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1 植 物 保 护 学 报 Journal of Plant Protection, 2016, 43(4): DOI: / j. cnki. zwbhxb 短 短 芽 胞 杆 菌 对 植 物 病 原 真 菌 的 抑 菌 活 性 和 抑 菌 机 理 1 周 金 伟 1 周 红 丽 1 易 有 金 2 柏 连 阳 3 李 高 阳 (1. 湖 南 农 业 大 学 食 品 科 技 学 院, 长 沙 ; 2. 湖 南 省 农 业 科 学 院 植 物 保 护 研 究 所, 长 沙 ; 3. 湖 南 省 农 业 科 学 院 农 产 品 加 工 研 究 所, 长 沙 ) 摘 要 : 为 探 讨 短 短 芽 胞 杆 菌 菌 株 011 对 植 物 病 原 真 菌 的 防 控 效 果, 采 用 平 皿 打 孔 法 测 定 菌 株 011 粗 提 液 对 14 种 植 物 病 原 真 菌 的 抑 制 作 用, 并 以 番 茄 早 疫 病 为 研 究 对 象, 研 究 了 其 抑 菌 机 理 结 果 显 示, 菌 株 011 粗 提 液 对 14 种 病 原 真 菌 均 有 抑 菌 活 性, 其 中 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 菌 活 性 最 强, 抑 菌 率 达 45 9% ; 菌 株 011 粗 提 液 能 导 致 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 生 长 异 常, 抑 制 孢 子 萌 发 ; 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 生 长 的 EC 50 为 71 4 mg / ml, 对 孢 子 萌 发 的 EC 50 和 MIC 分 别 为 0 12 mg / ml 和 0 8 mg / ml; 该 粗 提 液 能 引 起 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 的 脂 质 过 氧 化 程 度 和 细 胞 内 过 氧 化 氢 含 量 上 升, 菌 丝 细 胞 膜 的 蛋 白 质 合 成 量 下 降, 当 粗 提 液 浓 度 高 于 50 mg / ml 时, 菌 丝 细 胞 膜 的 麦 角 甾 醇 合 成 量 下 降 ; 该 粗 提 液 还 能 降 低 番 茄 早 疫 病 菌 胞 外 果 胶 酶 和 纤 维 素 酶 的 活 性 研 究 表 明, 菌 株 011 粗 提 液 可 作 为 生 防 制 剂 应 用 于 植 物 病 原 真 菌 的 防 治 关 键 词 : 内 生 菌 ; 发 酵 液 ; 抑 菌 活 性 ; 抑 菌 机 理 ; 菌 丝 The antifungal activity and mechanism of Brevibacillus brevis on plant pathogenic fungus Zhou Jinwei 1 Zhou Hongli 1 Yi Youjin 1 Bo Lianyang 2 Li Gaoyang 3 (1. College of Food Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha , Hunan Province, China; 2. Institute of Plant Protection, Hunan Academy of Agricultural Sciences, Changsha , Hunan Province, China; 3. Hunan Agricultural Product Processing Institute, Hunan Academy of Agricultural Sciences, Changsha , Hunan Province, China) Abstract: In order to explore the control efficacy of Brevibacillus brevis 011 strain, 14 plant pathogenic fungi were selected to evaluate their antagonistic activity by using plate perforation method, and the antifungal mechanism of crude extracts on Alternaria sonali was also determined. The results showed that the crude extracts of 011 strain had inhibitory effects on 14 pathogens, and showed the strongest inhibitory effect on Alternaria sonali, with an inhibition ratio of 45 9%. The treatment of crude extracts resulted in the pathogen mycelia growing in abnormal shape and the germination of spores was also inhibited. The EC 50 of crude extracts on Alternaria sonali mycelial growth was 71 4 mg / ml. The EC 50 and MIC of crude extracts on Alternaria sonali spores were 0 12 mg / ml and 0 8 mg / ml, respectively. The crude extracts also caused damage to cytoplasmic membrane including induction of lipid peroxidation, increase of hydrogen peroxide content in the cell and the decline of protein synthesis in mycelial membrane. When the concentration of crude extracts was over 50 mg / ml, it also expressed obvious inhibitive effect on ergosterol synthesis. The activities of pectinase and cellulose were both 基 金 项 目 : 十 二 五 国 家 科 技 支 撑 计 划 (2015BAD16B01), 国 家 自 然 科 学 基 金 ( ), 湖 南 省 教 育 厅 重 点 项 目 (15A082) 通 讯 作 者 (Authors for correspondence), E mail: yiyoujin@ 163. com, bailianyang2005@ aliyun. com 收 稿 日 期 :

