1202 伍 钢 放 射 治 疗 在 恶 性 淋 巴 瘤 治 疗 中 的 地 位 于 欧 美 近 年 来, 恶 性 淋 巴 瘤 的 研 究 取 得 了 巨 大 的 进 展, 分 子 生 物 学 和 免 疫 学 的 进 展 产 生 了 新 的 淋 巴 瘤 组 织 病 理 分 类, 加 深 了 对 淋

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1 中华肿瘤防治杂志 ２００９ 年 ８ 月第 １６ 卷第 １６ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ａｇ ２００９ Ｖ １６ Ｎ １６ １２０１ 高端述评 伍钢 男 医学博士 教授 主任医师 博士生导 师 华中 科技 大学 同济 医学 院附属协和医院肿瘤科主 任 任 中 国 临 床 肿 瘤 学 会 执 行 委 员 会 委 员 中 国 老年学会老年肿瘤专业委员会委员 湖北省 武汉市 肿瘤学会副主任 委员 武汉市放射肿瘤学会副主任 委 员 湖 北 省 抗 癌 协 会 淋 巴 瘤 专 业 委 员 会 主 任 委员 肺癌专业委员 会 副 主 任 委 员 １９８３ 年 毕 业 于 湖 北 医 科 大 学 １９８６ １９８９ 年在该校攻读医学硕士学位 １９９４ １９９７ 年在上海第二医科大学攻 读 医学博士学位 ２００１ 年 曾 在 美 国 东 田 纳 西 州 立 大 学 做 访 问 学 者 先 后 承 担省级科研课题 ５ 项 参 加 国 家 ８６３ 课 题 １ 项 国 家 自 然 科 学 基 金 课 题 ２ 项 获教育部和上 海 市 科 研 成 果 各 １ 项 获 上 海 市 医 学 科 技 成 果 三 等 奖 １ 项 发表学术论文 ７０ 余篇 主 编 和 参 编 专 著 各 ２ 部 参 编 教 材 １ 部 受 聘 担任 临床肿瘤学杂志 英文版 肿瘤防治研究 临床肿瘤学杂志 华中科技大学学报 和 临 床耳鼻喉杂志 等 ７ 种专业杂志编委 癌症 中华医 学杂 志 英 文 版 特 约 审 稿 专 家 擅 长 恶 性 肿 瘤的早期诊断与综合治疗 特别在肺癌 恶性淋巴瘤和头 颈肿 瘤 的 综 合 治 疗 方 面 造 诣 尤 深 科 研 方 向为肿瘤血管生成的机制与临床研究 犠犝 犌犪狀犵 Ｍ Ｄ ＷＧｇ Ｐ ｄｃｈ ｍ Ｄ ｍ Ｏ ｇ Ｗｈ Ｕ Ｈ Ｈ ｚｈｇｕ ｖ Ｓ ｄｔ ｈ ｇ Ｈｗ ｇ ｄ ｄ ｍ ＷｈＵ ｖ ｈｓ Ｃ Ｈ １９８３ Ｂ ｈ ｄ ｍ１９８６ １９８９ｈｋ ｄ ｇ Ｍ ｄｇ Ｃ Ｍｄ ｈ ｍ ｖ ｍ１９９４ １９９７ｈｗ ｈ ｇｈ Ｍｄ Ｄ ＴｈＳ ｄｍｄ Ｕ ｖ Ｓｈｇ Ｔｈ ｈ Ｈ ｄ ｇ ｇ ｖ ｇ ｈ Ｅ Ｔ Ｓ Ｕ ｖ ２００１ Ｈｇ ＵＳＡ ｖ ｇ ｍ Ｈｂ Ｐ ｖ ｄ ｄ ｍ ｇ ｍ ｈｎ Ｈ ｈ ｇｒ ｇｈｔ ｈｄｄ ｖ ｍ Ｐ ｇ ｍ Ｃｈ ８６３Ｐ ｇ ｍ ｄｗｎ Ｎ Ｓ Ｆｄ Ｃｈ Ｈｗ ｗ ｄｄ Ｓ Ｅｘ ｂ Ｍ Ｅｄ Ｃｈ ｄｓｈｇｈ Ｍ Ｇｖ ｍ Ｈｂ ｈｄｖ ７０ ｈ ｖ ｗｄｊ ｄ３ｂｋ ｈｃｈ Ｅｄ ｈ Ｈ Ｅｇ ｈｖ Ｃ Ｒ ｈ Ｐ ｖ ｄ ｈｄ ｂ ｄｍｍｂ Ｊ Ｃ Ｏ ｇ Ｔ ｍ Ｊ Ｈ ｚｈｇｕ ｖ Ｓ ｄｔ ｈ ｇ Ｎ Ｓ Ｊ Ｃ Ｏ ｈ ｇ ｄ ｈ ｖ ｗ Ｃｈ Ｊ Ｃ Ｅｇ ｈｖ Ｃｈ Ｍｄ Ｊ ｇ Ｈ ｚ ｖ ｄ ｍｂ ｍ ｍ ｍ ｇ ｇ ｍｂ ｄ ｈ ｇ ｍ ｗ ｍ ｈ ｄｄ ｋ Ｈ ｈ ｍ ｄ ｇ ｍｈｍ ｍ ｈ ｍｄ ｖ ｍ ｇ ｇ ｇ 放射治疗在恶性淋巴瘤治疗中的地位 伍钢 华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心 湖北 武汉 ４３００２３ Ｓ ｄ ｈ ｍ ｍ ｇ ｇ ｍｈｍ 犠犝 犌犪狀犵 犜狅狀犵犼 犕犱 犮犪 犾犆狅 犾 犾 犵狅犳 犎狌犪狕犺狅狀犵 犝狀 狏 狉 狊 狀犮 牔 犜 犮犺狀狅 犾 狅犵狔 犆犪狀犮 狉犆狀 狉狅犳 犝狀 狅狀 犎狅 狊狆 犪 犾 狔狅犳 犛犮 犠狌犺犪狀 ４３００２３ 犘 犚 狀犪 恶 性 淋 巴 瘤 特 别 是 非 霍 奇 金 淋 巴 瘤 Ｈｄｇｋ ｍｈｍ ＮＨＬ 的 发 病 率 近 年 来 率分别占全部肿瘤患者的第 ６ 位和第 ７ 位 我国恶性 淋巴瘤的发病率缺乏 完 整 的 统 计 数 据 但 近 年 来 上 升 呈明显的上升趋势 美国近 １０ 年来 每 年 以 ４ 左 右 的 态势同样十分明显 此 外 我 国 淋 巴 瘤 的 流 行 病 学 有 速度增加 仅 ２００５ 年美国就有 ７ ４ 万新确诊的恶性淋 其自身特点 如 Ｂ 细 胞 淋 巴 瘤 中 惰 性 淋 巴 瘤 发 病 率 低 巴瘤患者 同时约 ２ １ 万患者死于该病 发病率和死亡 于欧美 而 Ｔ 细胞淋巴瘤中 ＮＫ Ｔ 细胞淋巴瘤明显多

2 1202 伍 钢 放 射 治 疗 在 恶 性 淋 巴 瘤 治 疗 中 的 地 位 于 欧 美 近 年 来, 恶 性 淋 巴 瘤 的 研 究 取 得 了 巨 大 的 进 展, 分 子 生 物 学 和 免 疫 学 的 进 展 产 生 了 新 的 淋 巴 瘤 组 织 病 理 分 类, 加 深 了 对 淋 巴 瘤 的 认 识 ; 免 疫 治 疗 和 放 射 免 疫 治 疗 以 及 放 疗 化 疗 的 进 展, 使 患 者 的 生 存 率 得 到 了 提 高 这 些 都 使 恶 性 淋 巴 瘤 的 治 疗 原 则 发 生 了 改 变 由 于 免 疫 治 疗 ( 如 单 克 隆 抗 体 的 应 用 ) 和 放 射 免 疫 治 疗 的 治 疗 费 用 昂 贵, 尽 管 其 疗 效 十 分 令 人 鼓 舞, 但 要 在 短 期 内 广 泛 应 用 于 国 内 的 广 大 患 者 仍 有 困 难 因 此 在 设 计 淋 巴 瘤 的 治 疗 方 案 时, 应 考 虑 综 合 治 疗 的 优 势 放 射 治 疗 是 恶 性 淋 巴 瘤 的 传 统 治 疗 方 法, 适 应 证 广 ; 对 于 某 些 类 型 的 淋 巴 瘤, 放 射 治 疗 甚 至 是 主 要 乃 至 唯 一 的 治 疗 方 法 根 据 放 疗 在 不 同 类 型 淋 巴 瘤 治 疗 中 的 地 位, 将 其 分 为 3 类 :1) 通 过 放 疗 可 以 获 得 根 治 的 淋 巴 瘤, 包 括 早 期 霍 奇 金 淋 巴 瘤 (Hodgkin slymphoma, HL) 鼻 腔 NK/T 细 胞 淋 巴 瘤 及 皮 肤 蕈 样 霉 菌 病 ; 2) 放 疗 作 为 主 要 治 疗 手 段 的 淋 巴 瘤, 包 括 Ⅰ ~ Ⅱ 期 滤 泡 性 ( 惰 性 ) 淋 巴 瘤 胃 和 其 他 部 位 结 外 黏 膜 相 关 淋 巴 瘤 (MALT);3) 放 疗 作 为 有 效 治 疗 手 段 的 淋 巴 瘤, 包 括 Ⅰ~Ⅱ 期 侵 袭 性 淋 巴 瘤 Ⅲ~Ⅳ 期 HL 中 枢 神 经 系 统 NHL 以 及 睾 丸 NHL 等 1 通 过 放 疗 获 得 根 治 的 淋 巴 瘤 1.1 HL HL 原 名 霍 奇 金 病 (Hodgkin sdisease,hd) 1832 年 ThomasHodgkin 首 次 报 道 了 7 例 以 淋 巴 结 为 原 发 病 变 的 疾 病 1865 年 Samuel Wilks 以 Hodgkin 的 名 字 命 名 了 此 类 疾 病 CarlSternberg 和 DorothyReed 最 早 定 义 了 HL 肿 瘤 细 胞 在 显 微 镜 下 的 形 态 1965 年 Rye 会 议 上 制 定 了 4 种 病 理 分 类 和 分 期 1971 年 AnnArbor 会 议 修 改 了 该 病 的 分 期 并 沿 用 至 今 1993 年 Costward 会 议 再 次 进 行 了 修 订 1997 年 WHO 将 HL 分 为 如 下 病 理 类 型 : 结 节 性 淋 巴 细 胞 为 主 型 和 经 典 型 霍 奇 金 淋 巴 瘤 ( 包 括 富 有 淋 巴 细 胞 型 结 节 硬 化 型 混 合 细 胞 型 以 及 淋 巴 细 胞 削 减 型 ) HL 的 治 疗 原 则 经 历 了 以 下 的 转 变 过 程 在 年, 对 早 期 HL 放 疗 被 认 为 是 治 愈 该 病 的 唯 一 有 效 手 段 Ⅰ~ Ⅱ 期 HL 进 行 扩 大 野 照 射, 剂 量 为 45Gy 左 右,10~15 年 生 存 率 为 73%~91% 晚 期 HL 则 以 全 身 化 疗 为 主, 放 射 治 疗 主 要 应 用 于 化 疗 前 大 肿 块 或 化 疗 后 残 存 肿 瘤 的 治 疗 由 于 单 独 放 疗 的 晚 期 并 发 症 或 合 并 症 成 为 重 要 致 死 因 素, 如 第 二 肿 瘤 和 心 脏 合 并 症 等, 降 低 了 患 者 的 生 存 质 量, 加 之 放 疗 + 化 疗 的 疗 效 优 于 单 独 放 疗, 故 近 年 来 对 于 早 期 HL 强 调 综 合 治 疗, 但 放 疗 作 为 有 效 治 疗 手 段 的 地 位 未 被 动 摇 综 合 治 疗 的 优 点 是 降 低 了 放 疗 剂 量, 减 少 了 受 照 射 面 积, 还 可 以 减 少 化 疗 周 期 数, 降 低 化 疗 的 毒 副 反 应 综 合 治 疗 显 著 提 高 了 患 者 的 无 瘤 生 存 率 或 无 进 展 生 存 率, 但 未 能 提 高 总 生 存 率 目 前 的 治 疗 原 则 是 在 不 影 响 患 者 疗 效 的 情 况 下, 如 何 降 低 治 疗 相 关 的 远 期 毒 副 反 应, 探 讨 放 疗 化 疗 结 合 的 综 合 治 疗 时 有 效 和 毒 性 更 低 的 化 疗 方 案, 减 少 化 疗 周 期, 并 降 低 放 疗 照 射 剂 量 和 缩 小 照 射 靶 区 Ⅰ ~ Ⅱ 期 HL 初 程 治 疗 目 前 早 期 (Ⅰ ~ Ⅱ 期 )HL 的 治 疗 原 则 主 要 决 定 于 患 者 的 预 后 因 素, 根 据 表 1 影 响 预 后 的 因 素 将 其 分 为 预 后 好 早 期 HL 和 预 后 不 良 早 期 HL 两 大 类 目 前, 全 世 界 主 要 采 用 欧 洲 EORTC 和 德 国 GHSG 两 种 标 准 表 1 EORTC/GELA 及 GHSG 关 于 早 期 HL 预 后 因 素 和 治 疗 分 组 组 别 EORTC/GELA 标 准 GHSG 标 准 预 后 良 好 早 期 HL CS Ⅰ~Ⅱ 期, 无 不 良 预 后 因 素 CS Ⅰ~Ⅱ 期, 无 不 良 预 后 因 素 预 后 不 良 早 期 HL CS Ⅰ~Ⅱ 期, 有 任 何 不 良 预 后 因 素 CS Ⅰ~ⅡA 伴 任 何 RS;CS ⅡB 伴 RSC/D 但 不 伴 A/B 晚 期 HL CS Ⅲ~Ⅳ 期 CS ⅡB 伴 A/B;CS Ⅲ~Ⅳ 期 预 后 因 素 A 大 纵 隔 A 大 纵 隔 B 年 龄 50 岁 B 结 外 受 侵 C 无 B 症 状 但 ESR>50 或 ESR>30 伴 B 症 状 C 无 B 症 状 但 ESR>50 或 ESR>30 伴 B 症 状 D 4 个 部 位 受 侵 D 3 个 部 位 受 侵 注 :RS 表 示 危 险 因 素 ;CS 表 示 临 床 分 期 放 射 治 疗 是 早 期 HL 的 根 治 性 治 疗 手 段 但 目 前 除 预 后 极 好 的 ⅠA 期 HL, 即 结 节 性 淋 巴 细 胞 为 主 型 HL 可 单 独 放 疗 外, 其 他 类 型 的 HL 均 主 张 综 合 治 疗 对 无 不 良 预 后 因 素 者, 综 合 治 疗 较 之 单 纯 放 疗 能 提 高 无 瘤 生 存 率 无 复 发 生 存 率 或 无 治 疗 失 败 生 存 率, 但 未 能 提 高 总 生 存 率 EORTC H7F 的 临 床 研 究 于 年 完 成,333 例 预 后 好 的 临 床 ⅠA 和 ⅡA 患 者 随 机 分 为 6 个 周 期 EBVP+ 受 累 野 照 射 和 单 纯 次 全 淋 巴 结 照 射 两 组, 无 瘤 生 存 率 和 无 复 发 生 存 率 综 合 治 疗 组 明 显 高 于 单 纯 放 疗 组,10 年 无 事 件 生 存 率 分 别 为 88% 和 78% ( 犘 =0.0113), 但 两 组 的 10 年 生 存 率 均 为 92%, 差 异 无 统 计 学 意 义, 犘 =0.79 对 有 不 良 预 后 因 素 者 同 无 不 良 预 后 因 素 者 一 样, 综 合 治 疗 提 高 了 无 瘤 生 存 率 或 无 失 败 生 存 率, 但 未 能 提 高 总 生 存 率

