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1 微 生 物 学 通 报 Microbiology China Jul. 20, 2013, 40(7): by Institute of Microbiology, CAS 研 究 报 告 开 放 条 件 下 烟 管 菌 XX-2 对 孔 雀 石 绿 染 料 的 高 效 降 解 何 兴 兵 1* 林 永 慧 1 韩 国 民 2 王 成 1 周 小 成 1 叶 佳 1 何 再 华 (1. 吉 首 大 学 生 物 资 源 与 环 境 科 学 学 院 湖 南 吉 首 ) (2. 安 徽 农 业 大 学 生 命 科 学 学 院 安 徽 合 肥 ) 1 田 启 建 1 摘 要 : 目 的 评 价 白 腐 真 菌 Bjerkandera adusta XX-2 处 理 孔 雀 石 绿 染 料 废 水 的 能 力, 为 其 在 染 料 废 水 中 的 应 用 提 供 参 考 依 据 方 法 采 用 批 次 实 验 在 开 放 条 件 下 研 究 通 气 ph 温 度 染 料 初 始 浓 度 培 养 时 间 碳 源 氮 源 金 属 离 子 盐 度 等 因 子 对 该 菌 降 解 孔 雀 石 绿 的 影 响 同 时 利 用 植 物 萌 发 微 生 物 抑 菌 和 水 生 动 物 致 死 实 验 对 降 解 产 物 进 行 毒 性 测 试 结 果 B. adusta XX-2 菌 株 在 开 放 的 非 灭 菌 条 件 下 也 能 高 效 降 解 孔 雀 石 绿 例 如, 在 初 始 浓 度 为 120 mg/l 且 以 孔 雀 石 绿 为 唯 一 营 养 源 的 条 件 下 降 解 率 也 能 达 到 60% 静 置 培 养 和 摇 动 培 养 呈 现 出 几 乎 相 同 的 降 解 率, 这 可 以 为 技 术 应 用 节 约 动 力 成 本 最 适 降 解 ph 与 温 度 分 别 为 7.0 和 25 C 在 上 述 参 数 体 系 的 优 化 基 础 上, 分 别 进 行 了 碳 源 氮 源 与 金 属 离 子 的 添 加 优 化 实 验, 结 果 显 示 低 浓 度 的 碳 源 ( 如 柠 檬 酸 钠 ) 氮 源 ( 如 氯 化 铵 ) 和 金 属 离 子 ( 如 Zn 2+ ) 均 可 大 大 提 高 B. adusta XX-2 对 孔 雀 石 绿 的 脱 色 效 率 同 时 B. adusta XX-2 的 降 解 也 能 在 很 高 的 盐 浓 度 下 进 行 毒 性 测 试 表 明 降 解 后 的 染 料 对 植 物 微 生 物 水 生 生 物 的 毒 性 大 大 减 少 结 论 B. adusta XX-2 菌 株 在 处 理 染 料 废 水 方 面 具 有 很 大 的 应 用 潜 力 关 键 词 : 烟 管 菌, 孔 雀 石 绿, 降 解, 染 料 废 水, 毒 性 测 试 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (No ); 湖 南 省 自 然 科 学 基 金 项 目 (No. 13JJ3092); 吉 首 大 学 科 研 基 金 项 目 (No. jsdxkyzz200901, 10JD028); 喀 斯 特 草 地 生 态 系 统 研 究 生 培 养 创 新 基 地 项 目 (No A); 湖 南 省 生 态 学 重 点 学 科 建 设 项 目 (No. JSU0713Z02); 安 徽 省 自 然 科 学 基 金 项 目 (No QC70) * 通 讯 作 者 :Tel: ; : hexb@jsu.edu.cn 收 稿 日 期 : ; 接 受 日 期 :

2 1164 微 生 物 学 通 报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.7 Efficient degradation of Malachite Green dye by Bjerkandera adusta XX-2 strain in an air-opening system HE Xing-Bing 1* LIN Yong-Hui 1 HAN Guo-Min 2 WANG Cheng 1 ZHOU Xiao-Cheng 1 YE Jia 1 HE Zai-Hua 1 TIAN Qi-Jian 1 (1. College of Biology and Environmental Sciences, Jishou University, Jishou, Hunan , China) (2. School of Life Sciences, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui , China) Abstract: [Objective] Our aim was to evaluate the ability of Bjerkandera adusta XX-2 strain in degrading Malachite Green (MG) dye in order to provide reference for its application in treating dye wastewater. [Methods] Batch experiment was carried out to decolorize MG dye in an air-opening system in this study. Experimental parameters, such as oxygen demand, initial ph value, temperature, initial dye concentration, incubation time, carbon source, nitrogen source, metal ion and salinity, was investigated to analyze their effect on the decolorization of MG. The toxicity test of decolorized products on plant, aquatic animal and microorganism was also carried out in this study. [Results] B. adusta XX-2 strain showed efficient decolorization of MG dye without supplying basic salt medium in non-sterile culture, for example, decolorization rate still reached above 60% at the initial dye