416 毒 理 学 杂 志 2014 年 12 月 第 28 卷 第 6 期 J Toxicol December 2014 Vol 28 No 6 的 人 BDNF 治 疗 糖 尿 病 性 神 经 病 变 目 前 已 完 成 Ⅱ 和 Ⅲ 期 临 床 实 验, 具 有 可 喜 的 应 用 前 景 [
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- 觉晤 周
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1 毒 理 学 杂 志 2014 年 12 月 第 28 卷 第 6 期 J Toxicol December 2014 Vol 28 No 中 图 分 类 号 :R114 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : (2014) 论 著 脑 源 性 神 经 营 养 因 子 对 丙 烯 酰 胺 短 期 重 复 剂 量 神 经 损 伤 的 体 内 干 预 研 究 肖 经 纬, 陈 宵, 张 斌, 王 秀 会, 李 斌 ( 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 职 业 卫 生 与 中 毒 控 制 所, 北 京 ) 摘 要 目 的 在 体 内 实 验 条 件 下 探 讨 脑 源 性 神 经 营 养 因 子 ( brain derived neurotrophic factor, BDNF) 对 丙 烯 酰 胺 (acrylamide, ACR) 所 致 神 经 损 伤 的 干 预 效 应 方 法 30 只 雌 性 Wistar 大 鼠 随 机 分 为 生 理 盐 水 对 照 组 BDNF 对 照 组 (48 μg / kg BDNF) 30 mg / kg ACR 染 毒 组 ( 腹 腔 注 射,1 次 / d,6 d / 周,3 周 ) 和 低 高 剂 量 BDNF 干 预 组 (12 和 48 μg / kg BDNF, 尾 静 脉 注 射, 1 次 / 2 d, 自 第 2 周 始 ); 染 毒 步 态 评 分 后 肢 撑 力 试 验 评 价 神 经 行 为 改 变 ; 检 测 脑 分 区 脊 髓 坐 骨 神 经 及 神 经 外 重 要 的 组 织 脏 器 的 病 理 改 变 ;ELISA 法 检 测 血 浆 BDNF 的 含 量 结 果 BDNF 高 剂 量 (48 μg / kg) 干 预 组 对 ACR 所 致 大 鼠 神 经 损 伤 具 有 一 定 的 保 护 作 用,BDNF 高 剂 量 干 预 组 与 ACR 单 独 染 毒 组 比 较, 对 于 实 验 动 物 的 神 经 系 统 具 有 一 定 的 保 护 作 用, 如 试 验 结 束 时 体 重 高 于 ACR 染 毒 组, 异 常 体 征 弱 于 ACR 染 毒 组, 步 态 评 分 显 著 低 于 ACR 染 毒 组, 后 肢 撑 力 距 离 较 ACR 染 毒 组 缩 短, 血 浆 BDNF 含 量 高 于 ACR 染 毒 组 ( P < 0 05) 小 脑 皮 质 空 泡 略 少 于 ACR 染 毒 组 所 检 测 的 神 经 外 重 要 组 织 脏 器 未 见 明 显 的 病 理 组 织 学 异 常 结 论 所 致 短 期 重 复 剂 量 神 经 毒 效 应 发 挥 一 定 的 保 护 作 用 关 键 词 丙 烯 酰 胺 ; 脑 源 性 神 经 营 养 因 子 ; 神 经 毒 性 适 当 剂 量 外 源 性 BDNF 干 预 在 实 验 动 物 水 平 对 ACR Study on effects of brain derived neurotrophic factor in acrylamide induced subacute neurotoxicity in vivo XIAO Jing wei, CHEN Xiao, ZHANG Bin, WANG Xiu hui, LI Bin ( National Institute of Occupational Health and Poison Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing , China) Abstract Objective This study was aimed to investigate the effects