转 移 阴 性 的 病 例, 两 者 比 较 差 异 均 有 统 计 学 意 义 热 休 克 蛋 白 70 90α 在 TNM 分 期 Ⅲ 和 Ⅳ 期 的 病 例 中 的 含 量 明 显 高 于 其 他 分 期, 与 Ⅰ 和 Ⅱ 期 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义 ( 表 1,Tab.1) 2.2 RT PCR 结 果 在 胃 癌 组 织 中,HSP70 和 90αmRNA 的 扩 增 产 物 条 带 多 为 阳 性 或 强 阳 性 ( 分 别 为 ± 和 ±0.0488), 在 正 常 黏 膜 组 织 中 多 为 阴 性 或 弱 阳 性 表 达 ( 分 别 为 ± 和 ± ), 两 者 比 较 差 异 有 统 计 学 意 义, 犘 <0.01 在 淋 巴 结 转 移 5 个 以 上 或 发 生 远 隔 转 移 的 病 例 中, HSP70 和 90αmRNA 表 达 的 程 度 明 显 高 于 淋 巴 结 转 移 较 少 或 没 有 转 移 的 病 例 未 分 化 型 癌 与 分 化 型 癌 的 HSP70 和 90αmRNA 的 表 达 亦 有 明 显 的 差 异, 在 未 分 化 型 癌 中 多 为 强 阳 性 表 达 HSP70 和 90αmRNA 在 TNM 分 期 Ⅲ Ⅳ 期 的 病 例 表 达 明 显 高 于 其 他 分 期 ( 表 2,Tab.2) 病 理 因 素 表 1 HSP70 90α 表 达 与 胃 癌 病 理 因 素 的 关 系 ( 狀 ) 狀 HSP70 阳 性 阴 性 HSP90α 阳 性 阴 性 分 化 程 度 分 化 型 未 分 化 型 淋 巴 转 移 阴 性 阳 性 TNM 分 期 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 犘 <0.05 Tab.1 CorelationbetweentheexpressionofHSP7090α andthepathologicalcharacteristicsingastriccancer( 狀 ) Pathological characteristics 狀 HSP HSP90α + - Histologicaldiferentiation Diferentiation Uncliferentiation Lymphaticmetastasis TNMstaging Ⅰ,Ⅱ Ⅲ,Ⅳ 犘 <0.05.

17 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2006 年 4 月 第 13 卷 第 7 期 CHINJCANCERPREV TREAT,April2006,Vol.13 No 病 理 因 素 组 织 类 型 表 2 HSP7090αmRNA 与 胃 癌 病 理 因 素 的 关 系 狀 HSP70/ β actinmrna 分 化 型 ±0.300 未 分 化 型 ±0.227 淋 巴 结 转 移 阴 性 ±0.007 阳 性 ±0.013 TNM 分 期 Ⅰ Ⅱ ±0.008 Ⅲ Ⅳ ±0.298 犘 值 HSP90α/ β actinmrna 犘 值 ± ± ± ± ± ± Tab.2 CorelationbetweentheexpressionofHSP7090α mrnaandpathologicalcharacteristicsingastriccancer Pathological characteristics 狀 Histologicaldiferentiation HSP70/ β actinmrna Diferentiation ±0.300 Undiferentiation ±0.227 Lymphaticmetastasis ± ±0.013 TNMstaging Ⅰ,Ⅱ ±0.008 Ⅲ,Ⅳ ± 讨 论 犘 value HSP90α / β 犘 value actinmrna ± ± ± ± ± ± 热 休 克 蛋 白 的 主 要 功 能 是 维 持 细 胞 蛋 白 质 稳 定, 提 高 细 胞 对 应 激 的 耐 受 性, 增 强 抗 氧 化 作 用, 使 细 胞 维 持 正 常 的 生 理 功 能 在 许 多 情 况 下, 这 是 机 体 的 一 种 保 护 性 反 应, 可 以 使 机 体 不 受 损 害 各 种 HSP 的 功 能 不 尽 相 同,HSP70 在 正 常 组 织 细 胞 中 表 达 水 平 较 低, 在 应 激 或 其 他 