2 4 期 周 金 伟 等 : 短 短 芽 胞 杆 菌 对 植 物 病 原 真 菌 的 抑 菌 活 性 和 抑 菌 机 理 601 significantly lower than those of control after treatment with crude extracts. Therefore, the crude extracts of 011 strain could be a bioagent for control of plant pathogenic fungus. Key words: endophyte; fermentation; antifungal activity; antifungal mechanism; mycelium 由 病 原 真 菌 引 起 的 植 物 病 害 是 造 成 农 作 物 品 质 和 产 量 降 低 的 主 要 原 因 之 一 长 期 以 来, 对 于 植 物 病 原 真 菌 的 防 治 主 要 采 用 化 学 杀 菌 剂, 化 学 杀 菌 剂 具 有 效 价 高 药 效 稳 定 杀 菌 机 理 明 确 等 优 点, 但 长 期 使 用 易 造 成 环 境 污 染, 引 起 植 物 病 原 菌 产 生 耐 药 性, 且 农 药 残 留 危 害 人 类 健 康 ( 王 剑 峰 等,2011; 赵 洋 等,2014) 因 此, 为 了 适 应 绿 色 农 业 的 发 展, 开 发 出 新 型 无 公 害 农 药 势 在 必 行 当 前, 生 物 防 治 由 于 其 防 效 好 对 病 原 菌 专 一 性 强 药 剂 残 留 少 等 优 点, 已 成 为 植 物 病 害 防 治 的 研 究 热 点 之 一 ( 杨 胜 远 等,2004; 李 静 等,2007) 利 用 微 生 物 进 行 生 物 防 治 已 成 为 一 种 新 的 研 究 领 域, 并 取 得 了 一 定 成 效 ( Janisiewicz & Korsten,2002; 姚 良 辉 等,2010) 我 国 植 物 资 源 丰 富, 且 植 物 组 织 中 存 在 着 大 量 的 内 生 菌 资 源 内 生 菌 寄 生 在 植 物 组 织 中, 由 于 受 到 植 物 组 织 的 保 护, 能 够 得 到 足 够 的 营 养 物 质, 因 此 其 生 态 环 境 稳 定, 比 附 生 菌 更 易 于 发 挥 生 防 作 用 ( 王 芳 等,2009) 研 究 表 明, 植 物 内 生 菌 能 产 生 大 量 具 有 抗 菌 活 性 的 抗 生 素 ( Yu et al.,2010) 例 如 苦 楝 内 生 菌 Botryosphaeria dothidea 产 生 的 化 合 物 pycnophorin 对 枯 草 芽 胞 杆 菌 Bacillus subtilis 的 抑 菌 作 用 显 著 (Xiao et al.,2014); 芒 果 内 生 菌 Pestalo tiopsis mangiferae 产 生 的 酚 类 化 合 物 对 枯 草 芽 胞 杆 菌 绿 脓 假 单 胞 菌 Pesudomonas pyocyaneum 等 多 种 病 原 菌 具 有 抑 菌 活 性 ( Subban et al.,2013) 这 些 抗 生 素 的 抗 真 菌 机 制 主 要 包 括 3 个 方 面 : 一 是 影 响 真 菌 细 胞 壁 的 合 成, 造 成 真 菌 菌 丝 顶 端 膨 大 不 能 正 常 生 长 ( 王 宇 婷 等,2013); 二 是 损 伤 细 胞 膜, 造 成 细 胞 内 物 质 泄 露 ; 三 是 抑 制 真 菌 细 胞 内 蛋 白 质 和 核 酸 的 合 成 (Franklin & Snow,2005) 本 研 究 从 烟 草 中 分 离 到 1 株 内 生 拮 抗 细 菌 011, 经 16S rdna 鉴 定 为 短 短 芽 胞 杆 菌 Brevibacillus brevis(genbank 登 录 号 为 DQ444285) 为 了 明 确 该 菌 株 在 植 物 病 害 防 治 中 的 实 用 价 值, 为 后 续 生 防 制 剂 的 研 发 提 供 理 论 依 据, 本 试 验 拟 采 用 菌 丝 生 长 速 率 法 测 定 菌 株 011 粗 提 液 的 抑 菌 谱, 并 选 取 对 菌 株 011 粗 提 液 最 敏 感 的 番 茄 早 疫 病 菌 作 为 靶 标, 测 定 菌 株 011 粗 提 液 对 靶 标 真 菌 细 胞 膜 的 结 构 组 成 通 透 性 胞 外 水 解 酶 活 性 以 及 降 解 几 丁 质 作 用 的 影 响, 以 期 明 确 菌 株 011 粗 提 液 对 植 物 病 原 真 菌 的 作 用 机 理 1 材 料 与 方 法 1 1 材 料 供 试 菌 株 及 病 原 菌 : 烟 草 内 生 短 短 芽 胞 杆 菌 011 由 本 实 验 室 分 离 鉴 定 与 保 藏 豆 角 炭 疽 病 菌 Colletotrichum lindemuthianum 苦 瓜 蔓 枯 病 菌 Didy mella bryoniae 马 铃 薯 白 绢 病 菌 Sclerotium rolfsii 胡 萝 卜 白 绢 病 菌 S. rolfsii 柑 橘 炭 疽 病 菌 C. gloeospori oides 辣 椒 炭 疽 病 菌 C. capsici 番 茄 早 疫 病 菌 Alter naria sonali 黄 瓜 炭 疽 病 菌 C. lagenarium 油 菜 菌 核 病 菌 Sclerotinia sclerotiorum 辣 椒 白 绢 病 菌 S. rolfsii 辣 椒 疫 病 菌 Phytophthora capsici 马 铃 薯 晚 疫 病 菌 P. infestans 白 菜 黑 斑 病 菌 Alternaria brassicae 和 柑 橘 青 霉 Penicillium italicum 均 由 湖 南 农 业 大 学 食 品 科 技 学 院 微 生 物 实 验 室 提 供 培 养 基 : 牛 肉 膏 蛋 白 胨 酵 母 膏 培 养 基 (beef prp tone yeast,bpy): 牛 肉 膏 50 g 鱼 粉 蛋 白 胨 10 g NaCl 50 g 酵 母 膏 50 g 葡 萄 糖 50 g 蒸 馏 水 10 L, 121 高 压 灭 菌 待 用 ; 马 铃 薯 葡 萄 糖 琼 脂 培 养 基 (po tato dextrose agar,pda): 土 豆 200 g 葡 萄 糖 20 g 琼 脂 20 g, 定 容 至 1 L,121 高 压 灭 菌 待 用 ; 几 丁 质 培 养 基 : 胶 状 几 丁 质 7 5 g 酵 母 膏 1 5 g 硫 酸 铵 0 5 g 无 水 硫 酸 镁 0 15 g 磷 酸 二 氢 钾 0 68 g 琼 脂 7 5 g 蒸 馏 水 500 ml,121 高 压 灭 菌 待 用 试 剂 及 仪 器 :80% 恶 霉 灵 芸 苔 素 (hymexazol) 水 剂, 郑 州 雨 康 生 物 科 技 公 司 ; 其 它 试 剂 均 为 国 产 分 析 纯 R 1001 旋 转 蒸 发 仪, 郑 州 长 城 科 工 贸 有 限 公 司 ;UV9100 紫 外 分 光 光 度 计, 北 京 莱 伯 泰 科 仪 器 有 限 公 司 ;FD 1B 真 空 冷 冻 干 燥 机, 北 京 博 医 康 实 验 仪 器 有 限 公 司 ;XSP 6C 光 学 显 微 镜, 上 海 兆 仪 光 电 科 技 有 限 公 司 1 2 方 法 菌 株 011 粗 提 液 的 制 备 将 菌 株 011 活 化 后 接 入 BPY 液 体 培 养 基, r / min 培 养 48 h, 于 r / min 离 心 10 min 后 去 除 菌 体 得 原 发 酵 液, 原 发 酵 液 经 0 22 μm 无 菌 过 滤 器 过 滤, 得 无 菌 发 酵 滤 液 待 用 原 发 酵 液 用 4 倍 体 积 的 乙 腈 萃 取, 取 上 清 液,50 旋 转 蒸 发 去 除 乙 腈, 得 粗 提 液 待 用

