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1 第 36 卷 第 4 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.36, No 年 8 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Aug., 2015 DOI: /yykxjz 长 鳍 吻 (Rhinogobio ventralis) 胚 胎 发 育 * 和 仔 鱼 发 育 管 敏 肖 衎 胡 美 宏 刘 勇 鲁 雪 报 1 倪 勇 郭 文 韬 曲 焕 韬 李 莎 ( 三 峡 工 程 鱼 类 资 源 保 护 湖 北 省 重 点 实 验 室 中 国 长 江 三 峡 集 团 公 司 中 华 鲟 研 究 所 宜 昌 ) 摘 要 利 用 显 微 电 子 成 像 技 术 对 长 鳍 吻 (Rhinogobio ventralis) 胚 胎 发 育 和 仔 鱼 形 态 进 行 了 观 察 与 研 究, 详 细 描 述 了 各 发 育 期 的 形 态 特 征 和 发 育 时 间 结 果 显 示, 长 鳍 吻 卵 子 的 卵 径 为 mm 卵 膜 径 为 mm 卵 粒 质 量 为 g, 精 子 的 寿 命 为 s 激 烈 运 动 时 间 为 s 长 鳍 吻 的 胚 胎 发 育 可 分 为 受 精 卵 胚 盘 期 卵 裂 期 囊 胚 期 原 肠 期 神 经 胚 期 器 官 形 成 期 和 出 膜 期 8 个 阶 段, 在 水 温 为 流 水 孵 化 条 件 下, 其 受 精 卵 历 时 56 h 孵 化 出 膜, 在 水 温 为 的 条 件 下, 长 鳍 吻 仔 鱼 的 卵 黄 囊 在 5 日 龄 时 基 本 消 失,6 日 龄 时 完 全 消 失, 进 入 后 期 仔 鱼 阶 段,30 日 龄 的 长 鳍 吻 仔 鱼 鳍 条 基 本 形 成, 鳞 片 开 始 形 成, 结 束 仔 鱼 期, 进 入 稚 鱼 期 关 键 词 长 鳍 吻 ; 胚 胎 发 育 ; 仔 鱼 发 育 中 图 分 类 号 S917.4 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 (2015) 长 鳍 吻 (Rhinogobio ventralis) 隶 属 鲤 形 目 (Cypriniforme) 鲤 科 (Cyprinidae) 亚 科 (Gobioninae), 俗 称 洋 鱼 土 耗 子, 是 长 江 上 游 特 有 的 底 栖 性 鱼 类 ( 邓 辉 胜 等,2005) 近 年 来, 由 于 水 质 污 染 水 利 工 程 建 设 以 及 过 度 捕 捞 等 原 因, 长 鳍 吻 的 资 源 量 急 剧 下 降, 从 受 威 胁 程 度 遗 传 多 样 性 物 种 价 值 等 方 面 定 量 评 估 发 现, 长 鳍 吻 已 达 3 级 急 切 保 护 状 态 ( 刘 军, 2004) 目 前, 针 对 长 鳍 吻 的 研 究 主 要 集 中 在 生 物 学 种 群 生 态 学 以 及 资 源 量 调 查 等 方 面 ( 辛 建 峰 等,2010; 徐 念 等,2009) 关 于 长 鳍 吻 胚 胎 发 育 和 仔 鱼 发 育 的 研 究 尚 未 见 报 道, 作 者 在 中 国 长 江 三 峡 集 团 公 司 的 资 助 下 在 国 内 首 次 成 功 实 现 了 长 鳍 吻 的 人 工 催 产 繁 殖, 并 对 其 胚 胎 仔 鱼 发 育 进 行 了 较 为 详 细 的 观 察 和 描 述, 以 期 为 长 鳍 吻 的 批 量 繁 殖 生 产 提 供 理 论 依 据 和 科 学 参 考 1 材 料 与 方 法 1.1 受 精 卵 来 源 2014 年 3 5 月, 在 中 国 长 江 三 峡 集 团 公 司 中 华 鲟 研 究 所 金 沙 江 溪 洛 渡 向 家 坝 珍 稀 特 有 鱼 类 增 殖 放 流 站, 采 用 驯 养 成 熟 的 长 鳍 吻 亲 鱼, 经 催 情 诱 导 促 熟 后, 人 工 采 集 精 卵, 并 采 用 半 干 法 授 精 先 挤 卵 至 清 洁 干 燥 的 容 器, 再 挤 压 雄 鱼 腹 部 使 其 排 精, 一 旦 有 精 液 流 出 立 即 用 水 冲 洗 至 盛 有 卵 的 容 器, 重 复 几 次, 用 羽 毛 轻 轻 搅 拌 2 3 min, 完 成 授 精 后, 漂 清 杂 质, 将 受 精 卵 转 入 孵 化 器 孵 化 前 后 共 5 次 成 功 实 现 长 鳍 吻 的 人 工 繁 殖, 共 获 受 精 卵 9.8 万 余 粒, 初 孵 仔 鱼 3.15 万 尾 1.2 受 精 卵 的 孵 化 及 仔 鱼 培 育 根 据 漂 流 性 卵 特 性 选 用 流 水 孵 化 方 式, 孵 化 器 为 * 中 国 长 江 三 峡 集 团 公 司 野 生 长 鳍 吻 驯 养 和 人 工 繁 殖 技 术 研 究 项 目 资 助 管 敏, guanmin_888@163.com 1 通 讯 作 者 : 郭 文 韬, 高 级 工 程 师, realgwt2008@163.com 收 稿 日 期 : , 收 修 改 稿 日 期 :

