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1 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec.2015 袁 Vol. 24 袁 No 研 究 报 告 丹 参 酮 域 A 对 慢 性 心 力 衰 竭 心 肌 重 构 的 影 响 及 其 机 制 研 究 鄢 冯 俊 陈 华 文 李 树 生 渊 华 中 科 技 大 学 同 济 医 学 院 袁 湖 北 武 汉 冤 中 图 分 类 号 院 R285.5 文 献 标 志 码 院 A 文 章 编 号 院 X 渊 2015 冤 doi 院 /j.issn X 揖 摘 要 铱 目 的 观 察 丹 参 酮 域 A 通 过 调 控 mir-133 水 平 对 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 心 肌 重 构 的 影 响 遥 方 法 SD 大 鼠 行 腹 主 动 脉 缩 窄 术 建 立 心 力 衰 竭 模 型 袁 给 予 连 续 12 周 的 丹 参 酮 域 A 治 疗 袁 mir-133 拮 抗 剂 组 同 时 给 与 皮 下 植 入 渗 透 泵 持 续 泵 入 拮 抗 剂 antagomirs 曰 分 析 12 周 后 大 鼠 心 肌 心 脏 及 左 心 室 质 量 指 数 尧 凋 亡 指 数 尧 胶 原 含 量 及 caspase-9 尧 结 缔 组 织 生 长 因 子 渊 CTGF 冤 尧 RhoA 蛋 白 水 平 遥 结 果 与 假 手 术 组 比 较 袁 手 术 组 心 脏 及 左 心 室 质 量 指 数 尧 凋 亡 指 数 和 胶 原 含 量 增 加 渊 P<0.05 冤 袁 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 蛋 白 水 平 表 达 上 升 渊 P<0.05 冤 曰 丹 参 酮 域 A 处 理 组 大 鼠 各 指 标 均 有 改 善 渊 P<0.05 冤 曰 皮 下 连 续 泵 入 antagomirs 能 够 部 分 消 除 丹 参 酮 域 A 的 抗 心 肌 重 构 作 用 渊 P<0.05 冤 遥 结 论 丹 参 酮 域 A 可 能 通 过 上 调 mir-133 水 平 袁 从 而 调 控 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 蛋 白 水 平 的 表 达 发 挥 抗 心 肌 重 构 的 作 用 遥 揖 关 键 词 铱 丹 参 酮 域 A mir-133 心 力 衰 竭 心 肌 重 构 The Effect and Mechanism of Tanshinone 域 Aon Myocardial Remodeling in Rats with Heart Failure FENG Jun 袁 CHEN Huawen 袁 LI Shusheng. Tongji Hospital Affiliated to Tongji Medical College 袁 HuaZhong Uni 鄄 versity of Science and Technology 袁 Hubei 袁 Wuhan 袁 China 揖 Abstract 铱 Objective 院 To investigate the effect of mir-133 on myocardial remodeling in rats with chronic heart failure induced by Tanshinone 域 Aand its mechanism. Methods 院 The rats with heart failure were induced by Abdominal aortic constriction 渊 AAC 冤.The Tan 域 Ainjection was applied in the continuous twelve weeks 袁 while part of the rats were subcutaneously implanted with osmotic pump to pump into the antagomirs 渊 inhibition of mir- 133 冤. Twelve weeks later 袁 cardiac index 袁 left ventricular mass index 袁 apoptosis index 袁 collagen content and the protein expression of caspase-9 袁 CTGF and RhoA were Analysized. Results 院 Compared with Sham group 袁 AAC operation could increase cardiac index 袁 left ventricular mass index 袁 apoptosis index and collagen content 渊 P< 0.05 冤 袁 and enhance the protein expression of caspase-9 袁 CTGF and RhoA 渊 P<0.05 冤 曰 Tan 域 Atreatment on AAC rats could improve those items above with significant difference 渊 P<0.05 冤.Subcutaneous pumping of antagomirs could abolish these effects of Tan 域 A. Conclusions 院 Tan 域 Amay resist the cardiac remodeling of the rats with heart failure by lift regulating mir-133 levels to regulate the protein expression of caspase-9 袁 CTGF and RhoA. 揖 Key words 铱 Tanshinone 域 A 曰 MiR-133 曰 Heart failure rats 曰 Cardiac remodeling 心 室 肌 重 构 是 心 力 衰 竭 的 独 立 危 险 因 素 袁 随 着 心 室 肌 组 织 重 构 的 发 生 及 发 展 袁 最 终 导 致 心 肌 缺 血 尧 心 律 咱 1 暂 失 常 和 猝 死 遥 研 究 发 现 袁 我 国 传 统 中 药 丹 参 的 主 要 成 咱 2-4 暂 分 丹 参 酮 域 A 具 有 抗 心 室 肌 重 构 的 作 用 曰 最 近 研 究 咱 5 暂 发 现 袁 mir-133 可 调 节 相 关 因 子 如 caspase-9 尧 结 缔 组 咱 6 暂 咱 7 暂 织 生 长 因 子 渊 CTGF 冤 尧 RhoA 等 表 达 实 现 抗 心 肌 重 构 的 作 用 曰 笔 者 的 前 期 研 究 已 经 发 现 袁 丹 参 酮 域 A 可 以 升 咱 8 暂 高 心 力 衰 竭 大 鼠 下 降 的 mir-133 mrna 水 平 遥 本 实 验 研 究 丹 参 酮 对 mir-133 的 靶 基 因 caspase-9 尧 CTGF 尧 鄢 基 金 项 目 院 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 渊 冤 RhoA 等 的 影 响 袁 进 一 步 探 讨 丹 参 酮 域 A 此 作 用 的 可 能 机 制 遥 现 报 告 如 下 遥 1 材 料 与 方 法 1.1 动 物 健 康 成 年 雄 性 SD 大 鼠 40 只 袁 月 龄 2 个 月 袁 体 质 量 250 耀 300 g 袁 同 济 医 学 院 动 物 实 验 中 心 提 供 遥 1.2 试 剂 与 仪 器 丹 参 酮 域 A 磺 酸 钠 注 射 液 袁 上 海 第 一 生 化 药 业 有 限 公 司 产 品 曰 国 产 分 析 纯 袁 武 汉 康 盛 医 药 科 技 有 限 公 司 产 品 遥 1.3 分 组 与 造 模 将 SD 大 鼠 随 机 分 为 4 组 袁 假 手 术 组 渊 Sham 组 冤 尧 手 术 组 渊 Model 组 冤 尧 丹 参 酮 域 A 组 渊 Model+ Tan 域 A 组 冤 尧 mir-133 抑 制 剂 处 理 组 渊 Model+Tan 域 A+

2 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec 袁 Vol. 24 袁 No.12 antagomirs 组 冤 袁 每 组 10 只 袁 4 组 大 鼠 均 于 同 一 环 境 下 饲 养 遥 采 用 腹 主 动 脉 缩 窄 法 渊 AAC 冤 构 建 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 模 型 袁 10% 水 合 氯 醛 渊 0.3 ml/kg 冤 腹 腔 麻 醉 袁 仰 位 固 定 袁 腹 部 常 规 备 毛 尧 消 毒 袁 于 腹 中 线 开 腹 处 理 袁 暴 露 分 离 腹 主 动 脉 袁 8 号 针 头 平 行 置 于 腹 主 动 脉 旁 后 采 用 手 术 缝 线 渊 4 原 0 冤 将 两 者 结 扎 袁 随 后 抽 出 针 头 关 闭 腹 腔 遥 术 后 腹 腔 注 射 青 霉 素 抗 感 染 遥 假 手 术 组 只 分 离 腹 主 动 脉 袁 不 结 扎 遥 正 常 喂 养 4 周 遥 从 第 5 周 开 始 袁 丹 参 酮 域 A 组 给 予 丹 参 酮 域 A 磺 酸 钠 注 射 液 咱 1mL/ 渊 kg 窑 d 冤 暂 连 续 12 周 灌 胃 袁 其 余 两 组 均 给 予 等 容 积 0.9% 氯 化 钠 注 射 液 袁 此 外 袁 mir-133 抑 制 剂 处 理 组 还 于 皮 下 植 入 渗 透 泵 持 续 泵 入 antagomirs 渊 0.6 滋 mol/l 冤 遥 1.4 观 察 指 标 心 脏 指 数 渊 HWI 冤 及 左 心 室 质 量 指 数 渊 LVMI 冤 袁 静 脉 注 射 过 量 的 氯 化 钾 可 使 心 脏 止 于 收 缩 期 袁 迅 速 取 出 心 脏 称 重 袁 并 分 离 大 血 管 尧 心 房 及 右 心 室 袁 用 预 冷 的 PBS 液 充 分 冲 洗 袁 滤 纸 吸 干 袁 称 量 左 心 室 渊 包 括 室 间 隔 冤 的 湿 重 袁 以 心 脏 渊 mg 冤 与 体 质 量 渊 g 冤 之 比 作 为 HWI 袁 左 室 质 量 渊 mg 冤 与 体 质 量 渊 g 冤 之 比 作 为 LVMI 遥 Masson 染 色 观 察 心 室 肌 胶 原 变 化 情 况 袁 将 左 心 室 中 部 冠 状 切 面 的 心 肌 组 织 用 4% 多 聚 甲 醛 固 定 后 制 备 成 石 蜡 包 埋 切 片 渊 5 滋 m 冤 袁 脱 蜡 至 水 袁 按 照 Masson 试 剂 盒 指 示 方 法 进 行 染 色 袁 胶 原 纤 维 呈 蓝 色 袁 心 肌 纤 维 呈 红 色 袁 胞 核 黑 蓝 色 遥 观 察 心 肌 胶 原 纤 维 含 量 变 化 遥 TUNEL 法 检 测 心 肌 细 胞 凋 亡 遥 大 鼠 处 死 后 取 出 左 心 室 袁 依 次 4% 福 尔 马 林 固 定 尧 梯 度 酒 精 脱 水 尧 石 蜡 包 埋 和 切 片 渊 5 滋 m 冤 袁 按 照 TUNEL 试 剂 盒 提 供 的 步 骤 进 行 心 肌 细 胞 凋 亡 的 检 测 袁 统 计 每 个 视 野 的 染 色 阳 性 细 胞 数 袁 以 阳 性 细 胞 所 占 的 比 例 计 为 凋 亡 指 数 遥 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 水 平 表 达 袁 采 用 western bolt 法 检 测 心 肌 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 水 平 袁 取 大 鼠 心 肌 组 织 100 mg 袁 提 取 总 蛋 白 袁 依 次 加 入 上 样 缓 冲 液 煮 沸 变 性 尧 10% SDS- PAGE 电 泳 尧 转 膜 尧 5% 脱 脂 奶 粉 封 闭 尧 一 抗 渊 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 冤 孵 育 过 夜 袁 二 抗 孵 育 后 进 行 ECL 显 示 处 理 曰 Gel-Pro analyzer 分 析 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 光 密 度 袁 以 茁 -actin 作 为 内 参 照 对 比 袁 比 值 结 果 表 示 其 蛋 白 的 相 对 含 量 遥 1.5 统 计 学 处 理 采 用 SPSS18.0 统 计 软 件 分 析 遥 计 量 资 料 以 渊 x 依 s 冤 表 示 袁 多 组 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析 袁 两 两 比 较 采 用 SNK 法 遥 P<0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 遥 2 结 果 2.1 各 组 大 鼠 左 心 室 质 量 指 数 测 定 结 果 比 较 见 表 1 遥 与 Sham 组 比 较 袁 Model 组 的 HWI 和 LVMI 均 显 著 升 高 渊 P<0.05 冤 遥 Tan 域 A 处 理 后 HWI 和 LVMI 均 明 显 降 低 渊 P<0.05 冤 袁 说 明 Tan 域 A 可 抑 制 左 心 室 重 构 袁 而 Model+ Tan 域 A+antagomirs 组 的 HWI 和 LVMI 较 Model+Tan 域 A 组 上 升 渊 P<0.05 冤 袁 说 明 antagomirs 可 部 分 抵 消 Tan 域 A 抑 制 左 心 室 重 构 遥 表 各 组 Masson 染 色 观 察 心 肌 胶 原 含 量 变 化 比 较 见 图 1 遥 正 常 心 肌 细 胞 呈 红 色 袁 胶 原 呈 绿 色 遥 Sham 组 心 肌 间 隙 可 见 少 量 胶 原 纤 维 袁 