3 602 植 物 保 护 学 报 43 卷 菌 株 011 粗 提 液 抑 菌 谱 的 测 定 将 各 病 原 真 菌 分 别 接 种 于 PDA 培 养 基 中 央, 28 培 养 24 h, 在 离 菌 落 边 缘 25 mm 处 用 口 径 6 mm 打 孔 器 打 孔, 每 孔 加 100 μl 菌 株 011 粗 提 液, 以 无 菌 水 为 阴 性 对 照,80% 恶 霉 灵 ( 使 用 时 稀 释 倍 ) 为 阳 性 对 照, 待 阴 性 对 照 长 到 孔 径 边 缘 时, 测 量 抑 菌 圈 半 径, 计 算 抑 菌 率, 每 处 理 3 次 重 复 ( 易 有 金 等,2007) 抑 菌 率 = (1 - Dc / Dd) 100%, 式 中,Dc 为 处 理 菌 落 半 径,Dd 为 阴 性 对 照 菌 落 半 径 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 菌 活 性 将 菌 株 011 粗 提 液 冷 冻 干 燥, 配 成 mg / ml 系 列 浓 度 的 粗 提 液, 采 用 中 的 方 法 测 定 不 同 浓 度 的 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 菌 效 果, 以 无 菌 水 为 阴 性 对 照,80% 恶 霉 灵 为 阳 性 对 照, 计 算 抑 菌 率 将 抑 菌 率 转 化 成 几 率 值, 浓 度 转 化 成 对 数 值, 通 过 回 归 分 析 求 得 其 抑 菌 中 浓 度 EC 50 挑 取 抑 菌 活 性 测 定 中 抑 菌 圈 边 缘 的 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝, 在 光 学 显 微 镜 下 观 察 菌 丝 形 态 ( 王 美 琴 等, 2010) 将 番 茄 早 疫 病 菌 接 种 于 PDA 培 养 基 上, 28 培 养 7 ~ 12 d, 用 带 有 无 菌 水 的 玻 璃 珠 洗 下 孢 子, 加 无 菌 水 稀 释 到 40 倍 物 镜 下 每 个 视 野 中 约 40 个 孢 子 取 孢 子 悬 浮 液 20 μl 与 等 体 积 不 同 浓 度 的 粗 提 液 混 匀, 取 10 μl 混 合 液 于 凹 玻 片 上,28 保 湿 培 养 24 h, 显 微 镜 观 察 孢 子 形 态, 计 算 孢 子 萌 发 抑 制 率, 求 得 最 低 抑 菌 浓 度 MIC 和 抑 菌 中 浓 度 EC 50 以 无 菌 水 为 阴 性 对 照,80% 恶 霉 灵 为 阳 性 对 照, 每 处 理 3 次 重 复 孢 子 萌 发 抑 制 率 = ( 镜 检 孢 子 总 数 - 孢 子 萌 发 数 ) / 镜 检 孢 子 总 数 100% 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 菌 机 理 对 细 胞 膜 脂 质 过 氧 化 的 影 响 : 采 用 硫 代 巴 比 妥 酸 法 ( 张 志 良 和 瞿 伟 菁,2003) 测 定 菌 丝 中 的 丙 二 醛 (malondialdehyde,mda) 含 量 将 番 茄 早 疫 病 菌 的 10 6 个 / ml 孢 子 悬 浮 液 ( 采 用 血 球 计 数 板 计 数 ) 接 种 于 50 ml PDA 培 养 液 中, r / min 培 养 5 d, 过 滤 收 取 菌 丝, 用 0 05 mol / L 磷 酸 缓 冲 液 (ph 7 2) 冲 洗 数 次, 加 入 mg / ml 粗 提 液 各 4 ml 处 理 h 后, 过 滤, 用 磷 酸 缓 冲 液 洗 涤 各 处 理 菌 丝,6 000 r / min 离 心 10 min, 收 集 菌 丝 体 以 无 菌 水 处 理 作 为 对 照 组, 每 种 浓 度 不 同 处 理 时 各 称 取 2 g 加 液 氮 研 磨 至 粉 末, 计 算 MDA 含 量 MDA = [6 45 ( D D 600 ) D 450 ] Vt / (Vs W), 式 中,Vt 为 提 取 液 总 体 积,Vs 为 测 定 用 提 取 液 体 积,W 为 样 品 鲜 重 对 菌 丝 内 H 2 的 影 响 : 采 用 Sagisaka(1976) 方 法 测 定 H 2 含 量 取 上 述 各 处 理 菌 丝 0 5 g, 加 入 4 ml 磷 酸 缓 冲 液 冰 浴 研 磨 后, 加 入 5% 三 氯 乙 酸 2 8 ml, 于 r / min 下 离 心 10 min 取 1 6 ml 上 清 液, 加 入 50% 三 氯 乙 酸 0 4 ml 10 mmol / L 硫 酸 亚 铁 铵 0 4 ml 和 2 5 mol / L 硫 氰 酸 钾 0 2 ml 混 合, 于 480 nm 下 测 定 上 清 液 的 吸 光 值 OD 480, 由 H 2 测 定 的 标 准 曲 线 计 算 H 2 含 量 对 菌 丝 麦 角 甾 醇 的 影 响 : 取 摇 床 培 养 5 d 的 菌 丝 体, 加 入 mg / ml 粗 提 液 5 ml 处 理 3 d, 用 蒸 馏 水 反 复 冲 洗 菌 丝 体, 抽 干, 称 取 不 同 处 理 菌 丝 体 各 0 5 g, 参 考 吴 学 宏 等 (2005) 韩 平 等 (2006) 的 方 法 萃 取 麦 角 甾 醇, 取 萃 取 好 的 麦 角 甾 醇 在 282 nm 下 用 1 cm 石 英 比 色 杯 测 定 各 处 理 的 OD 值 ( 王 芳 等, 2009) 对 菌 丝 蛋 白 含 量 的 影 响 : 取 培 养 5 d 的 菌 丝 体, 加 入 mg / ml 粗 提 液 5 ml 处 理 3 d, 用 蒸 馏 水 反 复 冲 洗 菌 丝 体, 抽 干, 称 取 不 同 处 理 菌 丝 体 各 0 25 g, 预 冷 后 用 0 05 mol / L Tris HCl 缓 冲 液 提 取 菌 丝 蛋 白, 采 用 考 马 斯 亮 蓝 法 测 定 蛋 白 含 量 ( 王 芳 等,2009) 对 胞 外 水 解 酶 活 性 的 影 响 : 采 用 刘 西 莉 (2004) 方 法 提 取 酶 液,DNS 法 测 定 水 解 酶 的 活 性 以 单 位 体 积 (ml) 酶 液 每 分 钟 产 生 1 μg 葡 萄 糖 为 1 个 酶 活 力 单 位 发 酵 液 降 解 几 丁 质 的 作 用 测 定 : 参 照 陈 三 凤 等 (1992) 方 法 测 定 胶 状 几 丁 质 在 几 丁 质 培 养 基 中 央 打 孔, 在 孔 中 央 注 入 100 μl 无 菌 发 酵 滤 液,28 培 养 3 d, 观 察 孔 周 围 是 否 有 透 明 圈 产 生 1 3 数 据 分 析 采 用 Excel 2003 和 SPSS 18 0 软 件 对 试 验 数 据 进 行 统 计 分 析,LSD 法 进 行 差 异 显 著 性 检 验 2 结 果 与 分 析 2 1 菌 株 011 粗 提 液 抑 菌 谱 菌 株 011 粗 提 液 对 多 种 植 物 病 原 真 菌 具 有 抑 制 作 用, 其 中 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 制 作 用 最 强, 抑 菌 率 为 45 9%, 对 柑 橘 炭 疽 病 菌 的 抑 制 作 用 最 弱, 抑 菌 率 为 9 1% 菌 株 011 粗 提 液 对 豆 角 炭 疽 病 菌 苦 瓜 蔓 枯 病 菌 马 铃 薯 白 绢 病 菌 胡 萝 卜 白 绢 病 菌 柑 橘 炭 疽 病 菌 的 抑 菌 活 性 较 弱, 且 抑 菌 活 性 小 于 农 药 恶 霉 灵 ; 而 菌 株 011 粗 提 液 对 其 余 9 种 植 物 病 原 真 菌 的 抑 菌 活 性 较 强, 且 活 性 高 于 恶 霉 灵 表 明 菌 株 011 粗 提 液 对 植 物 病 原 真 菌 具 有 选 择 性 抑 制 作 用 ( 表 1)