2 58 渔 业 科 学 进 展 第 36 卷 不 锈 钢 锥 形 桶, 载 水 量 140 L, 流 量 为 t/h 孵 化 期 间, 水 温 为 , 溶 解 氧 为 7 9 mg/l, 氨 氮 亚 硝 氮 均 小 于 0.05 mg/l 仔 鱼 孵 出 后 转 入 直 径 6.0 m 的 玻 璃 纤 维 缸 ( 以 下 简 称 为 玻 纤 缸 ) 中 培 育, 水 温 为 18 24, 苗 种 培 育 采 用 前 期 静 水 后 期 微 流 水 的 方 式 苗 种 培 育 过 程 仔 鱼 的 开 口 饵 料 为 轮 虫 和 小 球 藻,11 日 龄 后 开 始 投 喂 枝 角 类 桡 足 类 幼 体,20 日 龄 后 开 始 投 喂 枝 角 类 桡 足 类 成 体 培 苗 期 间, 养 殖 用 水 的 ph 在 范 围 内, 溶 解 氧 >5 mg/l, 并 定 期 向 水 体 中 泼 洒 芽 孢 杆 菌 光 合 细 菌 等 有 益 菌 以 保 持 氨 氮 和 亚 硝 氮 均 <0.05 mg/l 养 殖 过 程 中 及 时 清 除 死 苗, 定 期 取 样, 进 行 生 长 指 标 测 定 并 做 好 记 录 1.3 观 察 方 法 利 用 显 微 电 子 成 像 系 统 将 NIKON 解 剖 镜 与 电 脑 相 连, 通 过 计 算 机 拍 摄 胚 胎 和 仔 鱼 发 育 的 照 片, 并 记 录 其 发 育 的 时 间 和 发 育 阶 段, 定 时 记 录 胚 胎 和 早 期 仔 鱼 发 育 的 形 态 变 化 特 征 2 结 果 2.1 卵 子 和 精 子 特 性 长 鳍 吻 产 漂 流 性 卵, 成 熟 鱼 卵 呈 圆 球 形, 无 油 球, 内 含 大 量 卵 黄, 淡 黄 色, 略 透 明, 卵 径 为 mm, 平 均 卵 径 为 1.8 mm, 平 均 单 卵 质 量 为 g( 图 1-1) 受 精 后 34 min, 在 动 物 极 形 成 隆 起 的 胚 盘, 为 半 透 明 状, 受 精 卵 处 于 侧 卧 状 态 长 鳍 吻 精 液 呈 乳 白 色, 光 镜 下 观 察 到 精 子 由 头 部 和 尾 部 组 成, 头 部 呈 圆 球 形, 尾 部 细 长 精 子 激 烈 运 动 时 间 平 均 为 s( 范 围 为 s), 缓 慢 运 动 时 间 平 均 为 s( 范 围 为 s), 摇 尾 运 动 时 间 为 s( 范 围 为 s), 精 子 寿 命 平 均 为 s( 范 围 为 s) 2.2 胚 胎 发 育 长 鳍 吻 的 胚 胎 发 育 分 为 受 精 卵 胚 盘 期 卵 裂 期 囊 胚 期 原 肠 期 神 经 胚 期 器 官 形 成 期 和 出 膜 期 8 个 阶 段 在 水 温 为 流 水 孵 化 条 件 下, 长 鳍 吻 卵 受 精 34 min 后 胚 盘 形 成,50 min 后 进 入 Ⅱ 细 胞 期,2.2 h 后 进 入 多 细 胞 期,4 h 后 发 育 至 囊 胚 前 期, 从 囊 胚 前 期 至 囊 胚 后 期 需 4 h, 囊 胚 后 期 1.5 h 后 达 到 原 肠 早 期, 再 经 过 1.6 h 发 育 至 原 肠 中 期, 原 肠 中 期 和 原 肠 晚 期 间 隔 2.5 h, 受 精 14.5 h 后 发 育 至 神 经 胚 期, 神 经 胚 期 1.6 h 后 胚 孔 封 闭, 神 经 胚 期 至 尾 牙 期 需 要 经 历 8.5 h, 受 精 后 30.8 h 后 可 发 育 至 肌 肉 效 应 期,56 h 后 孵 化 出 膜 长 鳍 吻 胚 胎 发 育 及 特 征 如 下 : 受 精 卵 长 鳍 吻 受 精 卵 呈 圆 球 形, 淡 黄 色, 卵 膜 光 滑, 无 特 殊 结 构, 无 油 球, 卵 黄 均 匀 受 精 卵 遇 水 后 卵 膜 迅 速 膨 胀, 卵 周 隙 扩 大, 卵 黄 因 受 精 而 活 动 起 来 ( 图 1-1) 胚 盘 形 成 期 从 受 精 到 胚 盘 形 成 需 要 34 min, 此 时, 受 精 卵 卵 周 隙 进 一 步 增 大, 卵 膜 径 增 大 至 mm, 平 均 为 6.8 mm, 两 极 逐 渐 分 化, 细 胞 质 向 动 物 极 集 中, 并 逐 渐 隆 起, 形 成 胚 盘 卵 裂 期 受 精 50 min 后, 胚 盘 开 始 第 1 次 卵 裂, 形 成 两 个 大 小 相 等 的 细 胞, 进 入 Ⅱ 细 胞 期, 随 着 细 胞 的 继 续 发 育, 细 胞 数 目 按 照 几 何 级 数 分 裂 受 精 后 2.2 h, 多 层 细 胞 叠 加 如 桑 椹, 动 物 极 隆 起 呈 小 丘 状, 细 胞 大 小 不 一, 界 限 模 糊, 发 育 到 多 细 胞 期 ( 图 1-2 图 1-6) 囊 胚 期 细 胞 分 裂 至 4 h 时, 分 裂 球 隆 起 达 最 高, 形 成 高 囊 胚, 囊 胚 层 外 层 凸 出, 内 层 稍 凹 下, 进 入 囊 胚 前 期 随 着 细 胞 的 不 断 分 裂, 囊 胚 的 高 度 不 断 下 降, 囊 胚 层 逐 渐 变 薄 变 扁,8 h 后 进 入 囊 胚 晚 期 ( 图 1 7 图 1 8) 原 肠 期 囊 胚 层 边 缘 细 胞 继 续 从 四 面 向 植 表 1 长 鳍 吻 卵 子 和 精 子 的 部 分 特 征 Tab.1 Some characteristics of R. ventralis egg and sperm 内 容 Content 平 均 值 Mean 范 围 Range 卵 径 Egg diameter(mm) 卵 膜 径 Egg membrane diameter(mm) 卵 粒 质 量 Egg weight(g) 精 子 激 烈 运 动 时 间 Swirling movement time of sperm(s) 精 子 缓 慢 运 动 时 间 Slow movement time of sperm(s) 精 子 摇 尾 运 动 时 间 Tail wag movement time of sperm(s) 精 子 寿 命 Sperm life(s)