因 子 调 节 下, [3] HSP70 可 被 诱 导 而 表 达 量 显 著 增 加 HSP70 与 肿 瘤 的 关 系 密 切, 在 肿 瘤 的 发 生 发 展 以 及 转 移 等 过 程 中, 均 起 到 一 定 的 作 用 HSP90 家 族 是 一 类 具 有 高 度 保 守 性 的 可 溶 性 蛋 白, 能 特 异 的 与 细 胞 功 能 蛋 白 结 合 而 改 变 这 些 蛋 白 的 功 能 状 态 在 正 常 细 胞 中,HSP90 的 表 达 受 细 胞 周 期 调 控, 而 在 肿 瘤 组 织 中,HSP90 呈 持 续 高 表 达, 突 变 或 异 常 蛋 白 的 存 在 刺 激 了 HSP90 的 表 达, 这 种 表 达 以 HSP90α 为 主, 可 以 达 到 正 常 的 2~ 10 倍 除 了 在 正 常 组 织 中 的 功 能 之 外, 近 年 来,HSP 在 肿 瘤 细 胞 中 的 表 达 及 作 用 越 来 越 受 到 广 泛 的 重 视 研 究 证 明 肿 瘤 细 胞 在 高 于 正 常 温 度 2 ~8 的 条 件 下 很 短 的 时 间 就 会 导 致 细 胞 死 亡, 通 过 对 HSP 的 研 究, 了 解 细 胞 的 热 耐 受 能 力, 提 供 了 对 热 治 疗 最 佳 时 机 和 最 佳 时 间 间 隔 的 选 择, 增 加 了 对 肿 瘤 治 疗 获 得 成 功 的 机 会 有 实 验 研 究 表 明 : 骨 肿 瘤 及 胃 肠 肿 瘤 热 疗 后 5 [4] 年 生 存 率 提 高, 个 别 病 例 远 隔 转 移 灶 消 退, 热 疗 后 肿 瘤 细 胞 中 的 HSP70 及 gp96 均 升 高, 动 物 实 验 肿 瘤 热 疗 后 NK 细 胞 活 性 升 高,IL 2 及 TNF( 肿 瘤 坏 死 因 子 ) 的 水 平 也 升 高, 这 些 都 表 明 HSP 诱 发 了 机 体 抗 肿 瘤 的 免 疫 作 用 进 一 步 研 究 HSP 与 机 体 对 抗 肿 瘤 化 疗 药 物 的 耐 受 能 力 的 关 系, 对 减 轻 肿 瘤 化 疗 所 带 来 的 伤 害 同 样 具 有 重 要 价 值 现 有 的 研 究 结 果 表 明,HSP 能 够 增 加 肿 瘤 细 胞 的 免 疫 原 性, 肿 瘤 来 源 的 HSP 能 够 引 起 针 对 肿 瘤 的 特 异 性 免 疫,HSP 水 平 增 加 能 够 提 供 更 强 [5] 的 免 疫 刺 激 信 号 以 打 破 肿 瘤 抗 原 的 耐 受 这 些 [6] HSP 可 能 作 为 被 T 细 胞 和 NK 细 胞 识 别 的 靶 结 构 在 我 们 的 研 究 中,HSP70 90α 在 胃 癌 组 织 中 的 表 达 多 为 强 阳 性 表 达, 且 表 达 量 明 显 高 于 正 常 组 织, 在 未 分 化 型 及 淋 巴 结 转 移 阳 性 的 胃 癌 组 织 中 高 于 分 化 型 及 淋 巴 结 转 移 阴 性 的 胃 癌 病 例 在 胃 癌 病 例 中,HSP70 90α 在 不 同 的 TNM 分 期 表 达 有 明 显 区 别, 在 Ⅲ Ⅳ 期 病 例 中 的 表 达 明 显 高 于 其 他 分 期 RT PCR 检 测 结 果 同 样 从 分 子 水 平 证 实 了 HSP70 90α 在 胃 癌 组 织 中 呈 高 表 达, 在 胃 癌 组 织 中, 不 仅 热 休 克 蛋 白 表 达 量 升 高, 编 码 该 蛋 白 的 mrna 也 升 高 HSP70 90α 的 表 达 与 胃 癌 的 生 物 学 行 为 相 关, 而 且 在 伴 有 转 移 的 胃 癌 及 分 化 较 差 的 胃 癌 病 例 中, 其 表 达 明 显 升 高 肿 瘤 细 胞 作 为 机 体 内 的 新 生 物, 虽 然 受 到 机 体 免 疫 系 统 的 监 视, 但 其 自 身 合 成 的 热 休 克 蛋 白 同 样 可 以 保 护 肿 瘤 细 胞 不 受 外 界 的 作 用 因 此, 肿 瘤 组 织 中 的 热 休 克 蛋 白 是 一 种 保 护 性 蛋 白 同 时, 肿 瘤 组 织 中 的 热 休 克 蛋 白 在 肿 瘤 蛋 白 合 成 和 加 工 的 过 程 中, 携 带 了 大 量 的 肿 瘤 抗 原 因 此, 肿 瘤 组 织 中 分 离 得 到 的 热 休 克 蛋 白 可 以 用 作 识 别 和 鉴 定 肿 瘤 特 异 性 和 非 特 异 性 抗 原 的 目 的 蛋 白 进 一 步 研 究 可 以 为 肿 瘤 的 特 异 性 和 非 特 异 性 免 疫 治 疗 提 供 可 靠 的 依 据 和 手 段 参 考 文 献 [1] Welch WJ.Mammalianstressresponse:celphysiology,struc ture/functionofstressproteins,andimplicationsfor medicine anddisease[j].physiolrev,1992,72(4): [2] 日 本 胃 癌 学 会. 