4 4 期 周 金 伟 等 : 短 短 芽 胞 杆 菌 对 植 物 病 原 真 菌 的 抑 菌 活 性 和 抑 菌 机 理 603 供 试 菌 Pathogen 豆 角 炭 疽 病 菌 Colletotrichum lindemuthianum 苦 瓜 蔓 枯 病 菌 Didymella bryoniae 马 铃 薯 白 绢 病 菌 Sclerotium rolfsii 胡 萝 卜 白 绢 病 菌 Sclerotium rolfsii 柑 橘 炭 疽 病 菌 Colletotrichum gloeosporioides 辣 椒 炭 疽 病 菌 Colletotrichum capsici 白 菜 黑 斑 病 菌 Alternaria brassicae 表 1 菌 株 011 粗 提 液 对 植 物 病 原 真 菌 的 抑 制 作 用 Table 1 The inhibitory effects of ferment produced by endophyte 011 on plant pathogens % 抑 菌 率 Inhibition ratio 粗 提 液 Crude extract 恶 霉 灵 Emeiling 供 试 菌 Pathogen 10 9 ± 1 0 a 39 5 ± 0 8 a 番 茄 早 疫 病 菌 Alternaria sonali 10 0 ± 1 1 a 20 9 ± 0 7 b 黄 瓜 炭 疽 病 菌 Colletotrichum lagenarium 15 0 ± 1 2 b 23 2 ± 1 0 b 油 菜 菌 核 病 菌 Sclerotinia sclerotiorum 14 5 ± 0 5 b 27 3 ± 0 4 c 辣 椒 白 绢 病 菌 Sclerotium rolfsii 9 1 ± 0 8 c 31 4 ± 0 5 d 辣 椒 疫 霉 菌 Phytophthora capsici 37 3 ± 0 9 d 19 5 ± 1 0 e 马 铃 薯 晚 疫 病 菌 Phytophthora infestans 32 3 ± 0 6 e 28 6 ± 0 9 c 柑 橘 青 霉 菌 Penicillium italicum 抑 菌 率 Inhibition ratio 粗 提 液 Crude extract 45 9 ± 0 6 f 36 4 ± 0 5 d 36 8 ± 0 8 d 39 5 ± 1 0 d 33 6 ± 0 9 e 34 1 ± 0 5 e 29 1 ± 0 6 g 恶 霉 灵 Emeiling 27 7 ± 0 3 c 33 6 ± 0 3 d 25 0 ± 0 9 c 30 0 ± 0 9 d 16 4 ± 0 4 f 29 5 ± 1 6 c 11 8 ± 0 7 g 表 中 数 据 为 平 均 数 ± 标 准 差 同 列 中 不 同 小 写 字 母 表 示 经 LSD 法 检 验 在 P < 0 05 水 平 差 异 显 著 Data are mean ± SD. Different letters in the same column indicate significant difference at P < 0 05 level by LSD test. 2 2 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 菌 活 性 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 制 作 用 随 着 浓 度 增 加 菌 株 011 粗 提 液 和 恶 霉 灵 的 抑 菌 活 性 均 显 著 增 强 (P < 0 05) 通 过 回 归 分 析 得 出 菌 株 011 粗 提 液 和 恶 霉 灵 的 毒 力 学 方 程 分 别 为 y = x ,R 2 = ;y = x , R 2 = 菌 株 011 粗 提 液 和 恶 霉 灵 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 EC 50 分 别 为 71 4 mg / ml 和 88 2 mg / ml 因 此, 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 具 有 较 好 的 抑 菌 活 性 ( 图 1) 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 的 影 响 培 养 48 ~ 72 h 后, 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 的 生 长 和 形 态 均 有 影 响 正 常 生 长 的 菌 丝 表 面 光 滑 透 明, 菌 丝 体 粗 细 均 匀, 原 生 质 分 布 均 匀 ( 图 2 a) 菌 株 011 菌 粗 提 液 处 理 后, 菌 丝 生 长 异 常, 形 态 畸 形 ( 图 2 b ~ d), 节 间 变 短 变 粗, 粗 细 不 均, 细 胞 原 生 质 收 缩, 出 现 空 泡 ( 图 2 e) 随 着 粗 提 液 浓 度 的 增 加, 菌 丝 断 裂 解 体 ( 图 2 f) 对 番 茄 早 疫 病 菌 孢 子 萌 发 的 影 响 培 养 12 h 后, 无 菌 水 对 照 组 孢 子 全 部 正 常 萌 发, 芽 管 细 长 均 匀, 菌 丝 光 滑 透 明, 粗 细 均 匀 经 浓 度 为 0 8 ~ 12 5 mg / ml 菌 株 011 粗 提 液 处 理 后, 孢 子 的 芽 管 畸 形, 顶 端 或 中 间 膨 大, 形 成 串 珠 状 囊 泡, 菌 丝 粗 细 不 均, 表 面 有 囊 状 突 起, 原 生 质 不 透 明 图 1 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 制 作 用 Fig. 1 The inhibitory effects of different concentrations of endophyte 011 crude extracts on Alternaria sonali 图 中 数 据 为 平 均 数 ± 标 准 差 不 同 字 母 表 示 经 LSD 法 检 验 在 P < 0 05 水 平 差 异 显 著 Data are mean ± SD. Different letters in the figure indicate significant difference at P < 0 05 level by LSD test. 浓 度 高 于 12 5 mg / ml 菌 株 011 粗 提 液 处 理 后, 孢 子 萎 缩 变 形, 孢 子 萌 发 完 全 受 到 抑 制 恶 霉 灵 的 抑 制 效 果 与 菌 株 011 粗 提 液 相 似 菌 株 011 粗 提 液 和 恶 霉 灵 对 番 茄 早 疫 病 菌 孢 子 萌 发 的 MIC 分 别 为 mg / ml 菌 株 011 粗 提 液 的 毒 力 回 归 方 程 为 y = x ,R 2 = 0 997,EC 50 为 0 12 mg / ml, 低 于 恶 霉 灵 的 2 02 mg / ml 表 明 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 孢 子 萌 发 的 抑 制 作 用 显 著 ( 表 2)