3 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2009 年 8 月 第 16 卷 第 16 期 CHINJCANCERPREV TREAT,August2009,Vol.16 No EORTC H5U 试 验 随 机 比 较 了 预 后 不 良 的 Ⅰ ~ Ⅱ 期 HL 全 淋 巴 结 照 射 和 3 个 周 期 MOPP+ 斗 篷 野 照 射 + 3 个 周 期 MOPP 的 疗 效, 综 合 治 疗 组 和 单 纯 放 疗 组 的 15 年 无 瘤 生 存 率 分 别 为 84% 和 65%( 犘 <0.001), 但 两 组 的 15 年 总 生 存 率 均 为 69%, 差 异 无 统 计 学 意 义 综 合 治 疗 时 要 考 虑 有 效 低 毒 的 化 疗 方 案 和 有 效 而 最 少 的 化 疗 周 期 数 ABVD 已 经 取 代 MOPP 成 为 HL 的 标 准 化 疗 方 案 EORTC H6U 试 验 随 机 比 较 预 后 不 良 的 临 床 Ⅰ ~ Ⅱ 期 HL 3MOPP+ 扩 大 野 + 3MOPP 和 3ABVD+ 扩 大 野 +3ABVD 的 疗 效,10 年 生 存 率 均 为 87%, 但 10 年 无 瘤 生 存 率 ABVD 组 (90%) 优 于 MOPP 组 (68%) 至 于 放 疗 的 范 围 和 剂 量,GHSG HL10 试 验 比 较 了 无 不 良 预 后 因 素 的 临 床 Ⅰ~Ⅱ 期 HL, 随 机 分 为 2ABVD+ 累 及 野 (20 Gy) 2ABVD+ 累 及 野 (30Gy) 4ABVD+ 累 及 野 (20Gy) 和 4ABVD+ 累 及 野 (30Gy)4 组, 随 访 24 个 月 的 初 步 报 道 显 示, 无 瘤 生 存 率 97%,4 组 间 差 异 无 统 计 学 意 义 该 试 验 提 示, 无 不 良 预 后 因 素 的 临 床 Ⅰ ~ Ⅱ 期 HL, 放 疗 剂 量 20 与 30Gy 相 比 疗 效 差 异 无 统 计 学 意 义,2 和 4 个 周 期 ABVD 疗 效 亦 相 同 2003 年 发 表 的 GSHG HD8 试 验, 入 组 1064 例 患 者, 随 机 分 为 两 组, 两 组 的 化 疗 方 案 都 为 ABVD, 均 完 成 4 个 周 期, 两 组 的 照 射 野 则 分 别 为 累 及 野 (IF) 和 扩 大 累 及 野 (EF), 结 果 两 组 的 PFS 和 OS 差 异 均 无 统 计 学 意 义 意 大 利 米 兰 的 一 组 研 究 比 较 了 在 化 疗 方 案 和 周 期 数 相 同 的 条 件 下, 次 全 淋 巴 结 照 射 (STIL) 和 IF 疗 效 的 差 异, 结 果 无 论 是 PFS 或 OS 也 相 同 综 合 治 疗 的 模 式 通 常 是 化 疗 后 放 疗, 其 优 点 在 于 化 疗 同 时 治 疗 原 发 灶 和 亚 临 床 病 灶, 化 疗 后 病 灶 缩 小, 可 以 缩 小 照 射 靶 区, 降 低 毒 副 反 应 上 述 临 床 试 验 建 议, 早 期 HL 联 合 化 疗 2~4 个 周 期 后 予 以 放 疗, 无 不 良 预 后 因 素 者 IF 已 足 够, 剂 量 为 20~30Gy; 若 有 大 肿 块 或 化 疗 后 未 达 到 完 全 缓 解 者, 则 需 36~40 Gy 放 疗 的 时 机 一 般 安 排 在 周 期 的 中 间 进 行, 即 三 明 治 疗 法 有 不 良 预 后 因 素 者, 酌 情 采 用 IF 或 EF, 化 疗 周 期 为 4~6 个 周 期 放 疗 在 晚 期 HL 中 的 地 位 晚 期 HL 放 疗 应 用 于 化 疗 完 全 缓 解 后 辅 助 性 治 疗 放 疗 作 为 综 合 治 疗 的 一 部 分 化 疗 部 分 缓 解 后 的 放 疗 3 个 方 面 放 射 治 疗 可 以 改 善 晚 期 HL 化 疗 后 肿 瘤 残 留 或 化 疗 前 大 肿 块 患 者 的 生 存 率 但 化 疗 后 完 全 缓 解 和 非 大 肿 块 的 晚 期 HL, 放 射 治 疗 并 不 能 改 善 生 存 率 Aleman 等 报 道, 739 例 晚 期 HL 经 6~8 个 周 期 MOPP/ABV 化 疗 达 CR 后, 随 机 分 为 两 组, 一 组 接 受 累 及 野 放 疗, 另 一 组 不 接 受 进 一 步 治 疗, 结 果 接 受 放 疗 者 其 无 瘤 生 存 率 和 总 生 存 率 无 改 善 ; 但 对 于 达 PR 者, 若 接 受 放 疗, 则 5 年 生 存 率 可 达 85%~90%, 可 与 化 疗 后 达 CR 者 的 疗 效 媲 美 因 此,ABVD 方 案 伴 或 不 伴 补 充 放 疗 是 目 前 晚 期 HL 治 疗 的 金 标 准 1.2 鼻 腔 NK/T 细 胞 淋 巴 瘤 NK/T 细 胞 淋 巴 瘤 多 发 生 在 亚 洲 墨 西 哥 以 及 中 南 美 洲, 在 我 国 占 全 部 恶 性 淋 巴 瘤 的 2%~10%, 常 见 于 成 年 男 性 NK/T 淋 巴 瘤 好 发 于 鼻 腔 鼻 咽 部 腭 部 皮 肤 软 组 织 胃 肠 道 和 睾 丸, 部 分 病 例 可 累 及 到 淋 巴 结, 鼻 腔 是 最 常 见 的 原 发 部 位 肿 瘤 常 有 嗜 血 管 性, 多 伴 有 血 管 破 坏 和 坏 死 最 典 型 性 的 免 疫 表 型 为 CD2 + CD56 + 表 面 CD3 - 以 及 胞 质 CD3ε +, 多 数 病 例 也 表 达 细 胞 毒 性 颗 粒 相 关 蛋 白 ( 如 粒 酶 B TIA 1 和 穿 孔 素 ) 其 他 T 和 NK 细 胞 相 关 抗 原 呈 阴 性, 其 中 包 括 CD4 CD5 CD8 TCRβ TCRδ CD16 和 CD57 CD43 CD45RO HLA DR IL 2 受 体 Fas(CD95) 和 Fasligand 常 阳 性, 偶 尔 有 CD7 或 CD30 阳 性 的 病 例 ⅠE ⅡE 期 患 者 首 选 放 疗, 然 后 酌 情 巩 固 化 疗, 如 超 腔 ⅠE 期 可 补 充 化 疗 2~4 个 周 期, 而 局 限 ⅠE 期 化 疗 的 效 果 不 肯 定 巩 固 化 疗 的 方 案 可 选 用 ECHOP B CHOP 或 其 他 临 床 试 验 方 案, 常 用 的 CHOP 方 案 疗 效 欠 佳 Ⅲ ~ Ⅳ 期 的 患 者, 主 要 为 化 疗, 方 案 同 上,4~6 个 周 期, 酌 情 补 充 放 疗 放 射 治 疗 的 剂 量 为 50~55 Gy, 在 肿 瘤 残 存 时 应 补 量 10~ 15Gy 之 所 以 强 调 放 疗 的 地 位, 因 为 我 国 的 李 晔 雄 教 授 对 比 观 察 了 一 组 病 例,105 例 患 者 随 机 分 为 两 组, 一 组 首 选 放 疗, 另 一 组 化 疗 后 再 放 疗, 结 果 首 选 放 疗 组 的 CR 率 为 83%, 而 化 疗 后 再 放 疗 组 仅 20%; 韩 国 的 Kin 也 报 道 了 相 同 的 结 果, 两 组 的 CR 率 分 别 为 69% 和 8% 无 论 哪 期 患 者, 如 果 在 治 疗 过 程 中 出 现 发 热, 应 注 意 检 查 有 无 新 的 病 灶, 特 别 应 注 意 沿 体 中 线 检 查, 如 咽 喉 肺 和 睾 丸 等, 同 时 应 注 意 皮 肤 的 检 查 1.3 蕈 样 霉 菌 病 蕈 样 霉 菌 病 (mycosisfungoides,mf) 是 一 种 常 见 的 嗜 表 皮 性 皮 肤 T 细 胞 淋 巴 瘤 MF 多 见 于 年 龄 较 大 的 成 人, 中 位 发 病 年 龄 为 55~60 岁 临 床 分 为 红 斑 期 (Patchstage) 斑 块 期 (Plaquestage) 和 瘤 样 期 (Tumorstage)3 个 阶 段 病 情 进 展 缓 慢, 从 红 斑 斑 块 到 瘤 样 期 需 数 年 到 十 多 年 全 身 电 子 线 放 疗 是 红 斑 期 和 斑 块 期 的 主 要 治 愈 方 法 瘤 样 期 对 局 部 治 疗 较 不 敏 感, 淋 巴 结 和 器 官 受 侵 时 应 考 虑 多 药 全 身 化 疗 病 变 广 泛 时, 可 考 虑 高 剂 量 化 疗 加 干 细 胞 移 植 全 身 电 子 线 放 疗 的 照 射 技 术 采 用 六 向 双 野 照 射, 可 获 得 理 想 的 均 匀 剂 量 分 布 射 线 选 用 3~6 MeV 的 电 子 线, 设 置 前 3 个 和 后 3 个 定 向 治 疗 野, 每 野 又 分 上 下 两 野, 即 水 平 轴 向 上 或 向 下 偏 转 20 的 治 疗 野 3 个 野 /d, 每 2 天 1 个 循 环, 每 个 循 环 内 整 个 皮 肤 的 受 照 剂 量 应 为 1.5~2.0Gy 一 般 每 周 安 排 4 次, 即 2 个 循 环 的 放 疗 姑 息 剂 量 10~20 Gy/

4 1204 伍 钢 放 射 治 疗 在 恶 性 淋 巴 瘤 治 疗 中 的 地 位 (1~2) 周 ; 根 治 剂 量 30~40Gy/(8~10) 周, 完 成 半 量 时 休 息 1~2 周, 注 意 保 护 晶 体 和 角 膜 2 放 疗 作 为 主 要 治 疗 手 段 的 淋 巴 瘤 2.1 滤 泡 性 淋 巴 瘤 滤 泡 性 淋 巴 瘤 (folicularlymphoma,fl) 约 占 美 国 成 人 的 35%, 占 全 世 界 (NHL) 的 22% FL 的 发 病 率 在 欧 洲 亚 洲 及 不 发 达 国 家 要 低 一 些, 我 国 为 5.5%~11% 在 美 国 FL 占 低 度 恶 性 淋 巴 瘤 的 比 例 可 高 达 70% FL 主 要 发 生 在 成 人, 平 均 年 龄 59 岁, <20 岁 的 患 者 罕 见 主 要 累 及 淋 巴 结, 但 也 可 见 于 脾 骨 髓 外 周 血 以 及 韦 氏 环 ; 也 可 见 于 结 外 如 胃 肠 道 软 组 织 皮 肤 及 其 他 部 位, 但 不 常 见 多 数 患 者 在 诊 断 时 肿 瘤 已 有 广 泛 扩 散, 如 累 及 到 外 周 和 中 央 ( 胸 腹 ) 淋 巴 结 及 脾 脏, 也 有 40% 累 及 到 骨 髓 仅 10%~20% 的 患 者 在 诊 断 时 处 于 Ⅰ ~ Ⅱ 期,80% 为 Ⅲ ~ Ⅳ 期 虽 然 FL 容 易 广 泛 扩 散, 但 恶 性 程 度 低, 病 情 进 展 缓 慢, 预 后 好 FL 可 以 进 展 为 弥 漫 大 B 细 胞 淋 巴 瘤,FL 的 分 级 根 据 中 心 母 细 胞 数 量 的 多 少 FL 起 源 来 源 于 生 发 中 心 B 细 胞, 瘤 细 胞 免 疫 表 型 通 常 表 达 SIg + 和 表 达 B 细 胞 相 关 抗 原 (CD19,CD20,CD22,CD79a) 大 多 数 病 例 有 Bcl 2 表 达, 其 强 度 从 FL1 级 的 近 100% 到 FL3 级 的 75% Bcl 2 在 鉴 别 肿 瘤 性 和 反 应 性 滤 泡 方 面 很 有 用, 但 在 鉴 别 FL 与 其 他 低 度 恶 性 的 B 细 胞 淋 巴 瘤 中 没 有 价 值, 因 为 多 数 细 胞 都 表 达 Bcl 2 皮 肤 FL Bcl 2 常 常 阴 性 组 织 学 分 级 与 FL 的 预 后 有 关,1~2 级 为 惰 性 淋 巴 瘤 ( 临 床 过 程 缓 慢 ), 不 易 治 愈 ;3 级 有 较 强 的 侵 袭 性, 但 如 果 采 用 较 强 治 疗 方 法 有 治 愈 的 潜 在 可 能 性, 类 似 于 DLBCL;2 级 FL 是 否 可 治 愈 还 有 不 同 看 法, 多 数 研 究 显 示 2 级 FL 的 生 存 率 下 降, 也 有 的 显 示 2 级 FL 是 可 治 愈 的 绝 大 多 数 研 究 显 示,3 级 FL 具 有 显 著 的 临 床 侵 袭 过 程, 采 用 类 似 治 疗 DLBCL 联 合 化 疗, 显 示 的 预 后 似 乎 较 DLBCL 稍 好, 但 复 发 的 可 能 性 亦 增 加 25%~30% 的 FL 会 转 化 或 进 展 为 大 B 细 胞 淋 巴 瘤, 通 常 是 弥 漫 性 的 一 旦 发 生 转 化, 临 床 上 表 现 为 进 行 性 加 重 并 且 肿 瘤 坏 死, 预 示 治 疗 会 很 困 难 FL 对 放 射 治 疗 高 度 敏 感, 受 累 野 照 射 是 早 期 低 度 恶 性 淋 巴 瘤 的 标 准 治 疗 单 纯 放 疗 的 10~15 年 无 瘤 生 存 率 为 28%~53%,10~15 年 总 生 存 率 为 43% ~ 79% 德 国 的 一 组 资 料 显 示, 早 期 FL 单 纯 放 疗 年 的 总 生 存 率 分 别 为 64% 44% 和 39%, 而 疾 病 无 进 展 生 存 则 分 别 为 44% 40% 和 37% 一 般 10 年 后 较 少 复 发 照 射 剂 量 为 30~36Gy/4 周 或 更 高 放 疗 结 合 化 疗 的 综 合 治 疗 能 否 提 高 早 期 低 度 恶 性 淋 巴 瘤 的 生 存 率 尚 无 明 确 答 案 回 顾 性 分 析 认 为, 综 合 治 疗 可 能 提 高 Ⅰ~ Ⅱ 期 FL 的 无 疾 病 进 展 生 存 率, 但 未 能 提 高 总 的 生 存 率 Ⅲ 期 惰 性 淋 巴 瘤 占 10%~15%, 多 数 患 者 用 Ⅳ 期 患 者 的 化 疗 方 法, 放 射 治 疗 的 5 年 无 瘤 生 存 率 约 为 60% 目 前 FL 的 治 疗 策 略 为 :Ⅰ~Ⅱ 期 FL Ⅰ~Ⅱ 级 的 治 疗 可 采 用 单 纯 放 疗 ( 扩 大 野 照 射 ) 或 综 合 治 疗 ;Ⅲ ~ Ⅳ 期 FL Ⅰ~Ⅱ 级 的 治 疗 以 全 身 化 疗 为 主, 多 采 用 美 罗 华 +CHOP 方 案 或 CHOP 方 案 ;Ⅲ 级 FL 的 治 疗 原 则 同 DLBCL;Ⅰ~Ⅱ 期 以 综 合 治 疗 为 主,3~4 个 周 期 CHOP 方 案 化 疗 后 行 受 累 野 放 疗 2.2 MALT 结 外 边 缘 带 B 细 胞 淋 巴 瘤 (MALT 型 ) 占 所 有 B 细 胞 淋 巴 瘤 的 7% ~8%, 约 占 原 发 性 胃 淋 巴 瘤 的 50% 大 多 数 病 例 发 生 在 成 人, 平 均 年 龄 61 岁, 女 性 稍 多 于 男 性 ( 男 比 女 为 1 1.2) 胃 肠 道 是 MALT 淋 巴 瘤 最 好 发 部 位, 占 所 有 病 例 的 50%, 在 胃 肠 道 中 胃 是 最 常 受 累 的 部 位 (85%) 其 他 常 见 部 位 包 括 肺 (14%) 眼 附 属 器 (12%) 皮 肤 (11%) 甲 状 腺 (4%) 和 乳 腺 (4%) 大 多 数 MALT 淋 巴 瘤 病 例 有 慢 性 炎 症 性 疾 病 病 史, 常 常 是 自 身 免 疫 性 疾 病, 引 起 结 外 淋 巴 组 织 聚 集, 例 如 幽 门 螺 杆 菌 相 关 的 慢 性 胃 炎 干 燥 综 合 征 以 及 桥 本 甲 状 腺 炎 等 细 胞 起 源 于 生 发 中 心 后 (post germinalcenter) 的 边 缘 带 B 细 胞 典 型 的 免 疫 表 型 为 IgM + IgA +/- IgG +/- 及 单 一 型 轻 链 ( 克 隆 性 轻 链 ) 在 IPSID 中 浆 细 胞 和 边 缘 带 B 细 胞 都 表 达 α 重 链, 但 不 表 达 任 何 轻 链 MALT 淋 巴 瘤 呈 CD20 + CD79a + CD5 - CD10 - CD23 - CD43 +/- 及 CD11c +/- ( 弱 ) 瘤 细 胞 表 达 边 缘 带 细 胞 相 关 抗 原 CD21 和 CD35 CD21 和 CD35 染 色 可 以 显 示 被 殖 入 滤 泡 的 FDC 网 MALT 淋 巴 瘤 具 有 惰 性 的 临 床 过 程, 缓 慢 扩 散, 复 发 后 可 累 及 到 其 他 部 位, 对 放 疗 敏 感, 局 部 治 疗 后 可 获 长 期 无 瘤 生 存 结 外 多 部 位 受 累, 甚 至 骨 髓 受 累 也 不 一 定 意 味 着 预 后 不 好 抗 幽 门 螺 旋 杆 菌 治 疗 对 幽 门 螺 旋 杆 菌 相 关 胃 MALT 淋 巴 瘤 可 达 到 长 期 缓 解 有 可 能 发 生 大 B 细 胞 淋 巴 瘤 转 化 胃 MALT(ⅠE ⅡE) 淋 巴 瘤 对 放 疗 敏 感, 放 疗 可 以 保 留 胃 功 能, 提 高 生 存 质 量, 放 疗 ± 化 疗 成 为 Ⅰ~Ⅱ 期 胃 MALT 淋 巴 瘤 的 主 要 治 疗 手 段 之 一 放 疗 适 应 证 包 括 抗 感 染 治 疗 无 效 或 HP 阴 性 的 ⅠE 期 ⅡE 期 以 上 有 t(11;18) (q21;q21) 易 位 或 转 化 的 胃 MALT 淋 巴 瘤 和 高 度 恶 性 胃 MALT 淋 巴 瘤 (DLBCL) 2003 年 以 前, 多 采 用 全 腹 放 疗 20 Gy/(3~4) 周 + 胃 周 淋 巴 结 补 量 20 Gy/ (3~4) 周 不 良 反 应 多 为 小 肠 损 害 肾 损 害 5 年 总 生 存 率 Ⅰ 期 为 70%~85%,Ⅱ 期 为 37%~40% 目 前 治 疗 则 采 用 照 射 胃 + 胃 周 淋 巴 结 30~40Gy/(3~4) 周, 不 良 反 应 取 决 组 织 器 官 受 照 体 积, 建 议 采 用 三 维 适 形 放 疗,5 年 总 生 存 率 可 达 85%~100%