胃 癌 取 及 い 规 约 [M]. 第 13 版. 金 原 出 版 株 式 会 社,1999:06. [3] D'SilvaP,Walter W,MarszalekJ,etal.Regulatedcyclingof mitochondrialhsp70attheproteinimportchannel[j].science, 2003,300(5616): [4] Welch W J.Heatshockproteinsasbiomarkersforstrokeand trauma[j].amjmed,2001,111(8): [5] KatoK,ItoH,HasegawaK,etal.Enhancementofstress in ducedsynthesisofstressproteinsbymastoparaninc6ratglioma cels[j].jbiochem (Tokyo),1995,118(1): [6] ConroySE,GibsonSL,BrunstromG,etal.Autoantibodiesto 90kDheat shockproteininseraofbreastcancerpatients[j]. Lancet,1995,345(8942): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 宋 希 林 )

18 498 瞿 卫, 等 胃 癌 生 长 抑 素 受 体 mrna 表 达 的 研 究 胃 癌 生 长 抑 素 受 体 mrna 表 达 的 研 究 临 床 研 究 瞿 卫, 王 自 正, 王 书 奎, 王 峰 南 京 医 科 大 学 附 属 南 京 第 一 医 院 中 心 实 验 室, 江 苏 南 京 StudyonmRNAexpressionsofsubtypesofsomatostatinreceptorsingastriccarcinoma 犙 犝 犠 犲 犻, 犠 犃 犖 犌 犣 犻 狕 犺 犲 狀 犵, 犠 犃 犖 犌 犛 犺 狌 犽 狌 犻, 犠 犃 犖 犌 犉 犲 狀 犵 犖 犪 狀 犼 犻 狀 犵 犉 犻 狉 狊 狋 犎 狅 狊 狆 犻 狋 犪 犾 犃 犳 犻 犾 犪 狋 犲 犱 狋 狅 犖 犪 狀 犼 犻 狀 犵 犕 犲 犱 犻 犮 犪 犾 犝 狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 狔, 犖 犪 狀 犼 犻 狀 犵 , 犘. 犚. 犆 犺 犻 狀 犪 摘 要 目 的 : 研 究 胃 癌 组 织 中 生 长 抑 素 受 体 (SSTR) 各 亚 型 的 分 布 与 表 达 特 性 方 法 : 用 逆 转 录 聚 合 酶 链 反 应 (RT PCR) 检 测 24 例 胃 癌 肿 瘤 组 织 与 癌 旁 正 常 组 织 中 5 种 SSTR 亚 型 mrna 的 表 达 结 果 : 胃 癌 肿 瘤 组 织 及 癌 旁 组 织 中 SSTR1 2 5mRNA 阳 性 表 达 率 均 为 100%(24/24);SSTR3 4mRNA 在 肿 瘤 组 织 的 阳 性 表 达 率 分 别 为 79%(19/24) 和 71%(17/24), 在 癌 旁 组 织 的 阳 性 表 达 率 分 别 为 83%(20/24) 和 75% (18/24) RT PCR 产 物 凝 胶 定 量 分 析 结 果 表 明 胃 癌 肿 瘤 组 织 各 型 生 长 抑 素 受 体 mrna 的 表 达 量 均 较 癌 旁 组 织 为 低, 但 差 异 无 统 计 学 意 义, 犘 >0.05 胃 癌 肿 瘤 组 织 中 以 SSTR2 mrna 表 达 量 最 高, 其 次 为 SSTR5 SSTR1 SSTR3mRNA,SSTR4mRNA 表 达 量 最 低 结 论 : 胃 癌 肿 瘤 组 织 中 存 在 5 种 生 长 抑 素 受 体 亚 型 的 表 达, 并 以 SSTR2 的 表 达 最 为 显 著 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2006,13(7): [ 犃 犅 犛 犜 犚 犃 犆 犜 ] 犗 犅 犑 犈 犆 犜 犐 犞 犈 :Tostudytheexpressionand distributionof5subtypesofsomatostatinreceptors(sstr1-5) ingastriccarcinoma. 