5 ６０４ 植 物 保 护 学 报 ４３ 卷 图 ２ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌菌丝的影响 ４０ Ｆｉｇ ２ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｎａｌｉ ｍｙｃｅｌｉａ ４０ ａ ＣＫ ｂ ｆ 粗提液的浓度分别为 ６ ２５ １２ ５ ２５ ５０ 和 １００ ｍｇ ｍｌ ａ ＣＫ ｂ ｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｃｏｎ ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ６ ２５ １２ ５ ２５ ５０ ａｎｄ １００ ｍｇ ｍｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ 表 ２ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌孢子萌发的影响 Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏ ｐｈｙｔｅ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｓｐｏｒｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 抑菌率 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ 浓度 ｍｇ ｍｌ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ 粗提液 Ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ 恶霉灵 Ｅｍｅｉｌｉｎｇ １００ ０ ５０ ０ ２５ ０ １２ ５ ６ ３ ３ １ ７１ ４ ± ４ ２ ｂ １ ６ ３８ ５ ± １ ５ ｃ ０ ８ １１ １ ± ２ ６ ｄ ０ ４ ９２ ０ ± ５ ６ ｂ ０ ０ ± ０ ０ ｅ ０ ２ ７６ ３ ± ６ １ ｃ ０ ０ ± ０ ０ ｅ ０ １ ４１ ７ ± ３ ８ ｄ ０ ０ ± ０ ０ ｅ 表中数据为平均数 ± 标 准 差 同 列 不 同 字 母 表 示 经 ＬＳＤ 法检验在 Ｐ ０ ０５ 水平差异显著 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒ ｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ０ ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ＬＳＤ ｔｅｓｔ ２ ３ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌的作用机理 ２ ３ １ 对细胞膜脂质过氧化的影响 对照组在试验期间其细胞内 ＭＤＡ 含量变化不 显著 经菌株 ０１１ 粗提液处理后 番茄早疫病菌细 胞内 ＭＤＡ 含量均显著高于对照 且随粗提液浓度 增加 ＭＤＡ 含 量 显 著 上 升 在 ０ １２ ｈ 处 理 期 ６ ２５ １２ ５ ２５ ｍｇ ｍｌ 粗提液处理组其细胞内 ＭＤＡ 含量显著上升 １２ ｈ 后 上 升 幅 度 减 小 而 ５０ １００ ｍｇ ｍｌ 粗提液处理组其细胞内 ＭＤＡ 含量上升时间 延迟 到 １８ ｈ 后上升幅度开始变缓 １００ ｍｇ ｍｌ 粗 提液处理 ２４ ｈ 后 病原菌细胞膜内 ＭＤＡ 含量达到 ０ ８４ μｍｏｌ Ｌ 比 对 照 组 高 出 ３７５ ５ 表 明 菌 株 ０１１ 粗提液的浓度越高 病原菌细胞膜受到的损害 程度越大 图 ３ Ａ 图 ３ 菌株 ０１１ 粗提液对番茄早疫病菌菌丝膜脂质过氧化 Ａ 及菌丝膜 Ｈ２ Ｏ２ Ｂ 的影响 Ｆｉｇ ３ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ ０１１ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ａ ａｎｄ Ｈ２ Ｏ２ Ｂ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｉｎ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ 图中数据为平均数 ± 标准差 Ｄａｔａ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｇｕｒｅ ａｒｅ ｍｅａｎ ± ＳＤ

6 4 期 周 金 伟 等 : 短 短 芽 胞 杆 菌 对 植 物 病 原 真 菌 的 抑 菌 活 性 和 抑 菌 机 理 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 膜 H 2 的 影 响 随 着 处 理 时 间 增 长 菌 丝 细 胞 膜 内 H 2 含 量 均 呈 上 升 趋 势, 对 照 组 在 处 理 期 间 H 2 含 量 变 化 平 缓, 涨 幅 较 小, 变 化 不 显 著 而 处 理 组 随 着 时 间 延 长 H 2 含 量 显 著 上 升, 且 浓 度 越 高, 膜 内 H 2 含 量 上 升 越 快 不 同 处 理 之 间 其 膜 内 H 2 含 量 差 异 显 著 处 理 24 h 后, 和 100 mg / ml 粗 提 液 组 的 OD 值 分 别 为 和 0 91, 分 别 比 对 照 组 高 出 81 9% 130 4% 185 7% 252 6% 和 308 5% ( 图 3 B) 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 麦 角 甾 醇 的 影 响 使 用 浓 度 为 mg / ml 的 菌 株 011 粗 提 液 处 理 菌 丝, 菌 丝 细 胞 膜 上 的 麦 角 甾 醇 含 量 与 对 照 组 差 异 不 显 著 当 粗 提 液 浓 度 为 mg / ml 时, 其 OD 值 分 别 为 0 43 和 0 33, 与 对 照 组 相 比 较 存 在 显 著 差 异 (P < 0 05), 分 别 下 降 了 25 4% 和 42 8% 表 明 低 浓 度 的 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 细 胞 膜 的 麦 角 甾 醇 的 合 成 影 响 较 小, 而 高 浓 度 的 菌 株 011 粗 提 液 能 显 著 抑 制 菌 丝 细 胞 膜 麦 角 甾 醇 的 合 成 ( 图 4 A) 图 4 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 麦 角 甾 醇 (A) 蛋 白 质 (B) 含 量 胞 外 果 胶 酶 (C) 和 纤 维 素 酶 (D) 活 性 的 影 响 Fig. 4 The effect of strain 011 crude extracts on mycelial ergosterol (A), protein contents (B), extracellular pectinase ( C) and cellulase ( D) activities 图 中 数 据 为 平 均 数 ± 标 准 差 不 同 小 写 字 母 表 示 经 LSD 法 检 验 在 P < 0 05 水 平 差 异 显 著 Data are mean ± SD. Differ ent letters in the figure indicate significant difference at P < 0 05 level by LSD test 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 蛋 白 质 含 量 的 影 响 不 同 浓 度 的 菌 株 011 粗 提 液 处 理 后, 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 