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- 弓挂 米
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2 什 么 是 卵 白 蛋 白 OVA? 卵 白 蛋 白 ovalbumin, 缩 写 OVA, 是 鸡 蛋 白 中 的 主 要 蛋 白 成 分, 约 占 总 蛋 白 的 60-65% OVA 是 一 个 糖 蛋 白, 蛋 白 质 分 子 量 为 道 尔 顿 鸡 蛋 白 是 很 常 见 的 过 敏 原 OVA 和 卵 类 粘 蛋 白 (Ovomucoid) 是 鸡 蛋 白 里 面 主 要 的 过 敏 原 为 什 么 选 择 EndoGrade OVA? 内 毒 素 是 一 个 重 要 的 多 效 致 炎 因 子, 因 此, 静 脉 注 射 的 药 品 规 定 内 毒 素 的 含 量 不 能 超 过 5 EU/kg 商 品 化 的 OV A 里 如 果 含 有 高 的 内 毒 素, 会 引 发 炎 症, 不 能 真 实 反 映 OVA 本 身 在 体 内 的 作 用 大 部 分 商 品 化 OVA 不 能 令 人 满 意 的 去 除 内 毒 素, 亦 或 是 需 要 繁 杂 的 步 骤 SDS 沉 淀 或 者 苯 酚 抽 提 也 不 能 有 效 的 去 除 内 毒 素, 或 者 不 能 提 供 可 溶 性 的 蛋 白 溶 液 EndoGrade OVA 产 品 为 体 内 ( 注 射, 气 化 ) 或 者 体 外 ( 细 胞 增 殖 分 析 ) 科 学 研 究 提 供 了 内 毒 素 低 于 1EU/mg 的 OVA, 有 效 避 免 因 残 留 内 毒 素 导 致 的 干 扰 问 题 OVA 应 用 在 哪 些 科 研 领 域? 1 OVA 通 常 被 用 于 作 为 过 敏 原 建 立 一 系 列 实 验 模 型, 比 如 气 道 高 反 应 性 (Airway Hyper Reactivity, AHR) 模 型 动 物 ; 通 过 注 射 和 雾 化 吸 入 OV A 的 方 法 来 制 作 小 鼠 哮 喘 模 型 ; 可 建 立 OVA 变 应 原 致 敏 的 变 应 性 鼻 炎 ( Allergic Rhinitis, AR) 大 鼠 模 型 ;OVA 雾 化 吸 入 制 备 豚 鼠 过 敏 性 支 气 管 哮 喘 动 物 模 型 ; 通 过 OVA 建 立 大 鼠, 小 鼠, 豚 鼠 过 敏 性 休 克 模 型 ; 利 用 OVA 经 皮 致 敏 诱 发 小 鼠 异 位 性 皮 炎 病 变 的 实 验 模 型 2 在 模 型 动 物 里,OVA 作 为 一 种 抗 原, 引 起 特 异 性 免 疫 反 应, 用 于 抗 原 提 呈 信 号 转 导 研 究 3 OVA 蛋 白 疫 苗 或 其 DNA 疫 苗, 通 过 调 节 过 敏 性 哮 喘 的 Th1/Th2 失 平 衡 反 应, 可 预 防 哮 喘 嗜 酸 性 气 道 炎 症, 并 作 为 一 种 疫 苗 治 疗 哮 喘 4 OVA 可 以 作 为 载 体 蛋 白 用 于 与 半 抗 原 及 其 他 抗 原 的 交 联, 使 它 们 在 免 疫 中 具 有 更 强 的 免 疫 原 性 尽 管 不 常 用 于 初 级 免 疫 原 的 制 备, 在 对 使 用 钥 孔 血 蓝 蛋 白 KLH 或 其 他 更 具 免 疫 原 性 的 载 体 蛋 白 生 产 的 抗 体 进 行 分 析 时,OVA 是 一 种 普 遍 使 用 的 载 体 蛋 白 以 使 抗 原 更 经 得 起 检 验 OVA 独 立 的 结 构 使 其 格 外 适 于 作 为 ELISA 中 难 于 处 理 的 肽 段 和 其 他 小 抗 原 的 载 体 尽 管 与 BSA 相 比 更 疏 水, 在 水 相 缓 冲 液 中 的 溶 解 度 更 低, 卵 白 蛋 白 在 高 达 70% 的 DMSO 中 仍 具 有 一 定 的 溶 解 度, 使 其 适 用 于 与 溶 解 需 要 DMSO 的 半 抗 原 的 交 联 同 时 OVA 含 有 大 量 的 伯 胺 和 羧 基 基 团 可 以 成 为 与 戊 二 醛,N- 羟 基 琥 珀 酰 亚 胺 酯,EDC 以 及 其 他 交 联 试 剂 交 联 的 靶 点
3 EndoGrade OVA 内 毒 素 去 除 专 利 蛋 白, 多 糖 和 DNA 样 本 中 去 除 内 毒 素 是 最 困 难 的, 特 别 是 蛋 白 因 为 蛋 白 的 电 荷 状 态 疏 水 性 等 内 在 特 性 抑 制 了 内 毒 素 的 去 除, 同 时 也 容 易 损 失 目 的 蛋 白 噬 菌 体 细 胞 受 体 是 指 在 宿 主 细 胞 表 面, 存 在 着 某 些 可 被 噬 菌 体 吸 附 蛋 白 所 识 别, 并 与 之 特 异 性 结 合 的 正 常 生 理 功 能 物 质 不 同 噬 菌 体 其 细 胞 受 体 各 不 相 同, 有 的 在 细 胞 壁 上, 有 的 则 在 荚 膜 上 鞭 毛 上 或 性 菌 