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1 中 国 畜 牧 兽 医 " 不 同 浓 对 塔 里 木 马 鹿 冻 融 精 子 体 外 获 能 及 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 木 沙 托 合 提 张 俊 杰 艾 海 提 李 和 平 华 兴 耀 敬 斌 宇 库 尔 班 吐 拉 克? 新 疆 农 业 大 学 动 物 科 学 学 院 乌 鲁 木 齐? 东 北 林 业 大 学 野 生 动 物 资 源 学 院 哈 尔 滨? 新 疆 昌 吉 市 盛 华 马 鹿 驯 养 繁 育 基 地 昌 吉? 新 疆 厚 拾 生 物 科 技 有 限 责 任 公 司 库 尔 勒 摘 要 为 探 讨 不 同 浓 度 + A 对 马 鹿 精 子 体 外 获 能 的 影 响 本 研 究 以 塔 里 木 马 鹿 冻 融 精 子 为 试 验 材 料 将 精 子 分 别 悬 浮 于 含 不 同 浓 度 + A???? 的 台 氏 液 ( 液 中 在 培 养 时 采 用 金 霉 素 ++ 染 色 法 评 价 精 子 获 能 状 态 采 用 9(2 分 离 精 子 膜 蛋 白 进 行 免 疫 印 迹 分 析 检 测 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 结 果 表 明 + A 浓 度 为?? 有 利 于 精 子 活 力 的 维 持? 精 子 获 能 率 极 显 著 高 于 对 照 组 和 高 浓 度 组??? 精 子 存 活 时 间 最 长? 但 高 浓 度 + A? 对 精 子 活 力 具 有 显 著 抑 制 作 用? 精 子 获 能 率 极 显 著 低 于 低 浓 度 组? 精 子 存 活 时 间 最 短? 另 外 随 着 培 养 时 间 的 推 移 精 子 发 生 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 有 所 不 同 培 养 时? 组 精 子 蛋 白 磷 酸 化 水 平 极 显 著 高 于 其 他 各 组? 高 浓 度 + A?? 组 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 极 显 著 下 降? 结 果 表 明 塔 里 木 马 鹿 精 子 体 外 获 能 所 需 的 适 宜 + A 浓 度 为? 且 获 能 过 程 中 + A 的 存 在 是 必 要 的 关 键 词 塔 里 木 马 鹿 精 子 获 能 + A 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 ( 文 章 编 号 &%%%"" *%/"" /"%" "*'"'+&''"" <1-('% -(2E' (-% -" -1(" E2' 1*(' ' 5''-/ ' (+- 5'''1 ) ' ' 5'' )*"&&%%"%%%&%%&%+ A -% %%&&%&& *&-) ';&%%&%%'&%%%%'&&%% &++%"%;&%&&%&%&%% % %&%"& &&%&%9(2" %& &'('%&%%&%+ A? '%'&&&'%%%% %&%+ A '%% %& %%? &%%&%;%&"%"&%%%%&"&' 收 稿 日 期 基 金 项 目 新 疆 维 吾 尔 自 治 区 自 然 科 学 基 金 项 目 (/ 作 者 简 介 木 沙 托 合 提 // 男 新 疆 人 硕 士 生 研 究 方 向 动 物 遗 传 育 种 与 繁 殖 / 通 信 作 者 库 尔 班 吐 拉 克 / 男 新 疆 人 博 士 副 教 授 硕 士 生 导 师 研 究 方 向 动 物 遗 传 育 种 与 繁 殖 %'&?