concentration of 120 mg/l, using MG as sole nutrient source. Static culture presented the similar MG decolorization rate as shaken culture, indicative of low-cost application potential for B. adusta XX-2 strain. The optimal ph and temperature for decolorization were 7.0 and 25 C, respectively. Based on the system with optimal parameters, carbon source, nitrogen source and metal ion were separately added for choosing appropriate dosage. The results indicated that carbon source (e.g. sodium citrate), nitrogen source (e.g. ammonium chloride) and metal ion (e.g. Zn 2+ ), even at a low concentration, all could greatly improve the efficiency of decolorization. Moreover, B. adusta XX-2 could decolorize MG in dye solution with high salinity. Toxicity test showed toxicity of decolorized products on plant, aquatic animal and microorganism greatly declined, in comparison with non-decolorized MG dye. [Conclusion] B. adusta XX-2 strain had a good application potential for treating dye wastewater. Keywords: Bjerkandera adusta, Malachite Green, Degradation, Dye wastewater, Toxicity test 印 染 工 业 是 世 界 上 最 大 的 工 业 之 一, 它 包 括 纺 织 业 皮 革 化 妆 品 纸 业 印 刷 业 塑 料 制 造 制 药 和 快 餐 业 等, 同 时 它 也 是 世 界 上 最 大 的 污 染 源 之 一 [1] 如 果 染 料 废 水 被 排 到 河 水 中 会 对 水 生 生 物 的 肝 脏 鳃 肾 脏 肠 生 殖 腺 腺 垂 体 细 胞 产 生 有 害 的 影 响 [2 3] 因 此, 染 料 的 降 解 已 经 被 认 为 是 纺 织 业 废 水 处 理 的 一 个 非 常 重 要 的 问 题 [4] 各 种 各 样 的 物 理 或 化 学 方 法 已 经 被 用 于 染 料 废 水 的 处 理, 如 吸 附 离 子 交 换 凝 聚 膜 过 滤 臭 氧 法 等 [5] 用 物 理 化 学 方 法 除 去 孔 雀 石

3 何 兴 兵 等 : 开 放 条 件 下 烟 管 菌 XX-2 对 孔 雀 石 绿 染 料 的 高 效 降 解 1165 绿 相 对 来 说 过 程 复 杂 耗 时 且 效 率 不 高 [6] 而 生 物 方 法 因 其 是 一 种 环 境 友 好 型 的 处 理 方 式, 日 益 受 到 人 们 的 关 注 现 在, 越 来 越 多 的 实 验 研 究 报 道 了 微 生 物 对 染 料 的 降 解, 特 别 是 白 腐 真 菌 对 染 料 的 降 解 [7] 白 腐 真 菌 是 一 种 对 环 境 中 的 毒 性 物 质 具 有 很 高 耐 受 性 的 生 物 体, 这 也 使 它 们 成 为 生 物 降 解 最 理 想 的 菌 种 它 的 木 质 素 降 解 酶 系 主 要 由 木 质 素 过 氧 化 物 酶 锰 过 氧 化 物 酶 和 漆 酶 组 成, 故 能 降 解 很 多 难 降 解 复 合 物 [8 9] 孔 雀 石 绿 (Malachite Green, MG) 是 一 种 已 经 被 广 泛 应 用 于 工 业 的 三 苯 甲 烷 类 染 料, 它 影 响 人 类 的 免 疫 系 统 生 殖 系 统, 是 一 种 具 有 致 癌 性 的 有 毒 物 质 [10] 另 外, 直 接 接 触 孔 雀 石 绿 会 刺 激 皮 肤 损 伤 眼 睛 [11] 孔 雀 石 绿 已 经 被 美 国 食 品 与 药 物 管 理 局 提 名 为 首 要 的 致 癌 化 学 物 质 [12], 并 且 已 经 被 一 些 国 家 和 美 国 食 品 与 药 物 管 理 局 禁 止 使 用 [13] 但 是 由 于 低 成 本 易 得 和 高 效 性 等 特 点, 孔 雀 石 绿 仍 然 被 世 界 上 的 某 些 地 区 所 使 用, 而 且 据 报 道 孔 雀 石 绿 很 难 从 水 溶 液 中 清 除 [14] 我 们 从 野 外 采 集 的 大 型 真 菌 中 通 过 筛 选 获 得 了 一 株 白 腐 真 菌 Bjerkandera adusta XX-2 能 够 高 效 降 解 高 浓 度 孔 雀 石 绿 水 溶 液, 且 该 菌 株 能 够 在 低 成 本 的 培 养 基 中 短 时 间 内 (6 d 以 内 ) 形 成 较 为 致 密 的 菌 膜, 具 有 较 强 的 应 用 潜 力 [15] 此 菌 种 经 常 被 用 于 降 解 偶 氮 染 料 和 酞 青 染 料 等 [16 17] 据 我 们 所 知, B. adusta XX-2 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 报 道 很 少 而 且 相 对 于 需 要 添 加 KirK 培 养 基 土 豆 培 养 基 MSN 培 养 基 的 降 解 来 说, B. adusta XX-2 能 在 开 放 条 件 下 仅 利 用 孔 雀 石 绿 作 为 唯 一 碳 源 就 可 高 效 降 解 孔 雀 石 绿 此 实 验 的 主 要 目 的 在 于 研 究 ph 温 度 染 料 初 始 浓 度 碳 源 氮 源 金 属 离 子 和 盐 度 等 实 验 参 数 对 B. adusta XX-2 降 解 孔 雀 石 绿 的 影 响, 同 时 也 进 行 了 毒 性 测 试 以 分 析 降 解 后 产 物 的 毒 性 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 菌 