毛 上, 例 如 T3 T4 和 T7 等 噬 菌 体, 其 细 胞 受 体 是 脂 多 糖 噬 菌 体 尾 蛋 白 是 与 细 胞 膜 成 分 结 合 的 蛋 白, 通 常 位 于 噬 菌 体 的 尾 部, 也 存 在 于 头 部, 或 者 存 在 于 没 有 尾 部 的 噬 菌 体 的 衣 壳 上 本 专 利 中 利 用 基 因 工 程 重 组 的 T4 噬 菌 体 尾 蛋 白 p12, 改 变 尾 蛋 白 结 合 部 位 的 氨 基 酸 序 列, 并 经 过 化 学 修 饰, 优 化 其 结 合 内 毒 素 的 特 异 性 和 高 亲 和 性, 还 能 提 高 尾 蛋 白 本 身 的 稳 定 性 和 溶 解 性 重 组 的 T4 p12 固 定 在 某 固 相 载 体 上, 样 本 中 内 毒 素 与 p12 结 合 后, 即 可 达 到 去 除 内 毒 素 的 目 的 用 EDTA 等 螯 合 剂 可 使 p12 与 内 毒 素 分 离, 重 生, 载 体 可 重 复 利 用 来 去 除 内 毒 素 本 专 利 适 应 去 除 的 样 本 很 广 泛, 包 括 蛋 白, 质 粒 DNA, 基 因 组 DNA,RNA, 蛋 白 核 酸 复 合 物, 噬 菌 体, 病 毒, 糖, 疫 苗, 药 物, 透 析 液, 盐 分, 及 其 他 被 内 毒 素 污 染 的 溶 液 运 用 噬 菌 体 技 术 检 测 和 去 除 内 毒 素, 申 请 了 世 界, 美 国, 欧 洲, 香 港 等 专 利 (Publication No.:WO/2004/001418, WO/2005/062051, WO/2006/076905, , , US2009/ A1) 经 过 此 专 利 工 艺 处 理 后,OVA 蛋 白 回 收 率 可 高 达 90% 以 上, 同 时 没 有 改 变 OVA 蛋 白 的 性 质, 有 效 的 去 除 了 内 毒 素 EndoGrade OVA 与 其 他 商 业 化 OVA 比 较 Supplier Protein CAS Item number Batch number Puritiy Endotoxin content SDS- PAGE [EU/mg] LAL- test Sigma Ovalbumin A M7012V >98% Serva Ovalbumin >98% 8.94 Calbiochem Ovalbumin D >98% 9.24 Affymetrix Ovalbumin >98% 37.6 Pangaea Ovalbumin - BC8071 >98% Pangaea Ovalbumin - BB10492 >90% Hyglos Ovalbumin (10 mg) >98% 0.16 EndoGrade OVA 的 内 毒 素 含 量 明 显 低 于 其 他 商 品 化 的 OVA, 仅 为 Sigma 的 0.01%
4 EndoGrade OVA 产 品 的 特 性 描 述 产 品 名 称 其 他 名 称 Swiss-Prot No. CAS No. 分 子 量 消 光 系 数 来 源 制 备 方 法 纯 度 最 大 溶 解 度 内 毒 素 含 量 微 生 物 污 染 检 测 性 状 保 存 条 件 保 质 期 EndoGrade Ovalbumin 卵 白 蛋 白, 片 清 蛋 白, 过 敏 原 Gal d2, Gal d II P 大 约 45 千 道 尔 顿 0.7 ml/mg/cm 鸡 卵 白 从 鸡 卵 白 中 经 过 离 子 交 换 而 得 通 过 SDS-PAGE 检 测, 纯 度 超 过 98% 20 mg/ml OVA 在 1mg/mL 浓 度 下, 内 毒 素 含 量 低 于 1EU/mg 根 据 质 控 规 则 已 经 做 过 污 染 检 测 干 粉, 不 含 盐 分 干 粉 保 存 在 2-8 度, 溶 解 后 保 存 在 -20 度 干 粉 在 2-8 度 条 件 下, 参 考 包 装 上 的 保 质 期 ; 溶 解 后 在 -20 度 条 件 下 可 以 稳 定 保 存 6 个 月 EndoGrade OVA 产 品 信 息 货 号 产 品 名 称 产 品 描 述 EndoGrade Ovalbumin, 10 mg EndoGrade Ovalbumin, 100 mg EndoGrade Ovalbumin, 1000 mg EndoGrade Ovalbumin, Bulk 干 粉 (4 X 2.5mg), 体 内 ( 注 射, 气 化 ) 或 者 体 外 ( 细 胞 增 殖 分 析 ) 科 研 用 干 粉 (4 X 25mg), 体 内 ( 注 射, 气 化 ) 或 者 体 外 ( 细 胞 增 殖 分 析 ) 科 研 用 干 粉 (4 X 250mg), 体 内 ( 注 射, 气 化 ) 或 者 体 外 ( 细 胞 增 殖 分 析 ) 科 研 用 干 粉 ( 大 于 1g), 体 内 ( 注 射, 气 化 ) 或 者 体 外 ( 细 胞 增 殖 分 析 ) 科 研 用 &