of brain derived neurotrophic factor ( BDNF) on acrylamide ( ACR) induced neurotoxicity in rats. Methods 30 Wistar rats were randomized as normal saline control, BDNF control ( 48 μg / kg BDNF), 30 mg / kg ACR treatment group ( intraperitoneal injection, one time each day, six days one week for 6 weeks ) and two concentrations of BDNF (12 and 48 μg / kg, iv, one time every two days, start from the second week) intervention groups. The neurological changes were observed. Pathological changes of brain, spinal cord, sciatic nerve and other important organs or tissues of the body. Plasma level of BDNF was measured by ELISA kit. Results BDNF (48 μg / kg) administration significantly reduced the loss of body weight (P < 0 05), mitigated gait abnormalities ( P < 0 05 ) and pathological changes of cerebellar induced by 30 mg / kg ACR. No significant pathological changes were found in other tested organs or tissue. Plasma level of 48 μg / kg BDNF intervention group was higher than that of the ACR treatment group (P < 0 05). Conclusion ACR induced subactue neurotoxicity in rats. In conclusion, BDNF with appropriate doses had protective effects to some extent on Key words Acrylamide ( ACR); Brain derived neurotrophic factor ( BDNF); Neurotoxicity 在 基 础 医 学 研 究 领 域, 随 着 基 因 测 序 的 完 成 和 蛋 白 质 组 学 等 理 论 和 技 术 的 发 展 及 深 入 应 用, 从 因 果 关 系 的 角 度 在 重 要 疾 病 的 发 生 发 展 阶 段 进 行 针 对 性 防 治 已 成 为 临 床 干 预 的 重 要 手 段 脑 源 性 神 经 营 养 因 子 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 ( , ) 作 者 简 介 : 肖 经 纬, 博 士, 副 研 究 员, 研 究 方 向 : 神 经 毒 理 学 通 讯 作 者 : 李 斌, 研 究 员, 研 究 方 向 : 神 经 毒 理 学 (Brain derived neurotrophic factor, BDNF) 对 神 经 系 统 具 有 广 泛 影 响, 中 枢 神 经 病 变 如 缺 血 缺 氧 性 脑 损 伤 阿 尔 兹 海 默 氏 症 等 伴 有 中 枢 BDNF 及 其 受 体 含 量 的 病 理 性 变 化, 将 适 当 剂 量 的 BDNF 注 射 到 中 枢 损 伤 局 部 具 有 一 定 的 保 护 作 用 [1] 与 此 同 时,BDNF 对 糖 尿 病 性 外 周 神 经 病 变 也 可 起 到 一 定 的 治 疗 作 用, 可 保 护 糖 尿 病 鼠 的 感 觉 神 经 元, 促 进 病 变 神 经 的 轴 索 再 生 重 组