5 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2009 年 8 月 第 16 卷 第 16 期 CHINJCANCERPREV TREAT,August2009,Vol.16 No 放 疗 作 为 有 效 治 疗 手 段 的 淋 巴 瘤 3.1 弥 漫 大 B 细 胞 淋 巴 瘤 弥 漫 大 B 细 胞 淋 巴 瘤 是 最 常 见 的 NHL, 占 成 人 NHL 的 30%~40% 发 病 年 龄 的 范 围 比 较 宽, 可 以 发 生 于 任 何 年 龄 段, 中 位 发 病 年 龄 50~60 岁, 但 也 可 见 于 儿 童 ; 男 性 比 女 性 稍 多, 在 最 近 的 10~20 年 发 病 率 逐 渐 增 加 发 生 部 位 可 发 生 在 结 内 和 结 外 原 发 于 结 内 约 占 60%; 原 发 结 外 的 组 织 或 器 官 约 达 40%, 结 外 最 常 见 的 部 位 是 胃 肠 道 ( 胃 和 回 盲 部 ), 其 实 可 发 生 在 结 外 任 何 部 位, 如 皮 肤 中 枢 神 经 骨 睾 丸 软 组 织 腮 腺 肺 女 性 生 殖 道 肝 脏 肾 脏 脾 脏 和 韦 氏 环 DLBCL 表 达 多 种 B 细 胞 抗 原,CD19 CD20 CD22 和 CD79a 阳 性, 但 也 可 缺 少 其 中 的 一 项 或 几 项 典 型 免 疫 表 型 为 CD20 + CD45 + 和 CD3 - DLBCL 的 预 后 指 数 包 括 临 床 分 期 LDH 结 外 受 侵 年 龄 以 及 国 际 预 后 指 数 (IPI) IPI 是 DLBCL 重 要 的 预 后 指 数,DLBCLIPI 2 时,5 年 总 生 存 率 和 无 瘤 生 存 率 为 71% 和 64%;IPI 为 3~4 时,5 年 总 生 存 率 和 无 瘤 生 存 率 为 40% 和 35% 因 此 应 建 议 进 行 IPI 评 分 以 制 定 治 疗 方 案 根 据 已 有 的 临 床 研 究 的 证 据, 综 合 治 疗 是 Ⅰ ~ Ⅱ 期 侵 袭 性 NHL 的 标 准 治 疗 原 则,Ⅲ ~ Ⅳ 期 以 化 疗 为 主 美 国 NCCN 关 于 DLBCL 的 治 疗 指 南 为 : 非 大 肿 块 的 Ⅰ~Ⅱ 期 建 议 CHOP±R 化 疗 4 个 周 期 后 局 部 区 域 放 疗 ; 大 肿 块 的 Ⅰ~Ⅱ 期 建 议 CHOP±R 化 疗 6 个 周 期 后 局 部 区 域 放 疗 Ⅲ~Ⅳ 期, 如 果 IPI 2, 建 议 6 个 周 期 R CHOP 化 疗 ; 如 果 IPI 3, 预 后 差, 建 议 优 选 考 虑 临 床 试 验 或 6 个 周 期 R CHOP 化 疗 高 剂 量 化 疗 + 干 细 胞 移 植 可 能 对 中 高 危 或 高 危 患 者 首 程 治 疗 或 复 发 后 挽 救 治 疗 有 益 在 综 合 治 疗 中, 受 累 野 照 射 的 剂 量 建 议 如 下 : 化 疗 后 达 CR 者, 如 果 化 疗 前 肿 块 <3.5cm( 或 6cm), 剂 量 为 30~36Gy; 肿 块 为 3.5~ 6cm, 剂 量 为 36Gy; 肿 块 7~10cm, 剂 量 为 40Gy; 肿 块 >10cm, 剂 量 45Gy 化 疗 后 未 达 CR 者, 剂 量 多 需 50Gy 3.2 Ⅰ~Ⅱ 期 ( 早 期 ) 弥 漫 大 B 细 胞 淋 巴 瘤 放 射 治 疗 曾 是 Ⅰ~Ⅱ 期 侵 袭 性 NHL 的 主 要 治 疗 手 段, 单 纯 放 疗 可 以 治 愈 约 50% 的 早 期 患 者 放 疗 剂 量 为 35~50Gy, 局 部 控 制 率 >90%,5~10 年 生 存 率 为 40%~60%, 但 无 瘤 生 存 率 仅 为 31%~50% 治 疗 失 败 的 主 要 原 因 在 于 复 发 转 移 因 全 身 化 疗 可 以 有 效 控 制 远 处 器 官 亚 临 床 转 移, 故 化 疗 加 受 累 野 照 射 的 综 合 治 疗 成 为 Ⅰ~Ⅱ 期 侵 袭 性 NHL 的 标 准 治 疗 手 段 综 合 治 疗 改 善 了 Ⅰ~Ⅱ 期 侵 袭 性 NHL 的 5 年 无 瘤 生 存 率 和 总 生 存 率,5~10 年 总 生 存 率 和 无 瘤 生 存 率 为 63% ~85% SWOG8736 GELA LNH93 1 ECOG1484 GELA LNH93 4 等 随 机 对 照 研 究 比 较 综 合 治 疗 和 单 纯 化 疗 的 疗 效, 可 以 得 到 以 下 结 论 : 化 疗 后 受 累 野 照 射 是 Ⅰ ~ Ⅱ 期 侵 袭 性 NHL 和 DLBCL 的 标 准 治 疗 手 段 ; 分 期 调 整 IPI=0 的 患 者,3 个 周 期 CHOP 化 疗 加 受 累 野 照 射 即 可 获 得 很 好 的 疗 效, 生 存 率 >90%; 分 期 调 整 IPI 1 的 患 者, 需 6 个 周 期 CHOP 化 疗 加 受 累 野 照 射 ; 年 龄 >60 岁 且 无 预 后 不 良 因 素 的 患 者, 可 以 考 虑 CHOP 或 R CHOP 方 案 化 疗, 而 无 需 补 充 放 疗 3.3 Ⅲ~Ⅳ 期 ( 晚 期 ) 弥 漫 大 B 细 胞 淋 巴 瘤 晚 期 中 高 度 恶 性 NHL 以 全 身 化 疗 为 主 要 治 疗 手 段, 使 用 常 规 化 疗 能 够 取 得 较 好 的 治 疗 效 果, 长 期 缓 解 率 为 30%~50% CHOP±R 为 中 高 度 恶 性 NHL 首 程 治 疗 的 标 准 化 疗 方 案 高 剂 量 化 疗 + 干 细 胞 移 植 可 能 对 中 高 危 或 高 危 患 者 首 程 治 疗 或 复 发 后 挽 救 治 疗 有 益, 放 疗 仅 作 为 改 善 生 存 质 量 的 姑 息 治 疗 手 段 另 外, 放 疗 是 原 发 于 中 枢 神 经 系 统 和 睾 丸 等 部 位 淋 巴 瘤 的 主 要 治 疗 手 段 4 结 语 几 十 年 以 来, 伴 随 着 淋 巴 瘤 研 究 所 取 得 的 巨 大 进 展, 加 深 了 对 淋 巴 瘤 的 认 识, 患 者 的 生 存 率 得 到 了 提 高 也 给 放 射 治 疗 带 来 了 以 下 改 变 :1) 放 射 治 疗 的 靶 区 逐 渐 变 小 以 HL 为 例, 从 全 淋 巴 结 照 射 次 全 淋 巴 结 照 射 扩 大 野 照 射 到 现 在 的 受 累 野 照 射, 照 射 靶 区 的 逐 渐 缩 小, 带 来 的 益 处 是 放 疗 毒 副 反 应 的 下 降, 第 二 原 发 肿 瘤 发 病 率 的 减 少 2) 放 射 治 疗 的 剂 量 逐 渐 变 小 年,HL 的 根 治 剂 量 为 45Gy, 后 强 调 综 合 治 疗,HL 的 放 疗 剂 量 降 至 20~30Gy 同 期 NHL 的 放 疗 剂 量 也 由 50Gy 降 到 30~36Gy 3) 新 的 放 疗 技 术 (IMRT,IGRT) 也 开 始 用 于 淋 巴 瘤 的 治 疗 淋 巴 瘤 的 照 射 靶 区 缩 小 剂 量 降 低 后, 放 疗 不 良 反 应 下 降, 为 何 还 考 虑 应 用 新 技 术?MemorialSloan Ketering 肿 瘤 中 心 2005 年 发 表 了 关 于 应 用 IMRT 治 疗 纵 隔 和 胃 淋 巴 瘤 的 报 告, 结 果 IMRT 降 低 了 急 性 和 晚 期 并 发 症, 但 未 能 改 善 总 生 存 率 IMRT 与 AP PA 及 3DCRT 比 较, 肺 剂 量 分 别 减 少 12% 和 14% IMRT 可 改 善 PTV 剂 量 分 布, 减 少 肺 损 伤 因 此, 在 有 条 件 的 单 位, 应 用 新 的 放 疗 技 术 治 疗 淋 巴 瘤 是 有 前 途 的 收 稿 日 期 : ( 编 辑 : 左 文 述 )

6 １２０６ 江冠民 等 小鼠成纤维细胞激活蛋白 α 二肽基肽酶核心序列原核表达与纯化及复性 前沿报道 小鼠成纤维细胞激活蛋白 α 二肽基肽酶 核心序列原核表达与纯化及复性 江冠民 刘鹏 李小青 王震 衣艳梅 杜军 中山大学药学院微生物与生化制药实验室 广东 广州 ５１０００６ Ｐ ｋ ｘ ｄ ｄｍ ｄ ｄ ｄ ｍ ｂ ｂ ｖ α 犑犐犃犖犌犌狌犪狀 犿 狀 犔犐犝犘狀犵 犔犐犡 犪狅 狀犵 犠犃犖犌犣犺狀 犢犐犢犪狀 犿 犇犝犑狌狀 狇 犇狆犪狉 犿狀 狅犳 犕 犮 狉 狅 犫 犪 犾犪狀犱犅 狅 犮犺犿 犮犪 犾犘犺犪狉犿犪犮狔 犛犮犺狅 狅 犾狅犳 犘犺犪狉犿犪犮 狌 犮犪 犾犛犮 狀犮 狊 犛狌狀犢犪 狊 狀犝狀 狏 狉 狊 狔 犌狌犪狀犵狕犺狅狌５１０００６ 犘 犚 狀犪 摘要 目的 构 建 小 鼠 成 纤 维 细 胞 激 活 蛋 白 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔ ｋ ｘ ＦＡＰα 二肽基肽酶 催 化 核 心 序 列 ＦＡＰα 的 α ｍ ｄ ｈｍ ｄｍ ｄ ｄ 高效原核 表 达 载 体 进 行 该 序 列 的 原 核 表 达 ｄ ｍ ｂ ｂ ｖ α ＦＡＰα ｄｂ 纯 化 和 复 性 为 下 一 步 高 效 抗 体 制 作 和 以 ｈ ｄ ｖ ｄｂ ｇ ＦＡＰα 为靶 标 的 抗 肿 瘤 疫 苗 研 发 提 供 实 验 基 ｄ ｂｄ ｄ ｍ ｖ ｇ ＦＡＰα ｇ 础 方法 用 ＰＣＲ 技术 从质粒 Ｓ Ｔｇ２ Ｈ 犕犈犜犎犗犇犛 Ｔｈｇ ｇｍ ｄ ｇ ｄｍ Ｂ ＦＡＰα 中扩增出编码 ＦＡＰα 二肽基肽 酶 催 ｇ ｄ ｄ ｄ ＦＡＰα ｗ ｍ ｄ ｍ ｍ ｄ 化 核 心 区 域 的 基 因 片 段 与 原 核 表 达 载 体 Ｂ ＦＡＰαｂＰＣＲｄ ｄ ＥＴ２８α Ｔｇ２ Ｈｇ Ｓ ＤＥ３ 工 程 菌 中 实 ＥＴ２８α 连 接 在 ＢＬ２１ ｖ ｈ ｍｂ Ｈ ６ ＦＡＰα ｗ ｘ ｄ 现重 组 蛋 白 Ｈ ６ ＦＡＰα 的 表 达 并 进 行 纯 化 ＤＥ３ ｇ ｇｂ ｈ ｈ ＢＬ２１ ｇ 和复性 结 果 成 功 构 建 了 小 鼠 来 源 的 ＦＡＰα ｗ ｄｄ ｄ 犚犈犛犝犔犜犛 Ｔｈ ｋ ｘ 二肽基肽酶催化 核 心 区 域 的 原 核 表 达 质 粒 通 ｍ ｄ ｈ ｄｍ ｄ ｄ ｄ 过对 转 化 该 质 粒 后 的 感 受 态 细 菌 进 行 菌 液 ｄ ｄ ｈ ｄ ｄ ＦＡＰαｗ ＰＣＲ 鉴定以及对该质 粒 进 行 ＢｍＨＩ和 ＸｈＩ ｂｐｃｒｄｄ ｄｂｂｍｈｉｄｘｈｉ ｄｄｘ ｇ 双酶切鉴 定 鉴 定 结 果 与 预 期 结 果 完 全 一 致 ｗ ｘ ｄ Ｔｈ Ｈ ６ ＦＡＰα ｗ ｘ 实现了对 该 质 粒 编 码 的 融 合 蛋 白 Ｈ ６ ＦＡＰα ｄｄｍ ｄ ｈ ｍ ｂｄ Ｈ ６ ｘ 的表达 表达后的 融 合 蛋 白 主 要 以 包 涵 体 的 形 ｋｍ ｈ７０ ｈｂ Ｔｈ ＦＡＰα 式存在 表 达 产 量 占 菌 体 总 蛋 白 ７０ 纯 化 ｗ ｄ ｈ ｈｄ ｍ ｈ ９９ 了该融合蛋白 纯 化 后 的 蛋 白 纯 度 通 过 灰 度 分 ｈ ｇｈ ｈｇ Ｔｈ ｗ 析 ９９ 对 该 融 合 蛋 白 进 行 了 复 性 复 性 后 ｄ ｄ ｂ ｇ ｄ ｈ ｍ 该融合蛋 白 由 不 溶 的 包 涵 体 状 态 变 为 可 溶 的 ｈｗ ｂ ｍ ｈ ｂ ｂｄ 水溶 状 态 结 论 成 功 表 达 纯 化 和 复 性 了 犆犗犖犆犔犝犛 犐犗犖 Ｔｈ ｄｍ ｄ ｄⅠ ｄ ＦＡＰα 二肽酶 催 化 核 心 区 域 ＦＡＰα 为 深 入 开 ＦＡＰα ｘ ｄ ｄｄ ｄ ｂ 展 ＦＡＰα 的研究奠定基础 ｈ ｇ ｄ ｈ ｈ ＦＡＰα 中华肿瘤防治杂志 ２００９ １６ １６ １２０６ １２０９ 狀犑犆犪狀犮 狉犘狉 狏犜狉 犪 ２００９ １６ １６ １２０６ １２０９ 通讯作者简介 成纤维细胞激活蛋白 α 原核表达 纯化 复性 ｋ ｘ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｂ ｂ ｖ α 中图分类号 Ｒ７３５ １ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７３ ５２６９ ２００９ １６ １２０６ ０４ 基金项目 国家自然科学基金 ３０８７３０３２ 国家自然科学基金 ３０６７２５１０ 广东省科技计划项目 ２００７Ｂ０３０７０４００７ 第一作者简介 江冠民 男 湖南邵阳人 博士 主要从事生物靶向药物设计与分子机制的研究工作 Ｅ ｍ ｇｍ １６３ ｍ ｊ 通讯作者简介 杜军 男 吉林长春人 博士 教授 主要从事生物靶向药物设计与分子机制的工作 Ｔ ８６ ２０ ３９９４３０２２ Ｅ ｍ ｄ ｍ ｄ ｊ