5 EndoGrade OVA 实 验 结 果 举 例 EndoGrade OVA 在 DC 细 胞 中, 没 有 诱 导 IL- 12 的 表 达, 而 对 照 用 的 其 他 商 品 化 OVA 产 品 却 诱 导 了 IL- 12 的 表 达 证 明 EndoGrade OVA 中 内 毒 素 含 量 低, 更 适 于 科 学 研 究 引 自 Allergo Journal 2007, 16: 441 引 用 EndoGrade OVA 发 表 过 的 主 要 文 献 1 Micrometer-Sized Titanium Particles Can Induce Potent Th2-Type Responses through TLR4-Independent Pathways. Pankaj K. Mishra, et al. The Journal of Immunology, 2011, December 15; 187(12), Pages Plasmacytoid dendritic cell derived type I interferon is crucial for the adjuvant activity of Toll-like receptor 7 agonists. Deepa Rajagopal, et al. Blood, 11 March 2010, Vol. 115, No. 10, Pages Mycobacterium bovis BCG decreases MHC-II expression in vivo on murine lung macrophages and dendritic cells during aerosol infection. Nicole D. Pecoraa, et al. Cellular Immunology, Volume 254, Issue 2, 2009, Pages Spatial and mechanistic separation of cross-presentation and endogenous antigen presentation. Burgdorf S, et al. Nature Immunology, 2008 May; 9(5), Pages Use of a genetic cholera toxin B subunit/allergen fusion molecule as mucosal delivery system with immunosuppressive activity against Th2 immune responses. Merima Bublina, et al. Vaccine, Volume 25, Issue 50, December 5, 2007, Pages & & info@youzre.com
6 Trap 内 毒 素 去 除 什 么 是 内 毒 素? 内 毒 素 是 一 种 脂 多 糖 (Lipopolysaccharide,LPS), 是 革 兰 氏 阴 性 菌 的 细 胞 壁 外 壁 层 上 特 有 的 结 构, 细 菌 死 亡 或 分 解 后 释 出 的 毒 素, 又 称 之 为 热 原 内 毒 素 主 要 由 类 脂 A (lipid A) 核 心 寡 糖 (core oligosaccharide) 和 O- 特 异 性 多 糖 (O- specific polysaccharide,o-antigen) 三 部 分 组 成 内 层 ( 类 脂 A) 和 中 层 ( 核 心 寡 糖 ) 含 有 大 量 的 磷 酸 基 和 羧 基, 因 此 内 毒 素 的 等 电 点 较 低, 约 3.1, 在 通 常 ph 条 件 下 带 负 电 荷 内 毒 素 抗 原 性 弱, 可 刺 激 机 体 产 生 抗 体, 但 无 中 和 作 用, 形 成 抗 毒 素 与 外 毒 素 不 同, 内 毒 素 不 能 被 稀 甲 醛 溶 液 脱 去 毒 性 成 为 类 毒 素 内 毒 素 不 是 蛋 白 质, 因 此 非 常 耐 热 在 100 的 高 温 下 加 热 1 小 时 也 不 会 被 破 坏, 只 有 在 200 的 温 度 下 加 热 2 到 4 个 小 时, 或 用 强 碱 强 酸 或 强 氧 化 剂 加 温 煮 沸 30 分 钟 才 能 破 坏 它 的 生 物 活 性 内 毒 素 具 有 化 学 异 源 性, 不 同 来 源 的 内 毒 素 的 分 子 量 从 几 千 到 几 万 不 等, 且 内 毒 素 的 两 亲 性 使 其 易 在 水 溶 液 中 形 成 分 子 量 高 达 40 万 至 100 万 不 等 的 聚 集 体 内 毒 素 的 性 质 极 不 均 一, 使 得 很 难 找 到 一 种 简 单 或 通 用 的 去 除 方 法 为 什 么 要 检 测 和 去 除 内 毒 素? 