2 416 毒 理 学 杂 志 2014 年 12 月 第 28 卷 第 6 期 J Toxicol December 2014 Vol 28 No 6 的 人 BDNF 治 疗 糖 尿 病 性 神 经 病 变 目 前 已 完 成 Ⅱ 和 Ⅲ 期 临 床 实 验, 具 有 可 喜 的 应 用 前 景 [2] 作 为 典 型 的 神 经 毒 物,ACR 在 不 同 暴 露 条 件 下 对 中 枢 和 周 围 神 经 系 统 损 伤 的 差 异 性 使 得 其 病 变 特 征 具 有 一 定 的 特 殊 性, ACR 短 期 重 复 剂 量 暴 露 的 作 业 工 人 主 要 表 现 中 枢 - 周 围 神 经 症 候 群, 如 小 脑 共 济 失 调 和 周 围 神 经 病 等 异 常 体 征, 也 正 是 其 神 经 毒 性 的 特 殊 性 为 外 源 性 BDNF 干 预 效 果 的 验 证 提 供 了 一 定 的 线 索 和 依 据, 具 有 一 定 的 理 论 可 行 性 本 课 题 组 的 前 期 研 究 表 明,ACR 损 伤 后 雪 旺 细 胞 所 分 泌 的 内 源 性 BDNF 出 现 与 细 胞 的 损 伤 效 应 一 致 的 剂 量 依 赖 性 降 低 [3] ; 体 外 试 验 中 给 予 适 当 干 预 浓 度 的 外 源 性 BDNF(50 ~ 75 ng / ml) 可 减 轻 ACR 对 神 经 突 触 形 态 的 损 伤, 具 有 一 定 的 神 经 损 伤 保 护 作 用 [4] 本 研 究 以 此 为 基 础, 通 过 优 选 BDNF 的 体 内 干 预 剂 量 和 方 式, 在 体 内 试 验 水 平 进 一 步 开 展 BDNF 干 预 效 果 的 实 践 与 验 证, 从 而 为 ACR 的 神 经 危 害 防 治 提 供 一 定 的 线 索 和 依 据 1 材 料 与 方 法 1 1 试 剂 和 仪 器 丙 烯 酰 胺 ( 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司, 含 量 98 0% ),BDNF( 美 国 Gibco 公 司 ), 甲 醛 水 合 氯 醛 ( 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司, 化 学 纯 ), BDNF ELISA 试 剂 盒 ( 美 国 RB 公 司 ) 1 2 实 验 动 物 健 康 Wistar 大 鼠,30 只, 雌 性, 体 重 (160 ± 10) g, 由 中 国 人 民 解 放 军 军 事 医 学 科 学 院 实 验 动 物 中 心 提 供, 许 可 证 号 :SCXK( 军 ) , 饲 养 于 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 清 洁 级 动 物 房, 合 格 证 号 : SYXK( 京 ) , 试 验 开 始 前 和 结 束 时 各 称 量 体 重 1 次, 隔 日 称 量 体 重 并 根 据 体 重 调 整 给 药 量 1 3 剂 量 分 组 将 符 合 体 重 标 准 的 大 鼠 随 机 分 为 生 理 盐 水 对 照 组 BDNF 对 照 组 ACR 染 毒 组 和 低 高 剂 量 BDNF 干 预 组, 每 组 6 只, 具 体 如 表 1 剂 量 分 组 生 理 盐 水 对 照 组 (NS) BDNF 对 照 组 ACR 染 毒 组 BDNF 低 剂 量 干 预 组 BDNF 高 剂 量 干 预 组 表 1 剂 量 分 组 与 给 药 方 式 给 药 方 式 腹 腔 注 射,5 ml / kg,1 次 / d,6 次 / 周, 连 续 3 周 48 μg / kg BDNF, 尾 静 脉 注 射, 自 染 毒 第 2 周 初 给 药, 隔 日 给 药 1 次 直 至 实 验 结 束, 共 6 次, 首 次 剂 量 加 倍 30 mg / kg ACR, 腹 腔 注 射,5 ml / kg,1 次 / d,6 次 / 周, 连 续 3 周 30 mg / kg ACR, 腹 腔 注 射,5 ml / kg,1 次 / d,6 次 / 周, 连 续 3 周 ;12 μg / kg BDNF, 尾 静 脉 注 射, 自 染 毒 第 2 周 初 给 药, 隔 日 给 药 1 次 直 至 实 验 结 束, 共 6 次, 首 次 剂 量 加 倍 30 mg / kg ACR, 腹 腔 注 射,5 ml / kg,1 次 / d,6 次 / 周, 连 续 3 周 ;48 μg / kg BDNF, 尾 静 脉 注 射, 自 染 毒 第 2 周 初 给 药, 隔 日 给 药 1 次 直 至 实 验 结 束, 共 6 次, 首 次 剂 量 加 倍 1 4 神 经 行 为 评 价 体 征 : 染 毒 当 日 和 染 毒 后 观 察 期 内 每 日 观 察 动 物 的 大 体 行 为 表 现, 记 录 异 常 体 征 步 态 评 分 [5 6] : 试 验 开 始 前 和 试 验 开 始 后 每 周 末 进 行 1 次 步 态 评 分 检 查, 将 大 鼠 置 于 空 旷 地 面 使 其 自 主 活 动, 观 察 3 min, 记 录 步 态 评 分 分 值 评 分 原 则 为 :1 分, 正 常 步 态 ;2 分, 轻 微 异 常 步 态 ( 轻 微 的 共 济 失 调 足 张 开 行 动 吃 力 );3 分, 中 度 异 常 步 态 ( 明 显 的 共 济 失 调 足 张 开 移 动 时 肢 体 外 展 );4 分, 重 度 异 常 步 态 ( 足 张 开 不 能 支 持 体 重 无 法 站 立 ) 后 肢 撑 力 : 试 验 开 始 前 和 试 验 结 束 后 各 进 行 1 次 后 肢 撑 力 距 离 测 量, 使 大 鼠 从 距 离 着 陆 平 面 30 cm 处 自 由 落 下, 测 量 着 陆 时 其 后 爪 尖 滑 开 的 最 远 距 离, 每 只 大 鼠 测 3 次, 每 次 间 隔 30 min, 取 均 值 1 5 病 理 检 查 试 验 结 束 时 对 实 验 动 物 进 行 大 体 解 剖 检 查, 摘 取 重 要 的 脏 器 ( 脑 分 区 脊 髓 心 肝 脾 肺 肾 睾 丸 附 睾 卵 巢 子 宫 坐 骨 神 经 等 ), 置 于 4% 甲 醛 固 定 液 中 固 定, 组 织 经 修 块 梯 度 酒 精 脱 水 后 石 蜡 包 埋, 切 片 厚 度 5 μm, 苏 木 素 - 伊 红 ( HE) 染 色, 光 学 显 微 镜 下 检 查 1 6 血 浆 BDNF 定 量 试 验 开 始 前 和 试 验 结 束 后 采 集 静 脉 血 2 ml, 肝 素 抗 凝 取 血 浆, - 80 保 存 备 用, ELISA 法 (BDNF 酶 联 免 疫 分 析 试 剂 盒 ) 测 定 BDNF 的 质 量 浓 度 1 7 统 计 学 方 法 Excel 2007 建 立 数 据 库, 数 据 用 均 数 ± 标 准 差 ( x ± s) 表 示,SPSS 13 0 软 件 统 计 分 析, 首 先 进 行 正 态 性 和 方 差 齐 性 检 验, 满 足 方 差 分 析 条 件 的 数 据 采 用 ANOVA,SNK 比 较 组 间 差 异, 其 他 指 标 采 用 非 参 数 检 验 分 析, 检 验 水 准 α = 结 果 2 1 体 重 实 验 开 始 前, 各 组 间 动 物 体 重 差 异 无 统 计 学 意 义 ( P > 0 05); 实 验 结 束 时,BDNF 对 照 组 与 NS 对 照 组 大 鼠 体 重 差 异 无 统 计 学 意 义 ( P > 0 05);ACR 染 毒 组 及 BDNF 各 剂 量 干 预 组 大 鼠 体 重 显 著 低 于 对 照 组 (P < 0 05);48 μg / kg BDNF 干 预 组 大 鼠 体 重 显 著 高 于 ACR 染 毒 组 (P < 0 05), 见 表 神 经 行 为 中 毒 体 征 : 染 毒 结 束 时,ACR 染 毒 组 大 鼠 (A 1 B 1 ) 拖 步 肢 体 无 力 后 肢 瘫 痪, 尾 巴 高 抬 以 维 持 肢 体 平 衡 ;BDNF 高 剂 量 干 预 组 大 鼠 (B 2 ) 后 肢 略 显 无 力, 有 外 展 倾 向 ;BDNF 低 剂 量 干 预 组 大 鼠 异 常 体 征 与 ACR 染 毒 组 差 异 不 明 显 ; 对 照 组 大 鼠 (A 2 ) 蹲 伏 于 平 面 时 肢