排 列 整 齐 曰 Model 组 大 鼠 心 肌 间 隙 见 大 量 胶 原 堆 积 袁 并 有 微 瘢 痕 形 成 袁 心 肌 纤 维 排 列 紊 乱 袁 间 质 胶 原 纤 维 增 生 袁 以 血 管 周 围 为 明 显 袁 非 血 管 区 胶 原 纤 维 增 生 程 度 比 血 管 周 围 轻 曰 Model+Tan 域 A 组 可 见 不 同 程 度 胶 原 沉 积 于 细 胞 间 质 袁 胶 原 纤 维 排 列 紊 乱 袁 间 质 纤 维 增 生 袁 以 血 管 周 围 为 明 显 袁 但 总 体 胶 原 纤 维 增 生 程 度 较 Model 组 明 显 减 轻 遥 Model+Tan 域 A+ antagomirs 组 胶 原 纤 维 增 生 程 度 较 Model+Tan 域 A 组 明 显 遥 各 组 心 脏 指 数 和 左 心 室 指 数 结 果 比 较 渊 mg/g 袁 x 依 s 冤 组 别 n HWI LVWI Sham 组 依 依 0.04 Model 组 依 依 0.13 Model+Tan 域 A 组 依 0.08 * 2.15 依 0.03 * Model+Tan 域 A+antagomirs 组 依 0.12 银 2.68 依 0.08 银 与 Sham 组 比 较 袁 P 约 0.05 曰 与 Model 组 比 较 袁 鄢 P 约 0.05 曰 与 Model+Tan 域 A 组 比 较 袁 银 P 约 0.05 袁 下 同 遥 Model 组 Model+Tan 域 A 组 图 各 组 大 鼠 心 肌 细 胞 凋 亡 情 况 比 较 见 表 2 和 图 2 遥 与 Sham 组 比 较 袁 Model 组 凋 亡 指 数 明 显 升 高 渊 P< 0.05 冤 袁 而 Tan 域 A 可 以 降 低 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 心 肌 凋 亡 指 数 渊 P<0.05 冤 曰 皮 下 泵 入 antagomirs 可 部 分 拮 抗 Tan 域 A 的 作 用 渊 P<0.05 冤 遥 Model+Tan 域 A+antagomirs 组 Sham 组 各 组 大 鼠 心 肌 心 肌 胶 原 含 量 变 化 2.4 Caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 水 平 表 达 见 表 3 和 图 3 遥 与 Sham 组 比 较 袁 Model 组 心 肌 细 胞 的 cas 鄄 pase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 水 平 上 升 渊 P<0.05 冤 袁 Tan 域 A 可 使 三 者 的 蛋 白 水 平 降 低 袁 Model+Tan 域 A 组 与 Model 组 比 较 袁 差 异 有 统 计 学 意 义 渊 P<0.05 冤 曰 皮 下 连 续

3 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec.2015 袁 Vol. 24 袁 No 表 2 各 组 大 鼠 心 脏 凋 亡 指 数 比 较 渊 x 依 s 冤 组 别 n 凋 亡 指 数 Sham 组 依 0.01 Model 组 依 0.03 Model+Tan 域 A 组 依 0.01 * Model+Tan 域 A+antagomirs 组 10 * 银 0.35 依 0.02 图 2 各 组 大 鼠 心 肌 心 肌 细 胞 凋 亡 指 数 比 较 泵 入 antagomirs 能 够 部 分 消 除 Tan 域 A 的 作 用 袁 使 cas 鄄 pase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 蛋 白 水 平 上 升 渊 P<0.05 冤 遥 表 3 各 组 心 脏 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 水 平 比 较 渊 x 依 s 冤 组 别 n Caspase-9 CTGF RhoA Sham 组 依 依 依 0.00 Model 组 依 依 依 0.19 Model+Tan 域 A 组 依 0.08 * 1.26 依 0.12 * 1.27 依 0.09 * Model+Tan 域 A+antagomirs 组 10 * 银 1.78 依 0.12 * 银 1.66 依 0.08 * 银 1.83 依 0.18 图 3 各 组 大 鼠 心 肌 心 肌 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 水 平 水 平 比 较 3 讨 论 丹 参 酮 域 A 是 丹 参 乙 醚 提 取 物 中 的 脂 溶 性 有 效 成 分 遥 研 究 表 明 其 具 有 抗 心 室 重 构 的 作 用 袁 治 疗 各 种 原 因 咱 9 暂 导 致 的 慢 性 心 力 衰 竭 袁 能 明 显 改 善 心 功 能 遥 本 实 验 用 腹 主 动 脉 缩 窄 法 建 立 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 模 型 袁 发 现 手 术 组 术 后 左 心 室 质 量 指 数 和 凋 亡 指 数 明 显 升 高 袁 Masson 染 色 显 示 大 量 心 肌 胶 原 沉 积 袁 间 质 胶 原 纤 维 增 生 遥 给 予 丹 参 酮 域 A 处 理 后 袁 和 手 术 组 相 比 袁 大 鼠 左 心 室 肥 厚 指 标 尧 凋 亡 指 数 以 及 心 肌 胶 原 含 量 等 明 显 改 善 袁 提 示 丹 参 酮 域 A 可 抑 制 和 逆 缓 左 心 室 重 构 遥 此 外 袁 在 给 予 AAC 大 鼠 丹 参 酮 域 A 处 理 的 同 时 袁 皮 下 植 入 渗 透 泵 连 续 泵 入 mir-133 的 抑 制 剂 antagomirs 以 证 明 丹 参 酮 域 A 是 否 通 过 调 控 mir-133 来 抑 制 心 力 衰 竭 大 鼠 左 心 室 重 构 袁 经 antagomirs 处 理 后 袁 左 心 室 肥 厚 指 标 尧 凋 亡 指 数 以 及 心 肌 胶 原 含 量 变 化 情 况 较 丹 参 酮 域 A 组 恶 化 袁 表 明 antagomirs 可 以 下 调 mir-133 的 表 达 从 而 部 分 消 除 丹 参 酮 域 A 抗 心 力 衰 竭 大 鼠 左 心 室 重 构 的 作 用 遥 Caspase-9 是 线 粒 体 介 导 的 细 胞 凋 亡 的 关 键 调 节 因 子 之 一 遥 在 凋 亡 刺 激 下 袁 细 胞 色 素 C 以 datp 的 形 式 从 线 粒 体 释 放 到 细 胞 质 中 袁 和 凋 亡 蛋 白 酶 激 活 因 子 -1 渊 APAF-1 冤 和 caspase-9 形 成 凋 亡 复 合 体 遥 凋 亡 复 合 体 激 活 caspase-9 袁 然 后 蛋 白 水 解 激 活 caspase-3 袁 共 同 参 咱 10 暂 与 细 胞 凋 亡 遥 细 胞 外 基 质 渊 ECM 冤 是 保 持 心 肌 组 织 强 度 和 功 能 完 整 性 的 必 要 物 质 遥 高 血 压 和 压 力 负 荷 等 病 理 刺 激 下 袁 ECM 蛋 白 质 在 心 脏 过 量 积 聚 遥 CTGF 是 一 种 由 细 胞 外 基 质 合 成 的 分 泌 性 蛋 白 袁 是 一 个 重 要 的 组 织 纤 维 化 介 质 袁 在 心 肌 重 塑 过 程 中 袁 心 肌 细 胞 也 可 分 泌 咱 11 暂 CTGF 遥 RhoA 是 小 GTP- 结 合 蛋 白 的 成 员 之 一 袁 其 最 重 要 的 功 能 是 调 节 肌 动 蛋 白 细 胞 骨 架 袁 其 次 在 基 因 转 咱 20 暂 录 尧 细 胞 周 期 调 控 尧 膜 泡 运 输 等 过 程 中 也 起 重 要 作 用 遥 RhoA 激 酶 依 赖 性 通 路 也 可 通 过 收 缩 血 管 平 滑 肌 细 胞 尧 作 为 G 蛋 白 耦 联 受 体 的 下 游 目 标 尧 激 活 心 脏 和 全 身 肾 素 - 血 管 紧 张 素 - 醛 固 酮 系 统 活 性 等 途 径 参 与 心 力 衰 竭 大 鼠 的 肾 血 管 收 缩 和 心 肌 肥 厚 袁 并 参 与 调 节 心 咱 暂 脏 形 态 的 变 化 和 基 因 表 达 的 变 化 遥 本 实 验 慢 性 心 力 衰 竭 模 型 组 大 鼠 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 表 达 水 平 上 升 袁 给 予 丹 参 酮 域 A 干 预 后 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 表 达 水 平 均 明 显 降 低 袁 提 示 丹 参 酮 域 A 可 能 通 过 抑 制 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 表 达 来 抑 制 左 心 室 重 构 遥 此 外 袁 在 给 予 模 型 大 鼠 丹 参 酮 域 A 处 理 的 同 时 袁 给 予 mir-133 的 抑 制 剂 干 预 后 袁 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 的 蛋 白 表 达 水 平 明 显 下 降 袁 表 明 antagomirs 可 以 下 调 mir-133 的 表 达 从 而 部 分 消 除 丹 参 酮 域 A 的 作 用 遥 以 上 证 据 表 明 袁 mir-133 在 丹 参 酮 域 A 抗 心 室 重 构 过 程 中 发 挥 着 重 要 的 作 用 袁 而 丹 参 酮 域 A 通 过 上 调 mir-133 水 平 抗 心 室 重 构 的 可 能 的 途 径 是 通 过 mir-133 来 调 控 相 关 蛋 白 如 caspase-9 尧 CTGF 尧 RhoA 等 的 表 达 袁 进 而 影 响 心 室 重 构 遥 渊 下 转 第 2126 页 冤

4 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec 袁 Vol. 24 袁 No.12 研 究 报 告 麻 黄 细 辛 附 子 汤 对 正 常 小 鼠 外 感 及 肾 阳 虚 模 型 小 鼠 外 感 影 响 的 比 较 鄢 袁 2 孙 启 慧 相 美 容 王 朋 展 侯 衍 豹 容 蓉 杨 勇 渊 1. 山 东 中 医 药 大 学 袁 山 东 济 南 曰 2. 山 东 省 经 方 研 究 重 点 实 验 室 袁 山 东 济 南 冤 中 图 分 类 号 院 R285.5 文 献 标 志 码 院 A 文 章 编 号 院 X 渊 2015 冤 doi 院 /j.issn X 揖 摘 要 铱 目 的 探 讨 麻 黄 细 辛 附 子 汤 渊 MXF 冤 对 正 常 小 鼠 外 感 和 肾 阳 虚 模 型 小 鼠 外 感 干 预 作 用 效 果 差 异 遥 方 法 KM 小 鼠 按 体 质 量 和 肛 温 随 机 分 成 6 组 袁 并 设 空 白 对 照 组 遥 腹 腔 注 射 苯 甲 酸 雌 二 醇 渊 8mg/kg 冤 法 复 制 肾 阳 虚 小 鼠 模 型 袁 流 感 病 毒 H1N1 鸡 胚 尿 囊 液 渊 血 凝 滴 度 为 1 颐 320 冤 滴 鼻 感 染 小 鼠 袁 建 立 肾 阳 虚 小 鼠 外 感 模 型 遥 感 染 1d 后 给 分 别 给 MXF 和 利 巴 韦 林 药 物 干 预 袁 连 续 给 药 6d 袁 每 日 1 次 袁 观 察 并 记 录 小 鼠 的 体 质 量 尧 肛 温 变 化 袁 死 亡 数 和 死 亡 时 间 袁 比 较 各 脏 器 指 数 变 化 遥 结 果 肾 阳 虚 外 感 模 型 建 立 成 功 袁 肾 阳 虚 模 型 建 立 成 功 后 袁 小 鼠 死 亡 多 发 生 在 病 毒 感 染 后 的 2 耀 5d 之 内 曰 与 正 常 组 比 较 袁 其 余 6 组 小 鼠 体 质 量 显 著 降 低 渊 P 约 0.01 冤 曰 肾 阳 虚 外 感 组 及 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 的 肛 温 明 显 降 低 渊 P 约 0.01 冤 袁 肾 阳 虚 外 感 组 及 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 的 肺 指 数 明 显 升 高 渊 P 约 0.05 冤 遥 与 肾 阳 虚 外 感 组 比 较 袁 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 小 鼠 死 亡 率 尧 肺 指 数 均 有 所 降 低 袁 并 且 小 鼠 肛 温 显 著 回 升 渊 P 约 0.05 冤 曰 与 正 常 外 感 组 比 较 袁 正 常 外 感 MXF 组 小 鼠 死 亡 率 尧 肺 指 数 均 有 所 降 低 袁 肛 温 也 出 现 回 升 趋 势 曰 H1N1 感 染 小 鼠 袁 对 照 组 无 死 亡 袁 正 常 外 感 组 死 亡 率 10% 袁 肾 阳 虚 外 感 组 死 亡 率 20% 袁 利 巴 韦 林 分 别 给 药 干 预 后 死 亡 率 分 别 是 30% 和 10% 袁 MXF 给 药 干 预 后 正 常 外 感 组 和 肾 阳 虚 外 感 组 均 无 死 亡 现 象 袁 与 正 常 组 和 肾 阳 虚 外 感 模 型 组 比 较 袁 MXF 有 降 低 小 鼠 死 亡 率 的 趋 势 遥 结 论 MXF 更 适 合 于 肾 阳 虚 外 感 病 证 袁 为 临 床 上 方 证 相 关 用 药 提 供 了 一 定 的 实 验 依 据 遥 揖 关 键 词 铱 肾 阳 虚 模 型 外 感 正 常 小 鼠 外 感 流 感 病 毒 H1N1 MXF Intervention Comparison of Mahuang Xixin Fuzi Decoction on Influenza Virus in Normal Mice and Kid 鄄 ney-yang Deficiency Mice Model SUN Qihui 袁 XIANG Meirong 袁 WANG Pengzhan 