在 生 物 技 术 产 业 中, 革 兰 氏 阴 性 菌 被 广 泛 地 应 用 于 生 物 制 品 ( 如 多 肽 和 蛋 白 质 ) 的 生 产, 这 些 产 品 中 经 常 会 含 有 大 量 的 内 毒 素 即 使 生 物 制 品 本 身 不 含 内 毒 素, 也 可 能 由 于 生 产 环 境 或 操 作 过 程 而 受 到 内 毒 素 污 染 内 毒 素 对 人 体 有 很 大 的 危 害 少 量 的 内 毒 素 (20 EU/kg 体 重 ) 静 脉 注 射 就 可 以 引 起 发 烧 腹 泻 等 反 应, 大 剂 量 时 可 引 起 血 液 循 环 障 碍 和 内 毒 素 休 克 内 毒 素 的 主 要 致 病 机 理 是 作 为 致 热 原 刺 激 体 温 调 节 中 枢 引 起 机 体 发 热 ; 直 接 或 间 接 损 害 肝 细 胞, 抑 制 糖 原 的 异 生, 加 速 葡 萄 糖 分 解, 造 成 持 续 低 血 糖 症 ; 引 起 白 细 胞 和 血 小 板 减 少, 激 活 凝 血 纤 溶 系 统, 导 致 弥 漫 性 血 管 内 凝 血 或 严 重 的 休 克 症 状 因 此, 各 国 对 生 物 制 品 的 内 毒 素 含 量 都 有 严 格 的 要 求, 一 般 规 定 每 剂 注 射 用 针 剂 的 内 毒 素 含 量 必 须 低 于 5 EU/kg 体 重 生 物 制 品 中 内 毒 素 的 去 除 一 直 是 一 项 十 分 重 要 的 工 作 内 毒 素 检 测 和 去 除 应 用 在 哪 些 领 域? 内 毒 素 是 大 多 数 生 物 制 品 的 污 染 源, 严 重 影 响 着 医 学 药 学 试 验 和 各 种 药 物 的 质 量 1) 药 物 : 化 学 合 成 的 西 药 植 物 中 提 取 的 中 药, 在 其 合 成 或 提 取 工 艺 过 程 中 被 内 毒 素 所 污 染 2) 生 产 原 料 : 各 种 血 液 制 品 和 细 胞 培 养 基 在 制 备 过 程 中 被 内 毒 素 污 染 3) 生 物 制 剂 : 干 扰 素 白 介 素 或 其 他 重 组 的 各 种 具 有 治 疗 作 用 的 蛋 白 质 或 多 肽, 在 生 产 过 程 中 采 用 大 肠 杆 菌 作 为 表 达 的 载 体, 存 在 内 毒 素 的 污 染 内 毒 素 检 测 和 去 除 在 临 床 上 也 有 很 广 泛 的 应 用 举 例 来 说, 血 液 透 析 用 水 的 内 毒 素 含 量 关 系 到 晚 期 肾 功 能 衰 竭 患 者 的 治 疗 效 果 和 安 全, 检 测 和 去 除 透 析 用 水 中 的 内 毒 素 含 量 至 关 重 要 肝 炎 患 者 常 并 发 内 毒 素 血 症 检 测 血 浆 内 毒 素 水 平 对 判 断 病 情 轻 重 和 预 后 有 一 定 的 临 床 意 义, 指 导 病 毒 性 肝 炎 的 抗 内 毒 素 治 疗 急 性 胰 腺 炎 早 期 测 定 血 浆 内 内 毒 素 有 助 于 判 断 疾 病 的 严 重 程 度, 指 导 治 疗
7 EndoTrap 内 毒 素 去 除 有 哪 些 方 法? 内 毒 素 去 除 主 要 分 为 非 选 择 性 去 除 方 法 和 选 择 性 去 除 方 法 非 选 择 性 去 除 方 法 有 活 性 炭 吸 附 法 ( 兼 容 性 差 ) 萃 取 法 ( 易 损 失 目 的 蛋 白, 有 毒 性 ) 超 滤 法 ( 只 能 去 除 小 分 子 溶 液 中 的 内 毒 素 ) 和 离 子 交 换 法 ( 不 适 合 于 溶 液 中 存 在 其 他 带 负 电 荷 的 物 质 ) 高 温 法 (200 的 温 度 下 加 热 2-4h) 酸 碱 法 ( 强 碱 强 酸 或 强 氧 化 剂 煮 沸 30min) 等 这 些 方 法 存 在 选 择 性 差 内 毒 素 去 除 率 低 和 目 标 蛋 白 回 收 率 低 等 问 题 选 择 性 去 除 方 法 主 要 是 指 亲 和 色 谱 法, 具 有 高 度 的 选 择 性, 是 去 除 内 毒 素 的 一 种 较 为 理 想 的 方 法, 目 前 广 泛 应 用 适 当 的 配 基, 固 相 化 于 基 质 上 做 为 亲 和 介 质, 即 可 成 为 一 种 高 效 能 高 选 择 性 的 内 毒 素 吸 附 剂 组 胺 组 胺 酸 类 多 粘 菌 素 B 聚 阳 离 子 配 基 和 荷 正 电 聚 合 物 等 常 被 用 作 配 基 制 备 亲 和 介 质 用 于 去 除 内 毒 素 为 什 么 选 择 EndoTrap 不 论 是 基 础 科 研, 制 药 工 业 还 是 临 床 应 用 中, 内 毒 素 的 去 除, 不 仅 要 保 护 目 标 产 物 的 活 性, 维 持 原 有 的 空 间 结 构, 还 要 尽 量 减 少 目 标 产 物 的 损 失 EndoTrap 是 运 用 亲 和 层 析 法 来 高 效 去 除 内 毒 素, 能 广 泛 适 应 于 各 种 溶 液 中 的 内 毒 素 去 除, 比 如 蛋 白, 抗 体, 疫 苗, 核 酸 液 及 其 他 溶 液, 同 时 还 能 保 持 样 本 很 高 的 回 收 效 率 对 样 本 PH 值 有 宽 泛 的 耐 受 性, 等 