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1 第 35 卷第 4 期 2015 年 4 月 环 境 科 学 学 报 Acta Scientiae Circumstantiae Vol 35 No 4 Apr 2015 DOI 10 13671 j hjkxxb 2014 0797 高玉红 郭建军 孙振钧 等 2015 兽药阿苯达唑的蚯蚓繁殖毒性研究 J 环境科学学报 35 4 1212 1216 Gao Y H Guo J J Sun Z J et al 2015 Reproductive toxicity of earthworms exposed to veterinary pharmaceutical albendazole J Acta Scientiae Circumstantiae 35 4 1212 1216 兽药阿苯达唑的蚯蚓繁殖毒性研究 高玉红1 郭建军2 孙振钧3 吴广军2 李晓滨2 李宏双1 1 河北农业大学动物科技学院 保定 071001 2 承德市畜牧研究所 承德 067000 3 中国农业大学资源环境学院 北京 100094 收稿日期 2014 05 27 修回日期 2014 06 23 录用日期 2014 06 23 摘要 阿苯达唑是目前应用广泛的高效抗寄生虫兽药 其残留对蚯蚓等土壤动物的繁殖毒性鲜见报道 本研究选择了阿苯达唑的 5 个染毒剂量 1 3 6 9 和 12 mg kg 检测染毒 56 d 阿苯达唑对蚯蚓产茧 孵化及其幼蚓产生的影响 以及染毒 14 d 蚯蚓精子畸形率和精子细胞超微结 构的变化 结果表明 染毒 28 d 时 卵茧数量比其他繁殖参数 卵茧重和孵化率 对低剂量阿苯达唑敏感 随着染毒剂量 3 12 mg kg 增加 卵茧数量显著降低 p 0 01 呈现明显的剂量 效应关系 染毒 56 d 时 幼蚓重量比其他繁殖参数 幼蚓数量和孵化率 敏感 产生有毒作用的 最低染毒剂量为 3 mg kg p 0 01 短期染毒 14 d 时 精子细胞的超微结构在染毒剂量为 3 12 mg kg 时发生明显变化 尤其是线粒体 而精 子畸形率发生明显变化的最低剂量为 6 mg kg 可见 短期染毒时精子细胞的超微结构比光镜下的精子畸形率敏感 该研究结果可为阿苯达 唑残留的土壤生态毒理及早期监测提供依据 关键词 兽药 精子畸形 土壤环境 染毒 文章编号 0253 2468 2015 04 1212 05 中图分类号 X171 5 文献标识码 A Reproductive toxicity of earthworms exposed to veterinary pharmaceutical albendazole GAO Yuhong 1 GUO Jianjun 2 SUN Zhenjun 3 WU Guangjun 2 LI Xiaobin 2 LI Hongshuang 1 1 College of Animal Science and Technology Agricultural University of Hebei Baoding 071001 2 Animal Husbandry Research Institute of Chengde Chengde 067000 3 College of Resources and Environmental Sciences China Agricultural University Beijing 100094 Received 27 May 2014 received in revised form 23 June 2014 accepted 23 June 2014 Abstract Albendazole is a veterinary medicine with a high efficiency against helminths which has been used widely in livestock However few studies have been published on reproductive toxicity of albendazole residues on soil organisms including earthworms In this study earthworms were exposed to five levels