体 的 蛋 白 质 含 量 与 对 照 组 相 比 显 著 下 降 (P < 0 05), 分 别 比 对 照 组 降 低 10 6% 26 4% 34 3% 39 9% 和 48 8% 粗 提 液 浓 度 越 高, 其 菌 丝 体 内 蛋 白 质 含 量 越 低, 且 不 同 浓 度 粗 提 液 之 间 存 在 显 著 差 异 (P < 0 05) 表 明 菌 株 011 粗 提 液 可 抑 制 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 蛋 白 的 合 成, 从 而 抑 制 菌 丝 的 生 长 ( 图 4 B) 对 番 茄 早 疫 病 菌 胞 外 果 胶 酶 活 性 的 影 响 不 同 浓 度 的 菌 株 011 粗 提 液 处 理 后, 番 茄 早 疫 病 菌 在 离 体 条 件 下 合 成 的 胞 外 果 胶 酶 活 性 受 到 抑 制, 其 果 胶 酶 活 性 与 对 照 组 相 比 分 别 显 著 下 降 了 7 2% 14 0% 19 8% 24 5% 和 35 9% ( P < 0 05), 且 不 同 处 理 之 间 存 在 显 著 差 异 ( P < 0 05) 表 明 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 胞 外 果 胶 酶 活 性 具 有 显 著 抑 制 作 用 ( 图 4 C) 对 番 茄 早 疫 病 菌 胞 外 纤 维 素 酶 活 性 的 影 响 不 同 浓 度 的 菌 株 011 粗 提 液 处 理 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 后, 其 合 成 的 胞 外 纤 维 素 酶 活 性 均 显 著 下 降 (P < 0 05), 粗 提 液 浓 度 越 高, 纤 维 素 酶 的 活 性 越 低 与 对 照 组 相 比 分 别 显 著 下 降 了 3 0% 5 0% 6 9% 8 4% 和 11 9%, 且 不 同 浓 度 处 理 组 之 间 存 在 显 著 差 异 (P < 0 05) 说 明 菌 株 011 粗 提 液 能 够 抑 制 番 茄 早 疫 病 菌 的 胞 外 纤 维 素 酶 活 性 ( 图 4 D) 发 酵 滤 液 对 几 丁 质 的 降 解 作 用 菌 株 011 发 酵 滤 液 处 理 3 d 后, 在 培 养 基 中 央 孔 周 围 未 出 现 透 明 的 水 解 圈 表 明 发 酵 滤 液 中 不 含

7 606 植 物 保 护 学 报 43 卷 有 几 丁 质 酶, 因 此 推 测 菌 株 011 代 谢 产 物 不 能 降 解 番 茄 早 疫 病 菌 细 胞 壁 中 的 几 丁 质 3 讨 论 目 前, 筛 选 微 生 物 资 源 主 要 集 中 在 土 壤 植 物 根 际 和 海 洋, 但 植 物 组 织 内 部 也 存 在 着 对 人 类 有 益 的 微 生 物, 这 些 微 生 物 与 植 物 组 织 协 同 进 化, 是 植 物 微 生 态 结 构 的 重 要 组 成 部 分 ( 薛 鹏 琦 等,2011; 冯 志 珍 等,2012) 短 短 芽 胞 杆 菌 是 存 在 于 植 物 微 生 态 的 重 要 微 生 物, 具 有 很 强 的 抗 逆 能 力, 芽 胞 杆 菌 能 产 生 脂 肽 类 肽 类 多 烯 类 磷 脂 类 等 多 种 化 合 物, 对 多 种 植 物 病 原 真 菌 具 有 抑 菌 活 性, 如 抑 制 棉 花 立 枯 病 菌 枯 萎 病 菌 和 黄 萎 病 菌 菌 丝 的 生 长 ( 陈 莉 等, 2007), 抑 制 番 茄 枯 萎 病 菌 孢 子 的 萌 发 ( 郝 晓 娟 等,2007) 本 研 究 显 示, 短 短 芽 胞 杆 菌 011 对 14 种 植 物 病 原 真 菌 均 有 不 同 程 度 的 抑 菌 活 性, 其 中 对 番 茄 早 疫 病 菌 的 抑 制 作 用 显 著, 表 明 其 在 番 茄 早 疫 病 的 生 物 防 治 中 具 有 潜 在 的 应 用 价 值 短 短 芽 胞 杆 菌 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 菌 丝 和 孢 子 萌 发 均 有 强 烈 抑 制 作 用, 造 成 菌 丝 生 长 畸 形, 产 孢 能 力 下 降, 芽 管 长 度 和 孢 子 萌 发 率 下 降 蒋 细 良 等 (1997) 和 刘 爱 媛 (2001) 报 道 的 杀 稻 瘟 菌 素 S 对 孢 子 和 菌 丝 的 抑 制 作 用 结 果 与 本 研 究 结 果 一 致, 杀 稻 瘟 菌 素 S 主 要 是 通 过 抑 制 孢 子 和 菌 丝 的 呼 吸 作 用 而 实 现 的, 因 此 推 测 菌 株 011 粗 提 液 中 可 能 含 有 能 抑 制 孢 子 和 菌 丝 呼 吸 作 用 的 活 性 化 合 物 此 外, 菌 株 011 粗 提 液 处 理 导 致 细 胞 膜 脂 质 过 氧 化 程 度 增 强, 菌 丝 细 胞 膜 内 的 H 2 含 量 上 升, 菌 丝 细 胞 膜 的 组 成 成 分 麦 角 甾 醇 和 蛋 白 质 的 合 成 量 减 少 根 据 蒋 细 良 和 谢 德 龄 (1994) 报 道, 这 主 要 是 由 于 菌 株 011 粗 提 液 中 的 活 性 物 质 损 伤 病 原 菌 的 细 胞 质 膜, 造 成 细 胞 内 物 质 泄 漏 引 起 的 病 原 真 菌 在 侵 染 植 物 组 织 时, 其 分 泌 的 胞 外 水 解 酶 起 到 重 要 作 用 果 胶 酶 和 纤 维 素 酶 是 降 解 植 物 细 胞 壁 的 2 个 关 键 酶, 因 此, 抑 制 病 原 菌 产 生 胞 外 水 解 酶 也 是 防 治 植 物 病 害 的 一 条 重 要 途 径 ( 林 孔 勋, 1992) 本 研 究 表 明, 菌 株 011 粗 提 液 对 番 茄 早 疫 病 菌 合 成 的 果 胶 酶 和 纤 维 素 酶 均 有 抑 制 作 用 因 此, 菌 株 011 粗 提 液 对 于 防 止 病 原 真 菌 侵 染 宿 主 植 物 发 挥 着 重 要 作 用 对 于 菌 株 011 粗 提 液 抑 制 番 茄 早 疫 病 菌 的 作 用 靶 点 还 有 待 于 进 一 步 深 入 研 究 参 考 文 献 (References) Chen L, Miao WG, Liu HY, Nuerziya Antagonistic action of Brevibacillus brevis A57 against cotton mainly pathogenic fungus and fermentation condition with the strongest antagonistic activi ty. Chinese Journal of Biological Control, 23(S): (in Chinese) [ 陈 莉, 缪 卫 国, 刘 海 洋, 努 尔 孜 亚 短 短 芽 胞 杆 菌 A57 菌 株 对 棉 花 主 要 病 原 真 菌 的 拮 抗 作 用 和 及 其 最 佳 液 体 发 酵 条 件. 中 国 生 物 防 治, 23(S): 22-27] Chen SF, Li JL, Qiu WF Studies on the mycopathogen in hibiting chitinase: isolation and identification of a Flavobacteri um sp. with strong inhibiting activity. Acta Phytopathologica Sinica, 22(4): ( in Chinese) [ 陈 三 凤, 李 季 伦, 裘 维 蕃 关 于 抑 制 植 物 病 原 真 菌 几 丁 质 酶 来 源 及 效 应 的 研 究 强 作 用 黄 杆 菌 的 分 离 和 鉴 定. 