犕 犈 犜 犎 犗 犇 犛 :The mrna expressions of SSTR1-5incentralandadjacenttissuesofgastriccarcinoma weredetectedbyrt PCRtechnique. 犚 犈 犛 犝 犔 犜 犛 :Positiveexpres sionratesofsstr1,sstr2andsstr5mrna were100%in centralandadjacenttissuesofgastriccarcinoma,whilesstr3 andsstr4 mrna were79% and71% incentraltissueand 83%and75%inadjacenttissueofgastriccarcinoma,respective ly.themrnaexpressionsof5sstrintumortissuewerelow erthan whoseinadjacenttissue,buttherewasnosignificant diferencebetweencentraland adjacenttissues, 犘 >0.05. 犆 犗 犖 犛 犔 犝 犛 犐 犗 犖 :ThereismRNAexpressionsof5subtypesofso matostatinreceptorsingastriccarcinoma,andthe mrnaex pressionofsstr2ishigherthanthatoftheothers. 犆 犺 犻 狀 犑 犆 犪 狀 犮 犲 狉 犘 狉 犲 狏 犜 狉 犲 犪 狋,2006,13(7): 关 键 词 胃 肿 瘤 ; 受 体, 生 长 抑 素 ;RNA, 信 使 ; 基 因 表 达 [ 犓 犈 犢 犠 犗 犚 犇 犛 ] gastricneoplasm;receptors,somatostatin;rna,messenger;geneexpression 中 图 分 类 号 R735.2;R73-36 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2006) 生 长 抑 素 受 体 属 于 一 类 G 蛋 白 偶 联 的 受 体 家 族, 广 泛 分 布 于 神 经 内 分 泌 肿 瘤 的 细 胞 膜 上 以 往 的 研 究 证 实 垂 体 腺 瘤 胃 肠 道 类 癌 瘤 小 细 胞 肺 癌 和 乳 腺 癌 等 [1] SSTR 表 达 的 阳 性 率 均 在 70% 以 上 但 对 它 们 在 胃 实 体 瘤 中 的 表 达 报 道 较 少 我 们 通 过 RT PCR 方 法 研 究 胃 癌 组 织 中 SSTR 各 亚 型 mrna 的 表 达, 以 探 讨 应 用 生 长 抑 素 类 似 物 治 疗 胃 癌 的 可 能 性 1 材 料 与 方 法 1.1 标 本 来 源 收 集 2002 年 3 月 ~2003 年 3 月 无 锡 市 第 二 人 民 医 院 14 例 和 南 京 市 第 一 医 院 10 例 手 术 切 除 的 胃 癌 标 本 24 例 患 者 中, 男 18 例, 中 位 年 龄 为 60 岁 (44~74 通 讯 作 者 简 介 瞿 卫, 女, 江 苏 南 京 人, 主 管 技 师, 主 要 从 事 肿 瘤 分 子 生 物 学 的 研 究 工 作 Tel: E mail:njquwei@yahoo.com.cn 岁 ); 女 6 例, 中 位 年 龄 为 57 岁 (38~77 岁 ) 均 经 病 理 组 织 学 确 诊 收 集 肿 瘤 组 织 和 癌 旁 组 织 ( 病 理 明 确 无 癌 组 织, 距 离 癌 灶 5cm 外 ) 各 一 份, 于 液 氮 中 保 存 1.2 试 剂 TRIzol 试 剂 购 自 lifetechnologies 公 司,RT PCR 试 剂 盒 购 自 Promega 公 司,pUC Mix Marker 购 自 上 海 生 物 工 程 公 司 寡 核 苷 酸 引 物 由 上 海 博 亚 公 司 合 成 其 余 试 剂 为 国 产 分 析 纯 1.3 总 RNA 的 提 取 组 织 标 本 用 TRIzol 一 步 法 抽 提 总 RNA, 于 72 保 存 备 用 1.4 RT PCR 反 应 根 据 文 献 [2] 合 成 下 列 引 物 SSTR1(334bp) 上 游 :5 AGCCGGTTGACTATTATGCC 3, 下 游 :5 G CTCTCACTTCTACCATTGTC 3 ;SSTR2(461bp) 上 游 :5 GGTGAAGTCCTCTGGAATCG 3, 下 游 :5 CC ATTGCCAGTAGACAGAGC 3 ;SSTR3(221bp) 上 游 :