2 期 木 沙 托 合 提 等 不 同 浓 度 + A 对 塔 里 木 马 鹿 冻 融 精 子 体 外 获 能 及 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 / "%&%"&'&'&%%"% '%"%&%+ A "%%& %% &%%&%;%&"%&%%%%& %"&' &'&%%&%%%%;& %&&%&% &&%%& &% &%%&%"&'&;%&"%"&% %%&"&'%;&%&&%&% "%&%"&'+ A &;%&"%& &'%'""%%%%&&%+ A %&%&'&&& *&&-%%%&+ A & %%& +" -)&%%+ A &%%&&% 塔 里 木 马 鹿 - ) 是 中 国 特 有 的 唯 一 能 栖 息 于 荒 漠 景 观 中 的 马 鹿 亚 种 其 在 荒 漠 生 物 群 落 中 具 有 重 要 的 生 态 地 位 近 年 来 由 于 开 发 和 经 济 活 动 等 的 影 响 导 致 其 栖 息 地 萎 缩 种 群 数 量 日 益 下 降 物 种 生 存 面 临 严 重 威 胁 因 此 开 展 其 繁 殖 生 物 学 研 究 将 对 其 种 群 延 续 恢 复 具 有 积 极 的 作 用 精 子 获 能 是 受 精 的 关 键 又 是 复 杂 的 生 理 现 象 精 子 在 获 能 过 程 中 会 发 生 一 系 列 的 生 理 生 化 变 化 并 受 许 多 因 素 的 调 控 尽 管 + A 为 体 外 获 能 培 养 液 的 基 础 成 分 但 + A 对 精 子 获 能 的 影 响 具 有 物 种 特 异 性 而 且 即 使 是 同 一 个 物 种 的 研 究 报 道 也 存 在 差 异 精 子 在 获 能 过 程 中 发 生 胆 固 醇 流 失 质 膜 通 透 性 增 强 + A 和 碳 酸 根 离 子 等 内 流 超 激 活 运 动 最 终 顶 体 反 应 的 发 生 等 一 系 列 的 变 化 精 子 获 能 受 许 多 因 素 的 调 控 主 要 有 胆 固 醇 受 体 如 白 蛋 白 碳 酸 氢 盐 + A 等 + A 在 精 子 发 生 成 熟 获 能 等 过 程 中 具 有 重 要 调 控 作 用 精 子 超 激 活 运 动 顶 体 反 应 等 众 多 生 理 现 象 的 发 生 都 受 + A 的 调 控 胞 内 + A 浓 度 直 接 与 精 子 形 态 和 生 育 潜 力 密 切 相 关 许 多 研 究 表 明 + A 进 入 胞 内 后 激 活 腺 苷 酸 环 化 酶 (+ 促 进 环 磷 酸 腺 苷 (< 的 生 成 激 活 蛋 白 激 酶 ( 精 子 质 膜 上 的 + A 通 道 被 打 开 质 膜 中 的 + A 浓 度 增 加 当 精 子 内 部 的 + A 浓 度 达 到 阈 值 时 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 精 子 获 能 发 生 进 而 发 生 顶 体 反 应 刺 激 糖 酵 解 过 程 为 精 子 活 动 提 供 所 需 能 量 从 而 加 强 精 子 的 运 动 促 进 精 卵 结 合 达 到 受 精 的 目 的 精 子 是 高 度 分 化 的 特 殊 细 胞 基 本 上 不 具 备 转 录 及 翻 译 功 能 其 大 部 分 生 理 活 动 均 依 赖 于 蛋 白 质 修 饰 来 完 成 蛋 白 磷 酸 化 是 蛋 白 质 修 饰 的 主 要 形 式 蛋 白 磷 酸 化 和 去 磷 酸 化 在 调 控 精 子 获 能 超 激 活 和 顶 体 反 应 中 起 到 重 要 作 用 也 是 精 子 获 能 的 重 要 标 志 性 特 征 之 一 近 年 的 研 究 证 实 小 鼠 精 子 获 能 伴 随 着 蛋 白 酪 氨 酸 丝 氨 酸 和 苏 氨 酸 磷 酸 化 