植 物 病 理 学 报, 22 (4): ] Feng ZZ, Chen TC, Duan JN, Chen DX, Cheng JL, An DR Screening, identification and antifungal activity of antagonistic rhizospheric Bacillus FB 16 against tobacco black shank. Jour nal of Plant Protection, 39(3): (in Chinese) [ 冯 志 珍, 陈 太 春, 段 军 娜, 陈 德 鑫, 成 巨 龙, 安 德 荣 烟 草 黑 胫 病 拮 抗 根 际 芽 胞 杆 菌 FB 16 的 筛 选 鉴 定 及 其 抑 菌 活 性. 植 物 保 护 学 报, 39(3): ] Franklin TJ, Snow GA Biochemistry and molecular biology of antimicrobial drug action. Berlin: Springer Science & Business Media Han P, Liu XL, Liu PF, Si NG Effect of novel fungicide 5 (4 chlorophenyl) 2, 3 dinethyl 3 ( pyridine 3 ) oxazoline on ergosterol biosynthesis in Botrytis cinerea by high performance liquid chromatography. Chinese Journal of Analytical Chemis try, 34(10): ( in Chinese) [ 韩 平, 刘 西 莉, 刘 鹏 飞, 司 乃 国 高 效 液 相 色 谱 法 研 究 啶 菌 噁 唑 对 番 茄 灰 霉 病 菌 麦 角 甾 醇 生 物 合 成 的 影 响. 分 析 化 学, 34 (10): ] Hao XJ, Liu B, Xie GL, Ge CB, Lin KM Inhibition of Bre vibacillus brevis JK 2 strain against the pathogen of tomato Fusarium wilt. Chinese Journal of Biological Control, 23(3): (in Chinese) [ 郝 晓 娟, 刘 波, 谢 关 林, 葛 慈 斌, 林 抗 美 短 短 芽 胞 杆 菌 JK 2 菌 株 对 番 茄 枯 萎 病 的 抑 菌 作 用 及 其 小 区 防 效. 中 国 生 物 防 治, 23(3): ] Janisiewicz WJ, Korsten L Biological control of postharvest diseases of fruits. Annual Review of Phytopathology, 40: Jiang XL, Xie DL The mechanism of action of agricultural antibiotics. Chinese Journal of Biological Control, 10(2): (in Chinese) [ 蒋 细 良, 谢 德 龄 农 用 抗 生 素 的 作 用 机 理. 生 物 防 治 通 报, 10(2): 76-81] Jiang XL, Xie DL, Ni CF, Zhu CX, Song PG The mode of action of Zhongsheng mycin on pathogenic fungi. Chinese Jour nal of Biological Control, 13(2): (in Chinese) [ 蒋 细 良, 谢 德 龄, 倪 楚 芳, 朱 昌 雄, 宋 培 国 中 生 菌 素 对 真 菌 作 用 机 理 的 研 究. 中 国 生 物 防 治, 13(2): 69-71] Li J, Yu JN, Zhang LL Advances of research on postharvest

8 4 期 周 金 伟 等 : 短 短 芽 胞 杆 菌 对 植 物 病 原 真 菌 的 抑 菌 活 性 和 抑 菌 机 理 607 diseases and biocontrol of fruits. Chinese Journal of Biological Control, 23(S): (in Chinese) [ 李 静, 于 建 娜, 张 利 莉 果 品 采 后 病 害 及 生 物 防 治 研 究 进 展. 中 国 生 物 防 治, 23(S): ] Lin KX Toxicology of fungicides. Beijing: China Agriculture Press (in Chinese) [ 林 孔 勋 杀 菌 剂 毒 理 学. 北 京 : 中 国 农 业 出 版 社 ] Liu AY Inhibition of streptomycin on some oomycetes. Jour nal of Plant Protection, 28(3): (in Chinese) [ 刘 爱 媛 链 霉 素 对 几 种 卵 菌 的 抑 制 作 用. 植 物 保 护 学 报, 28(3): ] Liu XL Research on the biological characteristics and antimi crobial substances of Bacillus subtilis HL29. Ph. D Thesis. Bei jing: China Agricultural University ( in Chinese) [ 刘 西 莉 芽 孢 杆 菌 HL29 的 生 物 学 特 性 和 抗 菌 活 性 物 质 研 究. 博 士 学 位 论 文. 北 京 : 中 国 农 业 大 学 ] Sagisaka S The occurrence of peroxide in a perennial plant, Populus gelrica. Plant Physiology, 57(2): Subban K, Subramani R, Johnpaul M A novel antimicrobial and antifungal phenolic compound from the endophytic fungus Pestalotiopsis mangiferae. Natural Product Research, 27(16): Wang F, Ji MS, Gu ZM, Zhang Y, Wang JK Effect of anti fungal substances from endophytic bacteria B36 on Fulvia fulva. Chinese Journal of Biological Control, 25(3): ( in Chinese) [ 王 芳, 纪 明 山, 谷 祖 敏, 张 杨, 王 建 坤 苦 参 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 B 36 抗 菌 物 质 对 番 茄 叶 霉 病 菌 的 作 用 机 制. 