925 号 分 子 [1], 对 外 伤 性 脑 损 伤 具 有 一 定 的 治 疗 作 用, 已 被 纳 入 第 三 期 临 床 试 验 [2] 但 黄 体 酮 对 视 网 膜 神 经 细 胞 损 伤 的 保 护 作 用 却 罕 见 报 道 本 研 究 通 过 建 立 大 鼠 视 神 经 不 完

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1 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 924 欁 欁 引 文 格 式 : 白 瑜, 陈 乾, 安 国 禹, 赵 平. 黄 体 酮 在 大 鼠 视 神 经 损 伤 再 生 中 的 保 护 作 用 [J]. 眼 科 新 进 展,2015,35(10): doi: /j.cnki.rao 实 验 研 究 黄 体 酮 在 大 鼠 视 神 经 损 伤 再 生 中 的 保 护 作 用 白 瑜 陈 乾 安 国 禹 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 作 者 简 介 : 白 瑜, 女,1981 年 6 月 出 生, 河 北 石 家 庄 人, 硕 士, 主 治 医 师 主 要 从 事 眼 科 眼 底 病 及 视 神 经 病 变 方 面 的 研 究 联 系 电 话 : ;E mail:ixus60_love@ 126.com AboutBAI Yu:Female,born in June,1981.Masterdegree,atending doctor.tel: ;e mail:ix us60_love@126.com 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : 本 文 编 辑 : 周 志 新 作 者 单 位 : 河 北 省 石 家 庄 市, 石 家 庄 市 第 二 医 院 眼 科 ( 白 瑜 ); 河 北 省 石 家 庄 市, 河 北 医 科 大 学 附 属 第 三 医 院 眼 科 ( 陈 乾, 赵 平 ); 河 北 省 沧 州 市, 献 县 中 医 医 院 眼 科 ( 安 国 禹 ) 通 讯 作 者 : 赵 平,E mail:zhpsjz@ 126.com Receiveddate:Nov13,2014 Accepteddate:Mar15,2015 FromtheDepartmentofOphthalmolo gy,thesecondhospitalofshijiazhuang (BAIYu),Shijiazhuang050051,He beiprovince,china;departmentof Ophthalmology,theThirdHospitalAf filiated to HebeiMedicalUniversity (CHEN Qian,ZHAO Ping),Shiji azhuang050051,hebeiprovince,chi na;department of Ophthalmology, HospitalofTraditionalChineseMedi cineofxiancountry(an Guo Yu), Cangzhou ,Hebei Province, China Responsibleauthor:ZHAO Ping,E mail:zhpsjz@126.com 赵 平 Protectiveefectsofprogesteroneinregenerationafter opticnerveinjury BAIYu,CHEN Qian,AN Guo Yu,ZHAO Ping Keywords opticalnerveinjury;retinalganglioncel;progesterone;glutamatetran sporter 1;activatedp38 MAPK Abstract Objective Todiscusstheroleandmechanism ofprogesteroneinthe treatmentoftraumaticretinalandopticnerveinjury.methods Eightyratsweredi videdinto4groupsinrandom,normalgroup(notoperated),sham injurygroup(ex posedtherightopticalnervebutnotinjured),injury1group(madeincompleteoptic damagemodelswithrighteyeandgaveintraperitonealinjectionofsalineimmediately), injury2group(madeincompleteopticdamagemodelswithrighteyeandgaveintraper itonealinjectionofprogesterone1hourlater).at1day,3days,7daysand14daysafter injury,therighteyebalof5ratsintheeverygroupswereexcised.theretinaltissuewas taken,themorphologicchangesoftheretinawasobservedbyhestaining,andimmuno