技术研究 Technical Articles 磁共振成像 2010年第1卷第1期 Chin J Magn Reson Imaging, 2010, Vol 1, No 1 残存肿瘤组织的DWI表现及表观弥散系数(apparent diffusion coefficient, ADC)值测量已有报道
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- 败 纳喇
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1 大 鼠 右 肝 门 静 脉 结 扎 磁 共 振 扩 散 加 权 成 像 黄 丙 仓 1, 詹 松 华 2, 耿 道 颖 1*, 谭 文 莉 2 2, 杨 烁 慧 作 者 单 位 : 1. 复 旦 大 学 附 属 华 山 医 院 放 射 科, 上 海 中 医 药 大 学 附 属 曙 光 医 院 放 射 科, 第 一 作 者 简 介 : 黄 丙 仓 (1971-), 男, 博 士, 副 主 任 医 师 研 究 方 向 : 腹 部 影 像 诊 断 通 讯 作 者 : 耿 道 颖, gengdy@163.com 收 稿 日 期 : 接 受 日 期 : 中 图 分 类 号 :R735.7;R445.2 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : (2010) 黄 丙 仓, 詹 松 华, 耿 道 颖, 等. 大 鼠 右 肝 门 静 脉 结 扎 磁 共 振 扩 散 加 权 成 像. 磁 共 振 成 像, 2010, 1(1): [ 摘 要 ] 目 的 探 讨 大 鼠 右 肝 门 静 脉 血 供 阻 断 后 磁 共 振 扩 散 加 权 成 像 表 现 及 ADC 值 变 化 方 法 选 取 体 重 300 g 左 右 SD 大 鼠 30 只, 肝 门 静 脉 右 分 支 结 扎 术 后 随 机 分 成 5 组, 分 别 在 术 后 3 小 时 1 天 3 天 7 天 14 天 采 集 T1WI T2WI DWI 及 ADC 图 像, 并 处 死 大 鼠 取 得 标 本 作 病 理 电 镜 及 TUNEL 染 色 检 查 结 果 1 病 理 学 TUNEL 染 色 及 电 镜 检 查 证 实 30 只 大 鼠 右 肝 细 胞 均 发 生 灶 性 凋 亡, 术 后 3 小 时 开 始 出 现, 随 时 间 延 长, 凋 亡 细 胞 渐 增 多 ;2 术 后 各 组 肝 右 叶 T1WI 表 现 为 片 状 高 信 号, T2WI 术 后 3 小 时 表 现 为 片 状 低 信 号, 以 后 各 时 间 段 为 高 信 号,DWI 术 后 3 小 时 为 片 状 稍 高 信 号, 此 后 呈 小 片 状 高 信 号 ;3 各 组 肝 右 叶 ADC 测 量 值 较 肝 左 叶 均 下 降, 差 别 有 统 计 学 意 义 (P<0.05),rADC 值 随 时 间 渐 增 高 ;4 随 着 b 值 增 加, 各 组 ADC 测 量 值 渐 降 低,rADC 值 增 高,DWI 信 噪 比 及 敏 感 性 降 低, 但 特 异 性 增 加 结 论 大 鼠 肝 右 叶 门 静 脉 结 扎 除 诱 导 肝 细 胞 灶 性 凋 亡, 其 DWI 也 有 特 征 性 表 现, 可 以 借 助 DWI 及 ADC 值 来 判 断 肝 脏 血 供 干 预 手 术 的 成 败, 提 示 灶 性 凋 亡 的 存 在 [ 关 键 词 ] 细 胞 凋 亡 ; 磁 共 振 成 像, 扩 散 ; 大 鼠 ; 肝 静 脉 Diffusion weighted imaging features after hepatic right portal vein ligation in rats HUANG Bing-cang 1, ZHAN Song-hua 2, GENG Dao-ying 1*, TAN Wen-li 2, YANG Shuo-hui 2 1 Department of Radiology, Huashan Hospital, Fudan University, Shanghai , China 2 Department of Radiology, Shanghai Traditional Chinese Medical University