袁 et al. Shandong University of Traditional Chinese Medicine 袁 Shandong 袁 Jinan 袁 China 揖 Abstract 铱 Objective 院 To investigate the difference in intervention of Mahuang Xixin Fuzi decoction on normal mice and Kidney-yang deficiency mice model with influenza virus. Methods 院 KM mice were randomly divided into six groups by weight and anus temperature 袁 including the normal group. The Kidney-yang deficiency mice model infected with influenza virus group and intervened by ribavirin or MXF group and so on 袁 according to the weight and rectal temperature. Kidney-yang deficiency model mice were established by intraperitoneal injection of estradiol benzoate 渊 8mg/kg 冤.Mice were infected with influenza virus H1N1 allantoic fluid 渊 Hemagglutination titer 1 颐 320 冤 by intranasal to establish the mice model of influenza disease with kidney-yang deficiency. After infection the mice were treated for 6days. Body weight and rectal temperature changes 袁 mortality and survival time were observed 袁 comparing the visceral index. Results 院 After the model established 袁 the infected mice died in 2~5 days. Compared with the normal group 袁 the weight of other groups decreased significantly 渊 P 约 0.01 冤 曰 the Kidney-yang deficiency mice model infected with influenza virus group and intervened by ribavirin decreased significantly 渊 P 约 0.01 冤 袁 and their lung index decreased 渊 P 约 0.05 冤.Compared with the normal group 袁 the other index of mice inter 鄄 vened by MXF became normal. After infected with H1N1 袁 there were no death in normal group 曰 the death rate of the normal infected with influenza virus was 10% 曰 the Kidney-yang deficiency mice model infected with influenza virus was 20% 曰 the group intervened by ribavirin was 30% and 10% 曰 and there were no death between the group intervened by MXF 袁 which indicated that the MXF could decrease the death rate of mice. Conclusion 院 MXF has 鄢 基 金 项 目 院 国 家 科 技 重 大 专 项 渊 2014ZX 冤 曰 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 渊 冤 曰 山 东 省 中 医 药 科 技 发 展 计 划 渊 冤 通 信 作 者 渊 电 子 邮 箱 院 yy7204@163.com 冤

5 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec.2015 袁 Vol. 24 袁 No better intervention for the Kidney-yang deficiency mice model infected with influenza virus 袁 providing acertain reference value for the clinical combination of traditional Chinese medicine. 揖 Key words 铱 MXF 曰 Kidney-yang deficiency mice model infected with influenza virus 曰 Normal mice model in 鄄 fected with influenza virus 曰 Influenza virus H1N1 曰 MXF 病 毒 性 流 行 性 感 冒 渊 流 感 冤 每 年 均 在 全 世 界 流 行 袁 其 波 及 范 围 极 广 袁 每 年 全 球 大 约 有 10~20% 的 人 感 染 流 感 袁 其 中 2009 年 全 球 爆 发 的 H1N1 甲 型 流 感 造 成 全 咱 1 暂 球 至 少 20 万 人 死 亡 遥 流 感 一 般 是 由 流 感 病 毒 引 起 的 上 呼 吸 道 病 毒 感 染 性 疾 病 袁 发 病 率 高 袁 潜 伏 期 短 袁 易 暴 咱 2 暂 发 流 行 袁 是 人 类 最 常 见 的 上 呼 吸 道 感 染 性 疾 病 之 一 遥 现 代 医 学 认 为 流 感 临 床 症 状 较 重 袁 起 病 急 骤 袁 有 畏 寒 尧 发 热 尧 头 痛 尧 头 晕 尧 全 身 酸 痛 尧 乏 力 等 袁 可 伴 有 咽 痛 尧 流 涕 尧 流 泪 尧 咳 嗽 等 呼 吸 道 症 状 曰 并 发 症 发 生 率 高 袁 特 别 是 肺 炎 袁 可 引 起 死 亡 袁 年 迈 体 弱 和 幼 年 多 病 或 有 慢 性 基 础 咱 3-4 暂 病 患 者 为 其 高 危 人 群 遥 目 前 袁 抗 流 感 病 毒 药 物 研 究 已 取 得 初 步 成 果 袁 正 式 上 市 的 抗 流 感 药 物 大 体 分 为 两 类 院 金 刚 烷 胺 和 金 刚 乙 胺 类 曰 神 经 氨 酸 酶 渊 NA 冤 抑 制 剂 袁 逐 渐 发 现 流 感 病 毒 对 这 些 药 物 产 生 了 不 同 程 度 的 耐 药 咱 5 暂 咱 6 暂 性 遥 中 医 药 治 疗 流 感 源 远 流 长 袁 疗 效 显 著 袁 麻 黄 细 辛 附 子 汤 渊 MXF 冤 始 载 于 叶 伤 寒 论 曳 袁 为 治 疗 阳 虚 兼 外 感 经 方 之 一 遥 本 方 组 方 严 谨 袁 由 麻 黄 尧 细 辛 尧 炮 附 子 组 成 袁 麻 黄 发 汗 解 表 袁 附 子 温 里 助 阳 袁 细 辛 温 化 寒 饮 袁 既 助 麻 黄 解 表 袁 又 配 合 附 子 逐 里 之 寒 饮 遥 全 方 具 有 助 阳 解 表 尧 温 经 散 寒 之 功 效 袁 用 于 治 疗 素 体 阳 虚 袁 复 感 寒 邪 袁 恶 寒 发 热 袁 寒 重 热 轻 袁 头 痛 无 汗 袁 四 肢 欠 温 袁 舌 质 淡 袁 苔 薄 白 袁 脉 咱 7 暂 沉 细 等 病 症 遥 本 研 究 通 过 比 较 MXF 对 肾 阳 虚 外 感 及 正 常 外 感 干 预 作 用 的 差 异 袁 拟 探 究 中 药 复 方 治 疗 疾 病 的 方 证 相 关 性 袁 为 其 在 中 医 临 床 上 的 辨 证 论 治 所 强 调 的 方 药 与 疾 病 的 高 度 相 关 性 提 供 实 验 依 据 遥 现 报 告 如 下 遥 1 材 料 与 方 法 1.1 动 物 KM 小 鼠 雄 性 渊 20 依 2 冤 g 袁 SPF 级 袁 由 山 东 鲁 抗 动 物 实 验 中 心 提 供 袁 动 物 许 可 证 号 SCXK 渊 鲁 冤 遥 1.2 试 剂 及 药 物 苯 甲 酸 雌 二 醇 渊 宁 波 第 二 激 素 厂 袁 批 号 冤 曰 流 感 病 毒 H1N1 渊 北 京 地 方 株 引 自 中 国 CDC 病 毒 病 研 究 所 冤 曰 利 巴 韦 林 颗 粒 渊 四 川 百 利 药 业 有 限 责 任 公 司 袁 批 号 冤 曰 麻 黄 尧 炮 附 子 尧 细 辛 渊 济 南 市 建 联 中 药 有 限 公 司 中 药 饮 片 厂 袁 批 号 冤 袁 经 山 东 中 医 药 大 学 李 峰 教 授 鉴 定 符 合 叶 中 国 药 典 曳 2010 年 版 标 准 遥 1.3 仪 器 智 能 恒 温 控 制 仪 渊 成 都 泰 盟 科 技 有 限 公 司 冤 曰 DT-880B 型 手 持 式 人 体 表 面 温 度 快 速 筛 检 仪 渊 深 圳 市 华 盛 昌 机 械 实 业 有 限 公 司 冤 曰 ZIL-2 型 小 鼠 自 主 活 动 仪 渊 北 京 医 科 院 药 研 所 冤 曰 YP601N 型 电 子 天 平 渊 上 海 精 密 科 学 仪 器 有 限 公 司 冤 遥 1.4 分 组 KM 小 白 鼠 按 体 质 量 和 肛 温 随 机 分 为 正 常 外 感 组 尧 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 及 MXF 组 袁 肾 阳 虚 外 感 组 尧 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 及 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 袁 并 设 空 白 对 照 组 遥 1.5 造 模 1 冤 正 常 外 感 模 型 的 制 备 院 KM 雄 性 小 鼠 36 只 随 机 分 为 3 组 袁 分 别 为 正 常 外 感 模 型 组 尧 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 尧 正 常 外 感 MXF 组 袁 流 感 病 毒 H1N1 鸡 胚 尿 囊 液 渊 血 凝 滴 度 为 1 颐 320 冤 滴 鼻 感 染 小 鼠 50 滋 L/ 只 袁 对 照 组 小 鼠 滴 鼻 接 种 等 量 的 50 滋 L/ 只 给 予 0.9% 氯 化 钠 注 射 液 袁 第 1 日 接 种 流 感 病 毒 袁 2 耀 7d 为 药 物 干 预 治 疗 袁 每 天 记 录 小 鼠 体 质 量 尧 肛 温 变 化 袁 观 察 小 鼠 的 精 神 状 态 尧 发 病 及 死 亡 情 况 遥 2 冤 肾 阳 虚 小 鼠 模 型 的 复 制 院 KM 雄 性 小 鼠 45 只 袁 参 考 文 献 方 法 咱 8 暂 并 改 进 造 模 剂 量 袁 4mL/kg 腹 腔 注 射 2mg/mL 苯 甲 酸 雌 二 醇 稀 释 液 袁 每 日 1 次 袁 连 续 15d 袁 复 制 肾 阳 虚 模 型 袁 对 照 组 小 鼠 4mL/kg 腹 腔 注 射 0.9 豫 氯 化 钠 注 射 液 袁 于 造 模 12 耀 13 d 进 行 相 关 指 标 检 测 袁 通 过 测 定 自 主 活 动 尧 肛 温 尧 趾 温 尧 游 泳 时 间 咱 9 暂 袁 以 此 判 定 模 型 成 功 与 否 遥 3 冤 肾 阳 虚 外 感 小 鼠 模 型 建 立 院 将 复 制 成 功 的 肾 阳 虚 模 型 小 鼠 以 体 质 量 尧 肛 温 为 变 量 袁 随 机 分 为 3 组 袁 分 别 为 肾 阳 虚 外 感 模 型 组 尧 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 尧 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 袁 接 种 流 感 病 毒 方 法 同 正 常 外 感 模 型 遥 1.6 给 药 小 鼠 灌 胃 量 按 20 ml/kg 计 算 袁 利 巴 韦 林 组 剂 量 为 g/ 渊 kg 窑 d 冤 袁 麻 黄 细 辛 附 子 汤 剂 量 为 2.5 g/ 渊 kg 窑 d 冤 均 相 当 于 人 临 床 等 效 剂 量 遥 感 染 第 2 日 给 药 袁 对 照 组 尧 模 型 组 以 10 ml/kg 的 体 积 灌 服 蒸 馏 水 袁 其 余 组 灌 服 同 体 积 的 利 巴 韦 林 及 MXF 袁 连 续 给 药 6d 袁 每 天 灌 胃 1 次 遥 1.7 观 察 指 标 1 冤 造 模 过 程 中 每 天 测 量 接 种 流 感 病 毒 后 小 鼠 的 肛 温 尧 体 质 量 1 次 袁 记 录 每 天 变 化 趋 势 袁 连 续 7d 遥 并 观 察 过 程 中 小 鼠 的 临 床 症 状 如 精 神 状 况 尧 活 动 度 尧 饮 食 等 变 化 遥 2 冤 计 算 每 组 的 死 亡 率 院 死 亡 率 = 死 亡 动 物 数 渊 只 冤 / 动 物 总 数 渊 只 冤 伊 100% 遥 3 冤 实 验 结 束 小 鼠 取 各 组 小 鼠 肺 尧 脾 尧 胸 腺 等 组 织 袁 称 取 脏 器 质 量 袁 计 算 脏 器 指 数 遥 1.8 统 计 学 处 理 采 用 SPSS17.0 统 计 学 软 件 遥 计 量 资 料 以 渊 x 依 s 冤 表 示 袁 死 亡 率 的 比 较 采 用 字 2 检 验 遥 组 间 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析 渊 one-way ANOVA 冤 LSD 检 验 遥 P<0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 遥 2 结 果 2.1 肾 阳 虚 小 鼠 模 型 建 立 见 表 1 遥 结 果 示 袁 造 模 后 与 对 照 组 小 鼠 比 较 袁 模 型 小 鼠 肛 温 尧 趾 温 尧 自 主 活 动 次 数