histochemistrywasusedtoobservetheexpressionofglutamatetransporter 1(GLT 1) andactivatedp38 MAPK(p p38).results Afterprogesteronetreatmentofinjury2 group,theratretinalnuclearwasinalignment,theextentsofsparseandvacuolization wereslight,andtheretinalmorphologicalchangeswerefew.theimmumohistochemical resultsshowedthatthemeanopticaldensityofglt 1expressionsintheinjury2group at1day,3days,7daysand14daysafterinjurywere0.461±0.011,0.231±0.021, 0.132±0.022,and0.103±0.013,respectively,whichwerehigherthanthoseintheinju ry1group(0.368±0.033,0.151±0.027,0.106±0.031and0.076±0.020),therewere statisticaldiferences(alp<0.05).andexpressionofp p38decreased.themeanopti caldensityofp p38expressionintheinjury2groupat1day,3days,7daysafterinjury were0.339±0.019,0.245±0.014and0.154±0.032,respectively,whichwerelower thanthoseintheinjury1group(0.459±0.029,0.324±0.023and0.201±0.024),there werestatisticaldiferences(alp<0.05).conclusion tiveefectsontraumaticretinalandopticnerveinjury. Progesteronehastheprotec 关 键 词 视 神 经 损 伤 ; 视 网 膜 神 经 节 细 胞 ; 黄 体 酮 ; 谷 氨 酸 转 运 体 1; 活 化 p38 MAPK 摘 要 目 的 探 讨 黄 体 酮 对 外 伤 引 起 的 视 网 膜 及 视 神 经 损 伤 后 再 生 的 作 用 及 机 制 方 法 80 只 大 鼠 随 机 分 为 正 常 组 ( 不 作 任 何 处 理 ) 假 损 伤 组 ( 只 暴 露 视 神 经, 不 夹 伤 ) 损 伤 1 组 ( 行 视 神 经 不 完 全 损 伤 处 理, 伤 后 即 刻 给 予 腹 腔 注 射 生 理 盐 水 ) 损 伤 2 组 ( 行 视 神 经 不 完 全 损 伤 处 理, 伤 后 1h 给 予 腹 腔 注 射 黄 体 酮 注 射 液 ) 分 别 于 损 伤 后 1d 3d 7d 14d 将 各 组 5 只 大 鼠 右 眼 球 摘 除, 取 视 网 膜 组 织,HE 染 色 光 学 显 微 镜 观 察 视 网 膜 形 态 学 变 化, 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 视 网 膜 组 织 中 谷 氨 酸 转 运 体 1(glutamatetransporter 1,GLT 1) 及 活 化 P38 MAPK(p p38) 的 表 达 变 化 结 果 经 黄 体 酮 治 疗 的 损 伤 2 组 各 个 时 间 点 大 鼠 视 网 膜 细 胞 核 排 列 整 齐, 稀 疏 程 度 及 空 泡 化 较 轻, 视 网 膜 形 态 改 变 轻 微 免 疫 组 织 化 学 染 色 检 测 损 伤 1 组 视 网 膜 GLT 1 在 损 伤 后 1d 3d 7d 14d 表 达 的 平 均 光 密 度 值 分 别 为 0.368± ± ±0.031 和 0.076±0.020, 损 伤 2 组 分 别 为 0.461± ± ±0.022 和 0.103±0.013, 各 时 间 点 损 伤 2 组 较 损 伤 1 组 均 有 所 增 加, 差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( 均 为 P<0.05) 损 伤 1 组 视 网 膜 p p38 在 损 伤 后 1d 3d 7d 表 达 的 平 均 光 密 度 值 分 别 为 0.459± ±0.023 和 0.201±0.024, 损 伤 2 组 分 别 为 0.339± ±0.014 和 0.154±0.032, 各 时 间 点 损 伤 2 组 较 损 伤 1 组 均 明 显 降 低, 差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( 均 为 P<0.05) 结 论 黄 体 酮 对 外 伤 性 视 网 膜 及 视 神 经 损 伤 均 具 有 保 护 作 用 各 种 原 因 引 起 的 视 神 经 损 伤 都 会 造 成 视 觉 传 导 障 碍 从 而 影 响 视 力, 严 重 者 甚 至 失 明 视 神 经 损 伤 后 视 功 能 恢 复 的 关 键 因 素 是 受 损 视 神 经 的 再 生 因 此, 寻 找 促 进 视 神 经 损 伤 修 复 再 生 作 用 的 药 物 和 方 法 成 为 现 代 眼 科 学 研 究 的 热 点 黄 体 酮 是 目 前 临 床 上 广 泛 应 用 的 一 种 类 固 醇 激 素 近 年 的 研 究 表 明, 黄 体 酮 作 为 一 种 性 激 素, 其 作 用 已 远 远 超 出 妇 产 科 临 床 应 用 的 范 畴, 它 还 是 神 经 系 统 中 一 种 重 要 的 信