发 生 顶 体 反 应 后 蛋 白 磷 酸 化 水 平 明 显 下 降 目 前 已 / 经 证 实 许 多 物 种 如 仓 鼠 猪 马 牛 和 羊 精 子 获 能 过 程 与 精 子 蛋 白 质 酪 氨 酸 磷 酸 化 密 切 相 关 目 前 虽 然 众 多 研 究 者 认 为 + A 在 精 子 体 外 获 能 中 有 至 关 重 要 的 作 用 但 在 鹿 类 精 子 体 外 获 能 过 程 中 对 需 添 加 的 + A 浓 度 没 有 统 一 的 认 识 %& 等 认 为 白 尾 鹿 精 子 体 外 获 能 体 系 中 无 需 额 外 添 加 + A 但 &" 等 认 为 赤 鹿 体 外 受 精 体 系 中 添 加 高 浓 度 + A 效 果 更 好 另 外 哺 乳 动 物 精 子 获 能 过 程 中 胞 内 + A 的 来 源 众 说 不 一 有 学 者 认 为 胞 内 + A 浓 度 的 升 高 是 胞 内 + A 库 释 放 所 致 而 不 需 要 胞 外 + A 的 补 充 也 有 学 者 认 为 胞 内 + A 浓 度 的 升 高 主 要 是 由 于 胞 外 + A 进 入 细 胞 引 起 的 此 外 鹿 类 精 子 获 能 研 究 中 + A 与 精 子 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 有 何 关 系 作 用 机 制 如 何 等 方 面 的 研 究 报 道 较 少 本 试 验 将 塔 里 木 马 鹿 冻 融 精 子 在 含 不 同 浓 度 + A 的 台 氏 液 ( 培 养 液 中 孵 育 观 察 + A 浓 度 的 变 化 对 塔 里 木 马 鹿 精 子 获 能 顶 体 反 应 及 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 以 及 获 能 过 程 是 否 对 胞 外 + A 具 有 依 赖 性 材 料 与 方 法 - 试 验 动 物 精 液 采 集 与 冷 冻 保 存 试 验 动 物 由 新 疆 厚 拾 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司 自 治 区 级 塔 里 木 马 鹿 种 鹿 场 新 疆 昌 吉 盛 华 商 贸 有 限 责 任 公 司 马 鹿 驯 养 繁 育 基 地 及 农 二 师 团 鹿 场 提 供 均 为 成 年 健 康 纯 种 塔 里 木 马 鹿 共 头 试

3 %*& 中国畜牧兽医 验动物自由采食自由饮水' 精液的采集采用半麻醉站立式电刺激采精方 法 * %(+ '肉眼观察 所 采 精 液 的 状 态&颜 色镜 检 精 子 活力和密度并将精子活力 & c( 以上&密度中/以上 )* 卷 E% 精液处理 解冻后 的 精 液 用 无 C5e 的 获 能 液 "?@KR 液 *&& 离 心 洗 涤 次每 次 2 N -弃 上 清沉 淀 的公鹿精液混合到一起立即加入*/ ^ 预热 的牛 用 分 别 用 含 不 同 浓 度 C5e "&&% c%& c&* c2& %K的 2 c&nn?@kr 液悬浮使精 子浓 度调 至 N" 缓慢稀 释至 )&2 倍后再进行活力镜 检无 异 常 的 精 液 分 装 入 若 干 个 2&d%&( &%&&d%&( 个%NK于 *1 c2 ^ & 2L Cb &饱 和湿度培养箱中 孵 育每 隔 M 取 样 检 测 精 子 获 能 无菌试管盖紧盖子并用 1 层纱布包裹置于装有冰 率和顶体反应率等指标并用于提取精子膜蛋白' 块的保温瓶箱" )&2 ^ 并 运 送 到 实 验 室 平 衡 2M 于 ) ^ 将其轻轻摇匀并分装于 & c2 NK 细 管将其 EO 精子活力和存活时间的检测 精子活力的检测取%2K 精子悬液滴于恒温 迅速置于液氮 中 预 冷%&N -最 后 装 入 做 好 标 记 的 载物台上预热的载 玻 