of albendazole 1 3 6 9 and 12 mg kg for 56 days to investigate cocoon production hatching success and juvenile production and for 14 days to assess sperm deformity and ultrastructure of germ cells After 28 days cocoon number of earthworms was more sensitive to low concentrations of albendazole than other reproductive parameters cocoon weight and hatching success and a significant dose related decrease was found in cocoon number over the range of concentrations from 3 to 12 mg kg p 0 01 After 56 days juvenile weight was more sensitive to low concentrations of albendazole Significant decrease in juvenile weight was observed at 3 mg kg and above p 0 01 In short time exposure of 14 days ultrastructural alteration of germ cells particularly morphology of mitochondria was observed at 3 mg kg and above whereas increase of sperm deformity was observed at 6 mg kg and above suggesting the higher sensitivity of germ cell ultrastructure to low concentrations than sperm deformity in short time exposure The results provides important information on ecotoxicology of albendazole residues in soil and their early pollution prediction Keywords Veterinary pharmaceutical sperm deformity soil environment exposure 基金项目 河北省自然科学基金 No C2012204074 Supported by the Natural Science Foundation of Hebei Province No C2012204074 作者简介 高玉红 1971 女 副教授 博士 E mail gyhsxs0209 126 com 通讯作者 责任作者 E mail gjj730209 126 com Biography GAO Yuhong 1971 female associate professor Ph D E mail gyhsxs0209 126 com Corresponding author E mail gjj730209 126 com

2 4 期 高 玉 红 等 : 兽 药 阿 苯 达 唑 的 蚯 蚓 繁 殖 毒 性 研 究 引 言 (Introduction) 近 几 年 来, 兽 药 在 环 境 中 的 残 留 及 其 生 态 风 险 已 成 为 国 际 上 的 研 究 热 点. 阿 苯 哒 唑 是 近 年 来 发 展 迅 速 应 用 广 泛 的 高 效 抗 吸 虫 线 虫 绦 虫 和 囊 尾 蚴 等 寄 生 虫 的 苯 并 咪 唑 类 兽 药. 该 药 进 入 寄 生 虫 体 内 后, 大 约 11% 的 原 药 随 粪 尿 排 出, 并 且 在 尿 液 和 粪 便 中 均 已 检 测 到 其 代 谢 物 ( 赵 冠 宏 和 许 炽 标,2002). 