2 925 号 分 子 [1], 对 外 伤 性 脑 损 伤 具 有 一 定 的 治 疗 作 用, 已 被 纳 入 第 三 期 临 床 试 验 [2] 但 黄 体 酮 对 视 网 膜 神 经 细 胞 损 伤 的 保 护 作 用 却 罕 见 报 道 本 研 究 通 过 建 立 大 鼠 视 神 经 不 完 全 损 伤 模 型, 探 讨 黄 体 酮 在 视 神 经 损 伤 后 对 视 网 膜 的 保 护 作 用 及 对 视 网 膜 组 织 中 谷 氨 酸 转 运 体 1(glutamatetransporter 1,GLT 1) 活 化 P38 MAPK(p p38) 表 达 的 影 响, 为 黄 体 酮 治 疗 视 神 经 损 伤 的 临 床 应 用 提 供 理 论 基 础 和 实 验 依 据 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 试 剂 黄 体 酮 注 射 液 ( 上 海 通 用 药 业 股 份 有 限 公 司 ),GLT 1 抗 兔 多 克 隆 抗 体 ( 北 京 博 奥 森 生 物 技 术 有 限 公 司 ),p p38 抗 兔 多 克 隆 抗 体 ( 美 国 SantaCruz 公 司 ) 1.2 实 验 动 物 及 分 组 清 洁 级 健 康 SD 大 鼠, 体 质 量 (200±20)g, 行 外 眼 及 眼 底 检 查 无 病 变 的 纳 入 实 验, 雌 雄 不 限 选 择 右 眼 为 实 验 眼,80 只 大 鼠 随 机 分 为 四 组 : 正 常 组 20 只 ( 不 作 任 何 处 理 ); 假 损 伤 组 20 只 ( 只 暴 露 右 眼 视 神 经, 不 夹 伤 ); 损 伤 1 组 20 只 ( 右 眼 行 视 神 经 不 完 全 损 伤 处 理, 伤 后 给 予 生 理 盐 水 10 mg kg -1 腹 腔 注 射, 每 天 1 次 ); 损 伤 2 组 20 只 ( 右 眼 行 视 神 经 不 完 全 损 伤 处 理, 伤 后 给 予 黄 体 酮 注 射 液 10mg kg -1 腹 腔 注 射, 每 天 1 次 ) 1.3 方 法 视 神 经 损 伤 模 型 的 制 作 术 前 3d 给 予 环 丙 [3] 沙 星 滴 眼 液 滴 右 眼, 每 天 6 次 按 照 黄 厚 斌 等 的 方 法 制 作 视 神 经 不 完 全 损 伤 模 型, 右 眼 为 损 伤 眼 :50 g L -1 水 合 氯 醛 (7mL kg -1 ) 腹 腔 注 射 麻 醉 动 物, 于 角 膜 缘 处 剪 开 颞 侧 球 结 膜, 剪 断 外 直 肌, 弯 剪 钝 性 分 离 暴 露 视 神 经, 仔 细 分 离 视 神 经 周 围 血 管, 不 损 伤 血 管 在 球 后 2mm 处 用 压 力 恒 定 78g 反 向 镊 ( 尖 端 1mm 宽 ) 夹 闭 视 神 经 20s 瞳 孔 散 大, 直 接 对 光 反 射 消 失, 直 接 眼 底 镜 观 察 眼 底, 无 视 网 膜 出 血, 有 动 脉 血 液 供 应 者 纳 入 实 验 8 号 缝 线 缝 合 切 口, 涂 氧 氟 沙 星 眼 膏, 每 天 3 次, 至 实 验 结 束 HE 染 色 及 免 疫 组 织 化 学 染 色 损 伤 后 1d 3d 7d 14d 分 别 随 机 摘 除 各 组 5 只 大 鼠 右 眼 球, 取 视 网 膜 组 织 固 定 切 片, 以 视 盘 上 方 2mm 的 视 网 膜 组 织 作 为 观 察 对 象 HE 染 色 光 学 显 微 镜 观 察 视 网 膜 形 态 学 变 化, 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 视 网 膜 组 织 中 GLT 1 及 活 化 P38 MAPK(p p38) 的 表 达 变 化, 利 用 计 算 机 图 像 分 析 软 件 进 行 半 定 量 检 测 平 均 光 密 度 (averageopticaldensity,aod) 值, 以 免 疫 阳 性 染 色 的 AOD 值 来 表 示 抗 原 表 达 量,AOD 值 越 高 则 阳 性 表 达 越 强 1.4 统 计 学 分 析 采 用 SPSS13.0 统 计 软 件 进 行 分 析, 实 验 数 据 以 均 数 ± 标 准 差 ( x±s) 珋 表 示, 统 计 学 处 理 采 用 多 样 本 均 数 的 单 因 素 方 差 分 析 或 独 立 样 本 t 检 验, 组 间 比 较 采 用 LSD t 检 验 P<0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 2 结 果 2.1 视 网 膜 HE 染 色 观 察 结 