种 采 集 筛 选 和 鉴 定 : 菌 种 B. adusta XX-2 为 大 型 真 菌, 采 自 湖 南 省 湘 西 自 治 州 小 溪 国 家 自 然 保 护 区, 实 验 室 内 所 用 接 种 体 为 其 孢 子 萌 发 后 的 丝 状 菌 丝 体 染 料 脱 色 筛 选 采 用 染 料 固 体 培 养 基 ( 染 料 -PDA: 100 mg/l 孔 雀 石 绿 +20% 土 豆 浸 出 液 +2% 葡 萄 糖 +2% 琼 脂 ) 筛 选 法, 具 体 参 见 田 启 建 等 研 究 [18] 菌 种 B. adusta XX-2 采 用 ITS 序 列 测 序 方 法 进 行 鉴 定, 具 体 参 见 He 等 研 究 [19] 染 料 和 试 剂 : 孔 雀 石 绿 (C 23 H 25 C l N 2, 分 子 量 , λ max =680), 实 验 中 所 用 试 剂 为 国 产 分 析 纯 ( 天 津 石 英 钟 厂 霸 州 市 化 工 分 厂, Q/12YQ ) 染 料 溶 液 母 液 浓 度 为 1 g/l ( 按 1 g 孔 雀 石 绿 染 料 溶 于 1 L 去 离 子 水 的 比 例 制 备 ), 目 标 浓 度 的 染 料 由 去 离 子 水 连 续 稀 释 获 得 主 要 仪 器 设 备 : T6 新 世 纪 紫 外 可 见 分 光 光 度 计, 北 京 普 析 通 用 ; BSC-250 恒 温 培 养 箱, 上 海 博 迅 ; HZQ-F160 全 温 振 荡 培 养 箱, 哈 尔 滨 东 联 ; AUY120 电 子 分 析 天 平, SHIMADZU 1.2 方 法 接 种 体 的 制 备 : 将 培 养 于 PDA (Potato dextrose agar) 培 养 基 上 的 菌 种 接 种 于 装 有 50 ml PDB (Potato dextrose broth) 培 养 基 (g/l; 土 豆 浸 出 液 200, 葡 萄 糖 20) 的 150 ml 锥 形 瓶 中, 28 C 恒 温 摇 瓶 培 养 5 d, 形 成 菌 丝 球, 用 无 菌 玻 璃 棒 将 摇 瓶 中 的 菌 丝 球 充 分 打 碎, 用 移 液 枪 吸 取 1 ml 接 种 于 装 有 20 ml PDB 培 养 基 的 直 径 为 9 cm 的 无 菌 培 养 皿 中, 28 C 恒 温 静 置 培 养 6 7 d, 得 到 实 验 所 需 菌 膜, 作 为 染 料 降 解 过 程 中 的 接 种 体 降 解 实 验 : 采 用 不 同 批 次 实 验 在 开 放 系 统 ( 即 非 灭 菌 情 况 下, 降 解 体 系 直 接 与 外 界 微 生 物 接 触, 也 即 是 考 虑 了 外 源 微 生 物 的 竞 争 ) 中 分 析 不 同 参 数 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 影 响 首 先 静 置 与 摇

4 1166 微 生 物 学 通 报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.7 瓶 (125 r/min) 两 种 培 养 条 件 用 于 分 析 通 气 状 况 对 降 解 过 程 的 影 响 在 此 基 础 上 分 别 研 究 不 同 初 始 ph ( ) 不 同 温 度 (20 C 25 C 30 C 35 C 40 C) 不 同 染 料 初 始 浓 度 以 及 培 养 时 间 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 上 述 各 参 数 对 降 解 的 影 响 实 验 研 究 均 以 前 一 参 数 的 优 化 ( 或 选 择 ) 结 果 为 前 提 进 行 通 过 这 些 参 数 的 选 择 建 立 起 相 应 的 降 解 参 数 体 系, 加 入 不 同 的 碳 源 ( 酒 石 酸 钠 果 糖 蔗 糖 草 酸 葡 萄 糖 柠 檬 酸 钠 乙 酸 钠 木 糖 乳 糖 丙 二 酸 肌 醇 间 苯 三 酚 草 酸 ) 氮 源 ( 氯 化 氨 硝 酸 铵 尿 素 蛋 白 胨 硝 酸 钠 牛 肉 膏 酒 石 酸 氨 丙 烯 酰 胺 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 氨 基 乙 酸 ) 或 金 属 离 子 (Cu 2+ Zn 2+ Mn 2+ Hg 2+ Cd 2+ Ag + Pb 2+ Ca 2+ Co 2+ Mg 2+ Fe 3+ Ba 2+ Ni + ), 从 中 选 出 降 解 最 佳 的 碳 源 氮 源 和 金 属 离 子, 并 选 取 不 同 浓 度 的 最 佳 碳 源 氮 源 和 金 属 离 子 利 用 NaCl 来 确 定 菌 株 对 盐 度 的 耐 受 能 力, 同 时 对 该 菌 株 的 连 续 脱 色 能 力 进 行 测 试 降 解 实 验 发 生 在 150 ml 的 锥 形 瓶 中, 包 含 一 个 菌 膜 与 50 ml 的 孔 雀 石 绿 溶 液 所 有 处 理 均 设 置 3 个 重 复, 以 加 入 菌 膜 的 时 刻 为 起 点, 每 24 h 对 锥 形 瓶 中 的 染 料 降 解 液 进 行 离 心, 以 测 定 其 吸 光 值, 对 照 为 不 加 菌 膜 的 染 料 溶 液 毒 性 测 试 : 毒 性 测 试 以 去 离 子 水 为 对 照, 研 究 120 mg/l 的 孔 雀 石 绿 染 料 与 其 降 解 5 d 后 的 降 解 产 物 对 植 物 水 生 动 物 及 微 生 物 的 毒 性, 所 有 的 溶 液 测 试 前 均 用 0.22 µm 微 孔 滤 膜 除 菌 植 物 毒 性 测 试 以 豌 豆 (Pisum sativum) 和 豇 豆 (Vigna unguiculata) 为 材 料, 种 子 使 用 前 于 25 C 温 水 中 浸 泡 12 h, 选 取 膨 胀 的 种 子 用 于 测 试 3 层 滤 纸 铺 在 培 养 皿 的 底 部, Pa 灭 菌 30 min, 冷 却 后 将 10 粒 种 子 均 匀 置 于 培 养 皿 中 的 滤 纸 上 面 种 子 每 天 用 2 ml 相 应 溶 液 喷 洒 2 次, 以 保 持 种 子 萌 发 所 需 要 的 湿 度 种 子 置 于 28 C 培 养 箱 中 萌 发, 5 d 后 测 定 每 个 培 养 皿 中 种 子 的 发 芽 率 胚 芽 胚 轴 胚 根 的 长 度 以 及 三 者 的 干 重 (75 C 烘 48 h) 每 一 个 含 有 10 粒 种 子 的 培 养 皿 是 一 个 重 复, 实 验 共 5 个 重 复 微 生 物 毒 性 测 试 以 2 种 细 菌 [ 枯 草 芽 孢 杆 菌 (Bacillus subtilis) 大 肠 杆 菌 (Esherichia