19 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2006 年 4 月 第 13 卷 第 7 期 CHINJCANCERPREV TREAT,April2006,Vol.13 No TCATCTGCCTCTGCTACCTG 3, 下 游 :5 GAGCC CAAAGACGGCAGGCT 3 ;SSTR4(247bp) 上 游 :5 C GGCAGTCTTCGTGTTCTAC 3, 下 游 :5 GCATCAA GACTGGTCACGAC 3 ;SSTR5(211bp) 上 游 :5 AA CACGCTGGTCATCACGTGGT 3, 下 游 :5 AGACAC TGGTGACTGGTTGAC 3 ;GAPDH(820bp) 上 游 : 5 ATGACCCCTTCATTGACCTC 3, 下 游 :5 AAGT GGTCGTTGAGGGCAAT 3 反 应 体 系 50μL, 包 括 AMV/Tfl5 Bufer10 μl,dntpmix1 μl, 引 物 各 2μL,25mmol/L MgSO 42.5μL,5U/ μ L 的 AMV 逆 转 录 酶 1μL,5 U/ μ L 的 TflDNA 酶 1μL,RNA 模 板 2 μl, 无 RNA 酶 水 28.5μL 扩 增 条 件 如 下 :48 逆 转 录 45min,94 2 min, 变 性 (SSTR1 2 和 GAPDH:95 30s;SSTR3 4 5:94 1 min), 退 火 (SSTR2 和 GAP DH:63 1 min;sstr :60 1 min), 延 伸 (SSTR1 2 和 GAPDH:72 2min;SSTR3 4 5:72 1 min15s),40 个 循 环 1.5 RT PCR 扩 增 产 物 电 泳 及 分 析 取 10μLRT PCR 产 物, 溴 化 乙 锭 染 色, 在 1.7% 琼 脂 糖 凝 胶 上 进 行 电 泳 (100V,30 min), 电 泳 图 谱 经 复 日 FR 980 生 物 电 泳 图 象 分 析 系 统 拍 照, 保 留 图 谱, 用 smartview 分 析 软 件 分 析 结 果 GAPDH 作 为 内 标, 分 别 计 算 每 个 标 本 SSTR1~5 与 其 GAPDH 的 比 值, 示 SSTR mrna 表 达 水 平 1.6 统 计 学 分 析 数 据 以 狓 ± 狊 表 示 采 用 SPSS10.0 统 计 学 软 件 包 进 行 配 对 资 料 的 狋 检 验, 检 验 水 准 为 结 果 2.1 SSTR1~5mRNA 在 胃 癌 组 织 及 癌 旁 组 织 的 定 性 分 布 胃 癌 患 者 肿 瘤 组 织 及 癌 旁 组 织 中 SSTR1 2 5mR NA 的 阳 性 表 达 率 均 为 100%, 而 SSTR3 4 mrna 在 肿 瘤 组 织 的 阳 性 表 达 率 分 别 为 79% 和 71%, 在 癌 旁 组 织 中 的 阳 性 表 达 率 分 别 为 83% 和 75%( 表 1,Tab.1) 2.2 SSTR1~5mRNA 在 胃 癌 组 织 及 癌 旁 组 织 的 表 达 RT PCR 产 物 凝 胶 定 量 分 析 结 果 表 明, 胃 癌 肿 瘤 组 织 中 每 一 种 亚 型 生 长 抑 素 受 体 mrna 的 表 达 量 均 较 癌 旁 正 常 组 织 为 低, 但 差 异 无 统 计 学 意 义, 犘 >0.05 胃 癌 肿 瘤 组 织 以 SSTR2 mrna 表 达 量 最 高, 其 次 为 SSTR5 SSTR1 SSTR3 mrna,sstr4 mrna 的 表 达 量 最 低 ( 图 1,Fig.1; 图 2,Fig.2) 表 1 5 种 SSTR 亚 型 mrna 在 胃 癌 及 癌 旁 组 织 中 分 布 [ 狀 (%)] 标 本 来 源 例 数 SSTR1 