6 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec 袁 Vol. 24 袁 No.12 明 显 减 少 渊 P<0.01 冤 曰 游 泳 时 间 明 显 减 少 渊 P<0.05 冤 遥 结 合 上 述 指 标 表 明 肾 阳 虚 模 型 建 立 成 功 遥 表 1 造 模 对 小 鼠 肛 温 尧 趾 温 尧 自 主 活 动 尧 游 泳 时 间 的 影 响 渊 x 依 s 冤 组 别 n 肛 温 渊 益 冤 趾 温 渊 益 冤 自 主 活 动 渊 次 /10 min 冤 游 泳 时 间 渊 min 冤 模 型 组 依 依 依 依 对 照 组 依 依 依 依 与 对 照 组 比 较 袁 P 约 0.05 袁 P 约 0.01 遥 下 同 遥 2.2 各 组 小 鼠 一 般 情 况 比 较 对 照 组 小 鼠 皮 毛 干 爽 光 滑 袁 精 神 状 态 良 好 袁 活 泼 袁 体 质 量 渐 增 遥 正 常 外 感 组 小 鼠 感 染 初 期 出 现 不 活 泼 尧 打 喷 嚏 等 症 状 袁 总 体 质 量 从 第 2 日 开 始 下 降 直 至 最 后 解 剖 未 见 回 升 袁 期 间 严 重 者 甚 至 出 现 死 亡 遥 肾 阳 虚 外 感 模 型 组 小 鼠 感 染 24 h 后 袁 症 状 初 期 为 不 活 泼 尧 呼 吸 短 促 袁 挠 鼻 袁 喷 嚏 袁 后 期 呈 现 极 度 消 瘦 袁 尾 血 管 发 紫 袁 部 分 症 状 严 重 的 小 鼠 出 现 死 亡 袁 死 亡 多 发 生 在 感 染 后 的 2 耀 5d 之 内 遥 2.3 各 组 小 鼠 体 质 量 尧 肛 温 变 化 情 况 比 较 见 表 2 袁 表 3 遥 对 照 组 小 鼠 体 质 量 有 升 有 降 袁 但 总 体 呈 上 升 趋 势 曰 从 接 种 流 感 病 毒 起 袁 正 常 外 感 组 小 鼠 体 质 量 呈 持 续 降 低 趋 势 袁 到 第 5 日 降 至 最 低 袁 随 后 体 质 量 有 上 升 的 趋 势 曰 肾 阳 虚 外 感 模 型 组 小 鼠 体 质 量 从 第 1 日 开 始 一 直 呈 持 续 降 低 趋 势 未 见 恢 复 曰 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 尧 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 小 鼠 体 质 量 呈 急 剧 降 低 趋 势 袁 未 见 有 恢 复 趋 势 袁 且 该 组 动 物 整 体 出 现 不 健 康 状 态 袁 死 亡 率 比 较 高 袁 表 明 利 巴 韦 林 无 论 是 治 疗 普 通 外 感 尧 还 是 肾 阳 虚 外 感 袁 其 治 疗 作 用 均 较 差 曰 MXF 干 预 后 袁 正 常 外 感 组 小 鼠 接 种 病 后 前 2d 体 质 量 呈 降 低 趋 势 袁 给 药 第 3 日 开 始 呈 逐 渐 上 升 趋 势 袁 肾 阳 虚 外 感 组 小 鼠 MXF 干 预 后 体 质 量 一 直 呈 较 明 显 上 升 趋 势 袁 说 明 MXF 对 肾 阳 虚 外 感 小 鼠 体 质 量 回 升 有 更 明 显 作 用 遥 接 种 流 感 病 毒 后 对 照 组 小 鼠 肛 温 明 显 高 于 其 他 组 小 鼠 袁 第 1 日 ~5 日 与 肾 阳 虚 外 感 模 型 组 及 肾 阳 虚 外 感 给 药 组 比 较 袁 差 异 具 有 统 计 学 意 义 渊 P<0.01 冤 遥 第 6 日 起 正 常 外 感 组 及 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 肛 温 比 正 常 组 降 低 渊 P<0.05 冤 袁 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 肛 温 明 显 回 升 与 正 常 组 差 别 不 大 渊 P>0.05 冤 遥 与 肾 阳 虚 外 感 组 比 较 袁 给 药 第 5 日 袁 肾 阳 虚 外 感 MXF 干 预 组 肛 温 明 显 上 升 袁 差 异 具 有 统 计 学 意 义 渊 P<0.01 冤 遥 表 2 各 组 小 鼠 体 质 量 差 值 比 较 渊 g 冤 组 别 n 第 1 日 第 2 日 第 3 日 第 4 日 第 5 日 第 6 日 正 常 组 正 常 外 感 组 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 正 常 外 感 MXF 组 肾 阳 虚 外 感 组 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 组 别 表 3 组 别 各 组 小 鼠 肛 温 变 化 情 况 比 较 渊 益 袁 x 依 s 冤 与 正 常 外 感 组 比 较 正 常 外 感 MXF 干 预 后 肛 温 出 现 明 显 上 升 袁 但 差 别 不 大 渊 P>0.05 冤 遥 利 巴 韦 林 治 疗 组 肛 温 与 模 型 组 比 较 差 别 不 大 渊 P>0.05 冤 袁 表 明 该 药 物 对 小 鼠 体 温 的 回 升 作 用 不 明 显 遥 2.4 各 组 小 鼠 死 亡 率 比 较 见 表 4 遥 结 果 示 袁 H1N1 感 染 小 鼠 袁 对 照 组 无 死 亡 遥 正 常 外 感 组 死 亡 率 10% 袁 肾 阳 虚 外 感 组 死 亡 率 20.00% 袁 利 巴 韦 林 分 别 给 药 干 预 后 死 亡 率 分 别 是 30.00% 和 10.00% 袁 MXF 给 药 干 预 后 正 常 外 感 组 和 肾 阳 虚 外 感 组 均 无 死 亡 现 象 袁 与 正 常 组 和 肾 阳 虚 外 感 模 型 组 比 较 袁 MXF 有 降 低 小 鼠 死 亡 率 的 趋 势 遥 n 第 1 日 表 4 第 2 日 第 3 日 第 4 日 正 常 组 依 0.74 ## 依 0.8 ## 依 0.82 ## 依 0.57 ## 36.6 依 0.45 ## 依 0.29 ## 36.6 依 0.22 ## 正 常 组 10 正 常 外 感 组 10 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 10 各 组 死 亡 率 比 较 n 渊 % 冤 n 第 5 日 正 常 外 感 组 依 依 依 依 依 依 0.75 * 依 0.61 ** 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 依 依 依 依 依 依 依 0.76 ** 正 常 外 感 MXF 组 依 依 依 依 依 依 依 0.48 肾 阳 虚 外 感 组 依 0.94 ** 依 0.75 ** 依 0.99 ** 35.7 依 0.65 ** 依 1.4 ** 依 1.35 ** 依 1.31 ** 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 依 0.58 ** 35.4 依 0.72 ** 依 0.51 ** 35.4 依 0.62 ** 依 0.5 ** 依 0.45 ** 35.1 依 0.51 ** 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 依 0.62 ** 依 0.73 ** 依 0.55 * 依 依 0.4 # 依 0.57 ## 36.3 依 0.78 ## 死 亡 率 0 渊 0 冤 1 渊 冤 3 渊 冤 正 常 外 感 MXF 组 10 0 渊 0 冤 肾 阳 虚 外 感 组 10 2 渊 冤 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 10 1 渊 冤 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 10 0 渊 0 冤 第 6 日 第 7 日 与 正 常 组 比 较 袁 鄢 P 约 0.05 袁 鄢 鄢 P 约 0.01 曰 与 正 常 外 感 组 比 较 袁 P 约 0.01 曰 与 肾 阳 虚 外 感 组 比 较 袁 # P 约 0.05 袁 ## P 约 0.01 遥 2.5 各 组 小 鼠 模 型 脏 器 指 数 比 较 见 表 5 遥 与 正 常 组 比 较 袁 MXF 干 预 后 正 常 外 感 组 小 鼠 肺 指 数 升 高 渊 P< 0.05 冤 曰 与 肾 阳 虚 外 感 组 相 比 袁 MXF 干 预 后 肺 指 数 降 低 渊 P<0.05 冤 袁 且 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 肺 指 数 低 于 正 常 外 感 MXF 组 渊 P<0.05 冤 遥 与 正 常 组 比 较 袁 正 常 外 感 组 尧 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 尧 肾 阳 虚 外 感 组 尧 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 尧 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 胸 腺 指 数 尧 睾 丸 指 数 尧 精 囊 腺 指 数 降 低 渊 均 P<0.05 冤 遥 与 正 常 外 感 组 比 较 袁 正 常 MXF 组 脾 指 数 升 高 渊 P<0.05 冤 袁 而 肾 阳 虚 外 感 组 尧 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 下 降 渊 均 P<0.05 冤 曰 肾 阳 虚 外 感 组 尧 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 尧 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 睾 丸 指 数 尧 精 囊 腺 指 数 降 低 渊 均 P<0.05 冤 袁 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 则 升 高 渊 P<0.05 冤 遥 与 肾 阳 虚 外 感 组 比 较 袁 正 常 组 尧 正 常 外 感 组 尧 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 胸 腺 指 数 尧 肾 指 数 尧 睾 丸 指 数 尧

7 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec.2015 袁 Vol. 24 袁 No 精 囊 腺 指 数 均 升 高 渊 均 P<0.05 冤 遥 正 常 MXF 组 则 胸 腺 指 数 尧 睾 丸 指 数 尧 精 囊 腺 指 数 升 高 渊 均 P<0.05 冤 遥 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 尧 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 肾 指 数 升 高 渊 均 P<0.05 冤 遥 与 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 比 较 袁 正 常 外 感 组 胸 腺 指 数 升 高 袁 而 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 则 降 低 渊 均 P< 0.05 冤 遥 组 别 表 5 正 常 组 10 正 常 外 感 组 10 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 10 n 各 组 小 鼠 模 型 脏 器 指 数 比 较 渊 x 依 s 冤 肺 指 数 脾 指 数 胸 腺 指 数 依 # 依 依 ## 依 * 依 依 ## 绎 依 0.13 ## 依 依 依 0.05 ## 肾 指 数 依 ## 依 ## 正 常 外 感 MXF 组 依 依 依 ## 依 肾 阳 虚 外 感 组 依 * 依 依 ** 依 ** 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 依 * 依 ** ## 依 ** 依 ## 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 依 # 依 * 依 ** 绎 依 ## 睾 丸 指 数 精 囊 腺 指 数 依 ## 依 ## 依 *## 依 ## 依 ## 依 ## 依 ## 依 ## 依 ** 依 ** 依 0.42 ** 依 ** 依 ** 依 ** 与 正 常 组 比 较 袁 鄢 P 约 0.05 袁 鄢 鄢 P 约 0.01 曰 与 正 常 外 感 组 比 较 袁 P 约 0.05 袁 P 约 0.01 曰 与 肾 阳 虚 外 感 组 比 较 袁 # P 约 0.05 袁 ## P 约 0.01 曰 其 他 给 药 组 与 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 比 较 袁 绎 P 约 0.05 遥 3 结 论 本 实 验 采 用 流 感 病 毒 滴 鼻 感 染 免 疫 低 下 小 鼠 袁 造 成 流 感 病 毒 肺 炎 模 型 袁 以 死 亡 率 尧 肛 温 尧 肺 指 数 等 为 评 价 指 标 袁 实 验 结 果 示 袁 造 模 后 肺 指 数 明 显 升 高 袁 对 照 组 无 死 亡 袁 感 染 模 型 组 均 出 现 死 亡 现 象 袁 且 肾 阳 虚 外 感 模 型 死 亡 率 是 正 常 外 感 的 2 倍 袁 表 明 肾 阳 虚 外 感 模 型 相 对 于 正 常 外 感 模 型 而 言 有 病 理 较 严 重 的 