coli)] 和 2 种 真 菌 [ 黑 曲 霉 (Aspergillus niger) 黄 曲 霉 (Aspergillus flavus)] 为 受 试 菌 种, 采 用 圆 纸 片 法 [20] 所 用 细 菌 和 真 菌 分 别 在 37 C 和 28 C 培 养 24 h 后 测 定 抑 菌 圈 的 大 小 ( 直 径 ), 实 验 共 设 10 个 重 复 水 生 动 物 毒 性 测 试 以 青 鳉 (Oryzias latipes) 和 田 螺 (Bellamya aeroginosa) 为 受 试 水 生 动 物 分 别 将 10 条 小 青 鳉 和 田 螺 分 别 放 入 装 有 500 ml 120 mg/l 的 孔 雀 石 绿 染 料 溶 液 500 ml 其 5 d 降 解 产 物 和 10 d 降 解 产 物 的 开 敞 容 器 里, 置 于 室 温 中, 分 别 记 录 青 鳉 和 田 螺 的 致 死 和 半 致 死 时 间 分 析 方 法 : 菌 株 对 孔 雀 石 绿 的 降 解 能 力 采 用 比 色 法 测 定 每 24 h 取 一 次 培 养 液, 于 r/min 离 心 5 min, 所 得 上 清 液 于 孔 雀 石 绿 的 最 大 吸 收 波 长 (680 nm) 下 测 定 其 吸 光 度 A 1, 以 不 接 种 菌 膜 的 初 始 染 料 培 养 基 的 吸 光 度 A 2 为 对 照, 其 降 解 率 用 下 列 公 式 计 算 : 降 解 率 (%)=(A 1 A 2 )/A 数 据 分 析 : 不 同 处 理 间 数 据 差 异 比 较 采 用 SPSS 13.0 统 计 软 件 进 行 t-test (2 个 处 理 ) 与 单 因 素 方 差 分 析 (3 个 或 3 个 以 上 处 理 ) 2 结 果 与 分 析 2.1 菌 株 筛 选 鉴 定 以 及 静 置 与 摇 瓶 培 养 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 菌 株 XX-2 菌 丝 体 经 接 种 于 染 料 -PDA 培 养 基 上 显 示 出 明 显 的 脱 色 圈, 显 示 出 一 定 的 降 解 孔 雀 石 绿 的 能 力, 经 ITS 序 列 测 序 (GenBank 登 录 号 KC484654) 并 与 NCBI 数 据 库 已 知 基 因 序 列 进 行 比 对 鉴 定 为 Bjerkandera adusta

5 何 兴 兵 等 : 开 放 条 件 下 烟 管 菌 XX-2 对 孔 雀 石 绿 染 料 的 高 效 降 解 1167 B. adusta XX-2 在 静 置 与 摇 瓶 培 养 条 件 下 ( 温 度 28 C, ph 7.0) 对 孔 雀 石 绿 ( 染 料 初 始 浓 度 为 100 mg/l) 的 降 解 情 况 如 图 1 所 示 结 果 显 示, 降 解 前 期 ( 前 2 天 ) 静 置 培 养 引 起 的 降 解 率 明 显 低 于 摇 瓶 培 养, 但 是 这 种 差 别 在 第 3 天 后 逐 渐 减 小, 第 5 天 时 摇 动 和 静 置 培 养 的 降 解 率 相 差 不 大, 均 达 到 了 90% 以 上 三 苯 甲 烷 类 染 料 的 降 解 需 要 NADH/NADPH 依 赖 的 加 氧 酶, 摇 动 可 能 增 加 了 染 料 溶 液 的 溶 氧 量 使 该 酶 的 活 性 加 强, 从 而 促 进 了 染 料 的 降 解 [21] ; 同 时 摇 动 也 为 菌 体 生 长 提 供 了 更 多 的 氧 气, 使 菌 体 生 长 加 快 [22] 后 期 由 于 底 物 数 量 减 小, 持 续 的 溶 氧 供 应 已 不 能 持 续 快 速 增 加 降 解 量 因 此 只 需 通 过 延 长 降 解 时 间 至 3 d, 就 可 以 实 现 动 力 成 本 的 节 约, 显 示 出 该 菌 株 具 有 较 好 的 应 用 前 景, 静 置 培 养 用 于 本 研 究 后 续 其 它 参 数 或 影 响 因 素 的 分 析 在 该 试 验 中, 孔 雀 石 绿 是 染 料 降 解 体 系 中 唯 一 的 碳 源, 与 其 它 加 入 营 养 肉 汤 [22] 基 础 盐 培 养 [10,23 26] 基 的 脱 色 研 究 相 比, 仍 然 具 有 高 效 的 降 解 [10] 能 力 Ali 等 利 用 2 种 真 菌 对 50 µmol/l 的 孔 雀 石 绿 在 添 加 基 础 盐 培 养 基 的 条 件 下 实 现 了 97.43% (Aspergillus flavus) 和 96.91% (Alternaria solani) 的 脱 色 率, 降 解 效 率 明 显 低 于 本 研 究 中 所 使 用 的 B. adusta XX-2 菌 株 同 时, 本 研 究 采 用 开 放 式 的 降 解 体 系, 允 许 空 气 中 的 微 生 物 图 1 静 置 与 摇 瓶 培 养 对 孔 雀 石 绿 脱 色 的 影 响 Fig. 1 Effect of static and shaken culture on decolorization of MG by B. adusta XX-2 strain 进 入 该 体 系, 显 示 了 B. adusta XX-2 菌 株 在 与 外 源 微 生 物 共 存 竞 争 的 情 况 下 仍 然 能 够 发 挥 自 身 的 降 解 能 力 2.2 ph 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 ph 是 影 响 微 生 物 降 解 染 料 的 重 要 环 境 影 响 因 素 之 一, 本 研 究 中 孔 雀 石 绿 的 降 解 实 验 控 制 在 ph 为 的 范 围 内 进 行 ( 由 于 所 用 孔 雀 石 绿 在 ph 超 过 7.0 时 会 出 现 浑 浊, 所 以 暂 未 进 行 较 高 的 ph 影 响 实 验 ) 实 验 ( 静 置 培 养, 28 C, 染 料 初 始 浓 度 120 mg/l) 结 果 显 示 孔 雀 石 绿 在 ph 值 为 5.0 及 以 下 的 条 件 时 降 解 率 极 低, 最 高 仅 有 1.11%, 甚 至 在 ph 为 时 不 发 生 降 解, 这 说 明 酸 性 环 境 不 适 合 于 B. adusta XX-2 菌 种 的 降 解 一 种 可 能 是 酸 性 环 境 抑 制 了 菌 种 本 身 的 生 长, 另 一 种 可 能 是 酸 性 环 境 抑 制 了 染 料 降 解 酶 的 表 达 许 多 白 腐 真 菌 显 现 出 低 ph 降 解 的 特 性 [27 29], 但 与 之 相 反, 在 本 实 验 中 随 着 ph 的 上 升, B. adusta XX-2 的 降 解 率 也 在 ph 7.0 