Affiliated Shuguang Hospital, Shanghai , China * Correspondence to: Geng DY, gengdy@163.com Received 11 Dec 2009; accepted 15 Jan 2010 Abstract Objective: To study the diffusion weighted imaging (DWI) characters of hepatic cell focal apoptosis. Materials and Methods: Thirty SD rats about 300g are operated by hepatic right portal vein ligation and divided into 5 groups. T1WI, T2WI, DWI and apparent diffusion coefficient (ADC) image were obtained at 3 hours, 1 day, 3 days, 7 days, 14 days after the operation. After MRI examination, rats were sacrificed and the right hepatic lobes were sampled for pathology, electronic microscopy and TUNEL staining examination. Results: All right hepatic lobe focal apoptosis in 30 rats was certificated by pathology, electronic microscopy and TUNEL staining examination. Occurring from 3 hours after operation, apoptosis cell gradually increased with time. It was high signal at T1-weighted image in each group after operation, low signal at T2-weighted image after 3 hours and high signal in other groups, and slightly high signal at diffusion weighted image after 3 hours, and high signal in other periods. The ADC value of the right lobe was less than the left lobe in each group (P<0.05), the relative ADC value increased in all groups with time. The ADC value, signal-noise ratio (SNR) and sensitivity of DWI decreased with b value increasing, but the specificity increased. Conclusion: There are focal apoptosis in right hepatic lobes of rats after the portal vein ligation. What s more, its signal in DWI image and the ADC value is unique, so DWI is useful to judge the success of hepatic vessel ligation and detect focal apoptosis area in vivo. Key words Apoptosis; Magnetic resonance imaging, diffusion; Rat; Hepatic veins 磁 共 振 扩 散 加 权 成 像 (diffusion weighted imaging, DWI) 与 磁 共 振 波 谱 灌 注 成 像 是 研 究 功 能 及 微 观 影 像 学 的 重 要 