3 第 4 期 管 敏 等 : 长 鳍 吻 (Rhinogobio ventralis) 胚 胎 发 育 和 仔 鱼 发 育 59 物 极 下 包 扩 展, 受 精 后 9.5 h, 胚 盘 下 包 至 卵 黄 1/3 左 右 时 形 成 胚 环, 进 入 原 肠 早 期 随 着 胚 盘 细 胞 的 进 一 步 下 包, 球 形 胚 胎 逐 渐 变 为 椭 球 形, 包 至 卵 黄 1/2 1/3 左 右 时, 胚 环 更 加 明 显, 胚 盾 出 现, 进 入 原 肠 中 期 胚 层 细 胞 下 包 至 4/5 时, 裸 露 在 外 的 卵 黄 为 卵 黄 栓, 胚 盾 明 显 延 长, 胚 体 雏 形 形 成, 进 入 原 肠 晚 期 ( 图 1-9 图 1-11) 神 经 胚 期 受 精 14.5 h 后, 胚 盘 细 胞 继 续 分 裂, 当 下 包 至 6/7 时, 进 入 神 经 胚 期, 胚 孔 形 成, 胚 胎 出 现 增 厚 的 神 经 板, 胚 体 前 部 逐 渐 隆 起, 形 成 脑 泡 原 基 随 着 细 胞 继 续 分 裂 发 育, 胚 孔 收 缩 合 拢, 受 精 后 16.1 h 时 胚 孔 封 闭, 此 时 胚 体 形 状 明 显, 附 着 在 卵 黄 一 侧, 头 部 脑 泡 膨 大, 尾 基 收 缩 变 粗 ( 图 1-12 图 1-13) 器 官 形 成 期 随 着 胚 体 的 发 育, 胚 体 肌 节 继 续 分 化 增 多, 胚 体 头 部 前 端 抬 高, 头 部 结 构 越 来 越 复 杂, 在 脑 泡 两 侧 出 现 眼 囊, 呈 长 椭 圆 形 随 着 受 精 时 间 的 延 长, 眼 囊 下 方 出 现 嗅 板, 受 精 24.6 h 时, 尾 尖 脱 离 卵 黄 囊, 在 胚 体 后 端 伸 出 芽 状 突 起, 并 逐 渐 与 卵 黄 囊 分 离, 形 成 尾 芽 随 着 尾 芽 的 伸 长, 尾 芽 的 边 缘 表 皮 外 突 形 成 不 明 显 的 鳍 褶, 尾 部 开 始 增 长 约 27.6 h 时, 眼 杯 中 出 现 晶 体, 在 30.8 h 时 胚 体 出 现 缓 慢 而 轻 微 的 收 缩, 胚 体 进 入 肌 肉 效 应 期, 随 着 胚 体 的 发 育, 尾 部 不 断 伸 长 41.8 h 可 以 看 到 长 鳍 吻 胚 体 有 明 显 的 心 脏 跳 动, 进 入 心 脏 跳 动 期, 随 着 时 间 的 推 移, 跳 动 频 率 加 快 胚 体 经 过 持 续 的 发 育, 头 部 逐 渐 隆 起 与 卵 黄 囊 分 离, 尾 鳍 开 始 伸 展, 卵 黄 囊 被 拉 长, 尾 部 卵 黄 囊 逐 渐 缩 小 在 受 精 约 52 h 时, 胚 体 在 卵 膜 内 灵 活 转 动, 尾 部 延 伸 变 长, 头 部 明 显 抬 起 ( 图 1-14 图 1-16) 出 膜 期 出 膜 前 期, 尾 鳍 继 续 延 长, 胚 体 在 卵 膜 内 翻 滚 摆 动 明 显 加 快, 在 受 精 56 h 时, 卵 膜 变 软 变 薄, 胚 体 剧 烈 摆 动 出 膜 ( 图 1-17) 2.3 仔 鱼 形 态 发 育 特 征 在 温 度 为 溶 解 氧 为 6.0 mg/l 的 条 件 下, 长 鳍 吻 仔 鱼 的 卵 黄 囊 在 5 日 龄 时 基 本 消 失,6 日 龄 时 完 全 消 失 长 鳍 吻 苗 种 全 长 与 日 龄 的 相 关 关 系 式 为 :y=5.8208e x,R 2 = 式 中,y 为 仔 鱼 全 长,x 为 日 龄 胚 胎 发 育 时 期 Embryonic development stage 表 2 长 鳍 吻 胚 胎 发 育 特 征 Tab.2 Typical characteristics of embryonic development of R.ventralis 受 精 后 时 间 Time after fertilization(h) 主 要 特 征 Typical characteristics 未 受 精 卵 Unfertilized egg 球 形 淡 黄 色 略 透 明, 卵 膜 紧 贴 于 卵 质 的 表 面 受 精 卵 Fertilized egg 0 卵 质 分 布 均 匀, 极 性 不 明 显 胚 盘 形 成 期 Germinal disk formation stage 0.57 原 生 质 集 中 动 物 极, 隆 起 形 成 胚 盘 2 细 胞 期 2-cell stage 0.83 第 1 次 卵 裂, 两 个 细 胞 大 小 