病 理 损 伤 袁 动 物 机 体 状 态 更 差 曰 两 种 模 型 感 染 流 感 病 毒 后 的 小 鼠 体 质 量 尧 肛 温 均 开 始 下 降 袁 给 予 利 巴 韦 林 治 疗 袁 两 种 外 感 模 型 利 巴 韦 林 效 果 均 较 差 袁 正 常 外 感 利 巴 韦 林 组 的 肺 指 数 虽 然 比 正 常 外 感 MXF 组 低 袁 但 动 物 死 亡 率 较 高 袁 体 质 量 不 断 下 降 尧 体 温 降 低 后 也 未 得 到 回 升 遥 而 肾 阳 虚 外 感 利 巴 韦 林 组 的 肺 指 数 比 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 还 要 高 遥 以 上 数 据 反 映 利 巴 韦 林 治 疗 外 感 效 果 不 理 想 袁 笔 者 推 测 该 现 象 与 利 巴 韦 林 药 物 的 毒 副 作 用 有 关 咱 10 暂 袁 也 与 其 治 疗 流 感 病 毒 的 针 对 性 不 强 或 耐 药 性 有 关 遥 MXF 治 疗 正 常 外 感 尧 肾 阳 虚 外 感 模 型 小 鼠 均 有 效 果 袁 但 相 对 于 正 常 外 感 模 型 而 言 袁 MXF 对 肾 阳 虚 外 感 模 型 小 鼠 的 体 质 量 恢 复 增 长 更 明 显 遥 在 肺 指 数 反 映 的 炎 性 损 伤 指 标 中 袁 在 肾 阳 虚 外 组 比 正 常 外 感 组 更 严 重 的 肺 组 织 损 伤 基 础 上 袁 MXF 肾 阳 虚 外 感 组 比 MXF 正 常 外 感 组 的 肺 指 数 反 而 更 低 些 袁 表 明 MXF 对 肾 阳 虚 外 感 模 型 有 更 好 的 治 疗 作 用 曰 另 外 肾 阳 虚 外 感 MXF 组 与 正 常 外 感 MXF 组 比 较 袁 在 动 物 体 质 量 恢 复 尧 肛 温 回 升 方 面 袁 也 表 现 出 更 好 的 药 效 作 用 袁 这 些 均 反 映 了 中 医 方 证 相 关 的 合 理 性 和 必 要 性 遥 本 研 究 以 正 常 小 鼠 外 感 和 肾 阳 虚 小 鼠 外 感 为 研 究 对 象 袁 对 比 研 究 叶 伤 寒 论 曳 经 方 MXF 对 两 种 病 证 的 干 预 效 果 袁 同 时 以 西 药 利 巴 韦 林 作 为 阳 性 对 照 药 参 考 遥 本 实 验 发 现 袁 利 巴 韦 林 治 疗 这 两 种 病 证 的 效 果 均 不 理 想 袁 MXF 治 疗 这 两 种 外 感 模 型 均 有 作 用 袁 相 对 于 正 常 外 感 组 袁 MXF 治 疗 的 肾 阳 虚 外 感 组 无 论 在 动 物 体 重 恢 复 尧 肛 温 回 升 尧 肺 指 数 等 方 面 均 表 现 出 较 好 治 疗 效 果 遥 这 为 中 医 的 临 床 方 证 相 应 袁 辩 证 施 证 提 供 进 一 步 的 实 验 依 据 和 支 持 袁 同 时 也 为 流 感 的 高 危 人 群 防 治 渊 肾 阳 虚 外 感 冤 研 究 提 供 参 考 遥 参 考 文 献 咱 1 暂 Dawood FS 袁 Iuliano AD 袁 Reed C 袁 et al. Estimated global mor 鄄 tality associated with the first12 monthsof2009 pandemicin 鄄 fluenza A H1N1 virus circulation 院 a modelling study 咱 J 暂. LancetInfectDis 袁 2012 袁 12 渊 9 冤 院 咱 2 暂 蔡 林 利. 连 花 清 瘟 胶 囊 治 疗 流 行 性 感 冒 疗 效 和 安 全 性 的 系 统 评 价 咱 J 暂. 中 国 循 证 医 学 杂 志 袁 2012 袁 12 渊 11 冤 院 咱 3 暂 Quandelacy TM 袁 Viboud C 袁 Charu V 袁 et al. Age- and sex-re 鄄 lated risk factors for influenza-associated mortality in the U 鄄 nited States between 咱 J 暂.Am JEpidemiol 袁 2014 袁 179 渊 2 冤 院 咱 4 暂 中 华 医 学 会 呼 吸 病 学 分 会. 流 行 性 感 冒 临 床 诊 断 和 治 疗 指 南 渊 2004 年 修 订 稿 冤 咱 J 暂. 中 华 结 核 和 呼 吸 杂 志 袁 2005 袁 28 渊 1 冤 院 5-9. 咱 5 暂 Michiels B 袁 Van Puyenbroeck K 袁 Verhoeven V 袁 et al. The val 鄄 ue of neuraminidase inhibitors for the prevention and treat 鄄 ment of seasonal influenza 院 asystematic review of systematic reviews 咱 J 暂.PLoS One 袁 2013 袁 8 渊 4 冤 院 e 咱 6 暂 Chen XY 袁 Wu TX 袁 Liu GJ. Chinese Medicinal Herbs for In 鄄 luenza 院 ASystematic Review 咱 J 暂.he Journal of Alternative and ComplementaryMedicine 袁 2006 袁 12 渊 2 冤 院 咱 7 暂 张 烜 榕 袁 王 涛 袁 申 元 英 援 甲 型 流 感 病 毒 感 染 BALB/c 鼠 动 物 模 型 的 建 立 咱 J 暂. 大 理 学 院 学 报 袁 2007 袁 6 渊 10 冤 院 25. 咱 8 暂 李 荣 荣 袁 杨 勇 袁 容 蓉 袁 等. 麻 黄 细 辛 附 子 汤 对 肾 阳 虚 外 感 模 型 小 鼠 的 干 预 作 用 咱 J 暂. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志 袁 2013 袁 19 渊 3 冤 院 咱 9 暂 杨 勇. 肾 阳 虚 外 感 小 鼠 模 型 建 立 及 麻 黄 细 辛 附 子 汤 干 预 研 究 咱 D 暂. 山 东 中 医 药 大 学 袁 咱 10 暂 彭 碧 苗 袁 王 启 跃 袁 徐 秀 余. 利 巴 韦 林 注 射 液 不 良 反 应 分 析 咱 J 暂. 临 床 合 理 用 药 袁 2010 袁 15 渊 3 冤 院 渊 收 稿 日 期 冤

8 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec 袁 Vol. 24 袁 No.12 研 究 报 告 气 阴 两 虚 型 心 衰 病 证 结 合 小 鼠 模 型 的 构 建 与 评 价 鄢 杨 鸣 王 达 洋 龚 嫒 媛 雷 畅 王 延 雷 郭 淑 贞 渊 北 京 中 医 药 大 学 基 础 医 学 院 袁 北 京 冤 中 图 分 类 号 院 R285,5 文 献 标 志 码 院 A 文 章 编 号 院 X 渊 2015 冤 doi 院 /j.issn X 揖 摘 要 铱 目 的 探 究 野 气 阴 两 虚 型 心 衰 病 证 结 合 模 型 冶 的 构 建 与 评 价 遥 方 法 首 先 探 究 过 量 异 丙 肾 上 腺 素 渊 ISO 冤 造 成 心 衰 小 鼠 模 型 的 方 案 袁 以 超 声 心 动 尧 脏 器 指 数 尧 病 理 切 片 等 明 确 ISO 剂 量 曰 在 此 基 础 上 袁 联 合 剥 夺 睡 眠 的 方 式 袁 构 建 气 阴 两 虚 型 心 衰 病 证 结 合 小 鼠 模 型 袁 并 通 过 观 察 宏 观 体 征 尧 图 像 处 理 量 化 分 析 尧 旷 场 实 验 等 评 价 模 型 遥 结 果 递 减 剂 量 组 渊 第 1 天 20 mg/kg 袁 第 2 天 10 mg/kg 袁 第 3~14 天 5mg/kg 冤 相 比 恒 定 剂 量 组 渊 ISO 5mg/kg 连 续 30 d 冤 心 衰 更 显 著 曰 剥 夺 睡 眠 组 相 比 单 纯 注 射 ISO 组 气 阴 两 虚 程 度 更 明 显 遥 结 论 联 合 皮 下 注 射 异 丙 肾 上 腺 素 和 小 站 台 水 环 境 法 剥 夺 睡 眠 可 构 建 气 阴 两 虚 型 心 衰 病 证 结 合 小 鼠 模 型 遥 揖 关 键 词 铱 病 证 结 合 气 阴 两 虚 心 衰 动 物 模 型 小 鼠 The Construction and Evaluation of the Qi and Yin Deficiency Pattern of Hart Failure Mouse Model YANG Ming 袁 WANG Dayang 袁 GONG Aiyuan 袁 et al. School of Basic Medical Sciences 袁 Beijing University of Chi 鄄 nese Medicine 袁 Beijing 袁 China 揖 Abstract 铱 Objective 院 To explore the construction and evaluation of the Qi and Yin deficiency pattern of heart failure mouse model. Methods 院 The programme of excess isoproterenol mouse model with heart failure was ex 鄄 plored 袁 valued by ultrasonic cardiography 袁 organ index and pathology. On the basis of the heart failure mouse model 袁 sleep deprivation way was combined to build the Qi and Yin deficiency pattern of heart failure rat model and the model was evaluated by observing macroscopic signs 袁 open-field test 袁 and image processing quantification analysis. Results 院 The dose decreasing group 渊 the 1st day 20 mg/kg 袁 the 2nd day 10 mg/kg 袁 from 3rd to 14th day 5mg/kg 冤 had aseverer heart failure compared with the dose constant group 袁 渊 ISO 5mg/kg for 30 days 冤 and the group of sleep deprivation had ahigher degree on Qi and Yin deficiency. Conclusion 院 Subcutaneous injection of isoproterenol combined with small platform water environment to perform sleep deprivation can build Qi and Yin Deficiency type of mouse model with heart failure disease and syndrome. 揖 Key words 铱 The combination of disease and syndrome 曰 Qi and Yin deficiency 曰 Heart failure 曰 Animal model 曰 Mice 慢 性 心 力 衰 竭 渊 CHF 冤 是 各 种 心 脏 病 的 严 重 阶 段 遥 近 年 来 心 衰 发 病 率 持 续 增 长 袁 正 成 为 21 世 纪 最 重 要 的 心 血 管 病 症 遥 国 内 研 究 发 现 袁 我 国 心 衰 患 病 率 约 为 0.9% 袁 并 且 发 病 率 逐 年 上 升 咱 1 暂 遥 根 据 中 医 辨 证 袁 在 众 多 CHF 患 者 中 袁 出 现 心 悸 袁 胸 闷 袁 气 短 袁 活 动 后 加 重 袁 胸 胁 满 闷 袁 舌 质 淡 红 尧 脉 沉 细 或 沉 涩 等 气 阴 两 虚 证 的 症 状 者 较 多 咱 2 暂 袁 故 在 叶 实 用 中 医 心 病 学 曳 叶 中 药 新 药 治 疗 充 血 性 心 力 衰 竭 的 临 床 研 究 指 导 原 则 曳 等 文 献 研 究 中 袁 气 阴 两 虚 型 属 于 其 中 较 常 见 之 一 遥 研 究 表 明 袁 在 心 衰 发 展 的 鄢 基 金 项 目 院 教 育 部 新 世 纪 优 秀 人 才 支 持 计 划 渊 NCET 冤 曰 北 京 中 医 药 大 学 国 家 级 大 学 生 创 新 训 练 计 划 项 目 渊 冤 通 信 作 者 渊 电 子 邮 箱 院 guoshz@bucm.edu.cn 冤 前 期 袁 患 者 往 往 呈 现 气 阴 两 虚 证 的 表 现 袁 故 复 制 该 模 型 咱 3-4 暂 在 对 心 衰 的 早 期 干 预 较 有 意 义 遥 现 在 与 CHF 相 关 的 动 物 实 验 中 袁 气 阴 两 虚 型 心 衰 的 动 物 模 型 复 制 方 法 尚 不 明 确 遥 在 中 医 科 研 中 袁 动 物 实 验 模 型 的 评 价 方 法 多 咱 5 暂 样 袁 如 方 证 相 关 袁 然 而 常 忽 略 模 型 外 在 的 宏 观 体 征 袁 不 符 合 中 医 辨 证 的 整 体 观 念 遥 本 实 验 拟 采 用 过 量 异 丙 咱 6-12 暂 肾 上 腺 素 渊 ISO 冤 可 复 制 心 衰 模 型 的 方 法 袁 联 合 剥 夺 咱 13 暂 睡 眠 的 病 因 造 模 方 式 袁 探 索 气 阴 两 虚 型 心 衰 小 鼠 模 型 的 构 建 与 评 价 遥 现 报 告 如 下 遥 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 动 物 清 洁 级 健 康 的 雄 昆 明 小 鼠 袁 体 质 量 18~20 g 遥 合 格 证 编 号 院 遥 自 由 饮 水 和 摄 食 袁 光 照 24 h 袁 室 温 渊 21 依 1 冤 益 袁 湿 度 渊 50 依 1 冤 % 遥