7 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2009 年 8 月 第 16 卷 第 16 期 CHINJCANCERPREV TREAT,August2009,Vol.16 No 在 肿 瘤 间 质 中, 成 纤 维 细 胞 通 过 与 肿 瘤 细 胞 相 互 作 用 而 被 活 化, 这 种 活 化 的 成 纤 维 细 胞 被 称 为 肿 瘤 相 关 成 纤 维 细 胞 (carcinoma associated fibroblasts, CAF) [1],CAF 的 显 著 特 点 之 一 就 是 细 胞 膜 表 面 特 异 性 高 表 达 成 纤 维 细 胞 激 活 蛋 白 α(fibroblastactivation proteinα,fapα) [2] FAPα 在 >90% 恶 性 上 皮 性 肿 瘤 间 质 高 表 达, 而 正 常 组 织 中 不 表 达, 在 伤 口 愈 合 处 和 [3] 肝 硬 化 等 慢 性 炎 症 时 有 短 暂 的 表 达 有 研 究 表 明, FAPα 在 肿 瘤 组 织 的 高 表 达 与 肿 瘤 的 侵 袭 和 转 移 关 系 密 切, 抗 FAPα 活 化 位 点 抗 体 能 有 效 抑 制 FAPα 的 催 [4] 化 活 性, 从 而 减 缓 或 抑 制 肿 瘤 生 长 因 此, 研 制 出 有 效 抗 FAPα 特 异 性 抗 体 以 封 闭 FAPα 的 催 化 活 性, 以 及 探 讨 以 FAPα 为 靶 点 的 抗 肿 瘤 免 疫 治 疗 对 于 减 低 和 [5] 延 缓 肿 瘤 生 长 转 移 和 浸 润 具 有 非 常 重 要 的 意 义 本 研 究 旨 在 建 立 FAPα 二 肽 基 肽 酶 催 化 核 心 序 列 FAPαc 的 原 核 表 达 及 纯 化 系 统, 以 便 获 得 高 纯 度 的 目 标 重 组 蛋 白 His6 FAPαc, 为 研 制 抗 FAPα 二 肽 基 肽 酶 催 化 核 心 序 列 的 特 异 性 抗 体 和 设 计 以 FAPα 为 靶 点 的 抗 肿 瘤 疫 苗 奠 定 基 础 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 大 肠 埃 希 菌 菌 株 DH5α 和 BL21(DE3) 由 本 实 验 室 保 存 ; 质 粒 pet28α(+) 购 自 Novagen 公 司 ; 质 粒 psectag2/hygrob FAPα 由 美 国 Fox Chase 癌 症 中 心 的 JonathanD.Cheng 教 授 惠 赠 ; 引 物 由 上 海 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司 合 成 ;BamH Ⅰ Xho Ⅰ Taq DNA 聚 合 酶 和 T4DNA 连 接 酶 购 自 TaKaRa 公 司 ; 质 粒 提 取 试 剂 盒 DNA 凝 胶 回 收 试 剂 盒 购 自 V gene 公 司 ; 镍 离 子 螯 合 层 析 柱 购 自 Pharmacia 公 司 ; 超 滤 管 ( 截 留 相 对 分 子 质 量 ) 购 自 Milipore 公 司 ; 透 析 袋 购 自 Pierce 公 司 ( 截 留 相 对 分 子 质 量 ); 异 丙 基 β D 硫 代 半 乳 糖 苷 (IPTG) 购 自 北 京 鼎 国 生 物 技 术 有 限 公 司 ; 其 余 试 剂 为 国 产 分 析 纯 1.2 方 法 引 物 设 计 与 合 成 根 据 NCBIGeneBank 公 布 的 FAPα 序 列, 通 过 EXPASY 网 站 对 FAPα 全 长 序 列 进 行 ScanProsite 分 析, 找 出 FAPα 全 长 序 列 中 的 二 肽 基 肽 酶 催 化 活 性 核 心 序 列 为 位 氨 基 酸, 编 码 该 段 多 肽 的 cdna 序 列 为 :GACCAGCTCACA GCTGTCAGAAAATTCATAGAAATGGGTTTCA TTGATGAAGAAAGAATAGCCATATGGGGCTG GTCCTACGGAGGTTATGTTTCATCCCTGGCCC TTGCATCTGGAACTGGTCTTTTCAAATGTGGC ATAGCAGTGGCTCCAGTCTCCAGCTGGGAATA TTACGCATCTATCTACTCAGAGAGATTCATGG GCCTCCCAACAAAGGACGACAATCTCGAACAC TATAAA AATTCAACTGTGATGGCAAGAGCAG AATATTTCAGAAATGTAGACTATCTTCTC, 为 了 合 成 优 质 的 引 物 和 免 疫 原 性 较 强 且 包 括 该 酶 核 心 序 列 的 片 段, 本 研 究 选 择 FAPα 全 长 序 列 中 比 该 核 心 序 列 前 后 分 别 多 出 27 和 60 个 碱 基 的 片 段 作 为 扩 增 片 段 该 片 段 的 cdna 序 列 为 :CGAAAACTGGGTG TATATGAAGTTGAGGACCAGCTCACAGCTGT CAGAAAATTCATAGAAATGGGTTTCATTGAT GAAGAAAGAATAGCCATATGGGGCTGGTCCT ACGGAGGTTATGTTTCATCCCTGGCCCTTGCA TCTGGAACTGGTCTTTTCAAATGTGGCATAG CATGGCTCCAGTCTCCAGCTGGGAATATTACG CATCTATCTACTCAGAGAGATTCATGGGCCTC CCAACAAAGGACGACAATCTCGAACACTATA AAAATTCAACTGTGATGGCAAGAGCAGAATA TTTCAGAAATGTAGACTATCTTCTCATCCACG GAACAGATGATAATGTGCACTTTCAGAACTC AGCACAGATTGCTAAAGCT 据 此 设 计 的 引 物 序 列 为 : 上 游 5 CGCGGATCCATAAAACTGGGTGT 3 ( 含 BamH Ⅰ 酶 切 位 点 ); 下 游 5 CCGCTCGAGT GCTTTAGCAATCTGT 3 ( 含 Xho Ⅰ 酶 切 位 点 ) 目 的 基 因 的 获 取 以 质 粒 psectag2/hy grob FAPα 为 PCR 反 应 模 板, 以 上 述 引 物 进 行 梯 度 PCR 反 应 以 确 定 最 适 退 火 温 度 PCR 循 环 条 件 为 : 94 预 变 性 2min;94 45s,55~65 45s,72 30s,30 个 循 环 ;72 延 伸 7 min 扩 增 得 到 PCR 产 物 FAPαc, 并 经 1.0% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 鉴 定 pet28α(+) FAPαc 原 核 表 达 载 体 的 构 建 与 鉴 定 PCR 产 物 FAPαc 经 1.0% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 鉴 定 后, 进 行 BamH Ⅰ 和 Xho Ⅰ 双 酶 切, 并 利 用 DNA 纯 化 试 剂 盒 对 酶 切 产 物 进 行 纯 化 质 粒 小 提 试 剂 盒 小 提 质 粒 pet28α(+), 并 经 BamH Ⅰ 和 Xho Ⅰ 双 酶 切, 利 用 凝 胶 回 收 试 剂 盒 回 收 并 纯 化 酶 切 产 物 纯 化 的 PCR 产 物 和 pet28α(+) 按 5 1 的 摩 尔 比 用 T4 DNA 连 接 酶 于 16 连 接 16h, 连 接 产 物 于 60 灭 活 10min 后 转 化 至 感 受 态 大 肠 埃 希 菌 DH5α, 经 卡 那 霉 素 抗 性 筛 选, 菌 液 PCR 及 双 酶 切 鉴 定 阳 性 重 组 质 粒 pet28α(+) FAPαc His6 FAPα 蛋 白 的 融 合 表 达 及 其 可 溶 性 鉴 定 将 pet28α(+) FAPαc 转 化 至 感 受 态 大 肠 埃 希 菌 BL21, 次 日 从 转 化 平 板 上 随 机 挑 取 单 菌 落, 在 5 ml LB 液 体 培 养 基 ( 含 卡 那 霉 素 50ng/mL) 中 37 振 荡 培 养 12~16h, 取 菌 液 按 1 50 转 接 于 5mLLB 液 体 培 养 基 ( 含 卡 那 霉 素 50ng/mL) 中 ( 剩 余 的 细 菌 加 30% 甘 油 冻 存 在 -80 冰 箱 保 种 ),37 培 养 至 OD 值 为 0.6~0.8, 加 入 终 浓 度 为 0.5mmol/L 的 IPTG, 并 于 37 振 荡 培 养 3h 后, 取 1.5mL 菌 液 ( 剩 余 的 放

8 1208 江 冠 民, 等 小 鼠 成 纤 维 细 胞 激 活 蛋 白 α 二 肽 基 肽 酶 核 心 序 列 原 核 表 达 与 纯 化 及 复 性 4 冰 箱 保 存 ) 离 心 收 集 菌 体, 冰 上 加 入 适 量 溶 菌 酶 裂 解 缓 冲 液 裂 解 菌 体, 超 声 裂 菌 ( 输 出 频 率 为 25 Hz, 4,30s 10) 4,10000r/min 离 心 20min( 狉 = 7cm) 后, 分 别 收 集 上 清 和 沉 淀, 并 设 转 化 重 组 质 粒 pet28α(+) FAPαcIPTG 未 诱 导 BL21 细 菌 组 转 化 pet28α(+) 空 载 IPTG 诱 导 和 未 诱 导 BL21 细 菌 组 为 对 照 组, 对 照 组 同 样 收 集 1.5mL 菌 液 ( 剩 余 的 放 4 冰 箱 保 存 ) 离 心 收 集 菌 体, 冰 上 加 入 适 量 Lysozyme LysisBufer(50mmol/LTris HCl;0.1mg/LLyso zyme;1%tritonx 100;pH 值 9.0) 裂 解 菌 体, 收 集 全 菌 蛋 白 和 转 化 pet28α(+ ) FAPαcIPTG 诱 导 的 BL21 细 菌 组 的 上 述 上 清 和 沉 淀 一 起 进 行 SDS PAGE, 分 析 目 标 蛋 白 的 表 达 情 况 融 合 蛋 白 His6 FAPαc 的 纯 化 取 保 存 在 -80 冰 箱 中 转 化 pet28α(+) FAPαc 的 BL21 细 菌 按 中 的 方 法 扩 大 培 养 4L, 经 IPTG 诱 导 后 提 取 大 量 的 包 涵 体 蛋 白 His6 FAPαc, 用 InclusionBody DissolvedBufer(50 mmol/l Tris HCl;8 mol/l U rea;0.5%(v/v) β ME;pH9.0) 溶 解 该 包 涵 体 活 化 镍 柱, 并 用 1L 蒸 馏 水 以 12 ml/min 流 速 冲 洗 镍 柱, 然 后 以 100 ml DenaturingBindingBufer (8mol/L Urea;20 mmol/l Tris HCl;500 mmol/l NaCl; ph7.8) 平 衡 镍 柱 ( 流 速 控 制 在 8 ml/min); 将 溶 解 在 包 涵 体 溶 解 缓 冲 液 中 的 包 涵 体 蛋 白 装 入 镍 柱, 流 速 控 制 为 6mL/min, 静 置 30 min 后 再 用 约 200mLDena turingbindingbufer 以 8mL/min 流 速 平 衡 镍 柱 ; 换 用 500mLDenaturing WashingBufer(8mol/LUre a; 20 mmol/l Tris HCl; 500 mmol/l NaCl; 40mmol/LImidazole;pH6.0) 以 10mL/min 流 速 洗 脱 以 去 除 杂 蛋 白, 最 后 用 200 ml DenaturingElution Bufer (8 mol/l Urea; 20 mmol/l Tris HCl; 500mmol/L NaCl;500 mmol/limidazole;ph4.0) 以 8mL/min 流 速 洗 脱 目 的 蛋 白, 连 续 分 管 收 集 洗 脱 液 每 管 取 少 量 洗 脱 液 进 行 SDS PAGE 分 析, 剩 余 置 4 保 存 用 于 复 性 纯 化 蛋 白 的 复 性 及 超 滤 向 收 集 到 的 目 的 蛋 白 洗 脱 液 中 加 入 一 倍 体 积 的 Renaturation Bufer (20mmol/LTris HCl,pH9.0;0.5mmol/LGSSG; 5mmol/L GSH;0.5 mmol/l L His;0.5 mmol/l L Arg;30μmol/LCuSO 4 ),4 低 速 搅 拌 30min, 再 加 入 等 体 积 的 Renaturation Bufer4 低 速 搅 拌 30min, 移 入 透 析 袋, 在 复 性 缓 冲 液 中 透 析 过 夜, 换 复 性 液 重 复 透 析 2 次 最 后 用 超 滤 管 超 滤 浓 缩 复 性 蛋 白, 取 少 量 浓 缩 蛋 白 进 行 SDS PAGE 分 析 剩 余 的 分 装 于 1.5mLEP 管 中,-80 保 存 2 结 果 2.1 目 的 基 因 的 获 取 梯 度 PCR 扩 增 结 果 显 示 在 381bp 左 右 处 有 一 特 异 条 带, 与 预 期 片 段 大 小 相 符 ; 最 佳 退 火 温 度 为 pet28α(+) FAPαc 原 核 表 达 载 体 的 鉴 定 pet28α(+) FAPαc 转 化 至 感 受 态 大 肠 埃 希 菌 DH5α, 挑 取 单 菌 落,PCR 鉴 定 扩 增 得 到 381bp 左 右 的 目 的 条 带 ; 克 隆 至 pet28α(+) 载 体 的 重 组 质 粒 以 BamHⅠ 和 XhoⅠ 双 酶 切 后, 分 别 切 出 大 小 为 381bp 和 5323bp 左 右 的 2 个 片 段 ( 图 1), 与 预 期 条 带 位 置 符 合 ; 对 正 向 连 接 产 物 进 行 DNA 测 序, 经 BLAST 比 对 完 全 正 确, 证 明 重 组 质 粒 pet28α(+) FAPαc 构 建 成 功 图 1 重 组 pet28α(+) FAPαc 的 酶 切 鉴 定 M: 标 准 1kbDNA Marker;1: 质 粒 pet28α(+) 被 BamH Ⅰ 和 Xho Ⅰ 双 酶 切 ;2: 未 酶 切 质 粒 PET28α(+ );3: 质 粒 pet28α(+ ) FAPαc 被 BamH Ⅰ 和 Xho Ⅰ 双 酶 切 ;4: 未 酶 切 质 粒 pet28α(+) FAPαc 2.3 His6 FAPαc 的 表 达 及 可 溶 性 鉴 定 pet28α(+) FAPαc 转 化 至 感 受 态 大 肠 埃 希 菌 BL21, 随 机 挑 选 5 个 单 克 隆 菌 落, 扩 大 培 养 并 经 IPTG 诱 导 后, 用 SDS PAGE 分 析 可 见 目 的 蛋 白 在 5 个 菌 落 中 都 为 融 合 表 达 经 诱 导 表 达 的 目 的 蛋 白 相 对 分 子 质 量 , 与 理 论 值 接 近, 表 明 pet28α(+) F APαc 可 实 现 目 的 蛋 白 在 大 肠 埃 希 菌 中 BL21 的 融 合 表 达, 并 且 结 果 显 示,IPTG 诱 导 表 达 的 融 合 蛋 白 His6 FAPαc 以 包 涵 体 的 形 式 存 在 于 沉 淀 中, 表 达 产 量 占 菌 体 总 蛋 白 >70%( 图 2) 图 2 His6 FAPαc 融 合 蛋 白 诱 导 表 达 与 纯 化 的 SDS PAGE 分 析 1: 经 IPTG 诱 导 的 含 质 粒 pet28α(+) 全 菌 蛋 白 ;2: 未 经 诱 导 的 含 质 粒 pet28α(+) 全 菌 蛋 白 ;3: 未 经 诱 导 的 含 质 粒 pet28α(+) FAPαc 的 全 菌 蛋 白 ;4: 经 IPTG 诱 导 的 含 质 粒 pet28α(+) FAPαc 的 细 菌 裂 解 上 清 ;5: 经 IPTG 诱 导 的 含 质 粒 pet28α(+) FAPαc 的 细 菌 裂 解 沉 淀 2.4 His6 FAPαc 蛋 白 的 纯 化 阳 性 菌 株 经 扩 大 培 养 及 IPTG 诱 导 表 达, 用 镍 离

9 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2009 年 8 月 第 16 卷 第 16 期 CHINJCANCERPREV TREAT,August2009,Vol.16 No 子 亲 和 层 析 柱 纯 化 收 集 到 的 包 涵 体, 经 SDS PAGE 分 析 可 见 1~9 号 收 集 管 中 的 收 集 液 在 左 右 均 有 一 条 清 晰 的 条 带, 并 且 收 集 液 中 几 乎 没 有 杂 带 可 见 利 用 镍 离 子 亲 和 层 析 柱 对 His6 FAPαc 蛋 白 液 的 纯 化 效 果 极 好, 灰 度 分 析 >99%( 图 3) 图 3 SDS PAGE 分 析 纯 化 His6 FAPαc 蛋 白 的 表 达 M: 低 相 对 分 子 质 量 蛋 白 Marker;1~9:Elutionbufer 洗 脱 液 2.5 His6 FAPαc 蛋 白 的 复 性 经 镍 柱 纯 化 后 的 His6 FAPαc 蛋 白 存 在 于 含 8mol/L 尿 素 的 DenaturingElutionBufer 中, 是 以 变 性 的 非 活 性 状 态 的 形 式 存 在 经 过 蛋 白 复 性 操 作, 并 对 复 性 后 的 蛋 白 溶 液 超 滤 后, 分 别 取 少 量 超 滤 和 未 超 滤 的 复 性 蛋 白 溶 液 进 行 SDS PAGE 分 析 结 果 显 示, 经 超 滤 后 的 复 性 蛋 白 溶 液 在 左 右 位 置 可 看 到 1 条 清 晰 的 条 带, 而 未 经 超 滤 的 复 性 蛋 白 溶 液 由 于 浓 度 太 低 而 未 见 此 条 带 表 明 经 复 性 后 的 His6 FA Pαc 蛋 白 在 非 变 性 剂 存 在 的 条 件 下 已 是 可 溶 状 态, 并 且 纯 度 较 高 ( 图 4) 口 服 DNA 质 粒 疫 苗 免 疫 小 鼠 后 发 现, 这 种 疫 苗 能 显 著 地 抑 制 肿 瘤 的 生 长 和 提 高 化 疗 药 物 的 效 果 这 些 研 究 均 表 明,FAPα 是 一 个 很 好 的 抗 肿 瘤 药 物 的 作 用 靶 点 由 于 肿 瘤 细 胞 或 者 肿 瘤 间 质 细 胞 能 表 达 种 类 繁 多 并 能 被 机 体 免 疫 系 统 识 别 的 抗 原, 因 此, 肿 瘤 的 免 疫 治 疗 已 经 成 为 继 内 科 治 疗 外 科 治 疗 放 疗 之 后 的 第 4 种 治 疗 方 案 曲 妥 单 抗 西 妥 昔 单 抗 贝 伐 单 抗 和 帕 尼 单 抗 等 4 种 上 市 的 单 抗 发 现 对 实 体 瘤 有 很 好 的 治 疗 作 用, 虽 然 比 起 美 罗 华 对 非 霍 奇 金 淋 巴 瘤 的 治 疗 效 果 要 [8 11] 差 因 此 寻 找 有 效 的 肿 瘤 细 胞 与 肿 瘤 间 质 细 胞 药 物 治 疗 靶 点, 对 与 肿 瘤 的 防 治 意 义 深 远 本 研 究 得 到 了 高 纯 度 的 可 溶 性 融 合 蛋 白 His6 FAPαc, 为 进 一 步 获 得 高 效 的 抗 FAPα 二 肽 基 肽 酶 催 化 核 心 序 列 抗 体 和 构 建 以 FAPα 为 靶 标 的 抗 肿 瘤 疫 苗 提 供 基 础 和 技 术 支 持, 并 为 深 入 开 展 FAPα 的 研 究 和 以 FAPα 为 靶 标 的 肿 瘤 防 治 奠 定 基 础 参 考 文 献 [1] Mueler M M,Fusenig N E.Friendsorfoes bipolarefectsofthe tumourstromaincancer[j].naturereviews,2004,4(11): [2] Chen W T,KelyT.Seprasecomplexesincelularinvasiveness [J].CancerMetastasisReviews,2003,22(2 3): [3] GhersiG,Dong H,GoldsteinL A,etal.Regulationoffibro blastmigrationoncolagenousmatrixbyacelsurfacepeptidase complex[j].jbiolchem,2002,277(32): [4] HurwitzH,FehrenbacherL,Novotny W,etal.Bevacizumab plusirinotecan,fluorouracil,andleucovorinformetastaticcolor ectalcancer[j].nengljmed,2004,350(23): [5] ChengJD,WeinerL M.Tumorsandtheirmicroenvironments: tilingthesoil[j].clincancerres,2003,9(5): [6] ChengJD,Valianou M,CanutescuA A,etal.Abrogationof fibroblastactivationproteinenzymaticactivityatenuatestumor growth[j].molcancerther,2005,4(3): [7] LoeflerM,KrugerJA,NiethammerAG,etal.Targetingtumor associatedfibroblastsimprovescancerchemotherapybyincreasingin tratumoraldruguptake[j].jclininvest,2006,116(7): [8] Cohen M H,GootenbergJ,KeeganP,etal.FDAdrugapproval 图 4 SDS PAGE 分 析 复 性 His6 FAPαc 蛋 白 的 表 达 M: 低 相 对 分 子 质 量 Marker;1: 未 超 滤 的 复 性 His6 FAPαc 蛋 白 溶 液 ; 2: 超 滤 过 的 复 性 His6 FAPαc 蛋 白 溶 液 3 讨 论 FAPα 在 肿 瘤 的 发 生 发 展 及 转 移 中 发 挥 着 重 要 作 用 由 于 其 在 >90% 恶 性 上 皮 性 肿 瘤 的 相 关 成 纤 维 细 胞 表 面 都 有 表 达, 靶 位 丰 富, 局 部 浓 度 高 且 无 个 体 差 异 性, 因 此 被 认 为 是 一 种 理 想 的 抗 肿 瘤 靶 分 子 研 究 表 明, 定 点 突 变 FAPα 的 酶 活 性 位 点 能 显 著 地 减 慢 FAPα 驱 动 的 [6] [7] 肿 瘤 生 长 Loefler 等 把 含 有 FAPα 基 因 的 质 粒 做 成 summary:bevacizumabplusfolfox4assecond linetreatmentof colorectalcancer[j].oncologist,2007,12(3): [9] GiustiR M,ShastriK A,CohenM H,etal.FDAdrugapprov alsummary:panitumumab(vectibix)[j].oncologist,2007, 12(5): [10] HudisCA.Trastuzumab mechanismofactionanduseinclinical practice[j].nengljmed,2007,357(1): [11] JonkerDJ,OCalaghanCJ,KarapetisCS,etal.Cetuximab forthetreatmentofcolorectalcancer[j].nengljmed,2007, 357(20): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 马 骏 )