相 等 4 细 胞 期 4-cell stage 1.2 第 2 次 卵 裂, 分 裂 面 与 第 1 次 卵 裂 垂 直, 形 成 4 个 大 小 相 等 的 细 胞 8 细 胞 期 8-cell stage 1.45 第 5 次 卵 裂, 分 裂 面 与 第 一 次 卵 裂 平 行, 形 成 8 个 大 小 相 等 的 细 胞 16 细 胞 期 16-cell stage 1.65 第 4 次 卵 裂, 分 裂 面 与 第 一 次 卵 裂 垂 直, 形 成 16 个 大 小 相 等 的 细 胞 多 细 胞 期 Morula stage 2.2 细 胞 越 分 越 小 并 开 始 重 叠, 由 单 层 变 为 多 层 囊 胚 早 期 Early blastocyst stage 4 多 层 细 胞 形 成 的 囊 胚 高 而 集 中, 隆 起 在 卵 黄 上 囊 胚 晚 期 Late blastocyst stage 8 囊 胚 层 边 缘 变 薄, 细 胞 下 包, 向 卵 黄 扩 展 原 肠 早 期 Early gastrula stage 9.5 胚 盘 细 胞 向 卵 黄 下 包 1/3, 背 面 观 可 见 胚 环 原 肠 中 期 Midgastrula stage 11.1 胚 盘 下 包 2/3, 胚 盾 形 成 原 肠 晚 期 Late gastrula stage 13.6 胚 盘 下 包 3/4, 胚 盾 变 得 细 长 神 经 胚 期 Neurula stage 14.5 胚 盘 下 包 4/5, 形 成 神 经 管 胚 孔 封 闭 期 Blastopore closed stage 16.1 胚 层 下 包, 胚 孔 闭 合 尾 牙 期 End teeth stage 24.6 尾 尖 脱 离 卵 黄 囊, 在 胚 体 后 端 伸 出 芽 状 突 起, 并 逐 渐 与 卵 黄 囊 分 离, 即 形 成 尾 芽 肌 肉 效 应 期 Muscle effector phase 30.8 胚 体 开 始 出 现 微 弱 的 有 节 律 的 收 缩 心 脏 跳 动 期 Heart-beating stage 41.8 心 脏 呈 管 状, 开 始 跳 动 微 弱, 逐 渐 加 快 出 膜 期 Hatching stage 56 胚 胎 在 卵 周 隙 内 不 停 地 转 动, 陆 续 破 膜 而 出

4 渔 60 Fig. 1 业 科 学 进 展 第 36 卷 图 1 长鳍吻 胚胎发育时期 Embryonic development stages of R.ventralis 1. 受精卵 2. 2 细胞期 3. 4 细胞期 4. 8 细胞期 细胞期 6. 多细胞期 7. 囊胚早期 8. 囊胚晚期 9. 原肠早期 10. 原肠中期 11. 原肠晚期 12. 神经胚期 13. 胚孔封闭期 14. 尾牙期 15. 肌肉效应期 16. 心脏跳动期 17. 出膜期 18. 初孵仔鱼 1. Fertilized egg; 2. 2-cell stage; 3. 4-cell stage; 4. 8-cell stage; 5. 8-cell stage; 6. Morula stage; 7. Early blastocyst stage; 8. Late blastocyst stage; 9.early gastrula stage; 10. Midgastrula stage; 11. Late gastrula stage; 12. Neurula stage; 13. Blastopore closed stage; 14. End teeth stage; 15. Muscle effector phase; 16. Heart-beating stage; 17. Hatching stage; 18. The larva 前期仔鱼发育(从孵化出膜至卵黄囊完全消失) 出现 下颌开始出现(图 2-3) 初孵仔鱼通体透明 脊索细长 位于体上侧 全 长为(6.07±0.28) mm 卵黄囊呈长囊袋状 前部钝圆 4 日龄仔鱼全长为(7.93±0.26) mm 体无色透明 体表黑色素增多 特别是卵黄囊上缘 尾鳍褶和脊索 后端尖细 占鱼体的大部分 消化管隐约可见 背部 上缘黑色素沉积较多 卵黄囊消耗超过 3/4 心脏附 胸部及尾部出现鳍褶雏形 游动能力较差 随着孵化 近红色颜色加深 体表上方和尾鳍褶附近有红色 鳔 器中水流的涌动而做上下窜游(图 1-17) 原基出现 仔鱼活动能力加强 持续做上下窜游运动 1 日龄仔鱼全长为(6.57±0.32) mm 头部稍弯向 口裂形成 但不摄食(图 2-4) 下方 吻端紧贴卵黄囊 体无色透明 眼球出现黑色 5 日龄仔鱼全长为(8.51±0.21) mm 体表黑色素 素 心脏附近出现少量血液 呈淡红色 胸鳍鳍褶增 增多 除了卵黄囊上缘 尾鳍褶和脊索上缘黑色素沉 高 仔鱼尾部活动加强 在水中 仔鱼偶尔向上窜游 积较多之外 心脏周围也有黑色素沉积 卵黄囊消耗 窜游一小段距离后停止摆动身体 在水中自由落下 超过 8/9 心脏周围红色血液的颜色清晰可见 体表 每分钟重复此运动 次(图 2-1) 上方和尾鳍褶附近有红色 鳔已开始充气 仔鱼可以 2 日龄仔鱼全长为(7.02±0.33) mm 头部向上抬 在水体中上层平游 吻部更加突出 尾鳍呈扇形 消 起 