果 正 常 组 和 假 损 伤 组 : 视 网 膜 组 织 结 构 清 晰, 视 网 膜 神 经 节 细 胞 排 列 整 齐, 细 胞 核 排 列 规 则, 各 时 间 点 间 无 明 显 差 异 损 伤 1 组 : 损 伤 后 1d 时 视 网 膜 神 经 节 细 胞 部 分 轻 度 水 肿, 结 构 欠 清 晰, 数 量 未 见 明 显 减 少, 各 层 细 胞 核 未 见 显 著 改 变 ;3d 时 视 网 膜 神 经 节 细 胞 数 量 轻 度 减 少, 稍 显 稀 疏, 内 核 层 和 外 核 层 胞 核 未 见 明 显 变 化, 细 胞 坏 死 不 明 显 ( 图 1A);7d 时 神 经 节 细 胞 层 可 见 空 化 的 细 胞, 内 核 层 和 外 核 层 胞 核 稀 疏, 开 始 变 薄, 细 胞 坏 死 明 显 ( 图 1B);14d 时 神 经 节 细 胞 丢 失 增 加, 大 量 空 化 的 神 经 节 细 胞, 内 核 层 和 外 核 层 细 胞 核 稀 疏 更 加 显 著 ( 图 1C) 损 伤 2 组 : 损 伤 后 1d 时 视 网 膜 神 经 节 细 胞 稍 显 水 肿, 排 列 尚 整 齐, 数 量 未 见 减 少, 细 胞 核 未 发 现 变 化 ;3d 时 神 经 节 细 胞 数 量 减 少 不 明 显, 内 核 层 和 外 核 层 细 胞 核 无 明 显 改 变, 损 伤 较 正 常 组 3d 时 轻 ( 图 1D);7d 时 神 经 节 细 胞 偶 见 空 化 细 胞, 胞 核 稀 疏 不 明 显, 内 核 层 和 外 核 层 较 3d 时 变 薄, 但 较 正 常 组 损 伤 程 度 轻 ( 图 1E);14d 神 经 节 细 胞 空 化 细 胞 增 加, 内 核 层 和 外 核 层 胞 核 稀 疏 变 薄 ( 图 1F) 2.2 GLT 1 的 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 及 半 定 量 检 测 结 果 GLT 1 的 免 疫 阳 性 表 达 主 要 位 于 内 丛 状 层 内 核 层 和 外 丛 状 层, 呈 深 棕 色 染 色 正 常 组 和 假 损 伤 组 大 鼠 视 网 膜 在 内 丛 状 层 和 内 核 层 可 见 深 棕 色 阳 性 表 达, 各 个 时 间 点 无 明 显 变 化 损 伤 1 组 大 鼠 损 伤 后 1d 时 视 网 膜 GLT 1 阳 性 表 达 较 正 常 组 明 显 增 强 ( 图 2A),3d 时 阳 性 表 达 急 剧 下 降 ( 图 2B),7d 14d 时 表 达 明 显 减 弱, 较 正 常 组 低 ( 图 2C 图 2D) 损 伤 2 组 损 伤 后 1d 时 视 网 膜 GLT 1 阳 性 表 达 较 损 伤 1 组 增 强 ( 图 2E),3d 时 表 达 减 弱 ( 图 2F),7d 14d 呈 下 降 趋 势, 但 阳 性 表 达 仍 比 损 伤 1 组 强 ( 图 2G 图 2H) 损 伤 后 1d 时, 正 常 组 和 假 损 伤 组 AOD 值 差 异 无 统 计 学 意 义 (P>0.05), 损 伤 1 组 AOD 值 高 于 正 常 组 (P< 0 05), 但 低 于 损 伤 2 组 (P<0.05);3d 7d 14d 时, 损 伤 1 2 组 AOD 值 均 低 于 正 常 组 ( 均 为 P<0.05), 损 伤 1 组 AOD 值 均 低 于 损 伤 2 组 ( 均 为 P<0 05, 见 表 1) 表 1 不 同 时 间 视 网 膜 表 达 GLT 1 的 AOD 值 Table1 AODvalueofretinalGLT 1expresionatdiferent time (n=5, 珋 x±s) Group 1day 3days 7days 14days Normal 0.201± ± ± ±0.015 Shaminjury 0.188± ± ± ±0.022 Injury ± ± ± ±0.020 Injury ± ± ± ± p p38 免 疫 组 织 化 学 染 色 观 察 及 半 定 量 检 测 结 果 p p38 免 疫 组 织 化 学 阳 性 表 达 主 要 位 于 视 神 经 节 细 胞 层, 在 细 胞 核 内 表 达, 呈 深 棕 色 染 色 正 常 组 和 假 损 伤 组 大 鼠 视 网 膜 各 层 均 未 见 p p38 免 疫 阳 性 表 达, 每 个 时 间 点 无 明 显 变 化 损 伤 1 组 损 伤 后 1d 时 视 网 膜 可 见 p p38 阳 性 表 达 ( 图 3A),3d 7d 时 缓