10 潘恩春 等 淮安市两县区居民恶性肿瘤死亡 ３０ 年前后变化及对比研究 １２１０ 流行病学研究 淮安市两县区居民恶性肿瘤死亡 ３０ 年 前后变化及对比研究 潘恩春１ 胡伟１ 武鸣２ 周金意２ １ 淮安市疾病预防控制中心 江苏 淮安 ２２３００１ ２ 江苏省疾病预防控制中心 江苏 南京 ２１０００９ Ａ ｄｍ ｈｍ ｍ ｄ ｈ ｄ ｂ ｗ ｈｗ ｇ Ｈ ｇ３０ ｄ 犘犃犖犈狀 犮犺狌狀１ 犎犝 犠 １ 犠犝 犕 狀犵２ 犣犎犗犝犑 狀 狔 ２ １ 犆狀 狉犳狅 狉犇 狊 犪 狊 犆狅狀 狉 狅 犾犪狀犱犘狉 狏 狀 狅狀狅犳 犎狌犪 犪狀犆 犪狀２２３００１ 犘 犚 狀犪 狔 犎狌犪 ２ 犆狀 狉犳狅 狉犇 狊 犪 狊 犆狅狀 狉 狅 犾犪狀犱犘狉 狏 狀 狅狀狅犳犑 犪狀犵狊 狌犘狉 狅狏 狀犮 犖犪狀犼 狀犵２１０００９ 犘 犚 狀犪 摘要 目的 对比分析淮安市楚 州 金 湖 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔ ｄ ｍ ｄ ｇ 两县区居民恶性肿瘤死亡 ３０ 年前 后 变 化 ｖ ｄ ｈ ｍｋ ｇ ｈ ｍ ｈｄｂ 为癌症的预防控制工作提供决策 参 考 方 ｚ ｇ ｈｈｇ ｄ ｈ ｄ ｍ ｈ ｍ ｇ 法 采用淮安市楚州 金 湖 两 县 区 全 国 第 １ ｍ ｂ ｗ ｈｗ Ｈ ｇ３０ ｄ 次 １９７３ １９７５ 年 的 资 料 和 第 ３ 次 犕犈犜犎犗犇犛 Ｅ ｇ ｄｍ ｇ ｗ ｄ ｚ ｈ ２００４ ２００５ 年 的 资 料 全 死 因 回 顾 调 查 ｄ ｈｄ ｍ ｈ ｄ ｈ ｄ ｖ ｖ 数据进行分 析 比 较 并 用 生 态 流 行 病 学 方 ｄ ｈ ｄ Ｃｈ ｚｈｄｊ ｈ １９７３ 法进行 差 异 分 析 结 果 ３０ 年 前 后 两 县 １９７５ｄ２００４ ２００５ 犚犈犛犝犔犜犛 Ａｍｇ ｈｂ ｈ 区人群总死 亡 率 明 显 下 降 死 亡 谱 都 发 生 ｈｍ ｄ ｄ ｈ ３０ Ｔｈ ｍ 了改变 慢性 非 传 染 性 疾 病 成 为 主 要 死 亡 ｍ ｍｍ ｂ ｄ ｂ ｍ ｈ ｈｇｄ ｄ 原因 恶 性 肿 瘤 年 龄 标 化 死 亡 率 也 均 下 ｍ ｄ ｈ ＴｈＭ ｈｍ ｇ 降 楚州区从 ２６２ ５９ １０ 万 １９７３ １９７５ 年 ｍ ｍ ｍ ｂｖ ｄ ｂ ｄ 下降到 １６２ ６２ １０ 万 ２００４ ２００５ 年 金 ｈｗ ｈｍ ｍｍ ｍ ｍ Ｔｈｇ 湖县从 ２０５ ７０ １０ 万 １９７３ １９７５ 年 下 降 ｄ ｄ ｚ ｄ ｍ ｍ ｍ ｄ ｄ ｍ ｇ 到 １８０ ０２ １０ 万 ２００４ ２００５ 年 尤 以 消 １９７３ １９７５ １６２ ６２ １０００００ ２００４ ２６２ ５９ １０００００ 化道肿瘤死亡率下降明显 楚州区 下 降 幅 Ｃｈ ｚｈ ｍ ２０５ ７０ １０００００ １９７３ ２００５ ｄ 度高于金湖县 但恶性肿瘤一直处 于 两 县 １９７５ １８０ ０２ １０００００ ２００４ ２００５ Ｊ ｈ 犆犗犖 区居民死亡 原 因 的 首 位 并 高 于 全 国 平 均 犆犔犝犛 犐犗犖犛 Ｎ ｍｍ ｂ ｄ ｈ ｄｂｍｈ ｚ ｄ Ｔｈ 水平 结论 慢 性 非 传 染 性 疾 病 应 成 为 疾 ｄ ｍ ｄ ｖ ｍ ｈ ｇ 病控制的重点 经济发展的异同 可 影 响 恶 ｈｍ ｍ ｍ ｈｇ ｂ ｈ ｇ 性肿瘤死亡 率 变 化 幅 度 但 有 效 的 防 控 措 ｖ ｍ ｈｄ ｄ ｄ ｖ ｂｖ 施能显著降低居民的疾病死亡率 ｍｋ ｍ ｄ 中华肿瘤防治杂志 ２００９ １６ １６ １２１０ １２１２ 狀犑犆犪狀犮 狉犘狉 狏犜狉 犪 ２００９ １６ １６ １２１０ １２１２ 关键词 江苏 流行病学 肿瘤 死亡率 死亡原因 市区人口 对比研究 ｍ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｊ ｇ ｄｍ ｇ ｍ ｄ ｈ ｂ ｍ ｖ ｄ 中图分类号 Ｒ７３ ３１ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７３ ５２６９ ２００９ １６ １２１０ ０４ 项目基金 江苏省预防医学基金 ｚ ２００６００９ １９９６ 和 ２００６ 年 在 全 国 范 围 内 我 国 分 别 于 １９７６ 抽样开展以癌症为重 点 的 全 死 因 回 顾 调 查 基 本 摸 清 通讯作者简介 潘恩春 男 江 苏 灌 南 人 硕 士 副 主 任 医 师 了当时我国城乡居 民 死 亡 率 水 平 及 其 主 要 死 亡 原 因 主要从事慢性病的防治与研究工作 尤其是恶性肿瘤的流行规律及分布特征 淮安市金湖 Ｔ ８６ ５１７ ８３６７２２９２ Ｅ ｍ ｈ １６３ ｍ 县 楚州区参加了第 １ 次 和 第 ３ 次 调 查 本 研 究 拟 对

11 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2009 年 8 月 第 16 卷 第 16 期 CHINJCANCERPREV TREAT,August2009,Vol.16 No 两 县 区 30 年 前 后 恶 性 肿 瘤 死 亡 变 化 情 况 进 行 分 析 比 对, 为 全 市 疾 病 控 制 工 作 提 供 决 策 参 考 1 临 床 资 料 1.1 一 般 资 料 1976 和 2006 年 全 国 第 1 次 和 第 3 次 全 死 因 回 顾 调 查 资 料, 其 调 查 分 别 为 年 和 年 以 县 为 单 位 的 人 口 死 亡 原 因 普 查, 死 亡 原 因 以 根 本 死 因 为 统 计 口 径 年 原 始 数 据 使 用 CCD1 分 类 编 码, 年 数 据 使 用 ICD10 编 码, 由 于 本 研 究 分 析 以 大 类 为 主, 故 编 码 不 影 响 分 析 具 体 调 查 方 法 见 全 国 第 1 3 次 死 因 回 顾 抽 样 调 查 实 施 [1] 方 案 1.2 分 析 方 法 采 用 粗 死 亡 率 标 化 死 亡 率 构 成 比 和 死 因 顺 位 等 指 标 分 析 恶 性 肿 瘤 死 亡 水 平 和 变 化 趋 势 使 用 生 态 流 [2] 行 病 学 方 法 对 两 县 区 居 民 死 亡 特 别 是 恶 性 肿 瘤 死 亡 进 行 分 析 比 较 率 的 标 化 使 用 2000 年 全 国 人 口 普 查 人 口 为 标 准 人 口 1.3 结 果 两 县 区 基 本 情 况 楚 州 金 湖 两 县 区 均 属 淮 安 市, 地 处 江 苏 省 北 部, 里 下 河 地 区, 河 网 密 布, 均 为 鱼 米 之 乡, 两 县 区 接 攘, 金 湖 位 于 楚 州 西 南 20 世 纪 70 年 代, 金 湖 经 济 水 平 明 显 好 于 楚 州 2006 年 楚 州 金 湖 两 地 总 人 口 分 别 为 万 和 万, 地 区 生 产 总 值 分 别 为 亿 元 和 亿 元, 人 均 地 区 生 产 总 值 9526 元 和 元, 两 地 城 乡 居 民 人 均 可 支 配 收 入 分 别 为 9912 元 4814 元 和 7846 元 4597 元, 两 地 人 口 均 以 农 业 人 口 为 主 居 民 主 要 死 因 顺 位 变 化 两 县 区 30 年 来 居 民 的 首 位 死 亡 原 因 均 为 恶 性 肿 瘤, 其 他 疾 病 死 亡 顺 位 有 变 化, 脑 血 管 病 心 脏 病 等 慢 性 非 传 染 性 疾 病 位 次 前 移, 传 染 病 泌 尿 生 殖 系 统 疾 病 位 次 明 显 后 移 ( 表 1) 表 1 楚 州 和 金 湖 两 县 区 居 民 主 要 死 亡 原 因 顺 位 变 化 的 比 较 顺 位 楚 州 年 年 金 湖 年 年 1 恶 性 肿 瘤 恶 性 肿 瘤 恶 性 肿 瘤 恶 性 肿 瘤 2 呼 吸 系 统 疾 病 呼 吸 系 统 疾 病 损 伤 和 中 毒 外 部 原 因 脑 血 管 病 3 传 染 病 脑 血 管 病 呼 吸 系 统 疾 病 呼 吸 系 统 疾 病 4 损 伤 和 中 毒 外 部 原 因 心 脏 病 传 染 病 心 脏 病 5 消 化 系 统 疾 病 损 伤 和 中 毒 外 部 原 因 心 脏 病 损 伤 和 中 毒 外 部 原 因 6 心 脏 病 消 化 系 统 疾 病 脑 血 管 病 消 化 系 统 疾 病 7 脑 血 管 病 内 分 泌 以 及 营 养 和 代 谢 的 其 他 疾 病 消 化 系 统 疾 病 8 泌 尿 生 殖 系 统 疾 病 泌 尿 生 殖 系 统 疾 病 泌 尿 生 殖 系 统 疾 病 传 染 病 ( 不 含 呼 吸 道 结 内 分 泌 以 及 营 养 和 代 核 ) 谢 的 其 他 疾 病 主 要 死 因 合 计 (%) 内 分 泌 以 及 营 养 和 代 谢 的 其 他 疾 病 泌 尿 生 殖 系 统 疾 病 传 染 病 ( 不 含 呼 吸 道 结 核 ) 内 分 泌 以 及 营 养 和 代 谢 的 其 他 疾 病 恶 性 肿 瘤 死 亡 变 化 及 比 较 楚 州 金 湖 居 民 年 龄 标 化 全 因 死 亡 率 ( 每 10 万 人 口 ) 分 别 下 降 了 44.81% 和 38.14%, 恶 性 肿 瘤 总 死 亡 率 也 分 别 下 降 了 38.07% 和 12.48% 居 民 恶 性 肿 瘤 死 亡 主 要 以 食 管 癌 胃 癌 肝 癌 和 肺 癌 等 为 主, 在 这 几 种 常 见 的 恶 性 肿 瘤 中, 死 亡 率 下 降 最 大 的 是 食 管 癌 和 胃 癌, 楚 州 分 别 下 降 了 69.31% 22.54%, 金 湖 分 别 下 降 22.61% 和 18.77% 肺 癌 死 亡 均 上 升 明 显, 分 别 上 升 了 12.93% 和 17.04%( 表 2) 表 2 楚 州 和 金 湖 两 县 区 30 年 居 民 恶 性 肿 瘤 死 亡 率 变 化 的 比 较 (1/10 万 ) 楚 州 金 湖 肿 瘤 名 称 年 年 年 年 粗 死 亡 率 标 化 死 亡 率 粗 死 亡 率 标 化 死 亡 率 粗 死 亡 率 标 化 死 亡 率 粗 死 亡 率 标 化 死 亡 率 全 死 因 恶 性 肿 瘤 总 计 食 管 癌 胃 癌 肝 癌 肺 癌 结 肠 直 肠 和 肛 门 癌 白 血 病

12 1212 潘 恩 春, 等 淮 安 市 两 县 区 居 民 恶 性 肿 瘤 死 亡 30 年 前 后 变 化 及 对 比 研 究 2 讨 论 居 民 死 亡 率 及 其 死 亡 原 因 变 化 是 反 映 人 民 健 康 状 况 的 重 要 指 标 之 一, 是 制 定 卫 生 政 策 评 价 卫 生 工 作 质 [3] 量 和 效 果 的 科 学 依 据 本 研 究 通 过 对 比 分 析 淮 安 市 楚 州 金 湖 两 县 区 居 民 恶 性 肿 瘤 死 亡 30 年 前 后 变 化, 从 生 态 流 行 病 学 角 度 寻 找 一 些 有 意 义 的 线 索 从 居 民 总 死 亡 率 看, 两 县 区 人 群 总 死 亡 率 明 显 下 降, 这 与 30 年 间 两 地 经 济 发 展 水 平 居 民 生 活 水 平 及 卫 生 保 健 水 平 提 高 相 一 致 30 年 前 后 的 疾 病 死 亡 顺 位 均 呈 现 变 化, 但 恶 性 肿 瘤 一 直 位 居 居 民 死 因 首 位, 脑 血 管 疾 病 心 血 管 疾 病 呼 吸 系 统 疾 病 以 及 损 伤 与 中 毒 等 疾 病 位 次 前 移, 这 5 种 疾 病 由 20 世 纪 70 年 代 占 全 死 因 的 60% 上 升 到 目 前 的 >90% 传 染 病 泌 尿 生 殖 系 统 疾 病 等 位 次 明 显 后 移, 所 占 比 例 下 降 明 显 疾 病 [4] 谱 的 变 化 与 全 国 情 况 相 似, 随 着 经 济 的 高 速 发 展 及 居 民 生 活 水 平 的 提 高, 一 些 与 生 活 方 式 相 关 的 慢 性 非 传 染 性 疾 病 已 成 为 主 要 公 共 卫 生 问 题, 疾 病 死 亡 谱 的 变 化 提 示 对 疾 病 防 控 重 点 应 有 所 突 出 和 转 变 恶 性 肿 瘤 死 亡 变 化 专 项 比 较 显 示, 恶 性 肿 瘤 30 年 来 一 直 为 两 县 区 居 民 的 首 位 死 亡 原 因, 两 县 区 的 恶 性 [5] 肿 瘤 总 死 亡 率 虽 均 呈 下 降, 但 仍 高 于 全 国 平 均 水 平, 说 明 淮 安 市 一 直 属 恶 性 肿 瘤 高 发 地 区 第 1 次 调 查 时, 恶 性 肿 瘤 总 死 亡 率 楚 州 区 明 显 高 于 金 湖 县, 然 而 2006 年 的 调 查, 金 湖 县 的 恶 性 肿 瘤 死 亡 率 高 于 楚 州 区 在 恶 性 肿 瘤 的 死 亡 谱 中, 两 县 区 2 次 调 查 均 以 食 管 癌 胃 癌 和 肝 癌 等 消 化 道 肿 瘤 为 主, 前 后 下 降 明 显, 但 楚 州 的 消 化 道 肿 瘤 特 别 是 食 管 癌, 下 降 幅 度 大 于 金 湖 县 肺 癌 死 亡 率 两 县 区 均 上 升, 幅 度 相 近 分 析 其 原 因, 楚 州 区 自 第 1 次 全 国 死 因 回 顾 调 查 被 确 定 为 癌 症 高 发 区 后, 即 开 展 了 恶 性 肿 瘤 人 群 综 合 防 治 工 作, 建 立 完 善 了 肿 瘤 防 治 三 级 网, 建 立 建 全 了 恶 性 发 病 死 亡 疾 病 监 测 体 系 在 高 校 和 科 研 院 所 的 帮 助 指 导 下, 开 展 当 地 消 化 道 肿 瘤 高 发 的 病 因 学 研 究, 明 确 了 五 大 流 行 病 学 危 险 因 素, 实 施 了 抗 癌 健 康 教 育, 生 产 推 广 硒 肥 钼 肥, 农 村 改 水, 改 进 贮 粮 方 式, 宣 传 推 广 硒 强 化 营 养 盐, 治 理 三 废, 筹 建 二 级 污 水 处 理 站, 控 制 过 境 清 安 河 水 污 染 等 一 系 列 综 合 干 预 措 施 摸 索 出 的 政 府 领 导 部 门 协 作 防 治 结 合 及 防 研 互 补 和 以 卫 生 防 病 机 构 为 主 体 的 恶 性 肿 瘤 综 合 防 治 模 式 而 金 湖 县 则 没 有 开 展 专 项 的 肿 瘤 防 治 工 作,2 个 县 区 30 年 恶 性 肿 瘤 死 亡 谱 的 变 化 差 异, 从 生 态 流 行 病 学 角 度 分 析, 再 次 证 实 了 肿 瘤 是 可 防 治 的, 楚 州 县 的 防 治 措 施 是 有 效 的 同 时 也 说 明, 经 济 发 展 的 异 同, 可 影 响 恶 性 肿 瘤 等 疾 病 死 亡 率 变 化 幅 度, 但 有 效 的 防 控 措 施 能 有 效 降 低 居 民 的 疾 病 死 亡 率, 再 次 提 示 疾 病 控 制 对 社 会 发 展 的 重 要 性 本 研 究 对 两 县 区 30 年 居 民 恶 性 肿 瘤 的 死 亡 率 变 化 进 行 比 对, 发 现 了 一 些 有 意 义 的 线 索, 但 由 于 两 县 区 的 社 会 经 济 文 化 及 环 境 等 资 料, 特 别 是 20 世 纪 70 年 代 的 资 料 收 集 不 完 整, 不 能 充 分 从 生 态 流 行 病 学 角 度 进 行 深 入 分 析 两 县 区 特 别 是 楚 州 区 消 化 道 肿 瘤 下 降 明 显, 尤 以 食 管 癌 为 甚, 表 明 食 管 癌 防 治 工 作 已 初 见 成 效 然 而 值 得 注 意 的 是, 两 县 区 食 管 癌 死 亡 率 仍 处 于 较 高 水 平, 这 是 严 重 影 响 当 地 居 民 健 康 的 主 要 恶 性 肿 瘤, 亟 需 进 行 深 入 研 究 并 积 极 采 取 防 治 措 施, 以 减 轻 其 危 害 参 考 文 献 [1] 陈 竺. 全 国 第 三 次 死 因 回 顾 抽 样 调 查 报 告 [M]. 北 京 : 中 国 协 和 医 科 大 学 出 版 社,2008:2 3. [2] 李 立 明. 流 行 病 学 [M].6 版. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,2007: [3] 王 声 瀵. 死 因 分 析 与 评 价 方 法 的 进 展 [J]. 中 华 流 行 病 学 杂 志, 1996,17(4): [4] 游 允 中, 郑 晓 英. 中 国 人 口 的 死 亡 和 健 康 [M]. 北 京 : 北 京 大 学 出 版 社,2005: [5] 陈 竺. 全 国 第 三 次 死 因 回 顾 抽 样 抽 样 调 查 报 告 [M]. 北 京 : 中 国 协 和 医 科 大 学 出 版 社,2008:16. 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 马 骏 )