以 前 的 研 究 (Batzias et al.,2004; 李 庆 章 等,2007) 表 明, 阿 苯 达 唑 及 其 代 谢 物 除 了 影 响 动 物 的 能 量 代 谢, 干 扰 虫 体 的 生 长 和 繁 殖, 对 虫 卵 的 孵 化 也 有 抑 制 作 用, 且 该 类 药 对 动 物 具 有 一 定 的 致 畸 性 和 致 突 变 性 (Carlsson et al.,2013). 这 些 残 留 的 药 物 随 粪 尿 进 入 周 围 环 境 中 可 能 会 对 环 境 产 生 一 定 的 负 面 作 用,Escher 等 (2008) 通 过 检 测 药 物 的 脂 / 水 分 配 系 数 和 膜 通 透 性 证 明 了 阿 苯 达 唑 在 环 境 中 存 在 较 高 的 风 险 性. 蚯 蚓 作 为 评 价 土 壤 环 境 安 全 性 的 指 示 生 物 (Rao and Kavitha,2004), 当 阿 苯 达 唑 及 其 代 谢 物 随 着 粪 尿 进 入 土 壤 后, 对 蚯 蚓 可 能 会 产 生 潜 在 的 毒 害 作 用. 近 几 年 阿 苯 达 唑 对 蚯 蚓 存 活 生 长 和 抗 氧 化 物 酶 活 性 的 影 响 已 有 研 究 ( Gao et al.,2007; 王 轶 等, 2009), 但 该 药 对 蚯 蚓 繁 殖 性 能 影 响 的 研 究 很 少, 我 们 前 期 研 究 显 示 ( 高 玉 红 等,2012), 高 剂 量 的 阿 苯 达 唑 损 伤 了 蚯 蚓 精 子 的 发 生 系 统. 本 研 究 通 过 检 测 染 毒 56 d 时 阿 苯 哒 唑 对 蚯 蚓 产 茧 孵 化 和 幼 蚓 产 生 的 影 响, 以 及 短 期 染 毒 14 d 时 对 精 子 畸 形 率 和 精 子 细 胞 超 显 微 结 构 的 变 化, 以 期 探 讨 低 剂 量 阿 苯 达 唑 对 蚯 蚓 繁 殖 性 能 的 影 响. 2 材 料 和 方 法 (Materials and methods) 2.1 实 验 材 料 选 用 300 ~ 400 mg 健 康 成 年 蚯 蚓 ( Eisenia fetida), 蚯 蚓 取 自 中 国 农 大 蚯 蚓 养 殖 基 地. 实 验 兽 药 为 阿 苯 哒 唑 原 粉, 纯 度 为 95% 以 上. 2.2 染 毒 方 法 采 用 人 工 土 壤 法, 按 照 OECD(1984) 推 荐 的 标 准 方 法, 人 工 土 壤 包 括 20% 高 岭 土 10% 草 炭 土 和 70% 石 英 砂 (0.05 ~ 0.2 mm), 用 碳 酸 钙 将 配 置 好 的 人 工 土 壤 ph 调 到 6.0±0.5(Wu et al.,2012). 按 照 阿 苯 哒 唑 染 毒 的 预 试 结 果, 设 置 5 个 不 影 响 蚯 蚓 生 长 的 染 毒 剂 量 ( 和 12 mg kg -1 ) 和 1 个 对 照 组, 每 个 处 理 组 设 8 个 重 复,4 个 重 复 进 行 慢 性 繁 殖 实 验 (56 d), 其 余 4 个 重 复 进 行 精 子 畸 形 率 和 超 显 微 观 察 实 验 (14 d), 每 个 重 复 10 条 蚯 蚓, 蚯 蚓 染 毒 前 在 实 验 室 预 养 1 周. 染 毒 时, 不 同 剂 量 的 阿 苯 达 唑 首 先 溶 解 在 丙 酮 中, 然 后 与 人 工 土 壤 混 匀, 放 入 玻 璃 容 器 中 并 在 通 风 橱 中 通 风 12 h, 待 丙 酮 蒸 发 完, 放 入 蚯 蚓 并 于 人 工 气 候 箱 中 培 养, 箱 中 为 标 准 实 验 条 件 : 温 度 为 (23 ± 1), 湿 度 为 75% ± 2%, 光 暗 比 为 12 h / 12 h. 2.3 产 茧 孵 化 和 幼 蚓 产 生 的 测 定 染 毒 28 d 时 取 出 存 活 的 蚯 蚓, 洗 净 并 称 重, 同 时 卵 茧 和 孵 化 的 幼 蚓 被 检 出, 记 录 已 经 孵 化 和 未 孵 化 的 卵 茧 数 量, 并 记 录 卵 茧 重 量, 然 后 将 未 孵 化 的 卵 茧 和 幼 蚓 重 新 放 回 先 前 培 养 的 土 壤 中 继 续 培 养 28 d, 记 录 已 经 孵 化 和 未 孵 化 的 卵 茧 数 量 幼 蚓 数 量 及 其 重 量. 2.4 精 子 畸 形 率 的 测 定 染 毒 14 d 时 取 出 蚯 蚓,5% 乙 醇 麻 醉 5 min 后 解 剖, 取 出 贮 精 囊 放 在 滴 有 生 理 盐 水 的 载 玻 片 上, 通 过 挤 压 方 法 释 放 贮 精 囊 中 的 精 子 形 成 悬 液, 制 成 涂 片 后 甲 醇 固 定 和 Giemsa 染 色,400 倍 光 镜 下 观 察, 每 条 蚯 蚓 观 察 1000 个 精 子, 记 录 畸 形 精 子 的 形 态 和 数 量, 并 计 算 精 子 畸 形 率 (Zang et al.,2000). 