电 点 范 围 广 内 毒 素 检 测 和 去 除 专 利 蛋 白, 多 糖 和 DNA 样 本 中 去 除 内 毒 素 是 最 困 难 的, 特 别 是 蛋 白 因 为 蛋 白 的 电 荷 状 态 疏 水 性 等 内 在 特 性 抑 制 了 内 毒 素 的 去 除, 同 时 也 容 易 损 失 目 的 蛋 白 噬 菌 体 细 胞 受 体 是 指 在 宿 主 细 胞 表 面, 存 在 着 某 些 可 被 噬 菌 体 吸 附 蛋 白 所 识 别, 并 与 之 特 异 性 结 合 的 正 常 生 理 功 能 物 质 不 同 噬 菌 体 其 细 胞 受 体 各 不 相 同, 有 的 在 细 胞 壁 上, 有 的 则 在 荚 膜 上 鞭 毛 上 或 性 菌 毛 上, 例 如 T3 T4 和 T7 等 噬 菌 体, 其 细 胞 受 体 是 脂 多 糖 噬 菌 体 尾 蛋 白 是 与 细 胞 膜 成 分 结 合 的 蛋 白, 通 常 位 于 噬 菌 体 的 尾 部, 也 存 在 于 头 部, 或 者 存 在 于 没 有 尾 部 的 噬 菌 体 的 衣 壳 上 本 专 利 中 利 用 基 因 工 程 重 组 的 T4 噬 菌 体 尾 蛋 白 p12, 改 变 尾 蛋 白 结 合 部 位 的 氨 基 酸 序 列, 并 经 过 化 学 修 饰, 优 化 其 结 合 内 毒 素 的 特 异 性 和 高 亲 和 性, 还 能 提 高 尾 蛋 白 本 身 的 稳 定 性 和 溶 解 性 重 组 的 T4 p12 固 定 在 某 固 相 载 体 上, 样 本 中 内 毒 素 与 p12 结 合 后, 即 可 达 到 去 除 内 毒 素 的 目 的 用 EDTA 等 螯 合 剂 可 使 p12 与 内 毒 素 分 离, 重 生, 载 体 可 重 复 利 用 来 去 除 内 毒 素 本 专 利 适 应 去 除 的 样 本 很 广 泛, 包 括 蛋 白, 质 粒 DNA, 基 因 组 DNA,RNA, 蛋 白 核 酸 复 合 物, 噬 菌 体, 病 毒, 糖, 疫 苗, 药 物, 透 析 液, 盐 分, 及 其 他 被 内 毒 素 污 染 的 溶 液 内 毒 素 的 检 测, 是 利 用 T4 p12 蛋 白 捕 获 内 毒 素 后, 用 重 组 Factor C 蛋 白 检 测 内 毒 素, 利 用 ELISA 原 理 定 量 检 测 内 毒 素 含 量 运 用 噬 菌 体 技 术 检 测 和 去 除 内 毒 素, 申 请 了 世 界, 美 国, 欧 洲, 香 港 等 专 利 (Publication No.:WO/2004/001418, WO/2005/062051, WO/2006/076905, , , US2009/ A1) 经 过 此 专 利 工 艺 处 理 后, 目 的 蛋 白 回 收 率 可 高 达 90% 以 上, 同 时 没 有 改 变 目 的 蛋 白 的 性 质, 有 效 的 去 除 了 内 毒 素
8 EndoTrap 内 毒 素 去 除 产 品 的 特 性 描 述 EndoTrap 是 运 用 亲 和 层 析 法 来 高 效 去 除 内 毒 素, 包 括 EndoTrap blue, EndoTrap red, 和 EndoTrap HD 三 个 系 列 产 品 在 不 降 低 去 除 内 毒 素 的 效 率 下, 整 个 操 作 系 统 至 少 可 重 复 使 用 三 次 ( 一 般 来 说 可 使 用 至 十 次 ) 高 度 特 异 性 及 高 效 率 的 从 复 杂 溶 液 中 去 除 内 毒 素 利 用 重 力 原 理 快 速 简 便 的 进 行 单 次 或 大 批 量 去 除 内 毒 素 可 升 级 到 全 自 动 化 液 相 色 谱 分 析 系 统 平 均 样 本 回 收 率 超 过 95% 对 样 本 PH 值 有 宽 泛 的 耐 受 性, 等 电 点 范 围 广 适 用 于 通 常 用 的 缓 冲 液 及 高 盐 缓 冲 液 可 重 复 使 用 10 次 (EndoTrap HD) 基 质 非 多 黏 杆 菌 素 polymyxin B, 无 毒 性 可 提 供 法 规 文 件 和 毒 性 数 据 资 料 (EndoTrap HD) EndoTrap 内 毒 素 去 除 产 品 信 息 EndoTrap blue EndoTrap red EndoTrap HD 内 毒 素 结 合 能 力 2,000,000 EU/ml 柱 2,000,000 EU/ml 柱 5,000,000 EU/ml 柱 重 复 使 用 性 至 少 3 次 至 少 3 次 至 少 10 次 样 本 PH 范 围 推 荐 使 用 高 盐 溶 液 (>250 mm NaCl) PBS 缓 冲 液 样 本, 钙 离 子 螯 合 剂 溶 液 高 盐 溶 液, 全 自 动 分 析 系 统, 生 物 医 药 生 产