13 中华肿瘤防治杂志 ２００９ 年 ８ 月第 １６ 卷第 １６ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ａｇ ２００９ Ｖ １６ Ｎ １６ １２１３ 流行病学研究 ＭＣＭ２ 免疫细胞化学检测在宫颈癌筛查中的意义 郭会芹 赵焕 李楠 王乃鹏 李淑敏 中国协和医科大学 中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所 病理科 郭会芹 赵焕 王乃鹏 妇瘤科 李楠 李淑敏 北京 １０００２１ Ｕ ＭＣＭ２ ｖ ｍ ｇ 犌犝犗 犎狌 狀 犣犎犃犗 犎狌犪狀 犔犐犖犪狀 犠犃犖 犖犪 狆狀犵 犔犐犛犺狌 犿 狀 狇 犐狀 狊 狌 犘 犽 狀犵犝狀 狅狀 犕犱 犮犪 犾犆狅 犾 犾 犵 狀 狊 犃犮犪犱犿狔狅犳 犕犱 犮犪 犾 犆犪狀犮 狉犎狅 狊狆 犪 犾 犛犮 狀犮 狊 犅 狀犵１０００２１ 犘 犚 狀犪 犼 摘要 目 的 探 讨 ＭＣＭ２ 在 宫 颈 癌 和 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔｘ ｈｘ ＭＣＭ２ 癌前病变中的表达 及 其 临 床 意 义 方 法 ｖ ｍｄ ｄ ｖ 选择 宫 颈 液 基 细 胞 学 剩 余 标 本 进 行 犕犈犜犎犗犇犛 ＭＣＭ２ｗ ｄ ｄ ｍ ｋ ｂ Ｓ ｈ ＭＣＭ２ 免 疫 细 胞 化 学 标 记 ＭＣＭ２ 标 记 ｄ ｖ ｇ ｍｂｍｍ ｈｍ 结果与细 胞 学 结 果 和 活 检 组 织 学 结 果 对 ｍ ｈｄ ｄ ｗ ｍ ｄｗ ｈ ｇｄ ｇ ｄｈ 照分析 结果 共收 集 了 １８７ 例 宫 颈 液 基 ｇ ｂ ｄ ｇ 犚犈犛犝犔犜犛 Ａ １８７ ｄ ｇ 细胞学剩余标本 其 中 １７２ 例 有 活 检 组 织 ｍｗ ｄ Ａｍｇ ｈｍ１７２ ｗ ｖ ｂ 学结 果 ＭＣＭ２ 在 细 胞 学 诊 断 的 ＳＣＣ ｈ ｇ ｂ ｄ ｇ Ａ ｄ ｇ ｇ ｇ ＨＳ ＩＬ ＬＳ ＩＬ ＡＳＣ Ｈ 和 ＡＳＣ ＵＳ 中 阳 性 ＭＣＭ２ ｖ ｇ ｗ ｄ ｄ １００ ０ ｈ ＳＣＣ 表达 率 分 别 为 １００ ０ ９７ １ ６８ １ ９７ １ ｈ ＨＳ ＩＬ ６８ １ ｈｌｓ ＩＬ １００ ０ ｈ ＡＳＣ Ｈ １００ ０ 和 ５４ ６ 在 活 检 组 织 学 确 诊 的 ｄ５４ ６ ｈａｓｃ ＵＳ Ａｍｇ ｗ ｈｂ ｄ ｇ ｈ ＳＣＣ ＣＩＮ３ ＣＩＮ２ 和 ＣＩＮ１ 中 阳 性 表 达 率 ｇ ｖｍｃｍ２ｗ １００ ０ ｈｓｃｃ ９２ ２ 分 别 为 １００ ０ ９２ ２ ７５ ０ 和 ｈｃｉｎ３ ７５ ０ ｈ ＣＩＮ２ ｄ８５ ７ ｈ ＣＩＮ１ Ｕ ｇ ８５ ７ 在 ４０ 例 非 典 型 鳞 状 上 皮 细 胞 ＭＣＭ２ ｖ ｇ ｈ ｈ ｄ ｈ ＭＣＭ２ ｄｄ ＡＳＣ 中 ＭＣＭ２ 检测对 筛 选 组 织 学 确 诊 ｖ ８５ ７ ｄ ８０ ０ ｄ ｇｃｉｎ１ 的 ＣＩＮ１ 及以上病变敏感性和特异性分 别 ｗ ｗ ｈａｓｃｄ ｇ Ｗｈ ｈ ｖ ｗ 为 ８５ ７ 和 ８０ ０ 对筛选 ＣＩＮ２ 及 以 上 ７７ ８ ｄ ｈ ８６ ７ ｄ ｇｃｉｎ２ ｗ ｗ 病变的敏 感 性 和 特 异 性 分 别 为 ７７ ８ 和 犆犗犖犆犔犝犛 犐犗犖 ＭＣＭ２ ｖ ｘ ｖ ｍｄ ８６ ７ 结 论 ＭＣＭ２ 在 宫 颈 癌 和 癌 前 ｄｍｃｍ２ｍ ｖ ｍ ｋ ｈ 病变中 高 表 达 并 可 作 为 宫 颈 癌 筛 查 和 ｇ ｖ ｍｄｍｈ ｈ ｇ ｄ ｇ ｈ ＡＳＣ 管理的辅助性标志 ｄ ｇ ＡＳＣ 中华肿瘤防治杂志 ２００９ １６ １６ １２１３ １２１６ 狀犑犆犪狀犮 狉犘狉 狏犜狉 犪 ２００９ １６ １６ １２１３ １２１６ 关键词 宫颈肿瘤 诊断 细胞学技术 活组织检查 微小染色体维持蛋白 ２ ｄ 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｖ ｘ ｍ ｇ ｇ ｈ ｂ ｍ ｈ ｍ ｍｍ ２ ｑ 中图分类号 Ｒ７３７ ３３ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７３ ５２６９ ２００９ １６ １２１３ ０４ ｈ ｍ ｍ ｍ 微 小 染 色 体 维 持 蛋 白 ｍ ＭＣＭ 在 细 胞 周 期 中 形 成 ＤＮＡ 复 制 基金项目 首都医学发展基金 ２００５ ３１４１ 第一作者简介 郭会芹 女 河 北 石 家 庄 人 博 士 主 治 医 师 主要从事细胞病理学临床与基础的研究工作 Ｔ ８６ １０ ８７７８８５４９ Ｅ ｍ ２００６ １６３ ｍ ｇｈｑ 通讯作者简介 李淑敏 女 河 北 新 城 人 博 士 副 主 任 医 师 主要从事妇科肿瘤临床与基础的研究工作 Ｔ ８６ １０ ８７７８７２１３ Ｅ ｍ ｈｍ ６６６ ｈ ｍ 前复合物 启动 ＤＮＡ 复制 是细胞进入增殖期敏感而特 异的标志 ＭＣＭ 家族由 ６ 个成员组成 即 ＭＣＭ２ ７ 它们对 ＤＮＡ 的复制和延伸都是缺一不可的 １ 本研究 采用免疫细胞化学法检测宫颈液基细胞学诊断 后剩 余 标本中 ＭＣＭ２ 的 表达 并 探讨 其表 达在 宫 颈 癌 筛 查 中 的意义 １ 材料与方法 １ １ 标本来源

14 1214 郭 会 芹, 等 MCM2 免 疫 细 胞 化 学 检 测 在 宫 颈 癌 筛 查 中 的 意 义 根 据 细 胞 学 诊 断 结 果, 选 择 收 集 我 院 细 胞 学 室 宫 颈 细 胞 学 液 基 剩 余 标 本 187 例, 年 龄 22~83 岁, 平 均 年 龄 43.9 岁, 中 位 年 龄 43 岁 阳 性 病 例 选 择 细 胞 学 诊 断 非 典 型 鳞 状 上 皮 细 胞 (atypicalsquamouscel,asc), 并 且 2 个 月 内 行 阴 道 镜 活 检 的 病 例 ; 阴 性 对 照 随 机 选 取 细 胞 学 和 肉 眼 观 察 均 为 阴 性 的 病 例 1.2 标 本 处 理 宫 颈 液 基 细 胞 学 剩 余 标 本 采 用 ThinPrep2000 系 统 制 作 液 基 薄 片,4 冷 丙 酮 固 定 过 夜, 晾 干 将 每 张 液 基 薄 片 (ThinPrep TM,Cytyc Crop,Boxborough, Massachusets,USA) 划 分 为 两 半, 一 半 做 MCM2 免 疫 细 胞 化 学 检 测, 另 一 半 做 阴 性 对 照 1.3 检 测 方 法 及 结 果 判 断 采 用 SP 法 进 行 免 疫 细 胞 化 学 标 记 MCM2 单 克 隆 抗 体 由 中 国 医 学 科 学 院 肿 瘤 研 究 所 陆 士 新 院 士 惠 赠, 工 作 浓 度 为 微 波 抗 原 修 复,DAB 显 色, 苏 木 精 复 染,PBS 代 替 一 抗 作 阴 性 对 照 MCM2 为 细 胞 核 阳 性, 如 果 1 个 细 胞 的 核 染 成 棕 黄 色 或 棕 褐 色, 并 且 依 据 TBS(2001) 诊 断 系 统 这 个 细 胞 可 以 诊 断 为 非 典 型 鳞 状 细 胞 意 义 不 明 (atypicalsquamouscel ofundeterminedsignificance,asc US) 及 以 上 病 变, 则 判 定 为 阳 性 细 胞 1 张 涂 片 中 有 1 个 阳 性 细 胞 就 判 断 为 MCM2 阳 性 病 例 ; 如 果 涂 片 中 缺 乏 明 确 胞 核 着 色 的 细 胞, 或 有 胞 核 着 色 细 胞 但 该 细 胞 按 照 TBS 诊 [2 3] 断 系 统 没 有 异 常 改 变, 均 视 为 MCM2 阴 性 1.4 细 胞 学 诊 断 根 据 宫 颈 ( 阴 道 ) 细 胞 学 TBS(2001) 诊 断 标 准, 将 鳞 状 细 胞 病 变 分 为 未 见 上 皮 内 病 变 细 胞 或 恶 性 细 胞 (negativeforintraepitheliallesion or malignancy, NILM) ASC US 非 典 型 鳞 状 细 胞 不 除 外 上 皮 内 高 度 病 变 (atypical squamous cel,cannot exclude HSIL,ASC H) 低 度 鳞 状 上 皮 内 病 变 (low grade squamousintraepitheliallesion,lsil) 高 度 鳞 状 上 皮 内 病 变 (highgradesquamousintraepitheliallesion, HSIL) 以 及 鳞 状 细 胞 癌 (squamouscelcarcinoma, SCC) 1.5 分 析 方 法 及 统 计 学 方 法 MCM2 结 果 判 断 盲 法 进 行 随 访 组 织 学 活 检 结 果,MCM2 标 记 结 果 与 细 胞 学 活 检 组 织 学 诊 断 对 照 分 析 应 用 SPSS13.0 软 件 进 行 统 计 学 分 析, 采 用 χ 2 检 验 检 验 水 准 α= 结 果 2.1 MCM2 在 鳞 状 细 胞 病 变 中 的 表 达 MCM2 主 要 表 达 于 异 常 鳞 状 细 胞 的 核 中, 细 胞 核 着 色 强 烈 而 局 限, 部 分 病 变 细 胞 在 胞 核 阳 性 的 同 时 也 可 见 浅 淡 的 胞 质 着 色 除 异 常 鳞 状 细 胞 外, 少 数 颈 管 腺 细 胞 表 层 鳞 状 细 胞 也 有 核 着 色, 少 数 化 生 细 胞 有 胞 质 着 色 ( 图 1) 图 1 MCM2 在 鳞 状 细 胞 病 变 中 的 阳 性 表 达 A:HSIL 中 MCM2 表 达 为 细 胞 核 强 烈 而 局 限 的 棕 黄 色 着 色, 在 低 倍 镜 下 就 很 容 易 识 别 (SP 100);B: 单 个 ASC US 细 胞 的 核 着 色, 组 织 学 活 检 确 诊 为 CIN1(SP 400);C: 单 个 核 ASC H 细 胞 的 胞 核 着 色, 组 织 学 活 检 确 诊 为 CIN3(SP 400);D:LSIL 细 胞 MCM2 的 着 色, 此 细 胞 片 中 并 非 所 有 病 变 细 胞 都 有 MCM2 的 表 达, 组 织 学 活 检 确 诊 为 CIN1(SP 400);E: 合 胞 体 样 HSIL 细 胞 的 MCM2 表 达, 组 织 学 活 检 确 诊 为 CIN3(SP 400); F:SCC 细 胞 的 MCM2 表 达, 组 织 学 活 检 确 诊 为 SCC(SP 400)