2.5 超 微 结 构 的 观 察 染 毒 14 d 时, 取 出 贮 精 囊 ( 方 法 同 上 ), 放 入 2 5% 戊 二 醛 溶 液 中 固 定, 用 磷 酸 缓 冲 溶 液 冲 洗 干 净 后 修 成 1 mm 3 小 块 ; 然 后 用 1% 俄 酸 后 固 定, 乙 醇 梯 度 脱 水. 环 氧 树 脂 618 包 埋,LKB 型 超 薄 切 片 机 切 片, 醋 酸 双 氧 铀 柠 檬 酸 铅 双 染 色, 日 立 H27500 型 透 射 电 镜 拍 片. 2.6 统 计 分 析 根 据 SPSS17.0 软 件 的 单 因 素 方 差 分 析, 采 用 LSD 法 进 行 多 重 比 较 分 析. 3 结 果 与 分 析 (Results and analysis) 3.1 阿 苯 达 唑 对 蚯 蚓 产 茧 孵 化 和 幼 蚓 产 生 的 影 响 蚯 蚓 染 毒 28 d 时, 不 同 剂 量 的 阿 苯 达 唑 对 蚯 蚓 卵 茧 产 生 的 数 量 和 卵 茧 重 量 表 现 出 不 同 程 度 的 影 响 ( 见 图 1). 随 着 染 毒 剂 量 的 增 加 (3 ~ 12 mg kg -1 ), 每 条 蚯 蚓 产 生 的 卵 茧 数 量 显 著 下 降 (p<0.01), 并 表 现 出 明 显 的 剂 量 - 效 应 关 系, 而 卵 茧 重 量 只 有 在 染 毒 剂 量 达 到 12 mg kg -1 时 才 表 现 为 显 著 下 降 ( p < 0 05), 这 和 以 前 报 道 的 结 果 ( 王 轶 等,2009) 不 一 致, 该 研 究 认 为, 当 阿 苯 达 唑 的 染 毒 剂 量 达 到

3 1214 环 境 科 学 学 报 35 卷 7 mg kg 时才会对卵茧数量表现出显著性降低 而 的扩散 所以 影响卵茧产生数量的最低药物剂量 卵茧数量产生了影响 这可能与染毒的土壤有关 6 mg kg 本研究中阿苯达唑剂量达到 3 mg kg 时就已经对 本实验中采用的是标准的人工土壤 而该文献报道 中的染毒土壤是天然砂壤土 为 3 mg kg 而 影 响 孵 化 率 的 最 低 剂 量 则 为 随着染毒时间的延长 染毒 56 d 时 较高剂量 的阿苯达唑 9 和 12 mg kg 显著降低了卵茧的孵 化率 p 0 01 其孵化率分别只有 58 9 和 47 9 而对照组的孵化率较高 为 82 8 见图 2 从图 3 可以看出 染毒 56 d 时阿苯达唑对幼蚓产生的数量 和重量也有一定的影响 较低剂量 1 6 mg kg 的 阿苯达唑没有影响每条蚯蚓产生的幼蚓数量 p 0 05 但较高剂量 9 和 12 mg kg 却显著降低了 幼蚓数量 p 0 01 另外 不同剂量的阿苯达唑也降 低 了 幼 蚓 重 量 产 生 毒 性 影 响 的 最 低 剂 量 为 3 mg kg 可见 阿苯达唑染毒 56 d 时 幼蚓的重量 图 1 阿苯达唑对蚯蚓卵茧产生的影响 与对照组比较 p 0 05 p 0 01 下同 Fig 1 Effect of albendazole on cocoon production of earthworm 从 28 d 的卵茧孵化率 见图 2 可以看出 染毒 剂量达到或超过 6 mg kg 时 卵茧的孵化率显著降 低 p 0 05 6 12 mg kg 范围内的卵茧孵化率为 11 0 3 0 而对照组孵化率则为 14 7 可见 染 比其他繁殖指标 幼蚓数量和卵茧孵化率 对低剂 量更敏感 推断可能的原因是幼蚓通过采食含有药 物及其代谢物的基质以及通过皮肤扩散使更多的 有毒物质进入体内 从而影响了其生长 毒 28 d 时 卵茧数量对于低剂量的阿苯达唑比其他 繁殖指标 卵茧重量和孵化率 更敏感 已发表的文 献 Zhang et al 2008 Alves et al 2013 也证明了外 源化学污染物对蚯蚓慢性繁殖性能的毒理效应 但 