时 达 到 70.09%, 这 与 [25] Ayed 等 研 究 Sphingomonas paucimobilis 菌 株 降 解 孔 雀 石 绿 时 对 ph 适 应 性 的 结 果 相 似 [30] Daneshvar 等 利 用 藻 类 对 孔 雀 石 绿 进 行 降 解 时 也 发 现 碱 性 状 态 有 利 于 染 料 的 降 解, 认 为 染 料 溶 液 的 初 始 ph 是 各 类 影 响 参 数 中 最 为 有 效 的 影 响 [6] 因 素 Chen 等 也 发 现 了 Pandoraea pulmonicola YC32 在 略 偏 碱 的 溶 液 中 对 孔 雀 石 绿 降 解 效 果 更 好 由 于 染 料 废 水 通 常 呈 碱 性 状 态, 所 以 降 解 菌 对 碱 的 耐 受 性 是 进 行 工 业 应 用 时 所 要 考 虑 的 重 要 因 素 之 一 [31] 因 此, B. adusta XX-2 菌 株 更 有 可 能 应 用 于 碱 性 环 境 的 染 料 废 水 处 理 后 续 实 验 的 染 料 溶 液 初 始 ph 设 定 为 培 养 温 度 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 降 解 系 统 在 不 同 的 温 度 下 培 养 120 h, 研 究 温 度 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 研 究 ( 静 置 培 养, ph 7.0, 染 料 初 始 浓 度 为 120 mg/l) 结 果

6 1168 微 生 物 学 通 报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.7 表 明, 在 25 C 时 降 解 率 最 大, 达 到 66%, 这 与 [30] Daneshvar 等 利 用 藻 类 Chlorella sp. 降 解 孔 雀 石 绿 时 的 最 适 温 度 一 致 在 25 C 40 C 的 范 围 内, 降 解 率 随 温 度 的 升 高 而 降 低, 最 低 达 2.93% (35 C) 最 适 降 解 温 度 (25 C) 与 真 菌 活 跃 季 节 的 温 度 非 常 接 近, 有 利 于 菌 种 的 快 速 生 长, 也 是 菌 种 应 用 于 染 料 废 水 降 解 的 有 利 条 件 之 一 后 续 实 验 均 在 最 佳 温 度 25 C 下 进 行 曹 海 鹏 梅 嬛 [22,26,32] 林 少 芳 等 研 究 了 细 菌 对 孔 雀 石 绿 的 降 解, [33] 发 现 最 适 温 度 在 30 C; Daneshvar 等 利 用 藻 类 Cosmarium sp. 对 孔 雀 石 绿 进 行 降 解, 最 适 温 度 高 [25] 达 45 C, Ayed 等 利 用 Sphingomonas paucimobilis 降 解 孔 雀 石 绿 时 的 最 适 温 度 也 与 之 相 似 2.4 初 始 染 料 浓 度 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 从 图 2 ( 静 置 培 养, ph 7.0, 温 度 25 C) 可 以 看 出, B. adusta XX-2 对 孔 雀 石 绿 的 降 解 率 随 着 初 始 染 料 浓 度 的 升 高 而 降 低, 这 与 绝 大 多 数 的 研 究 结 果 相 似 [23,25], 是 因 为 随 着 染 料 浓 度 的 升 高, 染 料 对 微 生 物 的 毒 害 加 大 [34], 同 时 因 为 微 生 物 酶 分 泌 能 力 有 限, 这 种 降 解 效 率 也 会 下 降 当 孔 雀 石 绿 的 浓 度 由 10 mg/l 上 升 到 120 mg/l, 降 解 百 分 率 从 93.72% 下 降 到 61.29% 当 染 料 浓 度 达 到 200 mg/l 时, B. adusta XX-2 菌 株 仍 然 具 有 一 定 降 解 能 力, 降 解 率 大 约 为 24%, 说 明 B. adusta XX-2 菌 株 能 够 忍 耐 较 高 浓 度 孔 雀 石 绿 的 毒 性 [23] Parshetti 等 的 研 究 报 道 了 Kocuria rosea MTCC 1532 能 够 100% 的 降 解 50 mg/l 的 孔 雀 石 绿 溶 液, 但 是 当 孔 雀 石 绿 浓 度 达 到 100 mg/l 时 只 有 6% 的 [35] 降 解 率 ; Youssef 等 也 报 道 Acremonium kiliense 降 解 10 mg/l 孔 雀 石 绿 溶 液 的 降 解 率 也 只 有 [26] 35.48%; 梅 嬛 等 研 究 K4-W 降 解 孔 雀 石 绿 时 发 现 当 染 料 浓 度 超 过 20 mg/l 时, 降 解 效 率 明 显 降 低, 不 到 50% 与 之 相 比, 本 研 究 中 的 B. adusta XX-2 菌 株 表 现 出 更 加 高 效 地 对 孔 雀 石 绿 染 料 的 降 解 2.5 培 养 时 间 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 降 解 百 分 率 随 降 解 时 间 的 变 化 如 图 3 ( 温 度 25 C, 静 置 培 养, ph 7.0, 初 始 染 料 浓 度 120 mg/l) 所 示, 5 6 d 时 的 降 解 率 达 到 了 80% 90%, 6 d 后 随 着 时 间 的 增 加, 降 解 百 分 率 增 加 不 显 著, 降 解 系 统 基 本 达 到 平 衡, 所 以 我 们 选 择 5 d 作 为 实 验 时 间 在 染 料 降 解 初 期 即 前 3 天 的 时 间 内, 降 解 非 常 缓 慢, 这 可 能 是 由 于 B. adusta XX-2 菌 株 对 染 料 溶 液 有 一 个 适 应 驯 化 期, 同 时 也 可 能 是 由 于 初 期 分 解 酶 的 分 泌 量 较 小 导 致 [7] 的 Asgher 等 也 从 Schizophyllum commune 降 Fig. 2 图 2 初 始 染 料 浓 度 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 影 响 Effect of initial dye concentration on decolorization of MG by B. adusta XX-2 strain