15 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志 2009 年 8 月 第 16 卷 第 16 期 CHINJCANCERPREV TREAT,August2009,Vol.16 No MCM2 在 不 同 诊 断 级 别 病 变 中 的 表 达 187 例 病 例 中,172 例 细 胞 学 诊 断 ASC,15 例 细 胞 学 诊 断 为 NILM MCM2 在 100.0% 的 SCC 97.1% 的 HSIL 和 68.1% 的 LSIL 中 阳 性 表 达, 而 在 细 胞 学 诊 断 阴 性 的 病 例 中 不 表 达, 且 MCM2 阳 性 表 达 率 随 细 胞 学 分 级 的 增 加 而 增 加 HSIL 中 有 2 例 MCM2 表 达 呈 阴 性, 复 阅 涂 片,1 例 炎 性 反 应 较 重, 背 景 着 色 高 影 响 结 果 判 断 ; 另 外 1 例 涂 片 背 景 较 清 晰, 但 经 仔 细 观 察 未 找 到 核 浆 比 有 异 常 的 病 变 细 胞 ( 该 病 例 巴 氏 染 色 的 涂 片 中 病 变 细 胞 数 也 较 少 ), 见 表 例 细 胞 学 诊 断 ASC 的 病 例 全 部 有 活 检 组 织 学 结 果, 包 括 19 例 SCC 51 例 CIN3 16 例 CIN2 42 例 CIN1 和 59 例 慢 性 炎 症 MCM2 在 CIN2 及 其 以 上 病 变 中 的 阳 性 表 达 率 为 90.7%, 在 CIN1 中 的 表 达 率 为 85.7%, 两 者 差 异 无 统 计 学 意 义, 犘 =0.386 MCM2 在 CIN1 及 以 上 病 变 中 的 表 达 率 为 89.1%, 显 著 高 于 细 胞 学 诊 断 ASC 组 织 学 诊 断 为 慢 性 炎 症 病 例 的 44.1%, 犘 =0.000( 见 表 1) 表 1 MCM2 在 不 同 细 胞 学 诊 断 和 组 织 学 诊 断 中 的 表 达 项 目 MCM2 的 表 达 狀 阳 性 例 数 百 分 率 (%) 细 胞 学 诊 断 SCC HSIL ASC H SIL LSIL ASC US NILM 组 织 学 诊 断 SCC CIN CIN CIN 慢 性 炎 症 MCM2 在 ASC 病 例 中 的 表 达 40 例 ASC 病 例 ( 均 有 组 织 病 理 学 诊 断 ), 包 括 7 例 ASC H 和 33 例 ASC US 其 中 25 例 MCM2 表 达 阳 性 ( 包 括 SCC1 例,CIN33 例,CIN23 例,CIN111 例, 慢 性 炎 症 7 例 );15 例 MCM2 表 达 阴 性 ( 包 括 CIN22 例,CIN11 例, 慢 性 炎 症 12 例 ) MCM2 检 测 对 筛 选 组 织 学 确 诊 的 CIN1 及 以 上 病 变 的 敏 感 性 和 特 异 性 分 别 为 85.7% 和 80.0%; 对 筛 选 CIN2 及 以 上 病 变 的 敏 感 性 和 特 异 性 分 别 为 77.8% 和 86.7% 3 讨 论 微 小 染 色 体 维 持 蛋 白 家 族 (MCM2 7) 是 一 组 普 遍 存 在 的 高 度 保 守 的 蛋 白,MCM2 7 在 DNA 复 制 起 始 和 延 伸 过 程 中 做 为 解 旋 酶 起 着 重 要 的 作 用 正 常 细 胞 中,MCM 蛋 白 的 mrna 水 平 随 着 细 胞 周 期 的 变 化 而 改 变 MCM 蛋 白 的 表 达 在 G 1 /S 期 转 换 达 峰 值, 当 细 胞 进 入 G 0 期 和 分 化 衰 老 时,MCM 蛋 白 表 达 的 水 平 [1] 下 降, 甚 至 不 能 检 测 由 于 MCM 蛋 白 的 下 调 引 起 人 细 胞 增 殖 能 力 的 丢 失, 因 而 MCM 蛋 白 作 为 检 出 伴 有 生 长 潜 能 G 1 期 细 胞 的 一 个 新 生 物 学 标 志 已 被 提 [4] 出 研 究 人 员 已 将 此 标 志 用 于 宫 颈 癌 食 管 癌 膀 胱 [5 8] 癌 和 胰 腺 癌 等 多 种 恶 性 肿 瘤 的 检 测 在 本 研 究 中, MCM2 蛋 白 在 宫 颈 上 皮 内 病 变 细 胞 的 胞 核 中 有 着 局 限 而 强 烈 的 着 色, 阅 片 者 在 低 倍 镜 下 就 可 以 清 晰 的 识 别, 表 明 该 蛋 白 的 免 疫 细 胞 化 学 标 记 有 较 强 的 可 行 性 通 过 与 细 胞 学 诊 断 对 照 分 析 发 现,MCM2 蛋 白 的 表 达 情 况 与 细 胞 学 诊 断 有 较 高 一 致 性, 其 在 细 胞 学 诊 断 为 SCC HSIL 和 WINL 病 例 中 的 表 达 率 分 别 为 100% [2,9] 97.1% 和 0, 这 一 结 果 与 文 献 报 道 相 一 致 目 前 文 献 中 MCM2 在 宫 颈 癌 和 高 度 上 皮 内 病 变 中 的 高 表 达 率 已 被 普 遍 认 同, 而 在 低 度 上 皮 内 病 变 中 的 表 达 率 各 [9] 组 研 究 尚 存 较 大 差 异 例 如,Kely 等 和 Siddiqui [10] 等 研 究 显 示,MCM2 在 组 织 学 确 诊 的 CIN2 及 以 上 病 变 中 的 阳 性 表 达 率 为 85.3% ~98.8%, 而 在 CIN1 [5] [3] 中 仅 为 14.3% ~30% Shi 等 和 Beccati 等 的 研 究 则 显 示,MCM2 不 仅 在 CIN2 及 以 上 病 变 中 高 表 达, 而 且 在 CIN1 中 也 有 较 高 的 表 达 率, 约 为 76% 本 组 数 据 中 MCM2 在 CIN2 及 以 上 病 变 中 的 阳 性 表 达 率 为 90.7%, 在 CIN1 中 的 表 达 率 为 85.7%, 两 者 差 异 [5] [3] 无 统 计 学 意 义, 与 Shi 等 和 Beccati 等 的 结 果 一 致 这 一 结 果 进 一 步 验 证 了 MCM2 在 宫 颈 上 皮 内 病 变 中 普 遍 高 表 达, 提 示 MCM2 作 为 细 胞 增 殖 活 性 的 标 志 有 望 在 宫 颈 癌 的 筛 查 中 发 挥 作 用 MCM2 在 部 分 细 胞 学 诊 断 ASC 组 织 学 诊 断 为 慢 性 炎 症 的 病 例 中 有 表 达, 说 明 MCM2 蛋 白 在 部 分 炎 性 反 应 性 细 胞 中 确 有 表 达 ; 阴 道 镜 活 检 组 织 学 诊 断 受 取 材 局 限, 在 某 些 情 况 下 不 能 真 实 反 映 宫 颈 病 变 的 严 重 程 度 ASC 是 宫 颈 癌 筛 查 中 最 常 见 的 一 种 宫 颈 细 胞 学 异 常, 约 占 筛 查 人 群 的 5% 临 床 对 这 一 大 类 异 常 人 群 的 管 理 存 在 较 大 争 议, 争 议 的 根 源 在 于 ASC 意 义 的 不 确 定 性 组 织 学 随 访 证 实 ASC 函 概 了 从 炎 症 HPV 感 染 到 上 皮 内 瘤 变, 甚 至 是 浸 润 癌 等 多 种 病 变 这 类 细 胞 学 异 常 的 人 群 可 能 进 行 HPV 检 测 阴 道 镜 检 查 和 ( 或 ) 组 织 学 活 检 以 排 除 高 度 病 变 或 浸 润 癌 高 危 型 HPV DNA (high risk human papilomavirus, hr HPV) 检 测 目 前 已 用 于 对 ASC US 的 分 类 管 理, hr HPV DNA 阳 性 的 病 例 存 在 HSIL 的 风 险 大, 需 要 进 一 步 的 阴 道 镜 检 查 ;hr HPV DNA 阴 性 病 例 HSIL [11] 的 发 病 风 险 较 低 接 近 细 胞 学 诊 断 为 NILM 的 人 群 然 而 由 于 绝 大 多 数 HPV 感 染 为 一 过 性, 只 有 少 数 病

16 1216 郭 会 芹, 等 MCM2 免 疫 细 胞 化 学 检 测 在 宫 颈 癌 筛 查 中 的 意 义 例 会 持 续 进 展 为 上 皮 内 病 变 或 浸 润 癌,hr HPV DNA [12] 检 测 的 特 异 性 受 到 质 疑 因 此 研 究 人 员 试 图 寻 找 一 些 更 为 理 想 的 分 子 标 志 用 于 ASC 的 分 类 管 理 [10] Siddiqui 等 在 100 例 ASC H 中 的 研 究 显 示,MCM2 和 TOP2A( 拓 扑 异 构 酶 2) 联 合 标 记 对 CIN2 及 以 上 病 变 检 测 的 敏 感 性 和 特 异 性 分 别 为 98.8% 和 82.4%, 高 于 hr HPV DNA 检 测 的 71.1% 和 64.7% Siddiqui [13] 等 在 200 例 ASC US 中 的 研 究 也 显 示,MCM2 和 TOP2A( 拓 扑 异 构 酶 2) 联 合 标 记 对 CIN2 及 以 上 病 变 检 测 的 敏 感 性 和 特 异 性 均 高 于 hr HPV DNA 检 测 在 本 组 40 例 ASC 中,MCM2 检 测 对 组 织 学 确 诊 的 CIN1 及 以 上 病 变 的 敏 感 性 和 特 异 性 分 别 为 85.7% 和 80%; 对 CIN2 及 以 上 病 变 的 敏 感 性 和 特 异 性 分 别 为 77.8% 和 86.7%, 提 示 MCM2 标 记 将 有 助 于 对 ASC 中 上 皮 内 病 变 的 检 出 但 本 组 数 据 ASC 的 病 例 数 偏 少, 这 一 结 果 尚 有 待 大 样 本 的 研 究 来 进 一 步 证 实 参 考 文 献 [1] BlowJJ,HodqsonB.Replicationlicensing definingtheprolifer ativestate?[j].trendscelbiol,2002,12(2): [2] ShroyerK R,HomerP,HeinzD,etal.Validationofanovel immunocytochemicalassayfortopoisomerase Ⅱ αand minichro mosomemaintenanceprotein2expressionincervicalcytology [J].Cancer,2006,108(5): [3] BeccatiM D,BurianiC,PedrialiM,etal.Quantitativedetec tionof molecular markersproex C (minichromosome mainte nanceprotein2andtopoisomerase Ⅱα)and MIB 1inliquid basedcervicalsquamouscelcytology[j].cancer,2008,114 (3): [4] StoeberK,TlstyTD,HapperfieldL,etal.DNAreplicationli censingand human celproliferation[j].j Cel Sci,2001, 114(Pt11): [5] ShiJ,Liu H,Wilkerson M,etal.Evaluationofp16INK4a, minichromosome maintenance protein 2,DNA topoisomerase Ialpha,ProEX C,andp16INK4a/ProEX Cincervicalsqua mousintraepitheliallesions[j].hum Pathol,2007,38(9): [6] StoeberK,SwinnR,PrevostA T,etal.Diagnosisofgenito u rinarytractcancerbydetectionofminichromosomemaintenance 5proteinin urinesediments[j].j NatlCancerInst,2002, 94(14): [7] AyaruL,StoeberK,WebsterGL,etal.Diagnosisofpancreat icobiliary malignancybydetectionof minichromosome mainte nanceprotein5inbileaspirates[j].brjcancer,2008,98(9): [8] WiliamsG H,SwinnR,PrevostAT,etal.Diagnosisofoeso phagealcancerbydetectionofminichromosome maintenance5 proteiningastricaspirates[j].brjcancer,2004,91(4): [9] KelyD,KincaidE,FanslerZ,etal.Detectionofcervicalhigh gradesquamousintraepitheliallesionfromcytologicsamplesu singanovelimmunocytochemicalassay (ProExC)[J].Cancer, 2006,108(6): [10] SiddiquiM T,CohenC,NassarA.Detectinghigh gradecervical diseaseonasc Hcytology:roleofBDProExCandDigeneHy bridcaptureⅡ HPVDNAtesting[J].AmJClinPathol,2008, 130(5): [11] SolomonD,SchifmanM,TaroneR.FortheALTSstudyGroup. Comparsionofthreemanagementstrategiesforpatientswithatypical squamouscelsofundeterminedsignificance:baselineresultsfroma randomizedtrial[j].jnatlcancerinst,2001,93(4): [12] Schifman M,Khan MJ,SolomonD,etal.Astudyoftheim pactofaddinghpvtypestocervicalcancerscreeningandtriage tests[j].jnatlcancerinst,2005,97(2): [13] SiddiquiM T,HornamanK,CohenC,etal.ProExCimmuno cytochemistryandhigh riskhumanpapilomavirusdnatesting inpapanicolaoutestswithatypicalsquamouscel(asc US)cy tology:correlationstudywithhistologicbiopsy[j].archpathol Lab Med,2008,132(10): 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 史 本 玲 )

17 中华肿瘤防治杂志 ２００９ 年 ８ 月第 １６ 卷第 １６ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ａｇ ２００９ Ｖ １６ Ｎ １６ １２１７ 实验研究 真核载体介导 ＳＴＡＴ３ 基因沉默诱导 ＣＮＥ２ 细胞凋亡的研究 刘伟 王涛 陈叶珊 姚杰 胡建莉 华中科技大学附属协和医院肿瘤中心 湖北 武汉 ４３００２２ Ｉ ｈ ｂ ＳＴ Ａ Ｔ３ｇ ｘ ｂ ｋ ｖ ｄ ＣＮＥ２ ｇ 犔犐犝 犠 犠犃犖犌 犜犪狅 犆犎犈犖犢 狊 犺犪狀 犢犃犗犑 犎犝犑 犪狀 犾 狅狀 犎狅 狊狆 犪 犾 犎狌犪狕犺狅狀犵犝狀 狏 狉 狊 狀犮 犪狀犱犜 犮犺狀狅 犾 狅犵狔 犠狌犺犪狀 ４３００２２ 犘 犚 狀犪 犆狀 狉狅犳 犗狀犮 狅 犾 狅犵狔 犝狀 狔狅犳犛犮 摘要 目 的 研 究 真 核 载 体 介 导 的 ＲＮＡ 犃犅犛犜犚犃犆犜 犗犅犑犈犆犜犐犞犈 Ｔ ｖ ｈ ｇ 对人鼻咽 癌 ＣＮＥ２ 细 胞 凋 亡 的 影 响 方 法 ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ ｈｍ 真 核质粒介导的针对 ＳＴＡＴ３ 基因 ＲＮＡ 转 ｍ ＣＮＥ２ 犕犈犜犎犗犇犛 Ｇ ｈ ｇ 染人鼻咽 癌 细 胞 ＣＮＥ２ ＲＴＰＣＲ 蛋 白 质 印 ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ ｗ ｈ ｚ ｄｄ ｄ ＣＮＥ２ 迹法 激光共聚焦显微镜 流式细胞术分别检 ｂ ｍ Ｔｈｘ ＳＴＡＴ３ｇ ＣＮＥ２ ｗ 测 ＳＴＡＴ３ ｍｒｎａ 表 达 ＳＴＡＴ３ Ｃ Ｄ１ ｄ ｄｂｒｔｐｃｒ ｄ ｈｘ ＳＴＡＴ３ Ｃ Ｄ１ Ｂ ２ 和 Ｂｘ 蛋 白 表 达 以 及 细 胞 凋 亡 形 态 学 Ｂ ２ｄｂｘ ｗ ｄ ｄｂ Ｗ ｂ Ｔｈ 改变 细胞周期和细胞凋亡 结果 转染７２ｈ ｄ ｗ ｄ ｄｂｈ ｈ ３３２５８ｄ ｗ 后 与未转染组和阴性对照组相比 ＳＴＡＴ３ 基 ｍ ＦＣＭ ＣＮＥ２ 犚犈犛犝犔犜犛 Ａ ７２ｈ 因沉默组 ＣＮＥ２ 细 胞 中 ＳＴＡＴ３ ｍｒｎａ 犘 ｗ ｈ ＲＮＡ ｈ ｍｒｎａ 犘 ０ ０００ ｄ ｖ ０ ０００ 和蛋白表达显著下降 犘 ０ ０００ Ｃ 犘 ０ ０００ ＳＴＡＴ３ ＣＮＥ２ ｗ ｗ ｇ Ｄ１ 和 Ｂ ２蛋白表达明显减少 犘 ｈ ｈ ｈ ｄｄ ｍｂ ｄｇ ｍ ｄｂ Ｂ ｘ蛋 白 表 达 显 著 增 多 犘 ０ ０００ ０ ０００ ｄ ｈｘ Ｃ Ｄ１ｄＢ ２ 犘 Ｈ ｈ ３３２５８ 荧光染色可见核浓缩等典型细 ０ ０００ ｄ ｇｍ Ｂｘ ｘ 犘 胞凋亡 特 征 细 胞 周 期 Ｇ１ 期 比 例 明 显 增 多 ０ ０００ Ｍ ｋｄ ｍ ｇ ｈｇ ｗ ｂ ｈ 分别为 ８０ ０９±２ ３７ ５７ ９８±４ １９ ｖｄｂｈ ｈ ３３２５８ ｇ ｄ Ｔｈ 和 ６１ ８５±２ ３１ 犘 ０ ０００ 凋 亡 率 显 著 ｇ ８０ ０９±２ ３７ ５７ ９８± ｇ ｗ ｂ ｋｄ Ｇ１ 升 高 分 别 为 １６ ４±３ ７８ ３ ２０± ４ １９ ６１ ８５±２ ３１ 犘 ０ ０００ ｄ ｈ １ ７４ 和 ３ ４２±０ ５７ 犘 ０ ０００ 结 ｄ １６ ４±３ ７８ ３ ２０±１ ７４ ３ ４２±０ ５７ 论 ＳＴＡＴ３ 基 因 沉 默 能 有 效 地 抑 制 鼻 咽 癌 ＣＮＥ２ 细 胞 中 的 ＳＴＡＴ３ 表 达 并 通 过 调 节 犘 ０ ０００ ｈ ＲＮＡ ｄ ｇ 犆犗犖犆犔犝犛 犐犗犖 ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ ｖ ｈ ｂ ｈｘ ＳＴＡＴ３ Ｃ Ｄ１ Ｂ ２ 和 Ｂ ｘ蛋 白 表 达 使 鼻 咽 癌 细 ｄ ｄ ｈ ｂ ｂ ｈ ｇ 胞阻滞于 Ｇ１ 期 最终引致细胞凋亡 ｈ ｘ Ｂ ｘ Ｃ Ｄ１ ｄｂ ２ ＣＮＥ２ 中华肿瘤防治杂志 ２００９ １６ １６ １２１７ １２２０ 狀犑犆犪狀犮 狉犘狉 狏犜狉 犪 ２００９ １６ １６ １２１７ １２２０ 关键词 鼻咽肿瘤 ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ 干扰 细胞凋亡 犓犈犢犠犗犚犇犛 ｈ ｍ ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ ｇ 中图分类号 Ｒ７３ ３ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７３ ５２６９ ２００９ １６ １２１７ ０４ 细 胞 信 号 传 导 子 和 转 录 激 活 子 ３ ｇ 信号 ｄ ｄ ｖ ３ ＳＴＡＴ３ 第一作者简介 刘伟 男 安徽六 安 人 硕 士 住 院 医 师 主 要 从事恶性肿瘤早期诊断与治疗的研究工作 Ｔ ８６ ２７ ６５６５０９４４ Ｅ ｍ ｗ ｚｈｇ １６３ ｍ 传导通路在多种肿瘤细胞中存在异常激活现象 本研 究运用 ＲＮＡ 干 扰 ＲＮＡ 技 术 抑 制 人 鼻 咽 癌 细 胞 ＣＮＥ２ 中 ＳＴＡＴ３ 的表达 观察阻断 ＳＴＡＴ３ 信 号通 路 对鼻咽癌细胞凋亡的影响作用 １ 材料与方法 通讯作者简介 胡 建 莉 女 浙 江 绍 兴 人 副 主 任 医 师 主 要 从事恶性肿瘤早期诊断与治疗的研究工作 Ｔ ８６ ２７ ６５６５０９４４ Ｅ ｍ ５１９９ ｈ ｍ ｊ １ １ 细胞与试剂 ＣＮＥ２ 细 胞 由 协 和 医 院 中 心 实 验 室 提 供 质 粒