3 417 毒理学杂志 2014 年 12 月第 28 卷第 6 期 J Toxicol December 2014 Vol 28 No 6 表 2 BDNF 干预对 ACR 所致大鼠体重的影响 g x ± s 153 33 ± 2 42 151 83 ± 3 82 BDNF 对照组 150 33 ± 3 90 152 83 ± 1 83 151 00 ± 1 55 201 50 ± 3 56 表 3 BDNF 干预对 ACR 所致大鼠后肢撑力距离的 影响 cm x ± s 197 50 ± 5 01 8 46 ± 0 45 159 33 ± 6 62 8 55 ± 0 40 15 16 ± 1 01 8 82 ± 0 73 13 69 ± 0 46 147 33 ± 7 06 172 83 ± 5 49 注 与对照组比较 P 0 05 与 比较 P 0 05 n 6 体回缩有力 尾巴自然下垂 见图 1 BDNF 对照组 8 30 ± 1 11 8 79 ± 1 11 8 97 ± 1 54 8 76 ± 0 45 14 94 ± 1 01 注 与对照组比较 P 0 05 与 比较 P 0 05 n 6 红染 核小 变形 浓缩 深染 见图 3A BDNF 低剂量 干预组与 病理病变差异无统计学意义 定 性分析 较 病变略减 轻 表现为空泡数量略少 但尚需定量数据进一步确 证 见图 3B 图 1 不同动物体征 2 2 2 步态评分 实验结束时 及 BDNF 各剂量 干 预 组 大 鼠 步 态 评 分 分 值 高 于 对 照 组 P 0 05 大鼠步 态 评 分 分 值 低 于 P 0 05 各组步态评分变化见图 2 图 3 ACR 和 或 BDNF 引起大鼠主要病理改变 光学显微镜 200 2 4 血浆 BDNF 含量 由表 4 可见 实验前各组间血 浆 BDNF 含量差异无统计学意义 P 0 05 实验结 束时 与 BDNF 各剂量组血浆 BDNF 含量 均较对照组显著降低 P 0 05 的血浆 BDNF 含量显著高于 P 0 05 表 4 ACR 染毒和 BDNF 干预对大鼠血浆整体 BDNF 水平的影响 ng ml x ± s 0 545 ± 0 055 0 559 ± 0 057 图 2 BDNF 干预对 ACR 所致大鼠步态评分的影响 n 6 2 2 3 后肢撑力距离 实验开始前 各组间动物后肢 撑力距离差异无统计学意义 P 0 05 实验结束时 BDNF 对照组与 大鼠后肢撑力距离差异无 统计学意义 P 0 05 BDNF 低剂量干 预组 大 鼠 后 肢 撑 力 距 离 较 对 照 组 显 著 增 加 P 0 05 大鼠后 肢 撑 力 距 离 小 于 P 0 05 见表 3 2 3 组织病理 实验结束时 主要病变 为小脑皮质空泡变性 浦肯野细胞体积缩小 包浆均质 0 551 ± 0 045 0 549 ± 0 071 0 558 ± 0 065 0 254 ± 0 039 0 246 ± 0 038 0 306 ± 0 023 注 与对照组比较 P 0 05 与 比较 P 0 05 n 6 3 讨论 细胞模型可在体外环境下更为专一地进行系统的 机制研究 更有利于机制通路的顺利贯通 但机制研 究的最终目的在于转化应用于人体原型 为疾病的防 控提供线索和依据 由此 人体原型与细胞机制模型 之间如何有效贯通就成为转化的关键 而实验性人类 疾病的动物模型正可弥补两者间的距离 成为基础医
4 418 毒 理 学 杂 志 2014 年 12 月 第 28 卷 第 6 期 J Toxicol December 2014 Vol 28 No 6 学 研 究 成 果 合 理 转 化 的 中 间 桥 梁 由 此, 研 究 人 员 在 发 现 BDNF 细 胞 水 平 干 预 效 果 的 基 础 上, 通 过 优 选 BDNF 的 体 内 干 预 剂 量 和 方 式, 在 实 验 动 物 模 型 上 进 一 步 开 展 BDNF 干 预 效 果 的 实 践 与 验 证 3 1 给 药 方 式 和 给 药 时 点 的 选 择 神 经 营 养 因 子 类 药 物 已 有 一 定 的 临 床 应 用, 如 鞘 内 注 射 脑 室 内 注 射 静 脉 注 射 肌 肉 注 射 等 [7 10] 但 目 前 中 枢 给 药 的 安 全 性 问 题 尚 难 有 效 保 证, 如 体 内 试 验 发 现 脑 室 注 射 BDNF 后 大 鼠 出 现 体 重 减 轻 活 动 过 度 等 异 常 情 况 [11] 由 此, 综 合 用 药 安 全 性 和 人 体 预 防 的 实 际 可 接 受 度 等 因 素, 本 研 究 采 用 静 脉 注 射 这 一 创 伤 较 小 的 外 周 给 药 方 式 目 前, 毒 性 干 预 研 究 主 要 包 括 有 害 因 素 暴 露 之 前 给 药 和 暴 露 过 程 用 药 两 种 类 型 前 者 的 实 用 性 不 强 对 于 暴 露 过 程 用 药, 在 选 择 好 干 预 时 点 的 