7 何 兴 兵 等 : 开 放 条 件 下 烟 管 菌 XX-2 对 孔 雀 石 绿 染 料 的 高 效 降 解 1169 图 3 培 养 时 间 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 影 响 Fig. 3 Effect of incubation time on decolorization of MG by B. adusta XX-2 strain 解 孔 雀 石 绿 的 过 程 中 观 察 到 了 相 似 的 结 果 本 实 验 同 时 将 脱 色 率 随 时 间 的 变 化 数 据 进 行 了 动 力 学 模 拟, 发 现 B. adusta XX-2 菌 株 对 孔 雀 石 绿 的 降 解 行 为 符 合 一 阶 动 力 曲 线, 即 lnc= t (R 2 = , C 代 表 降 解 后 的 染 料 浓 度, t 代 表 降 解 的 天 数 ) 2.6 碳 源 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 碳 源 是 微 生 物 获 取 能 量 的 重 要 营 养 元 素 之 一, 染 料 降 解 菌 对 不 同 的 碳 源 具 有 不 同 的 利 用 能 力, 分 别 向 染 料 溶 液 中 添 加 酒 石 酸 钠 (ST) 果 糖 (FR) 蔗 糖 (CS) 葡 萄 糖 (G) 柠 檬 酸 钠 (SC) 乙 酸 钠 (SA) 木 糖 (XY) 乳 糖 (LA) 丙 二 酸 (MC) 肌 醇 (IN) 间 苯 三 酚 (PH) 和 草 酸 (AC), 使 最 终 浓 度 达 到 5 g/l 由 图 4 ( 静 置 培 养, 25 C, ph 7.0, 染 料 初 始 浓 度 120 mg/l) 可 知, 最 佳 碳 源 是 柠 檬 酸 钠 (SC), 在 没 有 其 它 基 础 盐 培 养 基 的 情 况 下 其 降 解 百 分 率 可 达 97.86% 然 而 在 许 多 其 它 染 料 降 解 的 研 究 中 葡 萄 糖 是 使 染 料 降 解 效 果 最 好 的 添 加 碳 源 之 一, 这 归 因 于 葡 萄 糖 是 多 数 微 生 物 最 容 易 利 用 的 营 养 物 质, 如 Raghukumar 和 Rivonkar [36] 研 究 表 明 白 腐 真 菌 Flavodon flavus 可 以 高 效 利 用 [37] 葡 萄 糖 降 解 染 料 废 水 ; 梁 红 昌 等 报 道 泡 盛 曲 霉 以 葡 萄 糖 为 碳 源 的 查 氏 培 养 基 脱 色 效 果 最 好 ; 林 [38] 永 慧 等 研 究 显 示 Mucoromycotina sp. 在 添 加 葡 萄 糖 为 碳 源 的 Kirk 培 养 基 中 脱 色 最 好 ; 田 启 建 [39] 等 发 现 撕 裂 蜡 孔 菌 P2 对 添 加 葡 萄 糖 的 橙 黄 G 染 料 废 水 的 降 解 效 果 最 佳 为 了 研 究 最 佳 碳 源 浓 度 对 降 解 的 影 响, 不 同 浓 度 的 柠 檬 酸 钠 添 加 到 染 料 溶 液 中, 显 示 柠 檬 酸 钠 浓 度 的 改 变 对 B. adusta XX-2 降 解 的 影 响 不 是 很 大, 降 解 率 大 约 在 86% 93% 之 间, 所 以 从 节 约 成 本 的 角 度 来 讲, 1 g/l 的 柠 檬 酸 钠 浓 度 更 适 合 实 际 的 孔 雀 石 绿 降 解 2.7 氮 源 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 分 别 向 染 料 溶 液 中 添 加 氯 化 氨 硝 酸 铵 硫 酸 铵 尿 素 蛋 白 胨 硝 酸 钠 牛 肉 膏 酒 石 酸 氨 丙 烯 酰 胺 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 和 氨 基 乙 酸, 使 最 终 浓 度 达 到 0.2 g/l 不 同 氮 源 条 件 下 的 染 料 降 解 研 究 ( 静 置 培 养, 25 C, ph 7.0, 染 料 初 始 浓 度 120 mg/l) 表 明 所 有 选 择 的 氮 源 都 能 很 大 程 度 上 促 进 B. adusta XX-2 菌 株 对 孔 雀 石 绿 的 降 解, 染 料 降 解 率 在 95% 98% 之 间 ( 高 出 无 氮 源 添 加 的 处 Fig. 4 图 4 不 同 碳 源 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 影 响 Effect of carbon source on decolorization of MG by B. adusta XX-2 strain

8 1170 微 生 物 学 通 报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.7 理 近 25%), 其 中 以 氯 化 氨 略 为 显 著 氮 素 的 添 加 可 能 促 进 了 菌 丝 量 的 生 长, 进 一 步 提 高 了 染 料 降 解 酶 的 分 泌, 从 而 提 高 了 降 解 效 率 不 同 的 研 究 结 果 显 示 了 不 同 微 生 物 对 氮 源 的 利 用 程 度 不 同, [26] 如 梅 嬛 等 报 道 Raoultella sp. 降 解 孔 雀 石 绿 时 对 [39] 有 机 氮 源 的 利 用 明 显 好 于 无 机 氮 源 ; 田 启 建 等 研 究 发 现 撕 裂 蜡 孔 菌 P2 降 解 橙 黄 G 染 料 时 对 硝 [38] 酸 铵 的 利 用 最 为 有 效 ; 而 林 永 慧 等 的 研 究 却 表 明 硫 酸 铵 是 利 用 最 为 有 效 的 氮 源 同 时, 本 研 究 也 分 析 了 不 同 浓 度 的 氯 化 氨 对 降 解 的 影 响, 结 果 表 明 氯 化 氨 浓 度 的 改 变 对 降 解 效 果 的 影 响 也 不 是 很 大, 同 碳 源 一 样, 降 解 率 基 本 在 90% 95% 之 间, 从 节 约 成 本 以 及 避 免 水 体 富 营 养 化 的 角 度 考 虑, 0.1 g/l 的 氯 化 氨 更 符 合 实 际 染 料 废 水 降 解 的 要 求 2.8 金 属 离 子 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 由 于 染 料 废 水 中 一 般 含 有 各 种 各 样 的 金 属 离 子, 我 们 研 究 了 不 同 金 属 离 子 对 染 料 降 解 的 影 响, 分 别 向 染 料 溶 液 中 添 加 Cu 2+ Zn 2+ Mn 2+ Hg 2+ Cd 2+ Ag + Pb 2+ Ca 2+ Co 2+ Mg 2+ Fe 3+ Ba 2+ 和 Ni +, 使 其 最 终 浓 度 为 0.1 mmol/l 图 5 ( 静 置 培 养, 25 C, ph 7.0, 染 料 初 始 浓 度 120 mg/l) 显 示 最 佳 金 属 离 子 为 