工 具 之 一 最 初 用 于 中 枢 神 经 系 统 疾 病, 特 别 是 超 急 性 期 脑 梗 死 脑 肿 瘤 及 癫 痫 等 疾 病 [1] 由 于 呼 吸 及 心 脏 搏 动 的 影 响, 在 肝 脏 的 应 用 受 到 限 制 最 近, 由 于 平 面 回 波 技 术 的 应 用, 生 理 性 运 动 伪 影 基 本 可 以 被 冻 结,DWI 在 肝 脏 的 应 用 逐 渐 开 展 [2] 肝 硬 化 肝 炎 肝 性 脑 病 肝 脓 肿 及 各 种 肝 脏 占 位 性 病 灶 DWI 研 究 及 临 床 应 用 已 获 得 了 较 大 的 进 展 [3-7] 肝 肿 瘤 治 疗 后 发 生 坏 死 及 55
2 技术研究 Technical Articles 磁共振成像 2010年第1卷第1期 Chin J Magn Reson Imaging, 2010, Vol 1, No 1 残存肿瘤组织的DWI表现及表观弥散系数(apparent diffusion coefficient, ADC)值测量已有报道[8,9] 但是 前瞻性研究发生灶性凋亡的肝细胞DWI表现及ADC 值测量尚未见报道 本文通过大鼠肝门静脉结扎的 方法来促使肝细胞发生灶性凋亡 研究凋亡的DWI 表现及ADC测量值定量研究 1 材料与方法 1.1 动物手术及分组 选取体重300 g左右的sd大鼠30只 雌雄各 半 3%戊巴比妥(1 ml/kg)腹腔麻醉 中下腹部剪毛 后 在严格无菌条件下打开腹腔 将胃及肠管慢慢 提起至于切口外 用湿纱布覆盖 然后在显微镜下 顺着肝胃韧带及肝十二指肠韧带找到门静脉右分支 进行钝性分离 并用0号线两次结扎确保门静脉血 供完全中断 然后将腹部脏器完全回位关腹 术后 将30只大鼠随机分成5组 每组6只 1.2 磁共振检查序列及参数 实验大鼠MRI检查采用Marconi 1.5 T Edge EclipseTM MR成像仪 腕关节环形表面线圈(外直径 为12 cm 内直径约为9 cm)为接收线圈 大鼠麻醉 后右侧卧位 将肝脏部位置于线圈中央 并用胶布 固定 然后调整垫子高度以保证大鼠上腹部位于磁 场中心位置 定位片获得后 行常规冠状位FSE序 56 列T2WI TR/TE=4000/80 ms 层厚3.0 mm FOV 13.0 cm 矩阵 信号激励次数为2 然后 行横断位T1WI T2WI TR/TE=450/12.0 ms及tr/ TE=4000/80 ms 层厚2.0 mm FOV 11.0 cm 矩阵 信号激励次数为2 横断位DWI TR/TE = /135.5 ms b值设为 s/mm2 1.3 病理学及电镜检查 MRI和DWI检查结束后 先取电镜标本 写明 样本包埋要求 然后择期进行半薄定位 电镜观察 及取片 将有明显细胞核固缩的观察野做好标记 进行电镜观察 分析 在电镜取材完成后 立即置于10%福尔马林溶 液中固定24 h以上 取肝右叶与左叶组织分切后常 规石蜡包埋 将石蜡组织块进行5 μm连续切片 随 机抽取病理白切片分别做常规HE染色 末端脱氧核 苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测细 胞凋亡 TUNEL染色 采用德国DAKO公司生产的 ApopTag S7100试剂盒 按照试剂盒附带的染色操 作步骤进行 以细胞核呈深棕红色伴核皱缩的细胞 为细胞凋亡阳性细胞 否则为阴性 1.4 ADC值测量及统计学方法 在T1WI肝左叶上编辑直径为3.0 mm的一个感 兴趣区(ROI) 在同一层面上我们在T2WI肝右叶上 编辑同样大小的一个ROI 然后采用同层复制的方
3 表 1 各 组 病 灶 侧 与 对 照 侧 T1WI T2WI 信 号 值 及 ADC 测 量 值 radc 值 序 列 部 位 3 小 时 24 小 时 3 天 7 天 14 天 T1WI 病 灶 侧 对 照 侧 T2WI 病 灶 侧 对 照 侧 ADC(b=100) 病 灶 侧 对 照 侧 radc 值 病 灶 / 对 照 ADC(b=300) 病 灶 侧 对 照 侧 radc 值 病 灶 / 对 照 ADC(b=500) 病 灶 侧 对 照 侧 radc 值 病 灶 / 对 照 注 : 右 肝 门 静 脉 结 扎 各 组 病 灶 侧 与 对 照 侧 ADC 值 采 用 配 对 t 检 验 统 计 学 处 理, 各 组 P 值 均 小 