SSTR2 SSTR3 SSTR4 SSTR5 肿 瘤 组 织 24 24(100.0) 24(100.0) 19(79.2) 17(70.8) 24(100.0) 癌 旁 组 织 24 24(100.0) 24(100.0) 20(83.3) 18(75.0) 24(100.0) Tab.1 DistributionofSSTR1 5mRNAincentralandadjacenttissuesofgastriccarcinoma[ 狀 (%)] Samplesource 狀 SSTR1 SSTR2 SSTR3 SSTR4 SSTR5 Centraltissue 24 24(100.0) 24(100.0) 19(79.2) 17(70.8) 24(100.0) Adjacenttissue 24 24(100.0) 24(100.0) 20(83.3) 18(75.0) 24(100.0) 图 2 胃 癌 组 织 及 癌 旁 组 织 各 型 生 长 抑 素 受 体 mrna 的 表 达 ( 每 一 柱 代 表 各 亚 型 的 狓 - ± 狊 ) 从 右 到 左 分 别 为 :DNA Marker,GAPDH,SSTR1,SSTR2,SSTR3, SSTR4,SSTR5 DNA Marker 从 上 到 下 各 片 段 长 度 分 别 为 和 190bp 图 1 SSTR 各 亚 型 RT PCR 产 物 1.7% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 图 Fromrighttoleft:DNA Marker,GAPDH,SSTR1,SSTR2, SSTR3,SSTR4,SSTR5. Fig.1 ExpressionsofSSTR1-5mRNAin1.7% agarose gelelectrophoresis Fig.2 ExpressionsofSSTR1-5mRNAincentralandadjacent tissuesofgastriccarcinoma(eachbargraphshowsmeans 狓 - ± 狊 ) 3 讨 论 生 长 抑 素 是 一 种 环 状 多 肽, 有 二 种 活 性 形 式, 即 14 肽 生 长 抑 素 (SST 14) 和 28 肽 生 长 抑 素 (SST 28), 生 长 抑 素 及 其 类 似 物 可 通 过 与 生 长 抑 素 受 体 (SSTR) 结 合 而 发 挥 抗 肿 瘤 的 作 用, 包 括 直 接 或 间 接 抑 制 肿 瘤 细 胞 的 增 殖 和 分 化 促 进 肿 瘤 细 胞 凋 亡 抑 制 肿 瘤 血 管

20 500 瞿 卫, 等 胃 癌 生 长 抑 素 受 体 mrna 表 达 的 研 究 [3-5] 形 成 等 生 长 抑 素 受 体 是 细 胞 膜 的 一 种 糖 蛋 白, 到 目 前 为 止 共 发 现 5 种 亚 型 根 据 氨 基 酸 序 列 同 源 性 的 高 低 及 与 此 相 关 配 体 的 选 择 性 及 功 能 应 答 的 相 似 性, 将 SSTR 家 族 分 为 两 类, 一 为 SSTR1 SSTR4 组 成 的 亚 族, 二 为 SSTR2 3 5 组 成 的 亚 族 有 研 究 认 为, SSTR1~4 与 SST 14 和 SST 28 亲 和 力 相 似, 而 [6] SSTR5 更 易 与 SST 28 给 合 许 多 肿 瘤 表 达 SSTR, 并 且 通 常 表 达 不 止 一 种 亚 [7] 型 Papoti 等 研 究 了 胃 类 癌 生 长 抑 素 受 体 5 种 亚 型 的 表 达, 发 现 肿 瘤 组 织 均 表 达 SSTR1 SSTR2 SSTR3 和 SSTR5, 而 仅 少 数 病 例 有 SSTR4 的 表 达 我 们 的 研 究 结 果 显 示, 在 胃 癌 患 者 的 肿 瘤 组 织 中 同 样 存 在 生 长 抑 素 5 种 受 体 亚 型 的 表 达, 但 呈 不 均 一 性, 以 SSTR2mR NA 的 表 达 量 最 高, 其 次 为 SSTR5 SSTR1 SSTR3mR NA,SSTR4mRNA 的 表 达 量 最 低 目 前 的 研 究 认 为, SSTR1 SSTR2 和 SSTR5 主 要 介 导 抗 肿 瘤 增 殖 作 用, 它 们 与 生 长 抑 素 结 合 后, 可 上 调 磷 酸 蛋 白 激 酶 的 活 性, 使 酪 氨 酸 激 酶 发 生 去 磷 酸 化 而 失 活, 从 而 抑 制 肿 瘤 细 胞 的 增 殖 另 