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- 葱局 鲍
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1 早 期 發 現 胃 癌 有 可 能 嗎? 解 開 幽 門 螺 旋 桿 菌 致 癌 之 謎 Molecular Cellular Proteomics (2006) Apr. & Aug. 台 大 醫 學 院 生 化 暨 分 生 所 周 綠 蘋
2 你 被 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 了 嗎? 幽 門 螺 旋 桿 菌 (Helicobacter Pylori, 以 下 簡 稱 HP), 是 一 種 革 蘭 氏 陰 性 細 菌, 其 一 端 有 4 到 6 根 鞭 毛, 此 菌 感 染 全 世 界 約 一 半 的 成 年 人, 台 灣 地 區 的 感 染 率 約 54% 1982 年 時, 馬 歇 爾 (Dr.Barry Marshall) 和 沃 倫 醫 生 (Dr.Robin Warren) 發 現 幽 門 螺 旋 桿 菌 馬 歇 爾 更 親 身 試 驗, 吞 下 幽 門 螺 旋 桿 菌, 隨 即 發 生 急 性 胃 炎, 幽 門 螺 旋 桿 菌 從 此 受 到 醫 界 的 矚 目 2005 年 兩 人 更 憑 此 發 現 獲 得 諾 貝 爾 醫 學 獎
3 幽 門 螺 旋 桿 菌 受 到 矚 目 的 原 因, 是 因 為 它 與 胃 潰 瘍, 十 二 指 腸 潰 瘍, 以 及 胃 癌 有 極 為 密 切 的 關 係 感 染 胃 潰 瘍 發 炎 十 二 指 腸 潰 瘍 酸 度 環 境 的 因 子 Gastric carcinoma 胃 癌
4 幽 門 螺 旋 桿 菌 的 診 斷 侵 入 性 的 內 視 鏡 檢 查 法 需 做 胃 鏡 檢 查 的 方 法, 是 在 胃 鏡 檢 查 時 胃 黏 膜 生 檢 ( 即 俗 稱 之 切 片 檢 查 ), 將 取 得 之 黏 膜 檢 體 分 別 進 行 下 述 檢 查 : 1. 胃 鏡 檢 測 法 (Direct microscopy) 2. 組 織 學 檢 查 (Histology) 3. 細 菌 培 養 (Culture) 4. 快 速 尿 素 酶 測 試 (Rapid urease test)
5 食 道 胃 內 視 鏡 光 線 作 切 片 胃 鏡 時, 送 病 理 科 染 色 並 在 顯 微 鏡 下 觀 查
6 尿 素 酶 urease test 尿 素 酶 試 驗 將 胃 鏡 切 片 標 本 放 入 含 有 尿 素 及 酸 鹼 指 示 劑 的 凝 膠 中, 有 變 色 即 表 有 此 菌
7 在 血 液 培 養 基 上 培 養 3 天 的 幽 門 螺 旋 桿 菌 切 片 作 細 菌 培 養
8 幽 門 螺 旋 桿 菌 的 診 斷 非 侵 入 性 的 檢 查 法 1. 碳 一 14 尿 素 呼 吸 試 驗 (14-C-urea breath test (UBT)) 2. 血 清 學 檢 查 (Serology: IgG, IgA) 3. 以 唾 液 或 糞 便 檢 體 進 行 聚 合 酶 鏈 鎖 反 應 (PCR in saliva and faces)
9 Diagnosis Breath Tests - Carbon-14-urea Breath Test 尿 素 呼 氣 試 驗 法 (UBT), 含 同 位 素 碳 一 14 的 尿 素 和 牛 奶 一 起 喝 下 去, 若 胃 內 有 幽 門 螺 旋 桿 菌, 則 其 分 泌 之 尿 素 酶 會 把 含 碳 一 13 的 尿 素 分 解 成 氨 及 含 碳 一 14 的 二 氧 化 碳, 而 後 者 將 由 血 流 吸 收 後 經 肺 臟 而 呼 出 體 外 所 以, 只 要 收 集 服 用 碳 一 14 尿 素 後 5-30 鐘 呼 出 之 氣 體 並 測 定 其 中 同 位 素 碳 一 14 之 含 量, 即 可 間 接 偵 測 胃 內 幽 門 螺 旋 桿 菌 之 存 在 與 否
10 抗 - 液 泡 毒 素 anti-vac A (89 kd) anti-cag A (116 kd) 抗 - 細 胞 毒 素 攜 帶 抗 原 A 血 清 學 檢 查 (serology test): 基 本 上 人 體 得 到 任 何 感 染 都 會 誘 發 本 身 免 疫 機 轉 抵 抗 這 些 入 侵 者, 其 中 一 方 法 就 是 由 B 細 胞 產 生 抗 體, 一 般 而 言, 幽 門 螺 旋 桿 菌 一 旦 感 染 胃 部, 人 體 胃 部 幽 門 螺 旋 桿 菌 會 持 續 存 在 的, 因 此, 藉 由 測 定 血 清 中 是 否 含 有 抗 幽 門 螺 旋 桿 菌 之 抗 體, 即 可 知 道 是 否 有 幽 門 螺 旋 桿 菌 之 感 染