吻端离开卵黄囊 并向前突出 脊索平直 卵黄 化道明显变粗并弯曲(图 2-5) 囊消耗 1/3 左右 体无色透明 眼球黑色素增多 心 脏附近红色颜色略有加深(图 2-2) 后期仔鱼发育(从卵黄囊完全消失至各鳍鳍条 基本形成) 6 日龄仔鱼全长为(9.45±0.24) mm 体 3 日龄仔鱼全长为(7.51±0.24) mm 脊索平直 表黑色素继续增多 除了尾鳍褶 脊索上缘和心脏周 清晰可见 卵黄囊消耗超过 1/2 体无色透明 体表 围黑色素沉积较多之外 头部也有黑色素沉积 鳔上 开始出现少量黑色素沉积 眼球黑色素进一步增多 缘黑色素沉积最多 卵黄囊完全消失 鳃原基进一步 心脏附近红色颜色加深 体表上方和尾鳍褶附近有红 发育 鳔进一步充气 胸鳍出现 身体可以保持平衡 色 背鳍 胸鳍及尾鳍鳍褶增大 增高 腹鳍褶和尾 游泳能力大大增强 仔鱼肠道和肛门贯通 沉入池底 鳍褶连成一体 仔鱼尾部活动进一步加强 鳃弓原基 开始摄食小球藻和轮虫等生物饵料(图 2-6)

5 第4期 管 敏等: 长鳍吻 (Rhinogobio ventralis)胚胎发育和仔鱼发育 8 日龄仔鱼全长为(10.51±0.29) mm 体表黑色素 61 鳃盖骨清晰可见 心脏明显发红 清晰可见 尾鳍逐 进一步增多 尾椎骨开始上翘 尾鳍鳍条开始发育 渐由圆形尾向叉形尾分化 鳔仍为一室 其上方黑色 鳔继续充气增大 呈长椭圆形 只有一个腔室 消化 素已覆盖 1/2 左右 消化道内充满食物 肌节清晰可 道内可见明显的食物 颅骨变厚 呈淡黄色 略透明 见 对(图 2-12) 25 日龄仔鱼全长为(20.32±0.15) mm 鱼体呈半 (图 2-8) 14 日龄仔鱼全长为(14.11±0.18) mm 鱼体呈半 透明 淡黄色 体表黑色素继续沉积 头部黄色颜色 透明 淡黄色 体表黑色素进一步沉积 头部黄色颜 继续加深 吻端 鳃盖边缘和头部上方黑色素继续增 色加深 吻端 鳃盖边缘和头部上方黑色素明显增多 多 并出现较大的黑色素斑点 心脏贯通到背主动脉 Fig.2 图 2 长鳍吻 仔鱼发育 Larvae development of R.ventralis 1. 1 日龄仔鱼 2. 2 日龄仔鱼 3. 3 日龄仔鱼 4. 4 日龄仔鱼 5. 5 日龄仔鱼 6. 6 日龄仔鱼 7. 7 日龄仔鱼 8. 8 日龄仔鱼 日龄仔鱼 日龄仔鱼 日龄仔鱼 日龄仔鱼 日龄仔鱼 日龄仔鱼 日龄仔鱼 日龄仔鱼 1. 1-day larva; 2. 2-day larva; 3. 3-day larva; 4. 4-day larva; 5. 5-day larva; 6. 6-day larva; 7. 7-day larva; 8. 8-day larva; day larva; day larva; day larva; day larva; day larva; day larva; day larva 注 图中横线长度(比例尺)为 1 cm Note: The length of the horizontal lines in the figure is 1 cm

6 62 渔 业 科 学 进 展 第 36 卷 和 尾 主 动 脉, 红 色 血 液 清 晰 可 见 ; 尾 鳍 鳍 条 上 沉 积 黑 色 素, 并 由 圆 形 尾 分 化 为 叉 形 尾, 鳍 条 数 24; 臀 鳍 开 始 出 现 ; 鳔 在 腹 腔 背 部, 发 育 为 两 室, 鳔 长 约 占 体 长 的 1/4, 其 上 方 黑 色 素 覆 盖 鳔 表 面 积 的 2/3 左 右 ; 消 化 道 内 充 满 食 物 ( 图 2-15) 30 日 龄 仔 鱼 全 长 为 (23.25±0.26) mm, 鱼 体 呈 暗 黄 色, 腹 部 呈 亮 黄 色, 透 明 度 降 低 ; 头 部 发 育 完 善, 黄 色 颜 色 加 深 ; 胸 鳍 背 鳍 臀 鳍 及 尾 鳍 的 鳍 条 形 成, 各 鳍 条 上 均 有 黑 色 素 沉 积, 鳞 片 形 成, 进 入 稚 鱼 期 ( 图 2-16) 3 讨 论 3.1 长 鳍 吻 精 子 和 受 精 卵 的 特 点 长 鳍 吻 精 子 的 激 烈 运 动 时 间 平 均 为 s, 缓 慢 运 动 时 间 平 均 为 s, 摇 尾 运 动 时 间 为 s, 精 子 寿 命 平 均 为 s, 这 与 罗 芬 等 (2011) 对 长 鳍 吻 精 子 活 力 观 察 结 果 相 一 致 精 子 活 力 会 受 到 一 些 生 物 和 非 生 物 因 素 的 影 响, 如 基 因 环 境 养 殖 密 度 光 周 期 渗 透 压 离 子 类 型 ph 激 素 等 (Alavi et al, 2005;Sansone et al,2002), 这 些 因 素 对 长 鳍 吻 精 子 活 力 的 影 响 有 待 研 究 长 鳍 吻 的 受 精 卵 为 漂 流 性 卵, 其 比 重 略 大 于 水, 吸 水 后 卵 膜 迅 速 膨 胀, 形 成 较 大 的 卵 周 隙, 随 流 水 漂 流 发 育 最 终 孵 出 鱼 苗 ( 周 春 生 等,1980) 漂 流 性 鱼 卵 的 卵 膜 径 一 般 在 mm 范 围 内, 因 种 属 不 同 卵 膜 径 也 有 显 著 差 异 如 草 鱼 (Ctenopharyngodon idellus) 鲢 鱼 (Hypophthalmictuthys molitrix) 铜 鱼 (Coreius heterodon) 圆 筒 吻 (Rhinogobio cylindricus Gunther) 吻 (Rhinogobio typus) 以 及 鳡 (Elopichthys bambusa) 等 卵 膜 径 为 mm, 属 大 型 鱼 卵 ; 蒙 古 红 鲌 (Erythroculter mongolicus) 翘 嘴 红 鲌 (Erythroculter ilishaeformis) 赤 眼 鳟 (Spualiobarbus curriculus) 花 斑 副 沙 鳅 (Parabotia fasciata Dabry) 以 及 长 春 鳊 (Parabramis pekinensis) 等 鱼 类 卵 膜 径 一 般 为 mm, 属 中 型 鱼 卵 ; 银 (Squalidus argentatus) 银 鲴 (Xenocypris argentea Gunther) 以 及 蛇 (Saurogobio dabryi) 等 小 型 鱼 类 卵 膜 径 通 常 为 mm( 周 春 生 等,1980) 长 鳍 吻 受 精 卵 的 卵 膜 径 为 mm, 平 均 为 (6.86± 0.31) mm, 属 于 大 型 鱼 卵 Lake 等 (1967) 和 Martell 等 (2005) 认 为, 鱼 卵 受 精 吸 水 膨 胀 后 形 成 的 较 大 卵 周 隙 可 以 有 效 抗 击 外 界 环 境 的 冲 击, 提 高 受 精 卵 的 成 活 率 据 此 分 析, 长 鳍 吻 受 精 卵 吸 水 后, 形 成 的 较 大 卵 周 隙, 一 方 面 可 以 为 胚 胎 发 育 提 供 安 全 的 内 部 环 境, 另 一 方 面 受 精 卵 吸 水 膨 胀, 扩 大 了 卵 的 体 积, 使 其 密 度 减 小, 可 以 实 现 漂 流 发 育, 鱼 卵 吸 水 后 的 这 一 系 列 生 理 变 化 是 其 繁 殖 策 略 的 重 要 体 现 3.2 长 鳍 吻 的 胚 胎 发 育 在 水 温 为 流 水 孵 化 条 件 下, 长 鳍 吻 受 精 卵 历 时 56 h 完 成 整 个 胚 胎 发 育 的 过 程 长 鳍 吻 的 胚 胎 发 育 与 大 多 数 鲤 科 鱼 类 胚 胎 发 育 期 的 划 分 基 本 一 致 长 鳍 吻 的 胚 胎 发 育 时 间 较 似 刺 鳊 (Paracanthobrama guichenoti Bleeker) 78 h 7 min (23 26 ) 蛇 h( ) 等 亚 科 鱼 类 历 时 较 短 ( 卢 敏 德 等,1996; 何 雪 福 等,1996), 较 中 华 沙 鳅 (Botia superciliaris) h(21 23 ) 花 斑 副 沙 鳅 12 h 30 min(28 ) 长 薄 鳅 (Leptobotia elongata) 34 h ( ) 等 鳅 科 鱼 类 历 时 长 ( 李 强 等,2011; 杨 明 生 等,2007; 梁 银 铨 等,2001), 明 显 短 于 青 海 湖 裸 鲤 (Gymnoocypris eckloni Herzensten) 132 h(18 21 ) 四 川 裂 腹 鱼 (Schizothorax kozlovi Nikolsky) 130 h(11 21 ) 以 及 尖 裸 鲤 (Oxygymnocypris stewarti) 265 h( ) 等 裂 腹 鱼 亚 科 鱼 类 ( 史 建 全 等,2000; 陈 永 祥 等,1997; 许 静 等,2011) 这 种 胚 胎 发 育 时 间 的 差 异 主 要 是 由 鱼 类 种 属 遗 传 特 性 决 定 的, 同 时 受 到 孵 化 水 温 条 件 的 显 著 影 响 温 度 是 影 响 鱼 类 胚 胎 发 育 的 主 要 环 境 因 素 ( 谢 仰 杰 等,2001), 长 鳍 吻 的 胚 胎 发 育 速 度 很 大 程 度 上 取 决 于 温 度 研 究 中 发 现, 长 鳍 吻 受 精 卵 在 水 温 为 时 孵 化, 经 56 h 即 可 出 膜, 而 在 水 温 为 时 孵 化, 则 需 72 h 才 能 出 膜 由 此 可 见, 温 度 影 响 长 鳍 吻 的 胚 胎 发 育 的 速 度, 在 一 定 温 度 范 围 内, 水 温 升 高 可 以 促 进 胚 胎 发 育, 相 反 水 温 降 低 会 延 缓 发 育 长 鳍 吻 胚 胎 发 育 的 适 宜 水 温 为 , 与 其 自 然 繁 殖 水 温 相 一 致, 水 温 过 高 或 过 低 都 会 造 成 胚 胎 发 育 畸 形 死 亡, 孵 化 率 降 低 3.3 长 鳍 吻 仔 鱼 的 生 长 发 育 长 鳍 吻 的 鱼 苗 卵 黄 囊 吸 收 的 特 点 是 首 先 吸 收 身 体 前 段 膨 大 部 分, 之 后 卵 黄 囊 变 成 条 状 直 至 消 失, 这 种 现 象 是 大 多 数 鲤 科 鱼 类 卵 黄 囊 被 吸 收 时 的 共 有 特 点 在 温 度 为 的 条 件 下, 长 鳍 吻 苗 种 全 长 与 日 龄 的 相 关 关 系 式 为 :y=5.8208e x (R 2 =0.9846), 从 初 孵 仔 鱼 到 6 日 龄 仔 鱼, 长 鳍 吻 的 生 长 速 度 较 为 缓 慢,7 30 日 龄, 生 长 速 度 逐 渐 加 快, 并 在 日 龄 进 入 快 速 生 长 期, 分 析 其 原 因 可 能 长 鳍 吻 的 仔 鱼 在 1 6 日 龄 时, 处 于 内 源 营 养 阶 段, 营 养 供 给 主 要 依 靠 卵 黄 囊,6 日 龄 以 后, 卵 黄 囊 完 全 消 失, 进 入 外 源 营 养 阶 段, 营 养 供 给 主 要 依 靠 外 源 物 质 此 时, 投 喂