9 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec.2015 袁 Vol. 24 袁 No 试 剂 与 仪 器 异 丙 肾 上 腺 素 渊 ISO 冤 渊 上 海 泛 柯 实 业 有 限 公 司 提 供 冤 遥 VisualSonics Vevo2100 超 声 仪 配 有 30 MHz 探 头 遥 1.3 分 组 与 造 模 动 物 造 模 实 验 袁 根 据 体 质 量 将 实 验 动 物 随 机 分 为 3 组 院 对 照 组 尧 递 减 剂 量 组 渊 第 1 日 20 mg/kg 袁 第 2 日 10 mg/kg 袁 第 3~14 日 5mg/kg 冤 尧 恒 定 剂 量 组 渊 ISO 5mg/kg 连 续 30 d 冤 袁 每 组 7 只 袁 实 验 结 束 后 各 组 动 物 数 分 别 为 对 照 组 7 只 尧 递 减 剂 量 组 6 只 尧 恒 定 剂 量 组 6 只 遥 心 衰 模 型 制 备 袁 分 组 当 天 皮 下 注 射 Iso 袁 对 照 组 皮 下 注 射 生 理 盐 水 袁 每 日 1 次 袁 连 续 30 d 遥 参 考 实 验 一 的 结 果 确 定 心 衰 造 模 方 法 袁 另 一 组 实 验 分 为 对 照 组 尧 模 型 组 渊 递 减 给 予 ISO 冤 尧 渊 递 减 给 予 ISO 冤 + 剥 夺 睡 眠 组 袁 每 组 10 只 小 鼠 袁 观 察 联 合 睡 眠 干 预 对 模 型 小 鼠 的 影 响 袁 增 加 剥 夺 睡 眠 干 预 的 实 验 袁 从 第 31 日 开 始 袁 咱 暂 ISO 联 合 剥 夺 睡 眠 组 采 用 小 站 台 水 环 境 法 剥 夺 睡 眠 袁 时 间 为 48 h 遥 实 验 结 束 后 各 组 动 物 数 分 别 为 对 照 组 10 只 尧 模 型 组 8 只 尧 ISO 加 睡 眠 剥 夺 组 9 只 遥 1.4 观 察 指 标 心 衰 小 鼠 模 型 的 评 价 袁 超 声 心 动 检 测 应 用 VisualSonics Vevo2100 超 声 仪 及 30MHz 探 头 于 造 模 结 束 后 第 12 周 对 小 鼠 做 超 声 检 查 遥 脏 器 指 数 袁 小 鼠 取 血 后 袁 游 离 心 脏 尧 肝 尧 肺 袁 肉 眼 观 察 袁 在 4 益 的 0.9% 氯 化 钠 溶 液 中 洗 净 血 液 袁 滤 纸 吸 干 袁 用 分 析 天 平 称 取 心 尧 肝 尧 肺 质 量 袁 测 量 小 鼠 胫 骨 长 度 袁 分 别 计 算 心 肝 肺 与 体 重 和 胫 骨 长 的 比 值 遥 病 理 组 织 学 袁 心 肌 组 织 取 材 袁 常 规 石 蜡 包 埋 尧 HE 染 色 袁 光 镜 下 观 察 组 织 病 理 变 化 遥 另 一 组 实 验 心 衰 的 气 阴 两 虚 证 型 的 评 价 袁 宏 观 体 征 观 察 依 据 自 创 的 宏 观 体 征 采 集 量 表 袁 定 期 收 集 整 理 小 鼠 宏 观 体 征 袁 包 括 精 神 尧 活 动 尧 毛 发 尧 口 鼻 尧 耳 尧 爪 和 尾 的 情 况 遥 为 减 少 主 观 性 袁 制 定 了 小 鼠 观 察 标 准 袁 并 保 证 观 察 记 录 人 员 固 定 遥 旷 场 试 验 袁 剥 夺 睡 眠 后 袁 测 定 小 鼠 旷 场 中 1min 水 平 移 动 距 离 及 抬 头 次 数 遥 旷 场 大 小 为 50 cm 伊 50 cm 袁 其 底 部 为 1cm 伊 1cm 方 格 遥 每 只 测 量 结 咱 16 暂 束 后 清 理 旷 场 袁 以 免 气 味 干 扰 遥 根 据 方 肇 勤 等 方 法 计 算 气 虚 程 度 遥 气 盛 衰 度 = 各 动 物 水 平 / 正 常 组 均 数 伊 0.6+ 各 动 物 直 立 / 正 常 组 均 数 伊 0.4 遥 图 像 处 理 量 化 分 析 宏 观 咱 17 暂 体 征 袁 戊 巴 比 妥 钠 将 小 鼠 麻 醉 袁 参 考 林 志 健 等 的 方 法 袁 运 用 Photoshop7.0 软 件 提 取 小 鼠 耳 尧 口 唇 尧 舌 尧 爪 尧 尾 的 R 尧 G 尧 B 值 袁 并 计 算 上 述 各 部 分 红 色 度 r=r/ 渊 R+G+ B 冤 袁 绿 色 度 g=g/ 渊 R+G+B 冤 袁 蓝 色 度 b=b/ 渊 R+G+B 冤 遥 1.5 统 计 学 处 理 采 用 SPSS13.0 统 计 软 件 分 析 遥 计 量 资 料 以 渊 x 依 s 冤 表 示 袁 组 间 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析 袁 方 差 不 齐 者 改 用 秩 和 检 验 的 Kruskal-Wallish 方 法 进 行 多 个 样 本 比 较 及 两 两 比 较 遥 P 约 0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 遥 2 结 果 2.1 各 组 心 衰 模 型 动 物 心 脏 结 构 与 心 功 能 结 果 比 较 见 表 1 遥 12 周 末 袁 实 验 组 小 鼠 左 室 舒 张 期 内 径 渊 LVID 曰 d 冤 尧 左 室 收 缩 期 内 径 渊 LVID 曰 s 冤 较 对 照 组 有 所 增 大 袁 左 室 射 血 分 数 渊 EF 冤 尧 左 室 短 轴 缩 短 率 渊 FS 冤 较 对 照 组 有 所 降 低 渊 P 约 0.05 冤 遥 表 1 各 组 小 鼠 12 周 末 二 维 超 声 心 动 图 比 较 渊 x 依 s 冤 组 别 n 对 照 组 7 递 减 剂 量 组 6 恒 定 剂 量 组 6 LVID 曰 d 渊 mm 冤 LVID 曰 s 渊 mm 冤 EF 渊 % 冤 FS 渊 % 冤 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 与 对 照 组 比 较 袁 P 约 0.05 袁 P 约 0.01 遥 下 同 遥 2.2 各 组 心 衰 模 型 动 物 脏 器 指 数 比 较 见 表 2 袁 表 3 遥 递 减 剂 量 组 与 对 照 组 相 比 袁 心 重 / 胫 骨 长 尧 肺 重 / 胫 骨 长 均 有 显 著 增 加 渊 P 约 0.05 冤 袁 肺 淤 血 相 对 肝 淤 血 更 明 显 袁 显 示 此 模 型 引 起 的 心 力 衰 竭 可 能 为 左 心 衰 遥 表 2 各 组 心 尧 肝 尧 肺 质 量 指 数 比 较 渊 x 依 s 冤 组 别 n 心 质 量 指 数 肝 质 量 指 数 肺 质 量 指 数 对 照 组 依 依 依 递 减 剂 量 组 依 依 依 恒 定 剂 量 组 依 依 依 表 3 各 组 心 尧 肝 尧 肺 质 量 / 胫 骨 长 比 较 渊 g/mm 袁 x 依 s 冤 组 别 n 心 质 量 / 胫 骨 长 肝 质 量 / 胫 骨 长 肺 质 量 / 胫 骨 长 对 照 组 依 依 依 递 减 剂 量 组 依 依 依 恒 定 剂 量 组 依 依 依 心 衰 模 型 动 物 病 理 结 果 见 图 1 遥 光 镜 下 可 见 实 验 组 均 有 不 同 程 度 的 纤 维 化 尧 淋 巴 细 胞 聚 集 遥 对 照 组 袁 伊 100 实 验 组 袁 伊 100 实 验 组 袁 伊 400 图 1 光 镜 下 HE 染 色 2.4 心 衰 模 型 动 物 联 合 睡 眠 剥 夺 干 预 宏 观 体 征 观 察 见 表 4 遥 实 验 组 与 对 照 组 相 比 袁 渐 进 性 出 现 精 神 萎 靡 袁 反 应 迟 钝 袁 毛 色 略 有 干 枯 尧 发 黄 袁 口 鼻 暗 红 袁 耳 部 血 管 充 盈 明 显 袁 爪 尧 尾 均 有 不 同 程 度 的 变 暗 袁 少 光 泽 遥 结 果 显 示 ISO+ 剥 夺 睡 眠 组 耳 部 g 值 尧 尾 部 r 值 尧 吻 部 r 值 偏 小 袁 舌 g 值 尧 吻 部 b 值 偏 大 袁 ISO 组 舌 g 值 偏 小 袁 差 异 有 统 计 学 意 义 渊 P 约 0.05 冤 遥 r 值 愈 大 愈 红 袁 愈 小 则 愈 淡 遥 g 值 愈 大 则 愈 暗 袁 愈 小 则 相 反 遥 b 值 愈 大 则 愈 青 紫 袁 愈 小 则 相 反 遥 故 剥 夺 睡 眠 组 尾 部 与 吻 部 r 值 偏 小 袁 表 明 气 虚 曰 舌 g 值 与 吻 部 b 值 偏 大 袁 表 明 有 阴 虚 血 瘀 的 倾 向 遥 可 见 剥

10 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec 袁 Vol. 24 袁 No.12 夺 睡 眠 的 造 模 因 素 对 于 体 征 的 影 响 比 单 纯 ISO 注 射 组 更 显 著 遥 表 4 对 照 组 渊 n 越 10 冤 组 别 两 组 小 鼠 耳 尧 爪 颜 色 色 度 尧 舌 尧 吻 部 颜 色 色 度 及 尾 色 色 度 分 析 结 果 比 较 渊 % 袁 x 依 s 冤 r g b 耳 爪 舌 依 依 依 依 依 依 依 依 依 3.99 吻 部 尾 依 依 依 依 依 依 1.56 ISO+ 剥 夺 睡 眠 组 r 依 依 依 依 依 1.27 渊 n 越 8 冤 g 依 依 依 依 依 0.21 b 依 依 依 依 依 1.24 ISO 组 r 依 依 依 依 依 0.61 渊 n 越 9 冤 g 依 0.35 * 依 依 依 依 0.95 b 依 依 依 依 依 各 组 实 验 动 物 旷 场 试 验 结 果 见 图 2 遥 ISO 联 合 剥 夺 睡 眠 组 在 剥 夺 睡 眠 后 袁 运 动 能 力 明 显 下 降 袁 ISO 组 与 对 照 组 相 比 袁 气 盛 衰 度 稍 有 下 降 遥 3 讨 论 图 2 气 盛 衰 度 3.1 模 型 构 建 模 拟 心 力 衰 竭 模 型 的 方 法 有 很 多 袁 在 目 前 的 研 究 中 大 致 分 为 手 术 法 和 药 物 注 射 法 两 大 类 遥 其 中 药 物 注 射 法 中 常 用 的 药 物 有 ISO 尧 阿 霉 素 尧 戊 巴 比 妥 钠 等 遥 其 中 ISO 能 够 增 强 心 肌 收 缩 力 袁 模 拟 压 力 超 负 荷 型 心 力 衰 竭 心 肌 细 胞 代 偿 与 失 代 偿 的 过 程 袁 具 有 无 创 袁 安 全 性 高 袁 动 物 均 一 性 好 的 特 点 袁 在 目 前 的 心 里 衰 竭 动 物 模 型 中 较 广 泛 使 用 遥 目 前 国 内 外 已 经 有 许 多 相 关 的 研 究 袁 注 射 方 法 大 多 为 皮 下 注 射 袁 腹 腔 注 射 袁 此 外 也 有 静 脉 持 续 点 滴 ISO 造 模 成 功 的 研 究 遥 但 是 具 体 的 造 模 剂 量 各 不 相 同 且 差 异 较 大 袁 为 进 一 步 确 定 合 适 的 造 模 剂 量 袁 并 探 索 在 心 衰 发 病 过 程 中 各 中 医 证 型 出 现 的 时 间 窗 袁 本 实 验 以 连 续 30 d 袁 5mg/kg 渊 小 剂 量 冤 和 第 1 日 20 mg/kg 袁 第 2 日 10 mg/kg 袁 第 3~14 日 5mg/kg 渊 递 减 剂 量 冤 两 种 方 法 给 予 小 鼠 皮 下 注 射 ISO 遥 从 中 医 病 因 的 角 度 分 析 袁 睡 眠 剥 夺 会 打 破 机 体 原 有 的 平 衡 袁 导 致 营 卫 失 调 尧 脏 腑 功 能 紊 乱 袁 卫 阳 不 得 入 于 阴 分 袁 从 而 灼 伤 营 血 袁 进 而 出 现 气 阴 两 虚 的 症 状 及 体 征 遥 目 前 剥 夺 睡 眠 的 方 法 较 多 袁 其 中 小 站 台 水 环 境 法 是 用 于 剥 夺 睡 眠 较 为 流 行 的 方 法 袁 简 单 易 行 袁 可 作 为 中 医 病 因 的 造 模 因 素 袁 复 制 气 阴 两 虚 状 态 的 小 鼠 模 型 遥 因 此 本 实 验 根 据 上 述 原 理 袁 使 用 注 射 ISO 结 合 剥 夺 睡 眠 方 法 袁 成 功 复 制 出 气 阴 两 虚 证 小 鼠 心 力 衰 竭 模 型 袁 并 且 探 究 出 具 体 注 射 剂 量 以 及 剥 夺 睡 眠 的 方 法 袁 具 有 较 高 可 行 性 和 可 复 制 性 遥 3.2 模 型 评 价 在 对 于 心 力 衰 竭 模 型 的 评 价 中 袁 常 用 的 评 价 方 法 为 超 声 心 动 尧 脏 器 指 数 及 病 理 袁 本 实 验 在 脏 器 指 数 的 评 价 中 采 用 较 为 创 新 的 脏 器 重 量 / 胫 骨 长 作 为 脏 器 指 数 的 方 法 袁 有 效 避 免 了 小 鼠 个 体 营 养 差 异 造 成 的 实 验 结 果 误 差 袁 优 于 传 统 的 脏 器 重 量 / 体 重 的 评 价 方 法 遥 同 时 袁 对 于 中 医 证 候 动 物 模 型 评 价 的 探 索 是 基 础 研 究 及 中 药 新 药 研 发 的 重 要 工 具 遥 本 实 验 基 于 临 床 袁 结 合 图 像 技 术 挖 掘 小 鼠 体 征 的 细 微 变 化 袁 并 引 入 旷 场 试 验 等 方 法 动 态 评 价 气 与 阴 的 盛 衰 程 度 袁 模 拟 临 床 辨 证 方 法 袁 从 正 面 对 小 鼠 进 行 辨 证 遥 此 法 本 于 中 医 理 论 袁 更 符 合 中 医 野 整 体 观 念 冶 野 司 外 揣 内 冶 的 辨 证 思 维 模 式 遥 图 像 处 理 的 方 法 是 野 望 诊 冶 的 延 伸 袁 将 其 精 确 量 化 袁 分 辨 细 微 的 差 别 袁 故 更 需 要 保 证 光 源 尧 角 度 尧 相 机 参 数 等 其 他 要 素 的 一 致 性 遥 剥 夺 睡 眠 组 尾 尧 吻 部 红 色 度 偏 淡 袁 提 示 气 虚 曰 两 实 验 组 小 鼠 舌 色 与 对 照 组 相 比 袁 均 有 不 同 程 度 偏 暗 袁 剥 夺 睡 眠 组 吻 部 蓝 色 度 偏 高 袁 提 示 阴 虚 荣 养 不 足 袁 并 有 血 瘀 倾 向 遥 故 各 组 小 鼠 耳 尧 爪 尧 尾 尧 舌 尧 吻 部 的 色 度 分 析 结 果 基 本 符 合 气 阴 两 虚 的 特 点 遥 旷 场 试 验 是 衡 量 小 鼠 活 跃 程 度 的 重 要 参 考 袁 实 验 发 现 剥 夺 睡 眠 后 的 小 鼠 活 跃 程 度 明 显 降 低 袁 气 虚 较 重 袁 而 未 剥 夺 睡 眠 的 实 验 组 与 对 照 组 差 异 较 小 袁 且 符 合 统 计 学 差 异 袁 故 可 证 明 该 方 法 在 评 价 气 阴 两 虚 程 度 中 起 到 关 键 作 用 遥 综 上 袁 本 实 验 采 用 的 评 价 方 法 弥 补 传 统 评 价 方 法 的 不 足 袁 并 做 到 中 西 医 结 合 评 价 心 衰 程 度 及 气 阴 两 虚 程 度 袁 具 有 创 新 性 及 客 观 性 遥 参 考 文 献 咱 1 暂 中 华 医 学 会 心 血 管 病 学 分 会 袁 中 华 心 血 管 病 杂 志 编 辑 委 员 会 援 慢 性 心 力 衰 竭 诊 断 治 疗 指 南 咱 J 暂 援 中 华 心 血 管 病 杂 志 袁 2007 袁 35 渊 12 冤 院 援 咱 2 暂 张 文. 