片 上盖 上 盖 玻 片于 */ ^ 在 纱布袋并投入液氮 中 冷 冻于 液 氮 罐 中 保 存 周 后 在 */ ^ 温水中 解 冻 *&镜 检 精 子 活 力活 力 & c* &&&)&& 倍显微镜下迅速观察 精 子 运 动 状 态根 据 多个视野的观察情况及时估计直线前进运动精子在 以上者用于后续试验' 总精子中的比例以 &&% c& 的十级评分法评定精子 E 主要试剂及仪器 牛血清白蛋 白 " J>@&乳 酸 钠 和 丙 酮 酸 钠 均 购 活力如 有 2&L 的 精 子 作 直 线 运 动活 力 计 为 & c2 自> N5公司)抗磷酸 酪 氨 酸 单 克 隆 抗 体 购 自 美 国 每个样本评价 * 次取平均值' 精子存活时间的确定培养期间每隔 %M 通 过 C > - 公司)荧光标记羊抗鼠Z WVK -5 P " M?` 1&&购自 美 国 FRK 公 司 " &) &/ %1 &()其 余 运动能力检测精子 体 外 生 存 时 间精 子 存 活 时 间 为 试剂均为 分 析 纯' 荧 光 正 置 摄 影 显 微 镜 " b VN9 第 次检查之间所经历的时间每个样本评价 * 次 JE 和专业数码成像系统" bkf`ri>wr/均 购自日本 b VN9公司)垂直电 泳槽和 转印 仪均 购 取平均值' 精子培养开始时间起到视野中无活动精子为止倒数 自美 国 J B5" 公 司)b"V V 双 色 红 外 激 光 成 像 E 精子获能的评价 精子获能状 态 的 评 价 采 用 金 霉 素 " C?C染 色 系统购自美国 K% C&B 公司' 法 *%/+ C?C 染色后所有 精 子 尾 部 均 染 上 黄 绿 色 荧 E& 培养液 台氏液 " %K O5C?@KR 液 %&& NN %K FC & %K O5ERb) * c%nn cg NN 光精子 头 部 则 呈 * 种 不 同 的 荧 光 染 色 类 型即 Q 型& J 型 型 "图 %'Q 型 为 未 获 能 且 顶 体 完 整的精子整个精子头部呈强烈的黄绿色荧光) J型 %K乳 酸 钠 %K C5C %K % c(nn c& NN & c)nn %K O5ECb*% %K EDRD> `C 2NN & c&nn 为获能且顶体完整 的 精 子精 子 顶 体 区 和 赤 道 段 呈 %K丙酮酸钠 % c&nn (N%NKJ>@)基 础 液 调 节 c)&/ c2过滤除菌 ) ^ 保存备用"不超 过 E 至 / 至消失出现一个明显的 暗 型 为 已 发 生 顶 体 反应的精子精子头 部 无 荧 光 或 顶 体 后 区 呈 较 强 的 周使用前加入 J>@ Cb 培养箱中平衡 M 以上' 黄绿色荧光而顶体区无荧光' 强烈的黄绿色荧光而 顶 体 后 区 的 荧 光 显 著 减 弱 Q 型精子) J J 型精子) Q5 -) J J5 -) 图 冻融塔里木马鹿精子经 *F* 染色后的着色类型" %&&&d K < 2 F H J 11 X Q L D 12 H X B L %&&&d /Z < /"

4 期 木 沙 托 合 提 等 不 同 浓 度 + A 对 塔 里 木 马 鹿 冻 融 精 子 体 外 获 能 及 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 - 精 子 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 检 测 根 据 ' 等 报 道 的 方 法 进 行 精 子 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 检 测 精 子 悬 液 " 离 心 用? 洗 涤 离 心 次 次 弃 上 清 液 再 用? &-+ 洗 涤 离 心 次 次 弃 上 清 液 后 沉 淀 中 加 入 含 膜 蛋 白 裂 解 液 置 于 摇 床 冰 上 裂 解? 