Zhang 等 2008 认为 蚯蚓卵茧的孵化率比卵茧的 产生对于污染物的暴露更敏感 这和我们的研究结 果相反 其原因不是很清楚 本研究中阿苯达唑对蚯 蚓卵茧产生的毒性影响主要是通过两种渠道 即蚯 蚓的肠道吸收和皮肤扩散 Shalaby et al 2009 而 该药对蚯蚓孵化率的毒性影响只是通过卵茧表面 图 3 阿苯达唑对幼蚓产生的影响 Fig 3 Effect of albendazole on juvenile production of earthworms 3 2 阿苯达唑对蚯蚓精子畸形率的影响 不同剂量的阿苯达唑对蚯蚓精子的形态产生 不同程度的影响 见表 1 蚯蚓染毒 14 d 时 该药对 表 1 阿苯达唑对蚯蚓精子畸形率的影响 Table 1 Effect of albendazole on sperm deformity of earthworms 处理 对照组 图 2 阿苯达唑对蚯蚓卵茧孵化率的影响 earthworms 胖头 弯曲 顶端成环 精子 畸形率 8 82 50 00 41 18 1 58 ±0 36 42 11 50 00 7 89 4 47 ±0 96 1 mg kg 15 38 6 mg kg 70 69 3 mg kg Fig 2 Effect of albendazole on hatching success of cocoons of 所占比例 9 mg kg 12 mg kg 70 91 65 25 69 23 24 14 3 64 5 93 15 38 5 17 25 45 28 81 1 50 ±0 35 7 18 ±2 58 13 75 ±3 56 14 75 ±4 15

4 4期 高玉红等 兽药阿苯达唑的蚯蚓繁殖毒性研究 1215 精子畸形率产生显著影响的最低剂量为 6 mg kg 6 12 mg kg 时 畸形精子的形态以胖头最多 为显著性增加 尤其是当剂量达 12 mg kg 时 精子 2000 也研究了蚯蚓暴露于杀虫剂的环境中精子 p 0 05 随着染毒剂量的增加 精子畸形率表现 畸形率高达 14 75 而对照组只有 1 58 从表 1 和 图 4 也可以看出 畸形精子的形态主要包括 3 种 胖 头 顶端成环和弯曲 低剂量 1 和 3 mg kg 染毒 时 畸形精子的形态以身体弯曲最多 而较高剂量 其次是顶端成环 身体弯曲的精子比例最低 Zang 等 畸形率的变化 研究发现 畸形精子的主要形态为 头部钩状弯曲和顶端成环 只有少数表现为胖头和 卷尾 这和我们的研究不是很一致 可能与化学污 染物的结构和性质有关 这仍需进一步探索和研究 图 4 阿苯达唑染毒时蚯蚓的畸形精子形态 a 正常精子 箭头 和弯曲的精子 粗箭头 b 顶部成环 箭头 和胖头精子 粗箭头 Fig 4 Deformed sperm morphology of earthworms to albendazole exposure a normal sperm arrow and curving sperm arrow head b apical loop arrow and swollen head arrow head 3 3 阿苯达唑对蚯蚓贮精囊超微结构的影响 一些线粒体的基质颗粒明显减少 部分嵴消失 图 从图 5 可以看到 蚯蚓精子细胞中正常的线粒 5b 随着染毒剂量的增加 细胞核的核膜及染色质 布于细胞核中 图 5a 当染毒剂量为 3 mg kg 时 变形 图 5c 染毒为 9 mg kg 时 核内染色质出现 体嵴发达 基质颗粒明显 致密的染色体均匀地分 也出现了异常 染毒剂量为 6 mg kg 时 核膜凹陷 图 5 阿苯达唑对蚯蚓贮精囊超微结构的影响 a 对照 左边箭头示正常的线粒体 右边箭头示正常的染色质 b 3 mg kg 箭头示损伤的 线粒体 c 6 mg kg 箭头示变形的核膜 d 9 mg kg 箭头示水肿的染色质 e 12 mg kg 上边箭头示严重损伤的线粒体 下边箭 头示水肿的染色质 Fig 5 Effect of albendazole on ultrastructure in seminal vesicles of earthworms a control normal mitochondria left arrow and chromatin right arrow b 3 mg kg damaged mitochondria arrow c 6 mg kg sunken nucleus membrane arrow d 9 mg kg chromatin edema arrow e 12 mg kg seriously damaged mitochondria above arrow and chromatin edema below arrow