Zn 2+, 其 次 为 Cu 2+, 金 剑 [40] 等 报 道 称 Zn 2+ 能 够 促 进 染 料 的 降 解, 这 可 能 是 由 于 Zn 2+ 能 够 提 高 木 质 素 过 氧 化 物 酶 的 活 性 ; 田 启 建 等 的 研 究 也 表 明 Zn 2+ 能 促 进 橙 黄 G 染 料 的 脱 色 [39] Cu 2+ 是 漆 酶 的 组 成 成 分, Cu 2+ 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 促 进 作 用 可 能 是 由 于 Cu 2+ 激 发 了 漆 酶 的 活 性 [40] 同 时 由 图 5 可 知 Hg 2+ 大 大 的 抑 制 了 B. adusta XX-2 对 孔 雀 石 绿 的 降 解, 可 能 是 由 于 菌 种 承 受 不 了 Hg 2+ 的 剧 毒 所 致 进 一 步 研 究 了 不 同 浓 度 Zn 2+ 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 影 响, 结 果 显 示 在 mmol/l 的 Zn 2+ 浓 度 范 围 内, 孔 雀 石 绿 的 降 解 百 分 率 变 化 不 大, 基 本 在 89% 95% 之 间 2.9 盐 度 对 B. adusta XX-2 降 解 能 力 的 影 响 印 染 工 业 废 水 中 含 有 大 量 的 无 机 盐, 盐 度 有 时 高 达 15% 17%, 染 料 降 解 微 生 物 对 高 盐 度 的 耐 受 性 是 影 响 其 能 否 正 常 应 用 的 重 要 因 素 之 一 [41] 研 究 ( 静 置 培 养, 25 C, ph 7.0, 染 料 初 始 浓 度 120 mg/l) 结 果 表 明, 当 盐 度 低 于 16 g/l 时, 对 降 解 率 的 影 响 不 大 ( 降 解 率 大 约 88% 左 右 ), 当 盐 度 高 于 32 g/l 后, 孔 雀 石 绿 的 降 解 率 随 着 盐 度 的 上 升 而 下 降, 但 当 盐 度 达 到 64 g/l 时, 降 解 率 仍 能 保 持 在 60% 以 上, 甚 至 在 盐 度 为 128 g/l 时 菌 株 仍 然 有 一 定 的 降 解 活 性 ( 降 解 率 为 8.59%), 可 以 表 明 B. adusta XX-2 是 一 株 耐 高 盐 的 真 菌, 显 示 出 较 强 的 应 用 潜 能 其 它 有 关 染 料 脱 色 的 研 究 也 报 道 了 许 多 相 似 的 耐 盐 菌 株 [38 39,41 42] Fig. 5 图 5 不 同 金 属 离 子 对 孔 雀 石 绿 降 解 的 影 响 Effect of metal ion on decolorization of MG by B. adusta XX-2 strain

9 何 兴 兵 等 : 开 放 条 件 下 烟 管 菌 XX-2 对 孔 雀 石 绿 染 料 的 高 效 降 解 连 续 脱 色 能 力 测 试 菌 株 的 连 续 脱 色 能 力 是 检 验 菌 株 应 用 能 力 的 一 个 重 要 指 标, 连 续 脱 色 能 力 测 试 ( 静 置 培 养, 25 C, ph 7, 染 料 初 始 浓 度 120 mg/l) 结 果 表 明, B. adusta XX-2 菌 株 显 示 了 对 孔 雀 石 绿 ( 浓 度 120 mg/l) 较 强 的 连 续 脱 色 能 力, 第 1 2 个 周 期 ( 每 个 周 期 5 d) 后 染 料 降 解 率 基 本 相 同, 约 67% 左 右, 之 后 降 解 率 显 著 下 降, 经 过 5 个 周 期 的 降 解 后, 仍 显 示 较 强 的 脱 色 能 力, 脱 色 率 达 42%, 显 [30] 示 出 该 菌 株 较 强 的 应 用 潜 力 Daneshvar 等 利 用 藻 类 Chlorella sp. 对 孔 雀 石 绿 进 行 连 续 脱 色, [43] 显 示 在 5 个 循 环 内 脱 色 率 不 变 ; Chang 和 Kuo 等 报 道 E. coli NO3 对 C.I. Reactive Red 22 进 行 连 续 脱 色 时 在 第 2 5 个 循 环 表 现 出 脱 色 效 率 的 增 加 不 同 研 究 中 连 续 脱 色 的 表 现 不 一 致, 这 可 能 归 因 于 不 同 菌 株 对 染 料 溶 液 的 适 应 性 不 同 2.11 毒 性 分 析 最 常 用 的 植 物 毒 性 测 试 方 法 是 监 测 种 子 的 发 芽 率 和 植 株 的 生 长 情 况 [44] 植 物 毒 性 测 试 结 果 如 表 1 所 示, 去 离 子 水 ( 对 照 ) 120 mg/l 孔 雀 石 绿 溶 液 与 其 降 解 产 物 对 豇 豆 和 豌 豆 种 子 进 行 培 养 后 种 子 萌 发 率 均 为 100%, 表 明 孔 雀 石 绿 及 其 降 解 产 物 对 豇 豆 和 豌 豆 种 子 的 萌 发 率 均 没 有 产 生 明 显 的 影 响 大 部 分 用 孔 雀 石 绿 降 解 产 物 浇 灌 的 种 子 胚 芽 胚 轴 胚 根 的 长 度 都 大 于 直 接 用 孔 雀 石 绿 浇 灌 的 种 子, 与 对 照 组 相 近, 甚 至 超 过 对 照 组, 说 明 降 解 后 的 溶 液 毒 性 极 大 下 [23] 降 Parshetti 等 的 研 究 也 显 示 MG 降 解 后 的 产 物 引 起 Triticum aestivum 的 种 子 萌 发 要 高 于 [25] MG; Ayed 等 研 究 发 现 MG 降 解 后 的 产 物 对 T. aestivum 和 Sorghum bicolor 萌 发 与 根 茎 生 长 的 毒 性 大 大 降 低 微 生 物 毒 性 测 试 的 数 据 结 果 如 表 2 所 示, 120 mg/l 孔 雀 石 绿 溶 液 的 抑 菌 圈 明 显 大 于 降 解 后 产 物 的 抑 菌 圈, 表 明 了 孔 雀 石 绿 溶 液 降 解 产 物 的 [25] 毒 性 较 降 解 前 有 所 降 低 Ayed 等 研 究 微 生 物 毒 性 测 试 时 也 发 现 在 MG 降 解 后 对 Sphingomonas paucimobilis 产 生 的 毒 性 极 大 减 小, 而 有 的 研 究 发 现 MG 降 解 后 生 成 的 隐 性 孔 雀 石 绿 的 毒 性 与 MG 相 同 [25] 参 数 Parameters 发 芽 率 Germination percentage (%) 胚 芽 长 度 Length of plumule (cm) 胚 轴 长 度 Length of plumule (cm) 胚 根 长 度 Length of plumule (cm) 胚 芽 干 重 