7 第 4 期 管 敏 等 : 长 鳍 吻 (Rhinogobio ventralis) 胚 胎 发 育 和 仔 鱼 发 育 63 的 轮 虫 枝 角 类 等 生 物 饵 料, 营 养 充 足, 保 证 了 仔 鱼 生 长 发 育 对 营 养 的 需 求 随 着 仔 鱼 各 个 器 官 发 育 逐 步 完 善, 仔 鱼 的 游 泳 能 力 不 断 增 强, 捕 食 能 力 大 大 提 高, 摄 食 量 不 断 加 大, 加 之 仔 鱼 的 消 化 系 统 发 育 完 全, 消 化 吸 收 能 力 显 著 提 高, 使 得 仔 鱼 在 7 日 龄 以 后 生 长 发 育 速 度 逐 渐 加 快, 并 在 11 日 龄 后 进 入 一 个 快 速 生 长 期 30 日 龄 的 仔 鱼 鳍 条 基 本 形 成, 鳞 片 开 始 出 现, 进 入 稚 鱼 期 第 1 批 长 鳍 吻 鱼 苗 在 出 膜 后 7 10 d 左 右 时, 每 天 均 出 现 大 量 死 亡, 观 察 发 现, 鱼 苗 身 体 瘦 弱, 肠 道 内 无 食 物 分 析 其 原 因, 可 能 是 因 为 长 鳍 吻 鱼 苗 在 卵 黄 囊 耗 尽 前 的 短 期 内 开 始 转 向 外 界 摄 食, 此 时 为 内 源 性 和 外 源 性 营 养 共 存 的 混 合 营 养 期, 而 在 此 阶 段, 长 鳍 吻 仔 鱼 没 有 获 得 足 够 的 营 养, 导 致 其 卵 黄 营 养 耗 尽 后 一 直 处 于 饥 饿 状 态, 尽 管 还 能 生 存 较 长 一 段 时 间, 但 很 难 恢 复 摄 食 能 力, 导 致 鱼 苗 死 亡 参 考 文 献 邓 辉 胜, 何 学 福. 长 江 干 流 长 鳍 吻 的 生 物 学 研 究. 西 南 农 业 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ), 2005, 27(5): 史 建 全, 祁 洪 芳, 杨 建 新, 等. 青 海 湖 裸 鲤 人 工 繁 殖 及 鱼 苗 培 育 技 术 的 研 究. 淡 水 渔 业, 2000, 30(2): 3 6 卢 敏 德, 杨 彩 根, 葛 志 亮, 等. 似 刺 鳊 胚 胎 发 育 的 研 究. 水 产 养 殖, 1996(6): 刘 军. 长 江 上 游 特 有 鱼 类 受 威 胁 及 优 先 保 护 顺 序 的 定 量 分 析. 中 国 环 境 科 学, 2004, 24(4): 许 静, 谢 从 新, 邵 俭, 等. 雅 鲁 藏 布 江 尖 裸 鲤 胚 胎 和 仔 稚 鱼 发 育 的 研 究. 水 生 态 学 杂 志, 2011, 32(2): 陈 永 祥, 罗 泉 笙. 乌 江 上 游 四 川 裂 腹 鱼 的 胚 胎 发 育. 四 川 动 物, 1997, 16(4): 何 雪 福, 宋 昭 彬, 谢 恩 义. 蛇 的 产 卵 习 性 及 胚 胎 发 育. 西 南 师 范 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ), 1996, 21(3): 辛 建 峰, 杨 宇 峰, 段 中 华, 等. 长 江 上 游 长 鳍 吻 的 种 群 特 征 及 其 物 种 保 护. 生 态 学 杂 志, 2010, 29(7): 李 强, 姚 明 予, 周 波, 等. 中 华 沙 鳅 人 工 繁 殖 技 术 初 探. 淡 水 渔 业, 2011, 41(5): 罗 芬. 长 鳍 吻 精 子 活 力 的 观 察. 泉 州 师 范 学 院 学 报, 2011, 29(6): 杨 明 生, 李 建 华, 黄 孝 湘. 澴 河 花 斑 副 沙 鳅 的 繁 殖 生 态 学 研 究. 水 利 渔 业, 2007, 27(5): 周 春 生, 梁 秩 燊, 黄 鹤 年. 兴 修 水 利 枢 纽 后 汉 江 产 漂 流 性 卵 鱼 类 的 繁 殖 生 态. 水 生 生 物 学 学 报, 1980, 7(2): 徐 念, 史 方, 熊 美 华, 等. 三 峡 库 区 长 鳍 吻 种 群 遗 传 多 样 性 的 初 步 研 究. 水 生 态 学 杂 志, 2009, 30(2): 梁 银 铨, 胡 小 建. 长 薄 鳅 人 工 繁 殖 技 术 的 研 究. 水 生 生 物 学 报, 2001, 25(4): 谢 仰 杰, 翁 朝 红, 管 延 华, 等. 温 度 对 花 尾 胡 椒 鲷 胚 胎 发 育 的 影 响. 