18 1218 刘 伟, 等 真 核 载 体 介 导 STAT3 基 因 沉 默 诱 导 CNE2 细 胞 凋 亡 的 研 究 pgenesil 1 购 自 武 汉 晶 赛 生 物 工 程 技 术 有 限 公 司 ; DNA 片 段 由 上 海 生 物 工 程 技 术 服 务 有 限 公 司 合 成 ; RT PCR 试 剂 盒 为 大 连 Takara 生 物 公 司 产 品 ; 质 粒 抽 提 试 剂 盒 购 自 美 国 Omega 公 司 ;Metafectene 脂 质 体 转 染 试 剂 购 自 德 国 Biontex 公 司 ;Anti STAT3 Anti CyclinD1 Anti Bcl 2 Anti bax 及 Anti β actin 兔 抗 人 多 克 隆 抗 体 购 自 SantaCruz 公 司 ;Hoechst33258 试 剂 盒 购 于 南 京 凯 基 生 物 有 限 公 司 1.2 重 组 质 粒 构 建 根 据 Genbank 中 报 道 的 STAT3 核 苷 酸 序 列 (No.NM003150) 参 考 SiRNA 的 设 计 序 列 ( 上 游 : 核 苷 酸 碱 基 序 列 CATCTGCCTAGATCG GCTA; 下 游 : 核 苷 酸 碱 基 序 列 GCAG CAGCTGAACAACATG), 合 成 2 条 DNA 寡 核 苷 酸 链, 退 火 后 与 pgenesil 1 质 粒 连 接, 连 接 产 物 转 化 DH5α 感 受 态, 常 规 铺 板, 挑 取 阳 性 菌 落 扩 增, 提 取 质 粒, 测 序 鉴 定 将 与 人 的 任 何 基 因 序 列 均 无 同 源 关 系 的 DNA 序 列 (Scrambled) 按 上 述 方 法 构 建 重 组 质 粒 作 为 阴 性 对 照 1.3 细 胞 培 养 及 转 染 于 含 10% 小 牛 血 清 的 RMPI1640 培 养 液 中 37 5% CO 2 孵 箱 培 养 转 染 前 24h 记 数, 接 种 于 6 孔 板, 每 孔 细 胞, 细 胞 达 90% 融 合 时 转 染 具 体 转 染 步 骤 按 Metafectene 脂 质 体 转 染 试 剂 说 明 书 上 操 作 转 染 实 验 分 为 未 转 染 组 转 染 质 粒 (Scram bled) 阴 性 对 照 组 和 转 染 阳 性 质 粒 (pgenesil STAT3 si RNA) 组, 质 粒 转 染 72h 后 收 集 细 胞 1.4 RT PCR 捡 测 STAT3mRNA 表 达 甘 油 醛 3 磷 酸 脱 氢 酶 (GAPDH) 基 因 扩 增 作 为 内 参 STAT3 扩 增 引 物 为 : 上 游 引 物 5 CCCATACCT GAAGACCAAGTTTATC 3 ; 下 游 引 物 5 TGGAA ATAATGGTGAAGGTGCTC 3, 产 物 长 度 125bp, 反 应 条 件 :94 变 性 30s,57 退 火 45s,72 延 伸 1min 取 3μLPCR 产 物 于 1.5% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 并 照 相, 实 验 重 复 3 次 1.5 蛋 白 质 印 迹 法 检 测 STAT3 CyclinD1 Bcl 2 及 Bax 蛋 白 表 达 细 胞 转 染 后 72h, 提 取 细 胞 总 蛋 白, 取 50μg 总 蛋 白 用 10%SDS PAGE 进 行 分 离, 转 至 PVDF 膜 上, 分 胰 酶 消 化 后, 收 集 不 同 抑 制 剂 处 理 24h 后 的 各 组 细 胞, 离 心 (1000r/min,5min, 狉 =9.5cm) 后 将 细 胞 吹 打 均 匀, 涂 片 并 干 燥 后, 甲 醛 液 (40 g/l) 固 定 10min, 然 后 用 蒸 馏 水 洗 2 次, 室 温 下 待 干 ; 最 后 Ho echst33258(5mg/l) 染 色 5min, 蒸 馏 水 洗 2 次, 室 温 下 晾 干, 荧 光 显 微 镜 下 观 察, 随 机 拍 照 1.7 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 周 期 和 凋 亡 收 集 细 胞 浓 度 约 ml -1,3.7% 冰 甲 醛 缓 冲 液 (ph7.4) 固 定 15min,PBS 清 洗 后 70% 冰 乙 醇 固 定,4 过 夜 染 色 前 低 速 离 心 (2000r/min5min, 狉 =9.5cm), PBS 洗 涤 2 次, 加 入 RnaseA( 终 浓 度 100mg/L) 碘 化 吡 锭 (PI, 终 浓 度 50 mg/l) Triton X100( 终 浓 度 0.5%), 37 水 浴 避 光 染 色 30 min,fc500 流 式 细 胞 仪 ( 美 国 BeckmanCoulter 公 司 ) 检 测 采 用 CXP 软 件 分 析 各 细 胞 周 期 的 百 分 率, 以 亚 二 倍 体 峰 代 表 凋 亡 细 胞 1.8 统 计 学 方 法 运 用 SPSS13.0 软 件 进 行 统 计 学 处 理, 组 间 比 较 用 单 因 素 方 差 分 析 (one wayanova) 联 合 SNK 检 验 检 验 水 准 α= 结 果 2.1 STAT3 SiRNA 转 染 对 CNE2 细 胞 STAT3 mrna 表 达 的 影 响 DNA 琼 脂 凝 胶 电 泳 结 果 显 示, 各 样 本 中 均 可 见 亮 度 均 一 的 GAPDH 条 带 在 未 转 染 组 与 阴 性 对 照 组 可 见 明 显 STAT3 目 的 DNA 条 带 ; 转 染 STAT3 sir NA 组 STAT3 DNA 条 带 亮 度 ( 灰 度 值 0.103± 0.089) 与 未 转 染 组 ( 灰 度 值 0.710±0.104) 和 阴 性 对 照 组 ( 灰 度 值 0.605±0.076) 相 比 明 显 变 浅, 犉 = , 犘 =0.000( 图 1) 图 1 STAT3 sirna 转 染 CNE2 细 胞 后 STAT3 的 mrna 表 达 M:DNA MarkerⅠ(100~600bp);U: 未 转 染 组 ;Sc: 转 染 Scrambled 阴 性 对 照 组 ;Si:STAT3 sirna 转 染 组 别 用 Anti STAT3(1 500 稀 释 ) Anti Cyclin D1 (1 500 稀 释 ) Anti Bcl 2(1 200 稀 释 ) 及 Anti bax (1 200 稀 释 ) 兔 抗 人 多 克 隆 抗 体 进 行 杂 交, 二 抗 为 HRP 标 记 的 羊 抗 兔 IgG( 稀 释 ),DAB 显 色 用 凝 胶 成 像 分 析 系 统 分 析 棕 黄 色 条 带 的 积 分 光 密 度 值 用 待 测 条 带 与 同 一 样 品 β actin 条 带 光 密 度 值 的 比 值 代 表 蛋 白 相 对 表 达 量 1.6 Hoechst33258 荧 光 染 色 法 观 察 细 胞 凋 亡 2.2 STAT3 SiRNA 转 染 对 CNE2 细 胞 STAT3 CyclinD1 Bcl 2 和 Bax 蛋 白 表 达 影 响 与 未 转 染 组 和 Scrambled 阴 性 对 照 组 比 较, 转 染 STAT3 组 CNE2 细 胞 的 STAT3 蛋 白 下 调,STAT3 蛋 白 表 达 被 明 显 抑 制, 犉 = , 犘 =0.000; 同 时, 转 染 STAT3 后 CNE2 细 胞 中 Bcl 2( 犉 =49.792, 犘 = 0.000) CyclinD1( 犉 =42.914, 犘 =0.000) 表 达 水 平

19 中华肿瘤防治杂志 ２００９ 年 ８ 月第 １６ 卷第 １６ 期 ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶ ＴＲＥＡＴ Ａｇ ２００９ Ｖ １６ Ｎ １６ １２１９ 显 著 降 低 Ｂｘ 表 达 水 平 升 高 犉 １７ ５０４ 犘 ｍｂ ｄ 阴性对照 组比 较 差 ０ ００３ 与未转染组和 Ｓ 异均有统计学意义 犘 ０ ０５ 图 ２ ２ ３ 细胞形态学改变 与未转 染 组 和 转 染 Ｓ ｍｂ ｄ 的 阴 性 对 照 组 相 比 转染组 ＣＮＥ２ 细 胞 凋 亡 细 胞 数 量 均 明 显 增 加 凋 亡细胞主要表现为细胞核浓缩及细胞核碎裂等典型改 变 与未转染组 和 转 染 Ｓ ｍｂ ｄ 的 阴 性 对 照 组 细 胞 几乎未见显著细胞凋亡形态学改变 图 ３ ２ ４ ＳＴ Ａ Ｔ３ Ｓ ＲＮＡ转染对 ＣＮＥ ２细胞周期和凋亡的影响 流式细胞仪分析 细 胞 周 期 结 果 显 示 与 未 转 染 组 和转染 Ｓ ｍｂ ｄ 的 阴 性 对 照 组 相 比 转 染 组 ＣＮＥ２ 细胞 Ｇ１ 期 细 胞 比 例 明 显 增 加 犉 ８７ ９７５ 犘 ０ ０００ 而 Ｓ 期比例减少 犉 ４６ ５９８ 犘 ０ ０００ 差 图 ２ ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ 转染 ＣＮＥ２ 细胞后相关蛋白的表达 异有统计学意义 表 １ 转染组 ＣＮＥ２ 细胞 凋亡率 显 Ｕ 未转染组 Ｓ 转 染 Ｓ ｍｂ ｄ 的 阴 性 对 照 组 Ｓ ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ 转 著高于对照组 犉 ７４ １５８ 犘 ０ ０００ 见表 １ 染组 图 ３ 各组 ＣＮＥ２ 细胞的凋亡情况 Ｈｈ ３３２５８ 荧光染色 ２００ Ａ 未转染组 Ｂ 转染 Ｓ ｍｂ ｄ 的阴性对照组 Ｃ ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ 转染组 表 １ ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ 对 ＣＮＥ２ 细胞凋亡和细胞周期的影响 狓 ±狊 组别 细胞周期 凋亡率 狀 Ｇ１ Ｓ Ｇ２ Ｍ ５７ ９８±４ １９ １７ ３９±２ ６４ ２２ ６３±３ ７４ ３ ４２±０ ５７ ６１ ８５±２ ３１ １８ ５０±２ ２６ １９ ６６±２ ０５ １６ ４±３ ７８ ８０ ０９±２ ３７ Ｕ ｄ ６ ３ ２０±１ ７４ Ｓ ｍｂ ｄ ６ ＳＴＡＴ３ ＲＮＡ ６ ６ ９８±１ ９２ ７ ９２±１ １５ ｍｂ ｄ 组比较 犘 ０ ０５ 与未转染组和转染 Ｓ ３ 讨论 细 胞 信 号 传 导 子 和 转 录 激 活 子 ３ ｇ ｄ ｄ ｖ ３ ＳＴＡＴ３ 是 转 录信号传导子与激活 子 家 族 的 重 要 成 员 其 信 号 传 导 亡 ９ 在维持内环境稳定发挥积极作用 机体内多数 发 生遗传学改变或不稳定的细胞通过这一死亡方式被清 除 如果机体内凋亡过程受到抑制会导致遗传学改变 或不稳定的细胞异常 累 积 增 加 细 胞 发 生 癌 变 的 可 能 性 Ｋ 等 １０ 利 用 ＲＮＡ 干 扰 技 术 研 究 证 实 ｇ 通路与细胞的生长 增 殖 分 化 凋 亡 及 炎 性 反 应 密 切 ＳＴＡＴ３ 异常激活促进乳腺癌细胞的生长 抑制细胞的 相关 该通路持续激 活 可 导 致 细 胞 异 常 增 殖 和 恶 性 转 凋亡 Ｋ ｋｖ 等 １１ 和 Ｋ ｂ 等 １２ 用相同的研究 化 １ 目前已有许多研究发现 在结直 肠癌 ２ 胃 癌 ３ 途径分别在脑星形细胞瘤和结直肠癌中发现相同的结 肺癌 ４ 头颈部 鳞 癌 ５６ 前 列 腺 癌 ７ 和 宫 颈 鳞 癌 ８ 等 果 本研究以人鼻咽癌 ＣＮＥ２ 细胞系为对象 用 ＲＮＡ 人类肿瘤中存在着 ＳＴＡＴ３ 异常激 活 现 象 细 胞 凋 亡 干扰方法阻断 ＳＴＡＴ３ 基因的表达 观察 ＳＴＡＴ３ 基因 Ａ 又 称 程 序 性 细 胞 死 亡 ｇ ｍｍｄ 对肿瘤 细 胞 凋 亡 的 影 响 结 果 表 明 鼻 咽 癌 细 胞 中 ｄ ｈ ＰＣＤ 是 由 基 因 控 制 的 细 胞 自 主 的 有 序 性 死 ＳＴＡＴ３ 基因沉默后 ＣＮＥ２ 细胞发生显著凋亡形态学

20 1220 刘 伟, 等 真 核 载 体 介 导 STAT3 基 因 沉 默 诱 导 CNE2 细 胞 凋 亡 的 研 究 变 化 ;G 1 期 出 现 明 显 阻 滞, 凋 亡 细 胞 比 例 明 显 增 多 说 明 鼻 咽 癌 细 胞 中 STAT3 信 号 通 路 与 细 胞 周 期 阻 滞 和 细 胞 凋 亡 相 关, 在 鼻 咽 癌 的 发 生 发 展 中 有 着 重 要 的 作 用 Bcl 2 家 族 是 一 个 较 大 的 与 凋 亡 相 关 的 基 因 群, 目 前 已 发 现 了 21 个 成 员 这 其 中 又 分 为 两 类, 一 类 为 抗 凋 亡 分 子, 包 括 Bcl 2 Bcl XL Bcl W 和 Bfl 1 等 ; 另 [13 14] 一 类 为 促 凋 亡 分 子, 包 括 Bax Bak 和 Bad 等 促 凋 亡 分 子 通 过 与 抗 凋 亡 分 子 形 成 杂 二 聚 体, 减 少 抗 凋 [15] 亡 分 子 的 同 源 二 聚 体 化, 从 而 促 进 细 胞 的 凋 亡 已 有 研 究 表 明,Bcl 2 家 族 分 子 对 鼻 咽 癌 细 胞 凋 亡 有 着 关 [16] 键 的 作 用 本 研 究 结 果 表 明,Bcl 2 蛋 白 表 达 明 显 减 少, 同 时 Bax 蛋 白 表 达 明 显 增 多, 并 伴 随 着 G 1 期 的 重 要 调 控 蛋 白 CyclinD1 表 达 降 低, 提 示 STAT3 信 号 通 路 可 能 通 过 调 节 Bcl 2 Bax 和 CyclinD1 表 达 来 导 致 肿 瘤 细 胞 周 期 阻 滞 和 细 胞 凋 亡 的 总 之,STAT3 信 号 通 路 可 通 过 抑 制 鼻 咽 癌 细 胞 凋 亡 来 促 进 肿 瘤 的 发 生 发 展, 调 节 Bcl 2 和 Bax 表 达 可 能 是 其 机 制 之 一 同 时 STAT3 基 因 可 能 成 为 鼻 咽 癌 [17] 治 疗 的 一 个 潜 在 靶 点 参 考 文 献 [1] StepkowskiS M,Chen W,RossJA,etal.STAT3:animpor tantregulatorofmultiplecytokinefunctions[j].transplanta tion,2008,85(10): [2] ParkJK,HongR,KimKJ,etal.Significanceofp STAT3ex pressioninhumancolorectaladenocarcinoma[j].oncolrep, 2008,20(3): [3] ZhaoA G,LiT,YouSF,etal.EfectsofWeiChangAnon expressionofmultiplegenesinhumangastriccancergraftedonto nudemice[j].worldjgastroenterol,2008,14(5): [4] TyagiA,SinghRP,RamasamyK,etal.Growthinhibitionand regressionoflungtumorsbysilibinin:modulationofangiogene sisby macrophage associatedcytokinesandnuclearfactor kap pabandsignaltransducersandactivatorsoftranscription3[j]. CancerPrevRes(PhilaPa),2009,2(1): [5] YamatodaniT,EkbladL,KjelénE,etal.WennerbergJ.Epi dermalgrowthfactorreceptorstatusandpersistentactivationof Aktandp44/42 MAPK pathwayscorrelate withtheefectof cetuximabinheadandneckandcoloncancercellines[j].j CancerResClinOncol,2009,135(3): [6] 韩 安 家, 宗 永 生, 何 杰 华, 等.STAT3 在 鼻 咽 癌 中 的 表 达 特 征 及 其 与 bcl 2 和 LMP1 表 达 的 关 系 [J]. 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2005, 12(2): [7] Tam L,McGlynnL M,TraynorP,etal.Expressionlevelsof thejak/statpathwayinthetransitionfrom hormone sensi tiveto hormone refractory prostatecancer[j].brj Cancer, 2007,97(3): [8] 舒 宽 勇 许 娟 秀. 宫 颈 鳞 癌 组 织 IL 6 和 Stat3 蛋 白 表 达 及 其 与 临 床 病 理 因 素 相 关 性 的 研 究 [J]. 中 华 肿 瘤 防 治 杂 志,2008, 15(18): [9] GrimmS,LinB.Geneticcelculturescreensrevealmitochondri alapoptosiscontrol[j].frontbiosci,2009,14: [10] KunigalS,LakkaSS,SodadasuP K,etal.Stat3 sirnain ducesfas mediatedapoptosisinvitroandinvivoinbreastcancer [J].IntJOncology,2009,34(5): [11] KonnikovaL,KoteckiM,Kruger M M,etal.Knockdownof STAT3expressionby RNAiinducesapoptosisinastrocytoma cels[j].bmccancer,2003,3:23. [12] KusabaT,NakayamaT,YamazumiK,etal.Expressionofp STAT3inhumancolorectaladenocarcinomaandadenoma;cor relationwithclinicopathologicalfactors[j].jclinpathol,2005, 58(8): [13] LevineB,SinhaS,KroemerG.Bcl 2familymembers:dualreg ulatorsofapoptosisandautophagy[j].autophagy,2008,4(5): [14] WongW W,PuthalakathH.Bcl 2familyproteins:thesentinels ofthemitochondrialapoptosispathway[j].iubmblife,2008, 60(6): [15] RealPJ,SierraA,DeJuanA,etal.Resistancetochemothera pyvia Stat3 dependentoverexpression of Bcl 2in metastatic breastcancercels[j].oncogene,2002,21(50): [16] YipK W,ShiW,Pintilie M,etal.Prognosticsignificanceof theepstein Barrvirus,p53,Bcl 2andsurvivininnasopharynge alcancer[j].clincancerresearch,2006,12(19): [17] AdachA,ElertA,KaminskaB.Molecularcharacterizationof STATsignalingininflammationandtumorigenesis[J].Methods MolBiol,2009,512: 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : ( 编 辑 : 杨 靖 )