基 础 上 其 干 预 效 果 的 评 价 比 较 明 确, 既 有 利 于 机 制 通 路 的 研 究, 也 与 我 国 职 业 危 害 防 治 的 实 际 情 况 较 为 吻 合 为 此, 本 研 究 采 用 过 程 干 预 的 方 式 给 予 外 源 性 的 BDNF BDNF 为 水 溶 性 的 大 分 子 物 质, 文 献 综 合 分 析 提 示 正 常 的 血 脑 屏 障 / 血 神 经 屏 障 虽 然 对 它 有 一 定 的 通 透 率, 但 也 有 一 定 的 屏 蔽 作 用, 限 制 其 神 经 组 织 的 有 效 浓 度, 其 对 神 经 疾 病 ( 如 缺 血 缺 氧 性 脑 损 伤 癫 痫 阿 尔 兹 海 默 氏 症 等 ) 的 治 疗 仍 存 在 局 限 [12] 就 本 研 究 而 言,ACR 短 期 重 复 剂 量 中 毒 主 要 表 现 为 中 枢 - 外 周 神 经 症 候 群, 与 很 多 神 经 退 行 性 病 变 具 有 一 定 的 相 似 性, 如 对 于 胶 质 细 胞 的 影 响, 对 于 神 经 髓 鞘 的 损 害 等 前 期 研 究 表 明,ACR 体 外 作 用 24 h 可 显 著 降 低 胶 质 细 胞 ( 雪 旺 细 胞 ) 的 存 活 率 [3] ; 已 有 研 究 表 明,ACR 可 破 坏 髓 鞘 结 构 [13], 而 胶 质 细 胞 和 髓 鞘 正 是 构 成 血 脑 屏 障 的 重 要 物 质 基 础 基 于 此, 干 预 时 点 选 择 ACR 染 毒 1 周 末 2 周 初, 即 在 血 脑 屏 障 受 到 一 定 影 响 而 神 经 异 常 体 征 显 露 前 给 予 BDNF, 并 采 用 首 剂 加 倍 后 隔 日 连 续 给 药 的 方 式, 即 在 短 时 间 内 促 进 药 物 浓 度 达 到 峰 值 后 维 持 相 对 稳 定 的 血 药 浓 度, 以 保 证 BDNF 在 中 枢 和 周 围 产 生 综 合 干 预 效 应 此 种 干 预 方 案 兼 顾 了 药 物 药 理 研 究 的 原 则 BDNF 体 内 代 谢 特 征, 也 考 虑 了 职 业 干 预 措 施 的 应 用 前 景, 具 有 一 定 的 可 操 作 性 和 实 际 应 用 价 值 3 2 干 预 效 果 评 价 的 指 标 体 系 BDNF 体 内 作 用 的 发 挥 是 一 个 多 因 素 综 合 作 用 的 过 程, 为 了 更 好 地 说 明 其 干 预 效 果, 本 研 究 采 用 宏 观 和 微 观 指 标 相 结 合 的 复 合 评 价 体 系, 涉 及 神 经 行 为 神 经 病 理 神 经 生 化 等 研 究 结 果 提 示,BDNF 高 剂 量 干 预 组 与 ACR 单 独 染 毒 组 比 较, 对 于 实 验 动 物 的 神 经 系 统 具 有 一 定 的 保 护 作 用, 如 试 验 结 束 时 体 重 高 于 ACR 染 毒 组, 异 常 体 征 弱 于 ACR 染 毒 组, 步 态 评 分 显 著 低 于 ACR 染 毒 组, 后 肢 撑 力 距 离 较 ACR 染 毒 组 缩 短, 小 脑 皮 质 空 泡 略 少 于 ACR 染 毒 组 外 周 血 BDNF 水 平 能 否 反 映 神 经 系 统 的 BDNF 含 [14] 量 一 直 是 学 术 界 争 论 的 热 点 Karege 等 通 过 实 验 证 实,BDNF 可 以 部 分 通 过 血 脑 屏 障, 且 外 周 血 BDNF 与 脑 内 BDNF 水 平 变 化 趋 势 平 行 血 浆 BDNF 一 般 较 血 清 BDNF 水 平 低 [15] [16] Piccinni 等 随 访 观 察 了 抑 郁 症 患 者 使 用 药 物 治 疗 后 血 浆 和 血 清 的 BDNF 含 量, 结 果 提 示, 抗 抑 郁 治 疗 1 个 月 后 血 浆 BDNF 水 平 恢 复 至 基 本 正 常 并 持 续 到 1 年 随 访 期 末, 但 血 清 BDNF 一 直 无 显 著 改 变, 由 此 认 为 血 浆 BDNF 更 可 能 是 状 态 指 标, 而 血 清 BDNF 为 特 质 指 标 血 浆 BDNF 可 排 除 血 小 板 所 含 BDNF 的 影 响, 能 更 好 地 反 映 神 经 元 和 胶 质 细 胞 所 分 泌 的 BDNF 的 作 用 与 血 清 相 比, 血 浆 BDNF 水 平 更 接 近 于 人 