外 还 可 通 过 抑 制 肿 瘤 生 长 的 激 素 和 生 长 因 子 [3] 的 作 用 间 接 抑 制 肿 瘤 细 胞 的 增 殖 我 们 的 实 验 结 果 表 明 胃 癌 肿 瘤 组 织 各 生 长 抑 素 受 体 亚 型 的 表 达 均 比 癌 旁 正 常 组 织 为 低, 提 示 在 胃 癌 的 发 生 发 展 中 伴 随 着 SSTR 的 低 表 达, 使 生 长 抑 素 对 胃 癌 增 殖 的 抑 制 作 用 大 大 地 降 低 了 因 此, 胃 癌 组 织 中 生 长 抑 素 受 体 的 下 降 可 能 是 胃 癌 发 生 的 一 个 重 要 因 素 大 量 的 研 究 表 明, 生 长 抑 素 及 其 类 似 物 不 仅 能 抑 制 内 分 泌 肿 瘤 的 增 殖, 对 消 化 系 实 体 性 肿 瘤 亦 存 在 抑 [8] [8] 制 作 用 Kouroumalis 等 对 晚 期 不 能 手 术 的 肝 癌 患 者 应 用 奥 曲 肽 治 疗,6~12 个 月 后 经 B 超 复 查,3cm 以 下 的 癌 结 节 均 消 失, 说 明 奥 曲 肽 对 于 进 展 期 肝 癌 的 治 疗 具 有 重 要 意 义 本 实 验 结 果 表 明 胃 癌 肿 瘤 组 织 中 SSTR2mRNA 的 表 达 量 较 其 他 亚 型 高 因 此, 选 择 对 SSTR2 具 有 高 亲 和 力 的 生 长 抑 素 类 似 物 如 奥 曲 肽,RC 160 等 来 治 疗 胃 癌 可 能 有 一 定 的 疗 效, 这 方 面 有 待 进 一 步 研 究 参 考 文 献 [1] 汪 静, 邓 敬 兰. 生 长 抑 素 受 体 家 族 与 肿 瘤 [J]. 细 胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志,1998,14(4): [2] MariaC,Zateli,FedericoTagliati,etal.somatostatinreceptor subtypes2and5diferentialyafectproliferationinvitroofthe humanmedularythyuoidcarcinomacellinett [J].TheJour nalofclinicalendocrinology & metabolism,2001,86(5): [3] 丁 丽, 姜 藻. 生 长 抑 素 类 似 物 基 因 治 疗 恶 性 肿 瘤 展 望 [J]. 国 外 医 学 肿 瘤 学 分 册,2002,29(4): [4] ChenXJ,LiuZS,QianQ.StudyofOctreotideinhibitgrowth andinduceapoptosisofhumanhepatocelularcarcinomacel[j]. ClinJHepatobiliarySurg,2000,6(8): [5] JiaW O,XuQL,XuR N,etal.Octreotideactsasanantitu morangiogenesiscompound andsuppressestumorgrowthin nude micebearing human hepatocelularcarcinomaxenografts [J].ComcerResclinOncol,2003,129(6): [6] PatelY,SrikantCB.Subtypeselectivityofpeptideanalogsfor alfiveclonedhumansomatostatinreceptor (hsstr1-5)[j]. Endocrinology,1994,135(6): [7] PapotiM,BongiovanniM,VolanteM,etal.Expressionofso matostatinreceptortypesin81casesofgastrointestinalandpan creaticendocrinetumors[j].virchowsarchive,2002,440(5): [8] KouroumalisE,SkordilisP,ThermosK,etal.Treatmentofhep atocelularcarcinoma with octreotide:arandomizedcontroled study[j].gut,1998,42(3): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 于 文 胜 )