于 0.05, 差 别 有 统 计 学 意 义 各 组 radc 之 间 差 别 无 统 计 学 意 义 b 值 单 位 : 10-3 mm 2 /s 法 在 不 同 b 值 的 DWI 图 像 上 加 以 复 制, 分 别 测 量 病 灶 侧 及 对 照 侧 T1WI T2WI DWI 信 号 值, 运 用 公 式 ADC=ln(S 1 /S 2 )/(b 2 -b 1 ) 算 出 ADC 测 量 值,S 1 S 2 是 不 同 弥 散 敏 感 系 数 (b 1 b 2 ) 条 件 下 弥 散 加 权 图 像 的 信 号 强 度 同 样 的 方 法 测 量 3 次 取 其 平 均 值 作 为 ROI 的 ADC 值 ROI 应 避 开 血 管 腹 壁 脂 肪 组 织 和 含 气 肺 组 织 统 计 学 方 法, 采 用 配 对 t 检 验 比 较 对 照 侧 与 病 灶 侧 的 差 异, 各 组 之 间 的 差 异 采 用 两 因 素 随 机 区 组 方 差 分 析 进 行 两 两 比 较, 统 计 水 平 为 P=0.05, 统 计 软 件 为 SPSS 结 果 2.1 大 鼠 肝 门 静 脉 结 扎 的 病 理 变 化 30 只 大 鼠 门 静 脉 右 分 支 结 扎 后, 肝 右 叶 颜 色 稍 变 暗 ( 图 1),3 天 后 肝 右 叶 开 始 发 生 萎 缩, 以 14 天 最 为 显 著, 而 肝 左 叶 发 生 代 偿 性 肥 大 改 变 ( 图 2) HE 染 色 可 见 术 后 3 小 时 肝 右 叶 肝 细 胞 出 现 少 量 核 固 缩 肝 细 胞, 此 后 各 时 间 组 固 缩 肝 细 胞 渐 增 多 ( 图 3),3 天 后 局 部 肝 细 胞 发 生 颗 粒 变 性 及 水 样 变 性,7 天 后 肝 细 胞 发 生 弥 漫 性 水 样 变 性, 胞 浆 内 见 较 多 水 泡 14 天 后 肝 细 胞 水 泡 变 性 部 分 融 合, 肝 细 胞 膜 部 分 破 裂 TUNEL 染 色 术 后 3 小 时 可 见 少 量 散 在 的 染 成 棕 黄 色 的 凋 亡 细 胞, 此 后 各 组 阳 性 细 胞 渐 增 多, 呈 灶 性 分 布 ( 图 4) 电 镜 检 查 发 现 术 后 3 小 时 组 开 始 出 现 凋 亡 细 胞, 此 后 各 组 凋 亡 细 胞 见 增 多, 可 见 典 型 的 核 边 集 改 变 ( 图 5), 细 胞 膜 及 质 膜 完 好 无 损, 线 粒 体 变 性, 内 质 网 肿 胀, 部 分 凋 亡 细 胞 周 边 可 见 凋 亡 小 9 图 7 术 后 3 天 磁 共 振 T1WI, 肝 右 叶 呈 高 信 号 ( 箭 头 ); 图 8 磁 共 振 T2WI, 呈 片 状 高 信 号 ( 箭 头 ); 图 9 术 后 3 天 DWI, 肝 右 叶 呈 小 片 状 高 信 号 ( 箭 头 ); 图 10 图 9 相 应 的 ADC 图, 肝 右 叶 呈 片 状 低 信 号 ( 箭 头 ) 体 ( 图 6) 7 天 后 各 组 肝 小 叶 之 间 可 见 小 叶 间 胆 管 及 纤 维 组 织 增 生 改 变 2.2 肝 细 胞 小 灶 性 凋 亡 的 T1WI T2WI 及 DWI 表 现 术 后 各 组 在 T1WI 肝 右 叶 信 号 较 左 侧 增 高 ( 图 7),3 小 时 组 T2WI 呈 片 状 低 信 号, 此 后 各 组 呈 片 状 高 信 号 ( 图 8),3 小 时 组 DWI 呈 低 信 号,24 小 时 后 各 组 均 呈 片 状 高 信 号 ( 图 9),ADC 图 表 现 正 好 同 DWI 表 现 相 反 ( 图 10) 2.3 病 灶 侧 与 对 照 侧 T1WI T2WI 信 号 值 及 ADC 测 量 值 由 表 1 可 见, 右 肝 门 静 脉 结 扎 各 组 病 灶 侧 与 对 10 57