11 經 過 檢 驗 後, 被 告 知 有 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 到 底 需 不 需 要 治 療 呢? 你 得 了 何 種 胃 部 疾 病? 十 二 指 腸 潰 瘍, 胃 潰 瘍, 胃 癌 胃 酸 十 二 指 腸 潰 瘍 產 生 量 正 常 的 胃 黏 膜 慢 性 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 胃 炎 沒 有 症 狀 的 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 的 增 急 性 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 加 胃 潰 瘍 胃 癌 年 齡 的 增 加
12 胃 癌 之 生 物 標 誌 是 甚 麼? 幽 門 螺 旋 桿 菌 宿 主 毒 性 因 子??? 細 胞 毒 素 攜 帶 抗 原 A 液 泡 毒 素 黏 附 素 氨 胃 癌 發 炎
13 Analyze 2-D 2 D Gels Spots picking for identification IEF 1 1-dimantion 2D Workstation Spot Picker Image Master Image Image Image Image Image Image Image Image scanning scanning scanning scanning scanning scanning scanning scanning and and and and and and and and analysing analysing analysing analysing analysing analysing analysing analysing PAGE PAGE PAGE PAGE PAGE PAGE PAGE PAGE 2-dimantion 2 dimantion dimantion dimantion / Blotting Blotting Blotting Blotting Blotting Blotting Blotting Blotting to to to to to to to to PVDF PVDF PVDF PVDF PVDF PVDF PVDF PVDF membrane membrane membrane membrane membrane membrane membrane membrane IPGphor 等 電 點 聚 焦 系 統 SE600 垂 直 電 泳 槽 裝 置 Ettan DALTsix 台 大 基 因 體 醫 學 中 心 設 備 Semi-dry Unit Image Scanner I I 半 乾 式 轉 印 裝 置 影 像 掃 描 器 蛋 白 質 自 動 取 點 系 統 影 像 分 析 軟 體 Typhoon 9400 影 像 分 析 定 量 系 統
14 利 用 介 質 輔 助 雷 射 脫 附 游 離 / 飛 行 時 間 質 譜 儀 來 偵 測 胜 肽 質 量 指 紋 Peptide Mass Fingerprinting with MALDI-TOF Gel 膠 Database 資 料 庫? Protein tryptic 酵 素 水 解 digestion mass 質 譜 分 析 spectrometry stored data or theoretical? peptides 比 較 compare:?? is identical to?
15 利 用 胃 癌 及 潰 瘍 病 人 的 血 清, 來 偵 測 經 二 維 電 泳 分 離 之 幽 門 螺 旋 桿 菌 蛋 白, 並 比 較 二 者 之 間 的 差 異 胃 癌 病 人 潰 瘍 病 人 萃 取 蛋 白 二 維 電 泳 膠 片 不 同 的 展 現 Key 明 顯 的 增 加 明 顯 的 減 少
16 不 同 種 類 的 胃 部 疾 病 之 間 對 groes 的 反 應 胃 癌 胃 潰 瘍 十 二 指 腸 潰 瘍 正 常 陰 性 反 應 陽 性 反 應 病 人 數 目