Dry weight of plumule (g) 胚 轴 干 重 Dry weight of plumule (g) 胚 根 干 重 Dry weight of plumule (g) 表 1 孔 雀 石 绿 染 料 溶 液 (120 mg/l) 与 其 降 解 产 物 (5 d 后 ) 对 豇 豆 和 豌 豆 种 子 萌 发 的 影 响 Table 1 Effect of 120 mg/l MG solution and its decolorized product on germination of V. unguiculata and P. sativum seeds 豇 豆 V. unguiculata 豌 豆 P. sativum 孔 雀 石 绿 降 解 产 物 孔 雀 石 绿 对 照 组 对 照 组 溶 液 Decolorized 溶 液 Control Control MG solution product MG solution 降 解 产 物 Decolorized product ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±0.04

10 1172 微 生 物 学 通 报 Microbiol. China 2013, Vol.40, No.7 表 2 孔 雀 石 绿 染 料 溶 液 (120 mg/l) 与 其 降 解 产 物 (5 d 后 ) 对 测 试 菌 的 影 响 Table 2 Effect of 120 mg/l MG solution and its decolorized products on tested bacteria and fungi 菌 种 Strain 抑 菌 圈 直 径 大 小 The diameter size of circle of inhibition (cm) 孔 雀 石 绿 溶 液 MG solution 降 解 产 物 Decolorized product 大 肠 杆 菌 E. coli 2.57± ±0.02 枯 草 芽 孢 杆 菌 B. subtilis 3.45± ±0.07 黄 曲 霉 A. flavus 1.92± ±0.03 黑 曲 霉 A. niger 1.76± ±0.03 Table 3 表 3 孔 雀 石 绿 染 料 溶 液 (120 mg/l) 与 其 降 解 产 物 对 小 青 鳉 和 田 螺 的 影 响 Effect of 120 mg/l MG solution and its decolorized products on O. latipes and B. aeroginosa 染 料 处 理 Dye treatment 半 致 死 时 Semilethal time (min) 小 青 鳉 O. latipes 全 死 时 间 Total lethal time (min) 半 致 死 时 间 Semilethal time (min) 田 螺 B. aeroginosa 全 死 时 间 Total lethal time (min) 孔 雀 石 绿 溶 液 MG solution 30.0± ± ± ±67.2 降 解 产 物 Decolorized products (5 d) 186.0± ± ± ±201.7 降 解 产 物 Decolorized products (10 d) 533.0±43.8 > ±133.4 >2 600 从 表 3 可 以 看 出 水 生 生 物 的 半 致 死 时 间 和 致 死 时 间 在 染 料 被 降 解 后 明 显 的 延 长, 而 且 降 解 时 间 越 长 水 生 生 物 存 活 的 时 间 越 长 降 解 后 的 溶 液 仍 有 小 青 鳉 田 螺 死 亡, 显 示 降 解 后 的 溶 液 仍 具 有 一 定 程 度 的 毒 性, 但 有 些 小 青 鳉 与 田 螺 经 过 一 段 时 间 的 适 应 后, 已 经 能 够 在 降 解 后 的 染 料 溶 液 中 长 期 生 存, 降 解 后 的 染 料 溶 液 毒 性 已 大 大 下 降 从 所 有 的 毒 性 测 试 结 果 可 以 看 出, 对 植 物 微 生 物 水 生 动 物 而 言, 降 解 后 的 产 物 毒 性 较 降 解 前 的 孔 雀 石 绿 溶 液 的 毒 性 明 显 减 弱, 说 明 利 用 B. adusta XX-2 菌 株 降 解 孔 雀 石 绿 会 使 染 料 溶 液 的 毒 性 大 大 降 低, 因 此 在 实 际 应 用 中 符 合 环 境 友 好 型 的 环 保 需 求 3 结 论 本 研 究 表 明 B. adusta XX-2 菌 株 能 够 在 静 置 和 系 统 开 放 条 件 下 高 效 降 解 孔 雀 石 绿, 静 置 培 养 与 摇 动 培 养 相 比 更 能 够 节 约 成 本, B. adusta XX-2 能 够 以 孔 雀 石 绿 为 唯 一 营 养 源 进 行 染 料 降 解, 且 添 加 低 浓 度 的 碳 源 氮 源 金 属 离 子 能 够 在 很 大 程 度 上 提 高 降 解 效 率 B. adusta XX-2 有 很 高 的 耐 盐 性, 毒 性 测 试 也 表 明 降 解 后 产 物 的 生 物 毒 性 明 显 减 弱 综 上 所 述, B. adusta XX-2 菌 株 在 处 理 以 孔 雀 石 绿 为 主 的 染 料 废 水 时 具 有 很 强 的 应 用 潜 力 参 考 文 献 [1] Babu PEJ, Kumar V, Visvanathan R. Equilibrium and kinetic study for the removal of malachite green using activated carbon prepared from Borassus flabellofer male flower[j]. Asia-Pacific Journal of Chemical Engineering, 2010, 5(3): [2] Hameed BH, El-Khaiary MI. Batch removal of malachite green from aqueous solutions by adsorption on oil palm trunk fibre: equilibrium isotherms and kinetic studies[j]. Journal of Hazardous Materials, 2008, 154(1/3): [3] Li L, Hong Q, Yan X, et al. Isolation of a malachite green-degrading Pseudomonas sp. MDB-1 strain

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