3 926 慢 下 降 ( 图 3B),14d 表 达 阴 性 ( 图 3C) 损 伤 2 组 损 伤 后 1d 时 视 网 膜 p p38 阳 性 表 达 较 损 伤 1 组 弱 ( 图 3D),3d 7d 时 表 达 明 显 下 降 ( 图 3E),14d 时 表 达 阴 性 ( 图 3F) 损 伤 后 1d 3d 和 7d 时, 损 伤 2 组 AOD 值 均 低 于 损 伤 1 组, 差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( 均 为 P<0.05, 见 表 2) Figure1 HEstainingofretina( 400).A:Injury1groupat3days;B:Injury1groupat7days;C:Injury1groupat14days;D:Injury2groupat3 days;e:injury2groupat7days;f:injury2groupat14days 视 网 膜 HE 染 色 ( 400) A: 损 伤 1 组 3d;B: 损 伤 1 组 7d;C: 损 伤 1 组 14d;D: 损 伤 2 组 3d;E: 损 伤 2 组 7d;F: 损 伤 2 组 14d Figure2 ImmunohistochemicalstainingofretinaforGLT 1( 400).A:Injury1groupat1day;B:Injury1groupat3days;C:Injury1groupat7 days;d:injury1groupat14days;e:injury2groupat1day;f:injury2groupat3days;g:injury2groupat7days;h:injury2groupat14days 视 网 膜 GLT 1 免 疫 组 织 化 学 染 色 ( 400) A: 损 伤 1 组 1d;B: 损 伤 1 组 3d;C: 损 伤 1 组 7d;D: 损 伤 1 组 14d;E: 损 伤 2 组 1d;F: 损 伤 2 组 3d;G: 损 伤 2 组 7d;H: 损 伤 2 组 14d 表 2 半 定 量 检 测 不 同 时 间 视 网 膜 表 达 p p38 的 AOD 值 Table2 AODvalueofretinalp p38expresionatdiferent time (n=5, x±s) 珋 Group 1day 3days 7days Injury ± ± ±0.024 Injury ± ± ± 讨 论 视 神 经 损 伤 后 视 力 的 恢 复 是 建 立 在 视 神 经 再 生 的 基 础 之 上 的 视 神 经 的 再 生 是 一 个 复 杂 的 过 程, 再 生 的 前 提 条 件 首 先 是 要 保 证 神 经 节 细 胞 的 存 活 [4] 损 伤 造 成 神 经 节 细 胞 的 丢 失 在 动 物 实 验 中 更 能 得 到 详 细 的 研 究 [5 7] 视 神 经 损 伤 后 导 致 节 细 胞 死 亡 的 原 因 有 多 种, 谷 氨 酸 的 堆 积 是 其 中 一 种 谷 氨 酸 是 一 种 兴 奋 性 神 经 递 质, 介 导 着 视 网 膜 神 经 细 胞 间 的 信 息 传 递 同 时 它 又 是 一 种 潜 在 的 神 经 细 胞 兴 奋 性 毒 素 由 于 损 伤 或 其 他 原 因 引 起 细 胞 外 谷 氨 酸 聚 集, 可 以 导 致 钙 离 子 大 量 内 流, 从 而 激 活 各 种 凋 亡 路 径 ( 包 括 p38 MAPK 通 路 ) 它 作 用 于 谷 氨 酸 受 体 ( 包 含 代 谢 型 受 体 和 离 子 型 受 体 ), 而 后 者 又 进 一 步 分 为 NMDA 受 体

4 927 Figure3 Immunohistochemicalstainingofretinaforp p38( 400).A:Injury1groupat1day;B:Injury1groupat7days;C:Injury1groupat14 days;d:injury2groupat1day;e:injury2groupat7days;f:injury2groupat14days 视 网 膜 p p38 免 疫 组 织 化 学 染 色 ( 400) A: 损 伤 1 组 1d;B: 损 伤 1 组 7d;C: 损 伤 1 组 14d;D: 损 伤 2 组 1d;E: 损 伤 2 组 7d;F: 损 伤 2 组 14d 和 非 NMDA 受 体 众 多 实 验 研 究 已 证 实, 谷 氨 酸 的 神 经 兴 奋 性 毒 性 主 要 是 由 于 过 度 刺 激 NMDA 受 体 引 起 的 级 联 反 应, 其 中 细 胞 内 钙 离 子 浓 度 的 升 高 被 认 为 是 关 键 所 在 [8], 但 其 机 制 尚 不 清 楚 与 之 对 应, 中 枢 神 经 系 统 包 含 两 类 谷 氨 酸 转 运 体 系 统, 它 们 的 作 用 是 将 突 触 间 隙 内 的 谷 氨 酸 转 运 至 胞 体 内, 调 节 突 触 间 谷 氨 酸 的 浓 度 一 类 是 囊 泡 膜 谷 氨 酸 转 运 体, 另 一 类 是 质 膜 谷 氨 酸 转 运 体 谷 氨 酸 转 运 体 1 (GLT 1) 属 于 质 膜 谷 氨 酸 转 运 体, 为 视 网 膜 组 织 中 摄 取 胞 外 谷 氨 酸 的 主 要 转 运 体, 通 过 及 时 转 运 胞 外 的 谷 氨 酸, 防 止 胞 外 浓 度 过 高, 维 持 视 网 膜 中 谷 氨 酸 正 常 的 平 衡 状 态 [9] 视 神 经 损 伤 后 神 经 节 细 胞 胞 外 谷 氨 酸 浓 度 升 高,GLT 1 表 达 会 出 现 一 个 短 暂 的 升 高, 随 后 迅 速 降 至 正 常 水 平 以 下 如 果 在 视 神 经 损 伤 后 能 够 进 一 步 增 加 GLT 1 的 表 达 并 能 够 维 持 或 者 减 缓 其 下 降, 或 许 可 以 转 运 更 多 的 谷 氨 酸, 降 低 神 经 