5 1216 环 境 科 学 学 报 35 卷 了 小 范 围 水 肿 ( 图 5d ); 当 染 毒 达 到 最 高 剂 量 (12 mg kg -1 ) 时, 精 子 细 胞 损 伤 严 重, 尤 其 是 线 粒 体, 出 现 严 重 水 肿, 且 嵴 消 失, 部 分 线 粒 体 膜 溶 解 模 糊 不 清, 出 现 空 泡 化 状 态, 而 且 核 内 染 色 质 出 现 大 面 积 水 肿 ( 图 5e). 我 们 以 前 的 文 献 ( 高 玉 红 等, 2007) 也 报 道 了 阿 苯 达 唑 损 伤 蚯 蚓 肠 道 上 皮 细 胞 的 线 粒 体 结 构, 其 超 微 结 构 变 化 和 本 实 验 基 本 一 致, 这 也 与 邵 萍 等 (1996) 对 囊 虫 的 研 究 一 致, 人 体 内 外 的 囊 虫 在 阿 苯 哒 唑 作 用 下, 囊 虫 线 粒 体 出 现 溶 解 或 肿 胀, 甚 至 空 泡 化 等 病 变. 线 粒 体 是 细 胞 内 最 易 受 损 伤 的 敏 感 细 胞 器, 线 粒 体 的 受 损 将 造 成 能 量 匮 乏, 导 致 蛋 白 质 合 成 运 输 中 断, 从 而 引 起 一 系 列 细 胞 功 能 的 障 碍, 最 后 导 致 细 胞 的 死 亡. 结 合 光 镜 下 畸 形 精 子 形 态 的 观 察 和 畸 形 率 的 分 析, 电 镜 下 精 子 细 胞 的 超 微 结 构 变 化 对 低 剂 量 阿 苯 达 唑 更 敏 感, 超 微 结 构 产 生 明 显 变 化 的 阿 苯 达 唑 最 低 剂 量 为 3 mg kg -1, 而 对 精 子 畸 形 率 产 生 显 著 影 响 的 最 低 剂 量 为 6 mg kg 结 论 (Conclusion) 1) 蚯 蚓 染 毒 28 d 的 产 茧 数 量 和 染 毒 56 d 的 幼 蚓 重 量 对 低 剂 量 阿 苯 达 唑 比 较 敏 感, 当 染 毒 剂 量 达 到 或 超 过 3 mg kg -1 时, 卵 茧 数 量 和 幼 蚓 重 量 显 著 降 低. 2)14 d 短 期 染 毒 时, 蚯 蚓 贮 精 囊 中 精 子 细 胞 的 超 微 结 构 变 化 比 光 镜 下 精 子 畸 形 率 变 化 对 低 剂 量 阿 苯 达 唑 敏 感, 发 生 明 显 变 化 的 最 低 剂 量 分 别 为 3 和 6 mg kg -1. 该 研 究 结 果 可 为 该 类 兽 药 残 留 的 土 壤 生 态 毒 理 及 早 期 检 测 提 供 依 据. 责 任 作 者 简 介 : 郭 建 军 (1973 ), 男, 农 业 技 术 推 广 研 究 员, 承 德 市 畜 牧 研 究 所, 主 要 研 究 方 向 为 畜 禽 废 弃 物 处 理 及 环 境 评 价. E mail: gjj730209@ 126.com. 参 考 文 献 (References): Alves P R, Cardoso E J B, Martines A M, et al Earthworm ecotoxicological assessments of pesticides used to treat seeds under tropical conditions [ J]. Chemosphere, 90(11): Batzias G C, Theodosiadou E, Delis G A Quantitative determination of albendazole metabolites in sheep spermatozoa and seminal plasma by liquid chromatographic analysis with fluorescence detection [ J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 35(5): Carlsson G, Patring J, Kreuger J, et al Toxicity of 15 