4 磁 共 振 成 像 2010 年 第 1 卷 第 1 期 Chin J Magn Reson Imaging, 2010, Vol 1, No 1 照 侧 ADC 值 经 配 对 t 检 验,P 值 均 小 于 0.05, 差 别 有 统 计 学 意 义 各 组 radc 之 间 差 别 无 统 计 学 意 义 3 讨 论 3.1 磁 共 振 扩 散 加 权 成 像 原 理 弥 散 是 指 分 子 的 随 机 侧 向 运 动, 即 布 朗 运 动 DWI 成 像 时 在 自 旋 回 波 (spin echo, SE)T2 加 权 序 列 180 脉 冲 前 后 加 上 两 个 对 称 的 弥 散 敏 感 梯 度 脉 冲, 对 于 静 止 ( 弥 散 低 ) 的 水 分 子, 第 一 个 梯 度 脉 冲 所 致 的 质 子 因 自 旋 去 相 位 作 用, 会 被 对 称 的 第 二 个 梯 度 脉 冲 再 聚 焦, 信 号 不 降 低 ; 而 对 于 运 动 ( 弥 散 强 ) 的 水 分 子, 第 一 个 梯 度 脉 冲 所 致 的 质 子 自 旋 去 相 位 发 生 后 很 快 离 开 了 原 来 的 位 置, 不 能 被 第 二 个 梯 度 脉 冲 再 聚 焦, 导 致 信 号 降 低 根 据 Fick 定 律, 真 正 的 弥 散 是 由 于 浓 度 梯 度 导 致 的 分 子 净 运 动, 在 磁 共 振 成 像 中, 浓 度 差 异 造 成 的 分 子 运 动 和 压 力 梯 度 热 效 应 以 及 离 子 的 相 互 作 用 引 起 的 分 子 运 动 无 法 区 分, 因 而 只 用 ADC 来 表 示 机 体 中 所 测 到 的 弥 散, 实 际 上 是 指 设 备 所 能 测 量 的 较 明 显 的 弥 散 运 动 的 综 合 体 现 ADC 值 增 大, 代 表 水 分 子 弥 散 增 加, 而 弥 散 加 权 图 像 信 号 降 低, 反 之 亦 然 [10] b 值 及 b 值 差 的 选 择 对 于 DWI 及 ADC 值 的 测 量 非 常 重 要, 不 同 b 值 及 b 值 差 对 ADC 值 能 够 产 生 影 响 [10,11] ADC 值 不 仅 受 水 分 子 弥 散 的 影 响, 也 受 毛 细 血 管 网 中 血 液 的 影 响, 当 梯 度 因 子 b 较 小 (<100) 时, 弥 散 效 应 对 信 号 的 衰 减 作 用 非 常 小, ADC 值 受 灌 注 的 影 响 很 大 ; 随 着 梯 度 因 子 b 的 增 加 (>500),DWI 上 的 图 像 对 比 度 可 更 多 地 反 映 水 分 子 弥 散 效 应 但 是 b 值 太 大, 信 噪 比 及 图 像 质 量 均 下 降 [12] 本 次 实 验 中 采 用 三 个 b 值, 随 着 b 值 增 加, 由 于 微 循 环 的 影 响 减 少 致 使 ADC 值 渐 降 低, 特 异 性 增 加, 但 敏 感 性 及 信 噪 比 却 下 降 其 中 b 值 为 300 图 像 信 噪 比 最 高 3.2 凋 亡 动 物 模 型 的 建 立 及 磁 共 振 扩 散 加 权 成 像 表 现 凋 亡 是 活 体 内 单 个 或 小 团 细 胞 死 亡, 可 以 是 生 理 性 的, 也 可 以 是 病 理 性 的 是 细 胞 的 程 序 性 死 亡, 死 亡 细 胞 的 质 膜 不 破 裂, 不 引 发 死 亡 细 胞 的 自 溶, 也 不 引 起 急 性 炎 症 反 应 缺 血 缺 氧 程 度 较 轻 时 可 加 速 细 胞 的 凋 亡 过 程 发 生, 笔 者 在 前 期 的 大 鼠 动 物 实 验 研 究 中 通 过 单 纯 门 静 脉 结 扎 已 成 功 建 立 了 肝 细 胞 凋 亡 动 物 模 型 [13] 本 次 实 验 笔 者 研 究 右 肝 门 静 脉 结 扎 后, 肝 右 叶 合 并 小 团 状 凋 亡 的 磁 共 振 扩 散 加 权 成 像 表 现 凋 亡 模 型 建 立 后 各 时 间 组 T1WI 呈 高 信 号,3 小 时 组 T2WI 呈 低 信 号,24 小 时 后 各 组 呈 高 信 号,DWI 呈 片 状 高 信 号 这 些 表 现 可 能 的 机 制 是 右 肝 门 静 脉 结 扎 后, 肝 右 叶 血 量 相 对 结 扎 前 减 少 了 约 75%, 蛋 白 浓 度 相 对 增 高, 致 使 T1WI 表 现 为 片 状 高 信 号, 与 肝 左 叶 分 界 清 晰 ; 由 于 肝 右 叶 血 量 突 然 减 少, 含 水 量 亦 减 少, 因 而 3 小 时 组 T2WI 为 低 信 [14] 号, 但 24 小 时 后 由 于 肝 动 脉 血 流 缓 冲 效 应 及 肝 细 胞 部 分 水 样 变 性, 其 