益 气 养 阴 中 药 调 治 气 阴 两 虚 型 慢 性 心 衰 患 者 的 临 床 研 究 咱 D 暂. 沈 阳 院 辽 宁 中 医 药 大 学 袁 咱 3 暂 徐 重 白 袁 贾 坚 袁 吴 中 华. 慢 性 心 衰 中 医 辨 证 分 型 及 规 范 化 治 疗 与 预 后 的 相 关 性 咱 J 暂. 江 西 中 医 药 袁 2011 袁 62 渊 9 冤 院 咱 4 暂 周 媛. 慢 性 心 力 衰 竭 中 医 证 候 特 点 的 临 床 研 究 咱 D 暂. 北 京 院 北 京 中 医 药 大 学 袁 咱 5 暂 叶 蓓 袁 阿 基 业 袁 郝 海 平 袁 等. 气 阴 两 虚 证 心 肌 缺 血 模 型 方 证 对 应 的 代 谢 组 学 表 征 咱 J 暂. 药 学 学 报 袁 2011 袁 46 渊 8 冤 院 咱 6 暂 罗 时 珂 袁 李 萍 袁 程 晓 曙. 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 模 型 的 建 立 咱 J 暂. 重 庆 医 学 袁 2012 袁 41 渊 4 冤 院 咱 7 暂 舒 玲 玉. 心 衰 现 代 实 验 研 究 方 法 及 中 医 药 研 究 现 状 咱 J 暂. 浙 江 中 西 医 结 合 杂 志 袁 2008 袁 18 渊 11 冤 院 渊 下 转 第 2092 页 冤

11 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec.2015 袁 Vol. 24 袁 No 研 究 报 告 活 血 通 络 解 毒 方 对 脑 缺 血 Wistar 大 鼠 炎 症 细 胞 因 子 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 的 影 响 鄢 贾 芸 易 燕 锋 艾 宗 耀 肖 梅 红 嵇 冰 杨 春 华 陆 周 翔 渊 1. 湖 州 师 范 学 院 医 学 院 袁 浙 江 湖 州 曰 2. 浙 江 中 医 药 大 学 附 属 湖 州 中 医 院 袁 浙 江 湖 州 冤 中 图 分 类 号 院 R285.5 文 献 标 志 码 院 A 文 章 编 号 院 X 渊 2015 冤 doi 院 /j.issn X 揖 摘 要 铱 目 的 研 究 活 血 通 络 解 毒 方 对 脑 缺 血 Wistar 大 鼠 神 经 缺 损 功 能 评 分 及 肿 瘤 坏 死 因 子 - 琢 渊 TNF- 琢 冤 尧 白 细 胞 介 素 -1 茁 渊 IL-1 茁 冤 尧 白 细 胞 介 素 -6 渊 IL-6 冤 的 影 响 遥 方 法 60 只 雄 性 Wistar 大 鼠 随 机 分 成 假 手 术 组 袁 模 型 组 袁 活 血 通 络 解 毒 方 低 剂 量 组 尧 中 剂 量 组 尧 高 剂 量 组 5 组 遥 大 鼠 大 脑 中 动 脉 栓 塞 模 型 造 模 成 功 24 h 尧 7d 尧 14 d 后 袁 各 组 给 予 相 应 处 理 袁 分 别 分 析 比 较 检 查 各 组 神 经 功 能 评 分 情 况 及 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 遥 结 果 假 手 术 组 无 大 鼠 死 亡 袁 模 型 组 死 亡 2 只 袁 分 别 死 于 术 后 第 2 日 尧 第 8 日 袁 活 血 通 络 解 毒 方 高 剂 量 组 死 亡 2 只 袁 分 别 死 于 术 后 第 6 日 和 第 9 日 遥 活 血 通 络 解 毒 方 中 尧 低 剂 量 组 未 见 动 物 死 亡 遥 造 模 后 各 组 大 鼠 神 经 功 能 缺 损 评 分 与 假 手 术 组 比 较 均 升 高 渊 P 约 0.01 冤 遥 各 治 疗 组 在 治 疗 后 其 评 分 与 模 型 组 比 较 均 降 低 渊 均 P 约 0.05 冤 袁 且 中 剂 量 组 神 经 功 能 缺 失 评 分 第 7d 明 显 低 于 模 型 组 渊 P 约 0.01 冤 遥 治 疗 中 剂 量 组 神 经 功 能 缺 失 评 分 从 术 后 第 7 日 尧 14 日 均 低 于 高 剂 量 组 和 低 剂 量 组 渊 P 约 0.05 冤 袁 高 剂 量 组 和 低 剂 量 组 评 分 差 别 不 大 渊 P 跃 0.05 冤 遥 造 模 后 24 h 各 组 大 鼠 血 清 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 假 手 术 组 比 较 均 明 显 升 高 渊 均 P 约 0.05 冤 袁 而 模 型 组 尧 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 间 比 较 则 差 别 不 大 渊 均 P 跃 0.05 冤 遥 术 后 2 周 假 手 术 组 尧 模 型 组 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 本 组 术 后 24 h 比 较 差 别 不 大 渊 均 P 跃 0.05 冤 曰 术 后 2 周 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 本 组 术 后 24 h 比 较 均 下 降 渊 均 P 约 0.05 冤 袁 且 中 剂 量 组 下 降 最 明 显 渊 P 约 0.05 冤 遥 术 后 2 周 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 模 型 组 同 期 比 较 均 下 降 渊 均 P 约 0.05 冤 遥 结 论 活 血 通 络 解 毒 方 可 改 善 缺 血 性 Wistar 大 鼠 神 经 功 能 缺 损 评 分 及 其 炎 症 因 子 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 袁 这 可 能 是 干 预 脑 梗 死 的 机 制 之 一 遥 揖 关 键 词 铱 脑 梗 死 脑 缺 血 再 灌 注 炎 症 细 胞 因 子 活 血 通 络 解 毒 方 实 验 研 究 The Effect of Huoxue Tongluo Jiedu Decoction on Inflammatory Cytokine TNF- 琢 袁 IL-1 茁 and IL-6 of Rats with Cerebral Ischemia Wistar JIA Yun 袁 YIYanfeng 袁 AIZongyao 袁 et al. Medical School of Huzhou U 鄄 niversity 袁 Zhejiang 袁 Huzhou 袁 China 揖 Abstracrt 铱 Objective 院 To Study the efficacy of Huoxue tongluo jiedu Decoction on inflammatory cytokine TNF- 琢 袁 IL-1 茁 袁 IL-6 of rats with cerebral ischemia Wistar. Methods 院 Sixty Wistar Mice were randomly devided into sham-operated group 袁 the model group 袁 group with low level of Huoxue tongluo jiedu Decoction 袁 group with mod 鄄 erate level 袁 and group with high level. The middle cerebral artery occlusion reperfusion model in rats was built ac 鄄 cording to Longa. 24h after finishing modeling and 7and 14 days after the treatment 袁 the level of TNF- 琢 袁 IL-1 茁 and IL-6 of each group were detected 袁 and the neurobehavioral change was observed. Results 院 At the end of the experiment 袁 there were no rats dead in sham operation group and group with low level 袁 2in the model group on 2nd and 8th day respectively after operation 袁 2in group with high level on 6th and 9th day respectively after op 鄄 eration. After finishing modeling 袁 compared with sham operation group 袁 Neurological deficit scores of other groups significantly increased 袁 with statistical significance 渊 P<0.01 冤.Compared with the model group 袁 the situation of neural function was improved 袁 and the level of TNF- 琢 袁 IL-1 茁 and IL-6 of each group increased 渊 P<0.05 冤.After 14 days 忆 treatment 袁 the level of TNF- 琢 袁 IL-1 茁 and IL-6 of each group decreased 袁 among which 袁 the group with moderate dose decreased the most 渊 P<0.05 冤. Conclusion 院 Huoxue tongluo jiedu Decoction can improve Neuro 鄄 logical deficit scores and decrease the level of TNF- 琢 袁 IL-1 茁 袁 IL-6 袁 which may be one of the mechanisms of 鄢 基 金 项 目 院 浙 江 省 中 医 药 科 技 计 划 项 目 渊 2013ZB126 冤 曰 湖 州 师 范 学 院 科 学 研 究 项 目 渊 KY 冤 通 信 作 者 渊 电 子 邮 箱 院 azy5765@sina.com 冤

12 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec 袁 Vol. 24 袁 No.12 cerebral infarction. 揖 Key words 铱 Cerebral infarction 曰 Cerebral ischemia reperfusion 曰 Inflammatory cytokine 曰 Huoxue tongluo jiedu Decoction 曰 Experimental study 急 性 脑 梗 死 是 由 于 脑 部 供 血 障 碍 袁 引 起 脑 组 织 缺 血 性 坏 死 的 一 类 疾 病 袁 前 期 笔 者 通 过 临 床 研 究 发 现 活 血 通 络 解 毒 方 对 急 性 脑 梗 死 患 者 有 较 好 的 临 床 疗 效 咱 1 暂 袁 拟 进 一 步 探 讨 其 作 用 机 制 袁 观 察 活 血 通 络 解 毒 方 对 脑 缺 血 Wistar 大 鼠 神 经 功 能 缺 损 程 度 评 分 及 炎 症 细 胞 因 子 肿 瘤 坏 死 因 子 - 琢 渊 TNF- 琢 冤 尧 白 细 胞 介 素 -1 茁 渊 IL- 1 茁 冤 尧 白 细 胞 介 素 -6 渊 IL-6 冤 的 影 响 遥 现 报 告 如 下 遥 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 动 物 健 康 雄 性 Wistar 大 鼠 袁 体 质 量 渊 280 依 20 冤 g 袁 由 浙 江 中 医 药 大 学 实 验 动 物 中 心 提 供 咱 合 格 证 号 SCXK 渊 浙 冤 袁 经 检 疫 合 格 备 用 暂 遥 大 鼠 在 24 耀 25 益 下 分 笼 饲 养 袁 保 持 相 对 湿 度 约 为 12% 尧 光 照 明 暗 比 为 13 颐 1 遥 1.2 试 剂 与 器 材 活 血 通 络 解 毒 方 院 茯 苓 15 g 袁 玄 参 10 g 袁 金 银 花 12 g 袁 当 归 10 g 袁 赤 芍 10 g 袁 大 黄 3g 袁 栀 子 10 g 袁 川 芎 6g 袁 地 龙 10 g 袁 红 花 10 g 袁 全 蝎 3g 袁 甘 草 6g 遥 中 药 液 渊 中 药 材 由 浙 江 中 药 材 公 司 提 供 冤 由 浙 江 中 医 药 大 学 附 属 湖 州 中 医 院 药 剂 科 配 制 遥 原 药 材 经 煎 煮 后 袁 去 除 药 渣 留 取 药 液 袁 将 药 液 浓 缩 