veterinary pharmaceuticals in zebrafish ( Danio rerio) embryos [ J]. Aquatic Toxicology, 126: Escher B I, Berger C, Bramaz N, et al Membrane water partitioning, membrane permeability, and baseline toxicity of the parasiticides ivermectin, albendazole, and morantel [ J ]. Environmental Toxicology and Chemistry, 27(4): Gao Y H, Sun Z J, Sun X S, et al Toxic effects of albendazole on adenosine triphosphatase activity and ultrastructure in Eisenia fetida [ J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 67(3): 高 玉 红, 贾 鎏 辉, 吴 占 军, 等 兽 药 阿 苯 达 唑 对 蚯 蚓 精 子 发 生 的 显 微 和 超 显 微 结 构 的 影 响 [ J]. 环 境 科 学 学 报, 32 ( 10): 李 庆 章, 郝 艳 红, 高 学 军, 等 苯 并 咪 唑 氨 基 甲 酸 酯 类 药 物 抗 猪 囊 尾 蚴 的 作 用 靶 点 [J]. 中 国 农 业 科 学, 40(5): Rao J V, Kavitha P Toxicity of azodrin on the morphology and acetylcholinesterase activity of the earthworm Eisenia foetida [ J]. Environmental Research, 96(3): Shalaby H A, Abdel Shafy S, Abdel Rahman K A, et al Comparative in vitro effect of artemether and albendazole on adult Toxocara canis [ J]. Parasitology Research, 105(4): 邵 萍, 卞 英 华, 陈 佩 惠, 等 阿 苯 哒 唑 对 体 外 培 养 猪 囊 虫 头 节 作 用 的 透 射 电 镜 观 察 Ⅰ[ J]. 寄 生 虫 与 医 学 昆 虫 学 报, 3( 3): 王 轶, 唐 云, 徐 凌 凌, 等 阿 苯 哒 唑 对 蚯 蚓 的 生 态 毒 理 效 应 [J]. 应 用 生 态 学 报, 20(9): Wu S J, Zhang H X, Zhao S L, et al Biomarker responses of earthworms ( Eisenia fetida) exposured to phenanthrene and pyrene both singly and combined in microcosms[ J]. Chemosphere, 87(4): Zang Y, Zhong Y, Luo Y, et al Genotoxicity of two novel pesticides for the earthworm, Eisenia fetida [ J ]. Environmental Pollution, 108(2): Zhang B H, Cox S B, McMurry S T, et al Effect of two major N nitroso hexahydro 1, 3, 5 trinitro 1, 3, 5 triazine ( RDX ) metabolites on earthworm reproductive success [ J]. Environmental Pollution, 153(3): 赵 冠 宏, 许 炽 标 阿 苯 哒 唑 在 猪 囊 尾 蚴 病 患 者 体 内 吸 收 和 排 泄 的 初 步 研 究 [J]. 中 国 航 天 医 药 杂 志, 4(3): 4 5

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