体 的 生 理 状 态, 与 神 经 异 常 体 征 的 相 关 性 分 析 可 以 更 好 地 反 映 BDNF 与 神 经 病 变 严 重 程 度 的 关 联 综 合 上 述, 本 研 究 选 择 血 浆 BDNF 含 量 为 观 察 指 标, 结 果 提 示, 实 验 开 始 前 各 组 间 血 浆 BDNF 含 量 无 显 著 差 异, 说 明 实 验 开 始 时 各 组 血 浆 BDNF 水 平 处 于 相 对 稳 定 的 基 线, 为 试 验 因 素 的 效 应 比 较 提 供 了 较 为 均 一 化 的 平 台 染 毒 结 束 时,ACR 染 毒 组 血 浆 BDNF 水 平 显 著 降 低, 即 ACR 在 体 内 达 到 一 定 的 累 积 剂 量 时 造 成 神 经 系 统 损 伤, 中 毒 体 征 明 确, 机 体 的 自 我 调 节 机 制 失 效,BDNF 水 平 显 著 降 低 适 宜 剂 量 的 外 源 性 BDNF 干 预 对 ACR 所 造 成 的 整 体 BDNF 水 平 减 低 的 趋 势 有 所 拮 抗, 在 一 定 程 度 上 弱 化 其 损 伤 效 应 综 合 上 述, 适 时 适 量 给 予 外 源 性 BDNF 在 实 验 动 物 ( 大 鼠 ) 水 平 对 ACR 神 经 毒 性 具 有 一 定 的 干 预 效 应, 体 现 在 体 重 神 经 行 为 神 经 生 化 神 经 病 理 等 方 面, 但 其 具 体 机 制 通 路 有 待 深 入 探 讨 参 考 文 献 [ 1 ] Ploughman M, Windle V, MacLellan CL, et al. Brain derived neurotrophic factor contributes to recovery of skilled reaching after focal ischemia in rats [ J]. Stroke, 2009, 40 (4): [ 2 ] Wellmer A, Misra VP, Sharief MK, et al. A double blind placebo controlled clinical trial of recombinant human brain derived neurotrophic factor ( rhbdnf ) in diabetic polyneuropathy [J]. J Peripher Nerv Syst, 2001, 6 (4):
5 毒 理 学 杂 志 2014 年 12 月 第 28 卷 第 6 期 J Toxicol December 2014 Vol 28 No [ 3 ] 肖 经 纬, 郭 灿 烂, 牛 凯 龙, 等. 雪 旺 细 胞 在 ACR 对 运 动 神 经 元 损 伤 及 修 复 过 程 中 的 作 用 研 究 [J]. 毒 理 学 杂 志, 2011, 25(5): [ 4 ] 肖 经 纬, 孙 彦 彦, 王 秀 会, 等. 脑 源 性 神 经 营 养 因 子 对 丙 烯 酰 胺 致 NB 1 细 胞 损 伤 的 保 护 作 用 [ J]. 毒 理 学 杂 志, 2014, 28(4): [ 5 ] LoPachin RM, Ross JF, Reid ML, et al. Neurological evaluation of toxic axonopathies in rats: acrylamide and 2, 5 hexanedione[ J]. Neurotoxicology, 2002, 23 ( 1 ): [ 6 ] Edwards PM, Parker VH. A simple, sensitive, and objective method for early assessment of acrylamide neuropathy in rats [ J]. Toxicol Appl Pharmacol, 1997, 40 (3): [ 7 ] Dechant G, Neumann H. Neurotrophins [ J]. Adv Exp Med Biol, 2002, 513: [ 8 ] Apfel SC, Kessler JA. Neurotrophic factors in the therapy of peripheral neuropathy [ J ]. Baillieres Clin Neurol, 1995, 4 (3): [ 