9 EndoTrap HD 在 不 同 样 本 中 的 内 毒 素 去 除 效 率 比 较 样 本 PI 值 样 本 量 样 本 浓 度 去 除 前 内 毒 去 除 后 内 毒 内 毒 素 去 除 样 本 回 配 体 漏 出 (ml) (mg/ml) 素 量 (EU/ml) 素 量 (EU/ml) 效 率 (%) 收 率 (%) (ng/ml) 牛 血 清 白 蛋 白 IgG 溶 菌 酶 < < > > > EndoTrap 内 毒 素 去 除 产 品 信 息 货 号 产 品 名 称 产 品 描 述 EndoTrap blue 1/1 1 x 1 ml 分 离 柱, 125 ml 平 衡 液, 125 ml 再 生 液 EndoTrap blue 5/1 5 x 1 ml 分 离 柱, 250 ml 平 衡 液, 125 ml 再 生 液 EndoTrap blue ml 分 离 柱,250 ml 平 衡 液,250 ml 再 生 液 EndoTrap blue ml 分 离 柱, 125 ml 10x 平 衡 液, 125 ml 10x 再 生 液 EndoTrap red 1/1 1 x 1 ml 分 离 柱, 125 ml 平 衡 液, 125 ml 再 生 液 EndoTrap red 5/1 5 x 1 ml 分 离 柱, 250 ml 平 衡 液, 125 ml 再 生 液 EndoTrap red ml 分 离 柱, 250 ml 平 衡 液 r, 250 ml 再 生 液 EndoTrap red ml 分 离 柱, 125 ml 10x 平 衡 液 r, 125 ml 10x 再 生 液 EndoTrap HD ml 分 离 柱, 再 生 液 EndoTrap HD ml 分 离 柱, 再 生 液 EndoTrap HD ml 分 离 柱, 再 生 液 引 用 EndoTrap 发 表 过 的 主 要 文 献 1.Nematode Asparaginyl-tRNA Synthetase Resolves Intestinal Inflammation in Mice with T-Cell Transfer Colitis. Michael A. Kron, et al. Clin Vaccine Immunol, 2013, 20 (2): T-Cell Responses to the DBLα-Tag, a Short Semi-Conserved Region of the Plasmodium falciparum Membrane Erythrocyte Protein 1. Evelyn N. Gitau, et al. PLoS ONE, 2012; 7(1):e ADAM9 inhibition increases membrane activity of ADAM10 and controls α-secretase processing of amyloid precursor protein. Marcia L. Moss, et al. The Journal of Biological Chemistry, 2011, 286(47):
10 4.Histidine-rich glycoprotein is a novel plasma pattern recognition molecule that recruits IgG to facilitate necrotic cell clearance via FcRI on phagocytes. Ivan K. H. Poon, et al. Blood, 2010, 115(12): Activation of c-kit in dendritic cells regulates T helper cell differentiation and allergic asthma. Nandini Krishnamoorthy, et al. Nature Medicine, 2008, 14: Neutrophils efficiently cross-prime naive T cells in vivo. Celine Beauvillain, et al. Blood, 2007, 110 (8): Prolactin/growth hormone-derived antiangiogenic peptides highlight a potential role of tilted peptides in angiogenesis. Ngoc-Quynh-Nhu Nguyen, et al. PNAS, 2006, 103(39): Serum retinol binding protein 4 contributes to insulin resistance in obesity and type 2 diabetes. Qin Yang, et al. Nature, 2005, 436(7049): 内 毒 素 检 测 有 哪 些 方 法? 