毒 性 从 而 起 到 保 护 视 神 经 的 作 用 视 神 经 节 细 胞 凋 亡 路 径 之 一 的 丝 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶 家 族 (MAPKs) 是 一 种 进 化 的 保 守 酶, 连 接 细 胞 表 面 受 体 到 细 胞 内 调 控 中 心 的 信 号 转 导 系 统, 负 责 调 节 包 括 细 胞 迁 移 增 生 和 分 化 在 内 的 多 种 细 胞 功 能, 包 括 有 ERK JNK p38 三 条 通 路 [10] p38 通 路 在 受 到 紫 外 线 内 毒 素 致 炎 细 胞 因 子 等 的 刺 激 时, 以 双 重 磷 酸 化 的 形 式 被 激 活, 通 过 调 控 肿 瘤 坏 死 因 子 诱 导 p53 基 因 等 多 种 途 径 介 导 细 胞 凋 亡 黄 体 酮 在 神 经 组 织 的 代 谢 途 径 与 其 在 内 分 泌 腺 中 有 所 不 同, 神 经 组 织 内 存 在 有 黄 体 酮 的 代 谢 酶, 可 使 其 转 化 为 具 有 神 经 活 性 的 代 谢 物 质 [11] 而 且 黄 体 酮 可 以 诱 导 海 马 神 经 元 分 泌 脑 源 性 神 经 营 养 因 子 (BDNF) [12 13], 有 研 究 已 经 证 实 BDNF 加 入 培 养 基 中 能 显 著 增 加 体 外 培 养 的 成 熟 的 星 形 胶 质 细 胞 GLT 1 的 表 达 [14] 视 神 经 属 于 中 枢 神 经 系 统 的 一 部 分, 本 实 验 观 察 到 在 视 神 经 损 伤 模 型 的 大 鼠 给 予 黄 体 酮 注 射 后, 其 视 网 膜 神 经 节 细 胞 丢 失 量 明 显 减 少, 且 内 核 层 和 外 核 层 情 况 也 明 显 好 于 对 照 组 这 可 能 与 黄 体 酮 在 损 伤 早 期 通 过 诱 导 海 马 神 经 元 分 泌 BDNF 从 而 增 加 了 GLT 1 的 表 达, 并 且 使 其 下 降 的 速 度 减 缓 有 关, 这 间 接 降 低 了 谷 氨 酸 的 浓 度, 减 少 了 谷 氨 酸 的 兴 奋 性 毒 性, 起 到 了 保 护 视 神 经 的 作 用 从 p p38 免 疫 组 织 化 学 半 定 量 检 测 的 结 果 来 看, 注 射 黄 体 酮 的 大 鼠 伤 后 早 期 视 网 膜 中 p p38 的 阳 性 表 达 就 低 于 正 常 组, 证 明 黄 体 酮 在 视 神 经 损 伤 的 早 期 就 通 过 增 加 GLT 1 的 表 达 抑 制 钙 离 子 在 细 胞 内 的 堆 积 所 激 活 的 p38 MAPK 通 路, 阻 断 了 其 介 导 的 细 胞 凋 亡, 并 且 视 网 膜 神 经 节 细 胞 存 活 的 数 量 也 随 之 增 加, 视 网 膜 内 外 核 层 细 胞 丢 失 程 度 也 较 正 常 组 轻, 这 说 明 黄 体 酮 不 仅 对 视 神 经 损 伤 后 的 视 网 膜 神 经 节 细 胞 有 保 护 作 用, 对 视 网 膜 其 他 细 胞 同 样 也 具 有 保 护 作 用 参 考 文 献 1 SchumacherM,GuennounR,MercierG,DesarnaudF,LacorP, BenavidesJ,etal.Progesteronesynthesisandmyelinformation inperipheralnerves[j].brainresrev,2001,37(123): SteinDG,WrightDW.Progesteroneintheclinicaltreatmentof acutetraumaticbraininjury[j].expertopininvestingdrugs, 2010,19(7): 黄 厚 斌, 马 志 中, 张 卯 年. 大 鼠 视 神 经 部 分 损 伤 后 视 神 经 纤 维 再 生 的 形 态 学 观 察 [J]. 中 华 眼 科 杂 志,2006,42(3): Dahlmann NoorAH,VigayS,LimbGA,Khaw PT.Strategiesfor opticnerverescueandregenerationinglaucomaandotheroptic neuropathies[j].drugdiscovtoday,2010,15(7): 祁 晓 君, 冯 炜, 张 洁, 赵 平. 丙 戊 酸 钠 在 大 鼠 视 神 经 损 伤 再 生 中 的 作 用 研 究 及 对 BDNF 表 达 的 影 响 [J]. 中 华 眼 外 伤 职 业 眼 病 杂 志, 2014,36(1):