中 国 生 物 防 治, 25(3): Wang JF, Dong F, Dong D, Qiu DM, Xiao SQ, Hu XF Identification and the characteristic of antagonism of endophytic antagonistic bacteria L3R3 1 from Pinellia ternate. Journal of Plant Protection, 38(6): ( in Chinese) [ 王 剑 峰, 董 飞, 董 丹, 求 东 妹, 肖 赛 琼, 胡 秀 芳 半 夏 内 生 菌 L3R3 1 鉴 定 及 其 对 植 物 病 原 菌 的 拮 抗 特 性. 植 物 保 护 学 报, 38(6): ] Wang MQ, He YC, Liu HP, Xue L, Lu T Controlling mech anisms of tomato gray mould by endophytic bacterium Jcxy8 (Bacillus cirulans ). Chinese Journal of Eco Agriculture, 18 (1): (in Chinese) [ 王 美 琴, 贺 运 春, 刘 慧 平, 薛 丽, 路 涛 内 生 环 状 芽 孢 杆 菌 Jcxy8 对 番 茄 灰 霉 病 的 防 病 机 制 研 究. 中 国 生 态 农 业 学 报, 18(1): ] Wang YT, Yi YJ, Xia Bo, Yang JK, Zeng J Antibiosis of the ferment of the endophyte Brevibacillus brevis strain 011. Plant Protection, 39(4): (in Chinese) [ 王 宇 婷, 易 有 金, 夏 菠, 杨 建 奎, 曾 静 内 生 短 短 芽 胞 杆 菌 011 菌 发 酵 滤 液 抑 菌 活 性 研 究. 植 物 保 护, 39(4): 29-33] Wu XH, Xiao JH, Zhang WH, Gao RJ Effect of triadimenol and tebuconazole on the content of ergosterol of wheat Rhizo ctonia cerealis. Chinese Journal of Pesticide Science, 7 ( 4 ): (in Chinese) [ 吴 学 宏, 肖 建 华, 张 文 华, 高 仁 君 % 三 唑 醇 戊 唑 醇 种 衣 剂 对 小 麦 纹 枯 病 菌 麦 角 甾 醇 含 量 的 影 响. 农 药 学 学 报, 7(4): ] Xiao J, Zhang Q, Gao YQ, Tang JJ, Zhang AL, Gao JM Second metabolites from the endophytic Botryosphaeria dothidea of Melia azedarach and their antifungal, antimicrobial, antioxi dant, and cytotoxic activities. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 62(16): Xue PQ, Liu F, Qiao JQ, Wu HJ, Feng ZK, Gao XW Screening of Bacillus strains with high inhibition on rape Sclero tinia disease and its lipopeptide compounds detection. Journal of Plant Protection, 38(2): (in Chinese) [ 薛 鹏 琦, 刘 芳, 乔 俊 卿, 伍 辉 军, 冯 致 科, 高 学 文 油 菜 菌 核 病 生 防 芽 胞 杆 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 脂 肽 化 合 物 分 析. 植 物 保 护 学 报, 38(2): ] Yang SY, Chen GG, Xiao GN, Liang ZQ Screening of an tagonistic microorganisms of the pathogens in mango. Plant Pro tection, 30(3): (in Chinese) [ 杨 胜 远, 陈 桂 光, 肖 功 年, 梁 智 群 芒 果 主 要 病 原 菌 拮 抗 微 生 物 的 分 离 筛 选. 植 物 保 护, 30(3): 55-58] Yao LH, Yin JY, He HX, Xu L, Liu JH, Gao HY Effect of biological preservation C06 treatment on fresh keeping of post harvest honey peach. Transactions of the CSAE, 26(4): (in Chinese) [ 姚 良 辉, 尹 京 苑, 何 惠 霞, 许 丽, 刘 剑 洪, 高 海 燕 生 物 保 鲜 剂 C06 对 水 蜜 桃 采 后 的 保 鲜 效 果. 农 业 工 程 学 报, 26(4): ] Yi YJ, Liu RS, Yin HQ, Luo K, Liu EM, Liu XR Isola tion, identification and field control efficacy of an endophytic strain against tobacco bacterial wilt ( Ralstonia solanacarum). Chinese Journal of Applied Ecology, 18 (3): ( in Chinese) [ 易 有 金, 刘 如 石, 尹 华 群, 罗 宽, 刘 二 明, 刘 学 瑞 烟 草 青 枯 病 拮 抗 内 生 细 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 田 间 防 效. 应 用 生 态 学 报, 18(3): ] Yu HS, Zhang L, Li L, Zheng CJ, Guo L, Li WC, Sun PX, Qin LP Recent developments and future prospects of antimi crobial metabolites produced by endophytes. Microbiological Research, 165(6): Zhang ZL, Qu WJ Plant physiology experiment. Beijing: High Education Press, pp. 145 (in Chinese) [ 张 志 良, 瞿 伟 菁 植 物 生 理 学 实 验 指 导. 北 京 : 高 等 教 育 出 版 社, pp. 145] Zhao Y, Chen DX, Huang HG, Jiang WZ, Wu X Inhibition of chitinase producing fungus Lecanicillium attenuatum on egg hatching of root knot nematode Meloidogyne incognita. Journal of Plant Protection, 41(5): ( in Chinese) [ 赵 洋, 陈 德 鑫, 黄 化 刚, 姜 维 珍, 武 侠 渐 狭 蜡 蚧 菌 Lecani cillium attenuatum 产 几 丁 质 酶 的 活 性 及 对 南 方 根 结 线 虫 卵 孵 化 的 抑 制 作 用. 植 物 保 护 学 报, 41(5): ] ( 责 任 编 辑 : 高 峰 )