9 ] Keiner S, Witte OW, Redecker C. Immunocytochemical detection of newly generated neurons in the perilesional area of cortical infarcts after intraventricular application of brain derived neurotrophic factor [ J]. J Neuropathol Exp Neurol, 2009, 68(1): [10] Agterberg MJ, Versnel H, de Groot JC, et al. Morphological changes in spiral ganglion cells after intracochlear application of brain derived neurotrophic factor in deafened guinea pigs [J]. Hear Res, 2008, 244(1 / 2): [11] Pizzo DP, Thal LJ. Intraparenchymal nerve growth factor improves behavioral deficits while minimizing the adverse effects of intracerebroventricular delivery [J]. Neuroscience, 2004, 124 (4): [12] Autry AE, Monteggia LM. Brain derived neurotrophic factor and neuropsychiatric disorders [ J]. Pharmacol Rev, 2012, 64 (2): [13] LoPachin RM, Balaban CD, Ross JF. Acrylamide axonopathy revisited [ J]. Toxicol Appl Pharmacol, 2003, 188 (3): [14] Karege F, Schwald M, Cisse M. Postnatal developmental profile of brain derived neurotrophic factor in rat brain and platelets [J]. Neurosci Lett, 2002, 328(3): [15] Cho HC, Kim J, Kim S, et al. The concentrations of serum, plasma and platelet BDNF are all increased by treadmill VO (2max) performance in healthy college men [J]. Neurosci Lett, 2012, 519 (1): [16] Piccinni A, Marazziti D, Catena M, et al. Plasma and serum brain derived neurotrophic factor (BDNF) in depressed patients during 1 year of antidepressant treatments [ J]. J Affect Disord, 2008, 105 (1 / 3): ( 收 稿 日 期 : ) 读 者 作 者 编 者 作 者 设 计 表 格 须 知 ( 一 ) 作 者 在 设 计 表 格 时, 首 先 要 考 虑 表 题 是 否 有 自 明 性, 即 读 者 一 看 表 题, 就 知 道 表 文 要 表 达 的 内 容 ; 并 注 意 表 题 字 数 一 般 不 要 超 过 15 个 字, 表 题 中 尽 量 不 用 标 点 符 号 ; 如 表 中 数 据 均 为 同 一 剂 量 单 位 或 ( 和 ) 表 中 的 样 本 数 ( 动 物 数 ) 各 组 均 相 同 时, 则 将 剂 量 单 位 或 ( 和 ) 样 本 数 等 均 列 于 表 题 之 后 的 () 中 本 刊 编 辑 部
1600 1000 40 50 2030 2000 采 取 行 动 的 机 会 90% 开 拓 成 功 的 道 路 2
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