5 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 928 欁 欁 引 文 格 式 : 胡 迭, 孟 旭 霞, 李 元 伟. 缺 氧 诱 导 因 子 1α 在 大 鼠 角 膜 发 育 过 程 中 的 表 达 [J]. 眼 科 新 进 展,2015,35(10): ,934.doi: /j.cnki.rao 实 验 研 究 缺 氧 诱 导 因 子 1α 在 大 鼠 角 膜 发 育 过 程 中 的 表 达 胡 迭 孟 旭 霞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欞 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 欁 李 元 伟 作 者 简 介 : 胡 迭, 女,1990 年 2 月 出 生, 山 东 菏 泽 人, 硕 士 E mail:hud iewahaha@126.com AboutHUDie:Female,borninFeb ruary,1990.masterdegree.e mail: hudiewahaha@126.com 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : 本 文 编 辑 : 董 建 军 作 者 单 位 : 山 东 省 青 岛 市, 青 岛 眼 科 医 院 通 讯 作 者 : 孟 旭 霞,E mail:mengxux ia@163.com Receiveddate:Nov29,2014 Accepteddate:Jul19,2015 FromtheQingdaoEyeHospital,Qing dao266000,shandongprovince,chi na Responsibleauthor:MENGXu Xia, 关 键 词 大 鼠 ; 角 膜 ; 胚 胎 发 育 ; 缺 氧 诱 导 因 子 1α 摘 要 目 的 观 察 大 鼠 角 膜 在 胚 胎 期 及 生 后 发 育 期 缺 氧 诱 导 因 子 1α(hypoxia induciblefactor 1alpha,HIF 1α) 的 表 达, 探 讨 HIF 1α 与 角 膜 发 育 之 间 的 关 系 方 法 取 实 验 用 Wistar 大 鼠 分 为 8 组 : 胚 胎 12d(E12) 胚 胎 16d(E16) 胚 胎 20d(E20) 生 后 1d(P1) 生 后 7d(P7) 生 后 15d(P15) 生 后 21d(P21) 成 年 组, 每 组 3 只 鼠 6 眼, 共 48 眼 每 只 鼠 取 一 眼, 采 用 免 疫 组 织 化 学 方 法 检 测 HIF 1α 的 表 达, 另 一 眼 采 用 实 时 荧 光 定 量 PCR 方 法 检 测 角 膜 组 织 中 HIF 1αmRNA 的 表 达 (E12 E16 时 鼠 胚 眼 球 较 小, 无 法 分 离 角 膜 组 织, 未 行 PCR 检 测 ) 结 果 免 疫 组 织 化 学 染 色 结 果 显 示, 大 鼠 在 角 膜 发 育 过 程 中,HIF 1α 的 表 达 存 在 时 空 变 化 E12 时, 由 表 面 外 胚 层 分 化 的 两 层 细 胞 内 可 见 明 显 棕 黄 色 颗 粒 E16 时, 分 化 形 成 的 上 皮 层 基 质 层 内 皮 层 中 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 櫄 6 黄 晓 瑛, 赵 平. 米 诺 环 素 对 大 鼠 视 神 经 损 伤 后 视 网 膜 神 经 节 细 胞 和 小 胶 质 细 胞 表 达 的 影 响 [J]. 中 华 眼 外 伤 职 业 眼 病 杂 志,2013, 35(7): 刘 晓 坤, 张 晓 宇, 王, 赵 平. 米 诺 环 素 对 大 鼠 视 神 经 挫 伤 后 视 网 膜 Caspase 3 表 达 的 影 响 [J]. 眼 科 新 进 展,2013,33(12): MehtaSL,ManhasN,RaghubirR.Moleculartargetsincerebral ischemiafordevelopingnoveltherapeutics[j].eurjpharma clo,2010,643(1): BoutrosT,ChevetE,MetrakosP.Mitogenactivatedprotein (MAP)kinase/MAPkinasephosphataseregulation:rolesincel growth,death,andcancer[j].pharmacolrev,2008,60(3): ParkCK,ChaJ,ParkSC,LeePY,Kim JH,Kim HS,etal.Difer entialexpression oftwo glutamate transporters,glast and Theexpressionofhypoxiainduciblefactor 1αincorne adevelopmentofrats HU Die,MENG Xu Xia,LIYuan Wei Keywords rats;cornea;embryonicdevelopment;hypoxia induciblefactor 1α Abstract Objective Toinvestigatetheexpressionofhypoxia induciblefactor 1α(HIF 1α)inrats'corneaduringtheembryonicandpostnatalperiod,andexplorethe roleofhif 1αincornealdevelopmentprocess.Methods Twenty fourwistarrats(48 eyes)weredividedinto8groups:embryonic12day(e12)group,embryonic16day (E16)group,embryonic20day(E20)group,postnatal1day(P1)group,postnatal7 day(p7)group,postnatal15day(p15)group,postnatal21day(p21)groupandadult group,3cases(6eyes)ineachgroup.immunohistochemistrystainingwasusedtoex aminetheexpressionofhif 1αinoneoftheeyebalsamples,andtheexpressionof HIF 1αmRNAintheothereyebalsampleswasdetectedbyreal timepcr(exceptfor E12andE16groupforthetoosmaleyebalsamples).Results Bytheimmunohisto chemistrystaining,thehif 1αwereexpressedchangefulyinthecorneaduringthede velopment.thecorneaexpressedhif 1αobviouslywithbrown yelowintheepithelium ofe12.whene16,hif 1αwasexpressedlargelyinepithelium,stromaandendothelium. WhenE20,thepositiveexpressionmainlylocatedintheepithelialandendotheliallayer, E mail:mengxuxia@163.com weaklyinthestromallayer.whenp1andp7,theeyelidwasadhered,few HIF 1αex pressionlocatedintheeachlayer,theepithelialandendotheliallayerwerestrongerthanthestromallayer.atthep15,the eyelidopened,cornealepithelium expressedaremarkablehif 1α.TheexpressionatP21wasfocusedonthebasementcels ofcornealepithelium,andthehif 1αexpressioninthestromalandendotheliallayernegative.Intheadultgroup,HIF 1α expressionwaspositiveonlyintheepithelialbasementcels.bythereal timepcr,therewasstatisticaldiferenceinhif 1α mrnaexpressionamongdiferentpostnatalperiods(f=97.00,p<0.05).thediferencebetweenp1ande20,adultandp21 werenotstatisticalysignificant(p=0.20,0.05),andstatisticaldiferenceswerefoundbetweenothergroups(p<0.05). Conclusion HIF 1αishighlyandchangefulyexpressedduringthecorneaembryonicandpostnataldevelopment.HIF 1α mayparticipateintheprocessofcornealdiferentiationanddivision. GLT 1,in an experimentalratmodelofglaucoma[j].exp BrainRes,2009,197(2): GonzalezSL,LabombardaF,DeniseleMC,GuennounR,Schu macherm,nicolaaf.progesteroneup regulatesneuronalbrain derivedneurotrophicfactorexpressionintheinjuredspinal cord[j].neuroscience,2004,125(3): AguireCC,BaudryM.Progesteronereverses17β estradiol me diatedneuroprotectionandbdnf inductioninculturedhipp ocampalslices[j].eurjneurosci,2009,29(3): 赵 红 岗, 李 庆 岗, 闫 静, 李 明 阳, 李 东 飞, 李 东 亮. 黄 体 酮 对 脑 创 伤 大 鼠 学 习 记 忆 功 能 的 影 响 [J]. 新 乡 医 学 院 学 报,2005,22(6): KirkpatrickB,KakoyannisA.Sexualdimorphism andthenmda receptorinaloparentalbehaviorinjuvenileprairievoles(micro tusochrogaster)[j].bhavoralnron,2004,118(3):

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