然 后 " 离 心 吸 取 上 清 液 于? 离 心 管 加 缓 冲 液 沸 水 中 处 理 后 分 装 保 存 备 用 精 子 膜 蛋 白 样 品 在 分 离 胶 上 进 行 9 (2 胶 上 的 蛋 白 在 下 转 至 + 膜 上 膜 用 ( 室 温 封 闭? 后 一 抗 孵 育 过 夜 用 洗 次 次 然 后 用 荧 光 标 记 二 抗 室 温 避 光 孵 育? 用 避 光 洗 次 次 然 后 用 避 光 洗 次 次 将 + 膜 避 光 自 然 干 燥 后 用 > 双 色 红 外 激 光 成 像 系 统 +>* 扫 描 成 像 %&%" 图 像 用 > 双 色 红 外 激 光 成 像 系 统 图 像 分 析 软 件 分 析 条 带 灰 度 值 - 统 计 分 析 试 验 数 据 用 适 合 性 '&%% 检 验 进 行 差 异 显 著 性 分 析? 为 差 异 不 显 著? 为 差 异 显 著 %&%" 条 带 灰 度 值 数 据 用? 进 行 方 差 分 析 结 果 与 分 析 - 不 同 浓 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 活 力 及 存 活 时 间 的 影 响 不 同 浓 度 + A 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 活 力 及 存 活 时 间 的 影 响 结 果 见 表 由 表 可 知 随 着 体 外 培 养 时 间 的 推 移 各 组 精 子 活 力 呈 下 降 趋 势 其 中 高 浓 度 组? 精 子 活 力 的 下 降 速 度 较 迅 速 培 养 时 与 低 浓 度 组?? 相 比 差 异 显 著? 其 他 组 各 时 间 点 的 精 子 活 力 之 间 无 显 著 性 差 异? 另 外 + A 浓 度 为? 和? 时 精 子 存 活 时 间 最 长 极 显 著 高 于 其 他 组?+ A 浓 度 为? 时 精 子 存 活 时 间 最 短 极 显 著 低 于 其 他 各 组?? + A 浓 度 组 和 对 照 组 之 间 差 异 不 显 著? 表 不 同 浓 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 活 力 及 存 活 时 间 的 影 响 " " "%" " " + A 浓 度 + A %&% 培 养 时 间 +'%'&% 存 活 时 间 '&%?????????? (????????? /??????????? /????????????? (??????????? + 同 列 数 据 肩 标 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 显 著? 肩 标 不 同 大 写 字 母 表 示 差 异 极 显 著? 肩 标 相 同 字 母 或 无 字 母 标 注 表 示 差 异 不 显 著? 下 同 %''%&%%&'&&%"%&? %&%% %&'&&%;%&"%&?%%&%&'&&%" %&?? - 不 同 浓 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 体 外 获 能 效 果 的 影 响 不 同 浓 度 + A 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 体 外 获 能 率 的 影 响 结 果 见 表 由 表 可 知 各 组 精 子 获 能 率 随 着 培 养 时 间 的 推 移 有 所 提 高 培 养 时 低 浓 度 组?? 精 子 获 能 率 极 显 著 高 于 对 照 组 高 浓 度 组??? 其 中 培 养 时? 组 精 子 获 能 率 略 优 于? 组 但 两 组 间 差 异 不 显 著? 对 照 组 与 高 浓 度 组 之 间 无 显 著 性 差 异?