17 ? 若 感 染 胃 幽 門 螺 旋 桿 菌 且 體 內 具 有 Anti-GroES 抗 體, 則 會 引 起 發 炎 促 進 細 胞 增 生 等 反 應 而 因 此 提 高 發 展 成 胃 竇 部 癌 的 風 險 利 用 此 發 明 可 以 血 清 學 檢 驗 法 來 判 定 是 否 感 染 胃 幽 門 螺 旋 桿 菌 並 且 區 別 是 否 為 發 展 成 胃 癌 的 高 危 險 群
18 幽 門 螺 旋 桿 菌 誘 發 宿 主 的 反 應 發 炎 反 應 導 致 或 防 止 胃 上 皮 細 胞 計 劃 性 死 亡 增 生
19 建 立 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 人 類 胃 部 上 皮 細 胞 的 模 式 系 統 以 模 擬 胃 部 癌 化 的 過 程 胃 上 皮 細 胞 胃 上 皮 細 胞 + 幽 門 螺 旋 桿 菌 共 同 培 養 將 細 胞 打 破 後, 分 別 結 合 上 不 同 顏 色 的 螢 光, 並 進 行 二 維 電 泳 分 析 紅 色 螢 光 結 合 至 未 被 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 之 胃 上 皮 細 胞 的 蛋 白 綠 色 螢 光 結 合 至 被 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 之 胃 上 皮 細 胞 的 蛋 白
20 人 類 胃 上 皮 細 胞 (AGS cells) 在 感 染 幽 門 螺 旋 桿 菌 後, 利 用 2D DIGE 分 析 細 胞 質 部 分 的 蛋 白 改 變 情 形 蛋 白 萃 取 物 1 藍 色 螢 光 標 記 混 合 標 記 的 萃 取 物 蛋 白 萃 取 物 2 紅 色 螢 光 標 記 利 用 二 維 電 泳 分 離 激 發 藍 色 螢 光 膠 片 影 像 激 發 紅 色 螢 光 影 像 分 析 : 重 疊 影 像 差 異 分 析 影 像 分 析 : 資 料 量 化
21 誘 發 細 胞 分 散 的 蜂 鳥 表 現 型 正 常 的 胃 上 皮 細 胞 正 常 的 胃 上 皮 細 胞 + 幽 門 螺 旋 桿 菌 形 態 異 常 的 胃 上 皮 細 胞
22 調 控 的 蛋 白 進 行 分 類 細 胞 通 訊 和 訊 息 轉 導 的 蛋 白 細 胞 骨 架 蛋 白 其 它 轉 錄 和 轉 譯 相 關 的 蛋 白 25% 3.6% 7.1% 7.1% 7.1% 氧 調 節 的 蛋 白 21.4% 17.9% 7.1% 蛋 白 合 成 和 摺 疊 相 關 的 蛋 白 新 陳 代 謝 的 酵 素 血 管 新 生 / 癌 轉 移 相 關 的 蛋 白 1. 幽 門 螺 旋 桿 茵 感 染 後, 蛋 白 表 現 量 有 兩 倍 的 增 加 2. 可 能 與 癌 症 相 關 的 蛋 白
23 預 後 之 評 估 在 胃 癌 組 織 中 進 行 免 疫 組 織 化 學 染 色 研 究 含 纈 酪 肽 蛋 白 (VCP) 烯 醇 酶 α T- 複 合 蛋 白 1 (TCP 1) 神 經 元 蛋 白 粒 線 體 間 質 蛋 白 P1 上 述 這 些 蛋 白 在 幽 門 螺 旋 桿 菌 感 染 胃 癌 細 胞 的 表 現 量 比 正 常 細 胞 高 出 許 多
24 結 論 1.GroES, 可 以 作 為 篩 檢 胃 癌 發 生 的 生 物 性 指 標 2. 本 次 研 究 中 所 發 現 的 蛋 白 因 子 ( 含 纈 酪 肽 蛋 白 ) 於 幽 門 螺 旋 菌 感 染 上 皮 細 胞 後 能 使 細 胞 繼 續 存 活 下 來 演 重 要 角 色, 該 因 子 對 於 胃 癌 之 發 展 及 預 有 預 測 的 價 值
25 3. 深 入 研 究 這 些 胃 癌 相 關 蛋 白 因 子 可 能 的 致 癌 機 轉, 更 能 對 胃 癌 藥 物 的 設 計 提 供 更 有 利 的 方 向 與 磐 石 4. 利 用 基 因 體 醫 學 中 心 的 新 知 識 及 技 術 來 了 解 疾 病 的 發 生 原 因 及 其 基 因 之 變 異, 進 而 能 找 出 有 療 效 的 標 的 分 子, 並 提 出 新 的 早 期 醫 療 檢 測 方 法, 更 進 一 步 發 展 相 關 之 疫 苗 與 治 療 試 劑, 以 擴 展 醫 藥 應 用 的 無 限 潛 力
26 誌 謝 台 大 醫 學 院 生 化 所 詹 佳 欣 柯 家 錚 林 玉 芬 台 大 醫 院 內 科 吳 明 賢 林 肇 堂 台 大 基 因 體 醫 學 中 心 陳 定 信 楊 泮 池 計 劃 資 助 : 教 育 部 提 升 研 究 型 大 學 之 基 因 體 醫 學 計 劃
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