含 水 量 又 增 加, 因 而 此 后 各 组 T2WI 表 现 为 高 信 号 DWI 各 组 均 表 现 为 片 状 高 信 号, 可 能 原 因 有 :1 肝 右 叶 门 静 脉 分 支 结 扎 后, 由 于 血 量 减 少, 肝 细 胞 浓 度 相 对 增 高, 因 而 水 分 子 弥 散 受 限,DWI 信 号 增 加 ;2 肝 门 静 脉 结 扎 后, 肝 血 窦 轻 度 淤 血 改 变, 也 使 水 分 子 弥 散 受 限 ;33 天 后 肝 细 胞 开 始 发 生 水 泡 变 性, 肝 细 胞 性 水 肿 也 是 弥 散 受 限 原 因 之 一 ;4 由 于 门 静 脉 结 扎, 微 循 环 的 影 响 减 小, 致 使 信 号 增 加 结 合 笔 者 前 期 肝 右 叶 门 静 脉 及 肝 动 脉 全 部 阻 断 DWI 变 化, 发 现 肝 右 叶 门 静 脉 单 扎 DWI 信 号 介 于 正 常 肝 右 叶 与 全 部 阻 断 血 供 后 肝 右 叶 信 号 之 间 3.3 凋 亡 的 ADC 测 量 值 radc 值 及 其 随 b 值 的 变 化 [15,16] 以 往 的 文 献 认 为 发 生 凋 亡 时, 其 ADC 值 是 增 加 的 笔 者 在 肝 肿 瘤 放 疗 后 诱 发 凋 亡 实 验 中 [17], 肿 瘤 区 域 的 ADC 值 也 是 增 加 的 但 是 本 次 实 验 中 各 组 病 灶 侧 ADC 测 量 值 均 较 对 照 侧 减 低, 病 理 学 HE 染 色 TUNEL 染 色 及 电 镜 均 证 实 肝 右 叶 门 静 脉 结 扎 后 确 实 发 生 灶 性 凋 亡 分 析 原 因, 实 验 结 果 与 文 献 并 不 矛 盾, 主 要 的 原 因 是 对 照 组 的 差 别, 只 能 选 取 自 身 对 照, 但 是 肝 左 叶 同 门 静 脉 结 扎 后 的 肝 右 叶 比 较, 由 于 肝 右 叶 含 血 量 减 少 及 其 细 胞 密 度 的 相 对 增 加, 以 及 后 期 合 并 少 量 空 泡 变 性 及 小 片 中 央 静 脉 旁 坏 死 等, 肝 右 叶 ADC 值 要 低 于 肝 左 叶 的 ADC 值 肝 右 叶 发 生 灶 性 凋 亡 后 肝 细 胞 间 隙 增 大 及 细 胞 数 量 的 减 少 所 致 的 ADC 值 增 加 远 远 被 前 述 肝 右 叶 含 血 总 量 锐 减 所 致 的 ADC 值 减 低 所 遮 盖 但 是, 笔 者 采 用 radc 值 却 能 够 反 映 出 肝 右 叶 门 静 脉 结 扎 后 随 着 时 间 的 变 化 情 况, 同 时 radc 值 还 可 以 去 除 微 循 环 及 b 值 的 影 响 radc 值 的 变 化 趋 势 同 各 组 TUNEL 染 色 结 果 变 化 一 致, 表 明 radc 值 可 以 活 体 反 映 本 实 验 中 肝 右 叶 发 生 灶 性 凋 亡 的 情 况 参 考 文 献 [1] Le Bihan D, Turner R, Douek P, et al. Diffusion MR imaging: clinical applications. AJR Am J Roentgenol, 1992, 159(3): [2] Muller MF, Prasad P, Siewert B, et al. Abdominal diffusion mapping with use of a whole -body echo-planar system. Radiology, 1994, 190(2): [3] Namimoto T, Yamashita Y, Sumi S, et al. Focal liver masses: characterization with diffusion-weighted echoplanar MR imaging. Radiology, 1997, 204(3): [4] Chan JH, Tsui EY, Luk SH, et al. Diffusion weighted MR imaging of the liver: distinguishing hepatic abscess 58
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