5 中 国 畜 牧 兽 医 卷 表 不 同 浓 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 体 外 获 能 率 的 影 响 " " "%" "" + A 浓 度 + A %&% 培 养 时 间 +'%'&%??????????? (?? (????? (?? (?????????????? 不 同 浓 度 + A 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 顶 体 反 应 率 的 影 响 结 果 见 表 由 表 可 知 各 组 精 子 顶 体 反 应 率 随 着 培 养 时 间 的 推 移 均 有 所 提 高 培 养 时 高 浓 度 组?? 精 子 顶 体 反 应 率 极 时 高 浓 度 组?? 精 子 顶 体 反 应 率 极 显 著 高 于 低 浓 度 组?? 和 对 照 组? 其 中? 组 精 子 顶 体 反 应 率 极 显 著 高 于? 组? 显 著 高 于 对 照 组 和 低 浓 度 组? 培 养 表 不 同 浓 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 顶 体 反 应 率 的 影 响 " " "%" """" + A 浓 度 + A %&% 培 养 时 间 +'%'&%???? (?? (????? (?? (????? (????????? +??????? + - 不 同 浓 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 不 同 浓 度 + A 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 结 果 见 表 由 表 可 知 随 着 培 养 时 间 的 推 移 精 子 发 生 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 不 同 在 不 同 时 间 点 高 浓 度 组?? 精 子 发 生 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 均 极 显 著 低 于 对 照 组 和 低 浓 度 组? 和?? 培 养 时? 组 精 子 蛋 白 磷 酸 化 水 平 达 最 高 值 显 著 高 于? 组? 且 极 显 著 高 于 其 他 各 组? 培 养 时 仍 是? 组 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 最 高 极 显 著 高 于 其 他 各 组? 表 不 同 浓 条 件 下 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 9"* 分 析 *9"* " %" "%" " + A 浓 度 + A %&% 培 养 时 间 +'%'&% //?/ ( /?/ (?/ (? /? (???? (? /? (??? +? +?? +? 9? +

6 期 木 沙 托 合 提 等 不 同 浓 度 + A 对 塔 里 木 马 鹿 冻 融 精 子 体 外 获 能 及 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 讨 论 精 子 获 能 是 受 精 的 前 提 获 能 现 象 被 发 现 的 多 年 的 时 间 里 许 多 研 究 者 模 拟 生 殖 道 内 环 境 对 精 子 获 能 及 其 分 子 机 理 进 行 研 究 + A 作 为 精 子 体 外 获 能 培 养 液 的 基 础 成 分 是 研 究 精 子 获 能 的 热 点 其 作 用 机 理 的 阐 明 对 精 子 体 外 受 精 技 术 体 系 的 建 立 具 有 重 要 意 义 + A 在 精 子 获 能 过 程 中 起 着 关 键 的 调 控 作 用 胞 内 + A 浓 度 的 增 加 激 活 可 溶 性 腺 苷 酸 环 化 酶 (+ 和 磷 酸 二 酯 酶 9 使 环 磷 酸 腺 苷 (< 含 量 增 加 并 通 过 一 系 列 信 号 转 导 作 用 对 精 子 功 能 起 到 调 节 作 用 外 部 添 加 高 浓 度 + A 致 / 使 精 子 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 降 