内 毒 素 检 测 目 前 内 毒 素 检 测 传 统 的 方 法 有 凝 胶 法 浊 度 法 显 色 基 质 法 免 疫 学 法 等 其 中 凝 胶 法 多 为 定 性 检 查 法, 浊 度 法 和 显 色 基 质 法 属 于 分 光 光 度 法, 为 定 量 检 查 法 浊 度 法 还 可 分 为 终 点 浊 度 法 和 动 态 浊 度 法 ; 显 色 基 质 法 也 可 分 为 终 点 显 色 基 质 法 和 动 态 显 色 基 质 法 目 前 市 场 上 主 要 有 LAL 鲎 试 剂 法, 重 组 蛋 白 Fc 荧 光 法 和 EndoLISA 法 LAL 鲎 试 剂 法 是 目 前 常 用 的 检 测 方 法, 但 是 存 在 响 应 慢 自 动 化 程 度 低 不 能 探 测 到 包 膜 结 合 LPS, 会 低 估 某 些 样 品 中 内 毒 素 的 浓 度, 如 果 样 品 本 身 有 颜 色 或 者 有 沉 淀 会 影 响 检 测, 制 备 时 需 要 捕 杀 稀 有 动 物 鲎 等 缺 点 重 组 蛋 白 Fc 荧 光 法 不 需 要 鲎 的 血 液, 利 用 重 组 Fc 蛋 白 检 测 内 毒 素 含 量, 是 一 种 新 的 方 法 EndoLISA 是 世 界 首 个 基 于 ELISA 的 荧 光 分 析 法, 应 用 高 亲 和 力 的 噬 菌 体 结 合 蛋 白 来 结 合 内 毒 素, 用 重 组 Fc 蛋 白 来 检 测 不 需 要 鲎 的 血 液, 可 高 通 量 操 作
11 为 什 么 选 择 EndoLISA? 世 界 上 第 一 个 基 于 ELISA 原 理 的 内 毒 素 检 测 试 剂 盒 高 灵 敏 度 : 样 本 不 需 要 跟 LAL 法 一 样 稀 释 高 特 异 性 : 只 结 合 内 毒 素, 不 受 葡 聚 糖 的 干 扰 不 需 要 鲎 : 跟 传 统 LAL 法 不 一 样, 不 需 要 鲎 的 血 液 正 努 力 进 入 欧 洲 和 美 国 药 典 EndoLISA 内 毒 素 检 测 与 其 他 传 统 方 法 比 较 方 法 特 点 LAL rfc EndoLISA 传 统 经 典 的 方 法, 需 要 鲎 的 血 液, 同 质 实 验 受 葡 聚 糖 干 扰 故 样 本 需 要 大 量 稀 释 检 测 范 围 窄, 灵 敏 度 能 达 到 0.001EU/mL 写 入 美 国, 欧 洲 等 药 典 不 需 要 鲎 的 血 液, 异 质 实 验 利 用 重 组 Fc 蛋 白 检 测, 不 受 葡 聚 糖 干 扰 灵 敏 度 0.01EU/mL 尚 未 进 入 欧 洲 和 美 国 药 典 应 用 噬 菌 体 结 合 蛋 白 来 结 合 内 毒 素, 亲 和 力 高, 用 重 组 Fc 蛋 白 来 检 测 不 需 要 鲎 的 血 液, 异 质 实 验 可 高 通 量 操 作 灵 敏 度 达 到 0.05EU/mL, 检 测 范 围 达 到 500EU/mL 跟 传 统 的 LAL 法 一 致 性, 相 关 性 很 好 复 杂 基 质 的 抗 干 扰 性 很 好, 所 以 样 本 不 需 要 大 量 的 稀 释 正 努 力 进 入 欧 洲 和 美 国 药 典 EndoLISA 和 EndoZyme 内 毒 素 检 测 产 品 的 特 性 描 述 灵 敏 度 达 到 0.05EU/mL, 检 测 范 围 达 到 500EU/mL 高 特 异 性, 只 结 合 内 毒 素, 不 受 葡 聚 糖 的 干 扰 跟 传 统 的 LAL 法 一 致 性, 相 关 性 很 好 复 杂 基 质 的 抗 干 扰 性 很 好, 样 本 不 需 要 稀 释 不 需 要 鲎 的 血 液, 异 质 实 验 可 高 通 量 操 作 EndoLISA 和 EndoZyme 内 毒 素 检 测 产 品 信 息 货 号 产 品 名 称 产 品 描 述 EndoLISA (2 96 tests) 2 EndoLISA Plate, 2 60 ml Endotoxin- free Water, ml 6 Binding Buffer, 2 Endotoxin Standard, 2 75 ml Wash Buffer,1 2.5 ml Enzyme, ml Substrate, 2 12 ml Assay Buffer, 2 Cover foil EndoZyme (2 96 tests) 2 EndoZyme Plate, ml Enzyme, ml Substrate, 2 Endotoxin Standard, ml Endotoxin- free Water, 2 12ml Assay Buffer 引 用 EndoLISA 发 表 过 的 主 要 文 献 1.Vaccine delivery system for tuberculosis based on nano-sized hepatitis B virus core protein particles. Dhananjayan Dhanasooraj, et al. International Journal of Nanomedicine, March 2, Increased hypoxia-inducible factor 1α expression in lung cells of horses with recurrent airway obstruction. Marie Toussaint, et al. BMC Veterinary Research, May 23, & info@youzre.com