集 美 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ), 2001, 6(2): Alavi SMH, Cosson J. Sperm motility in fishes. Effects of temperature and PH:A review. Cell Biol Int, 2005, 29(2): Lake JS Rearing experiments with five species of Australian freshwater fishes. Ⅱ. Morphogenesis and ontogeny. Australian J Mar Freshwat Res, 2005, 18: Martell DJ, Kieffer JD, Trippel EA. Effects of temperature during early life history on embryonic and larval development and growth in haddock. J Fish Biol, 2005, 66(6): Sansone G, Fabbrocini A, Leropoli S, et al. Effects of extender composition, cooling rate, and freezing on the motility of sea bass (Dicentrarchus labrax L.) spermatozoa after thawing. Cryobiology, 2002, 44(3): ( 编 辑 陈 严 )

8 64 渔 业 科 学 进 展 第 36 卷 Study on the Embryonic and Early Larval Development of Rhinogobio ventralis GUAN Min, XIAO Kan, HU Meihong, LIU Yong, LU Xuebao, NI Yong, GUO Wentao 1, QU Huantao, LI Sha (Hubei Province Key Laboratory of the Three Gorges Project Fish Resources Protection, China Yangtze Three Gorges Group Company, the Chinese Sturgeon Research Institute, Yichang ) Abstract The current study investigated the embryonic and early larval development of Rhinogobio ventralis using the micro electronic imaging technology. The running-water hatching way was used to incubate the fertilized egg. The hatching water temperature was and DO was 7 9 mg/l. The results showed that the range of R.ventralis egg diameter,egg membrane diameter and egg weight was mm, mm and g, respectively, and that the life and swirling movement time of sperm were s and s, respectively. The time period for embryonic development was 56 h at Eight embryo development stages of R.ventralis were described, which included fertilized egg, blastoderm, cleavage, blastula, gastrula, neurula, organogenesis, and hatching period. The yolk-sac of larvae disappeared after being reared for 5 days in the water at The yolk-sac of 6-days age larvae disappeared completely, and the late larval stage began. The fin of 30-days age larva was basically formed and scales began to form. The growing larvae further developed into juvenile stage after 30 days. Our study provides theoretical basis and scientific reference for the mass reproduction of R.ventralis. Key words Rhinogobio ventralis; Embryonic development; Larvae development 1 Corresponding author: GUO Wentao, realgwt2008@163.com

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