低 ( 含 量 减 少 近 年 的 许 多 研 究 表 明 + A 在 精 子 获 能 和 顶 体 反 应 中 起 重 要 的 作 用 获 能 过 程 中 精 子 细 胞 内 + A 浓 度 升 高 特 别 是 在 顶 体 区 超 激 活 运 动 与 鞭 毛 区 + A 浓 度 升 高 有 关 + A 浓 度 的 调 节 途 径 主 要 有 + 和 +%& 通 道 A + A 交 换 通 道 + A ( 酶 < 和 >*( 种 最 近 的 研 究 显 示 + A 进 入 精 子 引 起 去 极 化 和 精 子 超 激 活 运 动 +%& 蛋 白 是 不 可 缺 少 的 也 有 学 者 指 出 胞 质 碱 化 作 用 在 精 子 获 能 过 程 中 会 使 + A 浓 度 升 高 进 而 促 进 顶 体 反 应 另 外 获 能 过 程 中 + A 浓 度 升 高 与 精 子 细 胞 内 储 存 的 + A 释 放 有 关 这 个 过 程 的 调 控 需 要 + A ( 酶 受 体 蛋 白 +* 受 体 等 的 参 与 精 子 胞 质 内 + A 浓 度 的 升 高 和 蛋 白 质 酪 氨 酸 磷 酸 化 是 顶 体 外 膜 中 的 + A ( 酶 活 性 被 抑 制 的 结 果 据 报 道 人 精 子 获 能 仅 需? + A 人 精 子 与 透 明 带 的 相 互 黏 附 过 程 则 需 要? + A 小 鼠 精 子 获 能 培 养 液 中 的 + A 适 宜 浓 度 为? 豚 鼠 精 子 体 外 获 能 所 用 的 + A 浓 度 为? / 绵 羊 精 子 获 能 所 需 要 的 + A 浓 度 为? 本 试 验 结 果 表 明 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 在 含 不 同 浓 度 + A???? 培 养 液 中 培 养 + A 浓 度? 时 各 组 精 子 活 力 基 本 相 同 但 高 浓 度? + A 明 显 抑 制 了 精 子 活 力 从 精 子 存 活 时 间 上 看 + A 浓 度 越 高 存 活 时 间 越 短 从 精 子 体 外 获 能 率 来 看 低 浓 度 组?? 精 子 获 能 率 极 显 著 高 于 对 照 组 和 高 浓 度 组?? 对 照 组 和 高 浓 度 组?? 之 间 无 显 著 性 差 异 从 精 子 顶 体 反 应 率 来 看 高 浓 度 + A?? 促 进 了 精 子 提 早 发 生 顶 体 反 应 从 精 子 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 水 平 来 看 + A 浓 度 越 高 发 生 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 越 低? 组 相 对 优 于 其 他 组 说 明 + A 参 与 马 鹿 精 子 体 外 获 能 这 可 能 是 由 于 + A 进 入 胞 内 后 可 活 化 腺 苷 酸 环 化 酶 (+ 促 进 +< 的 生 成 蛋 白 激 酶 ( 被 激 活 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 促 使 精 子 获 能 的 发 生 综 合 以 上 各 指 标 认 为? 较 适 合 作 为 塔 里 木 马 鹿 精 子 获 能 所 需 的 浓 度 此 时 精 子 存 活 时 间 较 长 / 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 水 平 较 高 该 结 果 进 一 步 证 实 了 白 尾 鹿 附 睾 精 子 获 能 体 系 中 无 需 额 外 添 加 + A 的 研 究 结 果 但 这 结 果 又 与 赤 鹿 体 外 受 精 体 系 需 要 高 浓 度?? + A 的 结 果 有 差 异 这 可 能 是 因 为 塔 里 木 马 鹿 精 子 获 能 时 需 要 转 运 + A 进 入 胞 内 或 启 动 胞 内 钙 库 而? + A 能 够 满 足 这 一 需 要 本 试 验 中 + A 浓 度 升 高 至?? 