12 ALL FOR CELL SORTING Human Cell Isolation T cells NK cells B Cells Monocytes Dendritic cells Antigen- presenting cells Granulocytes and myeloid cells Leukocytes Erythroid cells Megakaryocytes and platelets Endothelial cells Epithelial cells Fibroblasts Neural cells Cytokine- producing cells Tumor cells Tissue derived cells Mouse Cell Isolation Progenitor cells Neural cells T cells NK cells B cells Macrophages Myeloid derived suppressor cells Kupffer cells Dendritic cells Antigen- presenting cells Granulocytes Leukocytes Endothelial cells Erythroid cells Cytokine- producing cell Tissue derived cells Rat Cell Isolation B cells Dendritic cells NK cells Antigen- presenting cells Neural cells (e.g., SCG from rat pups) Non-human primate Cell Isolation Rhesus monkey T cells Rhesus monkey NK cells Rhesus monkey B cells Rhesus monkey monocytes Rhesus monkey dendritic cells Rhesus monkey leukocytes & info@youzre.com
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附 件 1 国 际 中 药 专 业 高 级 技 术 职 称 评 审 条 件 及 报 名 材 料 一 系 列 ( 一 ) 中 1 高 级 专 科 ( 副 ) 高 级 专 科 ( 副 ) 1 取 得 中 专 科 职 称 后, 独 立 从 事 中 临 床 实 践 5 年 以 上 2 取 得 中 博 士 学 位 后, 临 床 实 践 2 年 以 上 3 取 得 中 硕 士 学 位 后, 临 床 实 践 7
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- 1 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - 做 四 个 全 面 的 宣 传 者 实 践 者 - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - - 12 - - 13 - - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - - 18 - - 19 - - 20 - 创 新 调 处 新 机 制 构 筑 稳 定 防 火 墙 - 21 - - 22 - - 23
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关 于 2015-2016 学 年 第 二 学 期 期 末 周 内 考 试 时 间 地 点 安 排 选 课 课 号 班 级 名 称 课 程 名 称 课 程 性 质 合 考 人 数 实 际 人 数 考 试 教 室 考 试 段 考 试 时 间 (2015-2016-2)-0006178-04247-1 130101 测 试 技 术 基 础 学 科 基 础 必 修 课 35 35 1 教 401 17 周
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附 件 4: 药 品 补 充 申 请 注 册 事 项 及 申 报 资 料 要 求 一 注 册 事 项 ( 一 ) 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 审 批 的 补 充 申 请 事 项 : 1. 持 有 新 药 证 书 的 药 品 生 产 企 业 申 请 该 药 品 的 批 准 文 号 2. 使 用 药 品 商 品 名 称 3. 增 加 中 药 的 功 能 主 治 天 然 药 物 适 应 症
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