时 发 生 酪 氨 酸 磷 酸 化 蛋 白 的 表 达 水 平 反 而 下 降 有 学 者 认 为 胞 外 过 多 的 + A 对 精 子 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 有 抑 制 作 用 这 种 抑 制 作 / 用 是 通 过 降 低 胞 内 ( 利 用 率 而 实 现 的 本 试 验 结 果 进 一 步 证 实 了 这 个 观 点 + A 浓 度 过 高 可 能 会 抑 制 塔 里 木 马 鹿 精 子 获 能 的 发 生 或 会 加 快 精 子 死 亡 或 精 子 尚 未 进 入 获 能 状 态 即 发 生 了 顶 体 反 应 因 此 + A 对 塔 里 木 马 鹿 精 子 体 外 获 能 是 很 有 必 要 的 但 + A 浓 度 不 易 过 高 其 最 佳 使 用 浓 度 为? 致 谢 本 试 验 中 马 鹿 精 液 的 电 刺 激 采 集 冷 冻 保 存 等 方 面 获 得 新 疆 厚 拾 生 物 科 技 有 限 责 任 公 司 种 鹿 场 农 二 师 团 和 团 鹿 场 及 新 疆 昌 吉 市 盛 华 马 鹿 驯 养 繁 育 基 地 等 单 位 及 工 作 人 员 的 大 力 支 持 为 此 表 示 衷 心 感 谢 参 考 文 献 E<&&&(+&&&&& %'&%%&& E / % 1&%"%'& &%%%&'" "E ' + / '%29 -+'& '& E &' <"'&<2&&<&%+&E(% *%%%&&%&

7 中 国 畜 牧 兽 医 卷 '%&%% %&%% '% &%& &%&% E ( ) & * **%&& %& %%&&%E( ) 2&++2"<%+"%% %&%&%%%& &%&&''&"&& %%&&%E( ) / <&9(%* -9&% %%& &% & "& &%'%&&&%%% %%& %%'&"%% %&&%E"() 1-)/ -&-'%*% % (<%&%%& &%;%&'&''&"& %%&&%E"( ) 1-)// /<&% (%E<&%( ''&%"%%%%% %& & &% %&&%"&%& ;%E%''// '&<&9%&% & B-( "&%&%& %""%E '( )// 2&++2"<%+"%% %&%&%%%& &%&&''&"&& %%&&%E( ) / %&E2* (% %-&%% % %%"%%%&& %E( ) 1-) &"9 (&2 %&&' %%"&E%'' // 石 其 贤 袁 玉 英 精 子 获 能 及 其 发 展 E 生 理 科 学 及 其 进 展 //// 韩 筱 兰 郑 荣 梁 哺 乳 动 物 精 子 膜 获 能 和 顶 体 反 应 相 关 结 构 及 配 体 的 研 究 进 展 E 国 外 医 学 泌 尿 系 统 分 册 增 刊 / 敬 斌 宇 蒋 小 明 孙 志 强 等 两 种 采 精 方 法 在 塔 里 木 马 鹿 上 的 应 用 效 果 分 析 E 新 疆 畜 牧 业 / 库 尔 班 吐 拉 克 陈 勇 王 旭 光 等 不 同 获 能 方 法 对 冻 融 塔 里 木 马 鹿 精 子 体 外 获 能 及 其 蛋 白 酪 氨 酸 磷 酸 化 的 影 响 E 新 疆 农 业 大 学 学 报 / '"+B%&%%& &%'&"%%& &&& && %- )E ( ) /&< (-%&"%&-%( % ' "%&"' %%%&&%++% %&%%E &%&%-*&"'%%&'& '&;%E ( ) - *'/ 9'+&&%&% +'%&&&%& &%'&"-%%E ' " - -&"(-B %% %&'&'+ A (%& &%"&%E") (%/ / E*9('+A';'&" &%%+(* %E ( )- ' '/ / %+ <<&%H"%&E9 % > & %' %& &%%E % &9"%&E 9 % &% & %%E ' / 9&9''& <& *"'% % %&%%'& &% %&'& + A & + A %& %E' ( ) <&&""&+2&'<% '&'&%&'&'% -E /// (&'%+&- <+%&%%" %%''&"" &&&%'&"% %E ' + //// / 李 明 文 焦 日 胡 国 俊 等 钙 通 道 阻 断 剂 对 豚 鼠 精 子 顶 体 反 应 的 影 响 E 中 国 兽 医 学 报 // 李 贺 娟 倪 和 民 薛 君 忠 等 钙 离 子 浓 度 对 绵 羊 精 子 获 能 的 影 响 E 中 国 畜 牧 兽 医 / // 责 任 编 辑 秦 彤

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