至 每 毫 升 含 原 生 药 材 2g 作 为 高 剂 量 组 袁 每 毫 升 含 原 生 药 材 1g 为 中 剂 量 组 袁 每 毫 升 含 原 生 药 材 0.5g 为 低 剂 量 组 遥 10% 水 合 氯 醛 渊 上 海 西 唐 生 物 技 术 有 限 公 司 提 供 袁 批 号 ws 冤 曰 0.9% 氯 化 钠 注 射 液 渊 浙 江 莎 普 爱 思 药 业 股 份 有 限 公 司 提 供 袁 批 号 C 冤 曰 5% 聚 维 酮 碘 溶 液 渊 杭 州 民 生 药 业 有 限 公 司 提 供 袁 批 号 冤 曰 Elisa 试 剂 盒 检 测 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 渊 武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 冤 遥 电 子 分 析 天 平 仪 Sartorius AG 渊 德 国 冤 曰 离 心 机 渊 江 苏 华 大 离 心 机 股 份 有 限 公 司 冤 曰 721 分 光 光 度 计 渊 上 海 予 腾 生 物 科 技 有 限 公 司 冤 曰 多 谱 酶 标 仪 渊 上 海 闪 谱 生 物 科 技 有 限 公 司 冤 曰 眼 科 手 术 剪 尧 止 血 钳 尧 动 脉 夹 尧 手 术 缝 合 针 尧 线 袁 试 管 袁 Eppendof 管 渊 上 海 医 疗 器 械 渊 集 团 冤 有 限 公 司 冤 曰 鱼 线 院 囟 =0.21 mm 渊 威 海 润 泽 进 出 口 有 限 公 司 冤 遥 1.3 分 组 与 造 模 将 Wistar 雄 性 大 鼠 按 照 改 良 Longa 等 咱 2 暂 法 建 立 大 鼠 大 脑 中 动 脉 阻 塞 再 灌 注 模 型 遥 造 模 成 功 后 按 随 机 数 字 表 法 分 组 为 假 手 术 组 尧 模 型 组 尧 低 剂 量 治 疗 组 尧 中 剂 量 治 疗 组 尧 高 剂 量 治 疗 组 各 12 只 遥 庆 大 霉 素 按 照 每 日 35 mg/kg 大 鼠 体 质 量 抗 感 染 袁 腹 腔 注 射 3d 遥 Wistar 大 鼠 在 再 灌 注 术 后 完 全 苏 醒 后 袁 参 照 改 良 Berdson 评 分 分 级 法 分 别 观 察 大 鼠 神 经 和 行 为 学 改 变 遥 评 分 逸 2 分 者 表 示 模 型 制 作 成 功 袁 纳 入 实 验 遥 1.4 给 药 大 鼠 所 用 药 物 等 效 剂 量 按 照 成 人 的 临 床 日 用 量 与 体 质 量 折 算 系 数 比 袁 再 计 算 出 相 当 于 高 尧 中 尧 低 剂 量 的 药 量 遥 每 毫 升 含 原 生 药 材 2g 作 为 高 剂 量 组 袁 每 毫 升 含 原 生 药 材 1g 为 中 剂 量 组 袁 每 毫 升 含 原 生 药 材 0.5 g 为 低 剂 量 组 遥 每 天 用 活 血 通 络 解 毒 方 灌 胃 1 次 袁 术 后 24 h 后 给 药 遥 模 型 组 和 假 手 术 组 按 照 相 同 的 方 法 分 别 给 予 相 同 体 积 0.9% 氯 化 钠 注 射 液 灌 胃 遥 各 组 用 药 时 间 均 为 14 d 遥 1.5 观 察 指 标 分 别 于 术 后 当 日 袁 术 后 第 1 日 尧 第 7 日 尧 第 14 日 进 行 神 经 行 为 学 评 分 遥 评 分 方 法 与 造 模 后 的 神 经 行 为 学 的 评 分 方 法 相 同 遥 术 后 24 h 尧 14 d 分 别 经 大 鼠 尾 静 脉 尧 腹 主 动 脉 取 血 检 测 血 清 TNF- 琢 尧 IL- 1 茁 尧 IL-6 浓 度 遥 1.6 统 计 学 处 理 采 用 SPSS13.0 统 计 学 软 件 遥 计 量 资 料 以 渊 x 依 s 冤 表 示 袁 采 用 单 因 素 方 差 分 析 尧 配 对 t 检 验 和 重 复 方 差 分 析 遥 P<0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 遥 2 结 果 2.1 各 组 大 鼠 死 亡 情 况 比 较 截 止 实 验 结 束 袁 假 手 术 组 无 大 鼠 死 亡 袁 模 型 组 死 亡 2 只 袁 分 别 死 于 术 后 第 2 日 尧 第 8 日 袁 活 血 通 络 解 毒 方 高 剂 量 组 死 亡 2 只 袁 分 别 死 于 术 后 第 6 日 和 第 9 日 遥 活 血 通 络 解 毒 方 中 尧 低 剂 量 组 未 见 动 物 死 亡 遥 2.2 治 疗 过 程 中 各 组 大 鼠 的 神 经 功 能 缺 损 评 分 比 较 见 表 1 遥 造 模 后 各 组 大 鼠 神 经 功 能 缺 损 程 度 评 分 与 假 手 术 组 比 较 均 升 高 渊 P<0.01 冤 遥 各 治 疗 组 在 治 疗 后 其 评 分 与 模 型 组 比 较 均 降 低 渊 均 P< 0.05 冤 袁 且 中 剂 量 组 神 经 功 能 缺 损 程 度 评 分 第 7 日 明 显 低 于 模 型 组 渊 P< 0.01 冤 遥 治 疗 中 剂 量 组 神 经 功 能 缺 损 程 度 评 分 从 术 后 第 7 日 尧 14 日 均 低 于 高 剂 量 组 和 低 剂 量 组 渊 P<0.05 冤 袁 高 剂 量 组 和 低 剂 量 组 评 分 差 别 不 大 渊 P 跃 0.05 冤 遥 表 1 组 别 各 组 大 鼠 不 同 时 期 神 经 功 能 缺 损 程 度 评 分 比 较 渊 分 袁 x 依 s 冤 术 后 24 h n 评 分 n 假 手 术 组 术 后 7d 术 后 14 d 评 分 n 评 分 模 型 组 依 1.2 * 依 1.3 * 依 2.1 * 高 剂 量 组 依 1.0 * 依 1.8 * 依 1.7 * 中 剂 量 组 依 1.3 * 依 2.3 * 荫 依 1.7 * 荫 低 剂 量 组 依 1.1 * 依 3.2 * 依 1.4 * 与 假 手 术 组 比 较 袁 鄢 P 约 0.01 曰 与 模 型 组 同 期 比 较 袁 P 约 0.05 袁 P 约 0.01 曰 与 高 剂 量 组 尧 低 剂 量 组 比 较 袁 荫 P 约 0.05 遥 2.3 治 疗 前 后 各 组 大 鼠 血 清 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 比 较 见 表 2 遥 造 模 后 24 h 各 组 大 鼠 血 清 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 假 手 术 组 比 较 均 明 显 升 高 渊 均 P< 0.05 冤 袁 而 模 型 组 尧 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 间 比 较 则 差 别 不 大 渊 均 P 跃 0.05 冤 遥 术 后 2 周 假 手 术 组 尧 模 型 组 TNF- 琢 尧 IL-

13 中 国 中 医 急 症 2015 年 12 月 第 24 卷 第 12 期 渊 卷 终 冤 JETCM. Dec.2015 袁 Vol. 24 袁 No 茁 尧 IL-6 水 平 与 本 组 术 后 24 h 比 较 差 别 不 大 渊 均 P 跃 0.05 冤 曰 术 后 2 周 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 本 组 术 后 24 h 比 较 均 下 降 渊 均 P<0.05 冤 袁 且 中 剂 量 组 下 降 最 明 显 渊 P<0.05 冤 遥 术 后 2 周 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 模 型 组 同 期 比 较 均 下 降 渊 均 P<0.05 冤 遥 表 2 各 组 Wistar 大 鼠 血 清 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 比 较 渊 x 依 s 冤 组 别 时 间 TNF- 琢 渊 ng/ml 冤 IL-1 茁 渊 pg/ml 冤 IL-6 渊 pg/ml 冤 假 手 术 组 术 后 24 h 1.27 依 依 依 0.10 渊 n 越 12 冤 术 后 2 周 1.23 依 依 依 0.13 裕 裕 裕 模 型 组 术 后 24 h 2.64 依 依 依 0.15 渊 n 越 12 冤 术 后 2 周 2.59 依 依 依 0.20 高 剂 量 组 术 后 24 h 2.38 依 0.21 裕 2.24 依 0.81 裕 1.14 依 0.13 裕 渊 n 越 12 冤 术 后 2 周 1.61 依 0.30 * 1.81 依 0.80 * 0.72 依 0.16 * 中 剂 量 组 术 后 24 h 2.45 依 0.35 裕 2.21 依 0.74 裕 1.12 依 0.21 裕 渊 n 越 12 冤 术 后 2 周 1.30 依 0.21 * 荫 1.38 依 0.66 * 荫 0.60 依 0.14 * 荫 低 剂 量 组 术 后 24 h 2.50 依 0.23 裕 2.26 依 0.82 裕 1.50 依 0.12 裕 渊 n 越 12 冤 术 后 2 周 1.78 依 0.33 * 1.89 依 0.76 * 0.80 依 0.11 * 与 假 手 术 组 比 较 袁 裕 P 约 0.05 曰 与 本 组 术 后 24 h 比 较 袁 鄢 P 约 0.05 曰 与 模 型 组 同 期 比 较 袁 P 约 0.05 曰 与 高 剂 量 组 尧 低 剂 量 组 比 较 袁 荫 P 约 0.05 遥 3 讨 论 Bothe 等 研 究 证 实 袁 检 测 神 经 元 缺 血 损 伤 的 唯 一 手 段 是 行 为 学 检 查 所 提 示 的 功 能 异 常 袁 该 检 测 方 法 不 能 被 任 何 其 他 方 法 所 替 代 咱 3 暂 遥 本 实 验 结 果 示 袁 造 模 后 各 组 大 鼠 均 有 一 定 程 度 的 神 经 功 能 缺 失 改 变 袁 采 用 相 应 治 疗 后 袁 活 血 通 络 解 毒 方 各 剂 量 组 均 能 明 显 改 善 神 经 功 能 缺 损 症 状 袁 降 低 脑 缺 血 再 灌 注 大 鼠 神 经 症 状 评 分 袁 促 进 神 经 功 能 恢 复 袁 中 剂 量 组 尤 为 明 显 遥 在 术 后 14 d 袁 中 剂 量 组 神 经 功 能 缺 失 评 分 明 显 低 于 高 剂 量 组 和 低 剂 量 组 袁 有 统 计 学 意 义 遥 由 此 可 以 看 出 袁 在 改 善 神 经 功 能 障 碍 及 起 效 时 间 方 面 中 剂 量 治 疗 具 有 更 明 显 优 势 遥 中 医 治 疗 缺 血 性 中 风 有 着 悠 久 的 历 史 遥 许 多 研 究 表 明 袁 瘀 血 内 阻 贯 穿 疾 病 的 全 部 过 程 并 且 急 性 期 毒 损 脑 络 是 重 要 的 病 机 咱 4 暂 遥 有 业 者 认 为 中 风 病 毒 邪 深 入 血 络 袁 与 瘀 血 相 搏 袁 形 成 毒 瘀 互 结 袁 损 伤 脑 髓 尧 脑 脉 袁 因 此 治 疗 上 除 了 一 般 的 活 血 化 瘀 之 外 袁 还 应 重 视 解 毒 咱 5 暂 遥 活 血 通 络 解 毒 方 以 活 血 化 瘀 尧 解 毒 通 络 为 大 法 袁 方 中 金 银 花 尧 大 黄 尧 栀 子 清 热 解 毒 曰 红 花 尧 桃 仁 尧 当 归 尧 赤 芍 尧 川 芎 活 血 化 瘀 袁 全 蝎 尧 地 龙 祛 风 通 络 遥 全 方 共 奏 活 血 化 瘀 尧 解 毒 通 络 之 功 遥 脑 梗 死 过 程 中 炎 症 反 应 促 进 了 脑 缺 血 损 伤 的 发 展 袁 是 加 重 缺 血 性 脑 损 伤 和 神 经 损 伤 的 重 要 病 理 机 制 之 一 咱 6-7 暂 遥 脑 缺 血 损 伤 后 在 缺 血 受 损 区 有 细 胞 因 子 的 过 量 表 达 和 炎 性 细 胞 浸 润 袁 过 量 炎 症 因 子 的 产 生 能 加 重 神 经 细 胞 损 伤 咱 8 暂 遥 尤 其 是 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 等 细 胞 因 子 咱 9-10 暂 过 度 释 放 袁 致 使 血 脑 屏 障 受 损 袁 加 重 脑 损 伤 及 咱 11 暂 脑 水 肿 袁 形 成 缺 血 炎 症 恶 性 循 环 遥 动 物 实 验 表 明 袁 脑 缺 血 大 鼠 血 清 中 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 和 IL-6 相 关 细 胞 因 子 均 升 高 遥 造 模 后 24 h 各 组 大 鼠 血 清 中 炎 性 细 胞 因 子 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 均 有 明 显 升 高 遥 术 后 2 周 假 手 术 组 尧 模 型 组 炎 性 细 胞 因 子 差 别 不 大 曰 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 炎 性 细 胞 因 子 渊 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 冤 与 造 模 后 24 h 比 较 均 下 降 袁 以 中 剂 量 组 下 降 最 为 明 显 袁 术 后 2 周 高 尧 中 尧 低 剂 量 组 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 与 模 型 组 同 期 比 较 均 下 降 袁 表 明 活 血 通 络 解 毒 方 可 通 过 降 低 脑 缺 血 再 灌 注 Wistar 大 鼠 血 清 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 水 平 袁 保 护 脑 缺 血 大 鼠 脑 组 织 遥 综 上 所 述 袁 活 血 通 络 解 毒 方 具 有 促 进 脑 缺 血 再 灌 注 大 鼠 神 经 功 能 恢 复 的 作 用 袁 其 作 用 机 理 可 能 是 通 过 降 低 血 清 中 炎 症 细 胞 因 子 TNF- 琢 尧 IL-1 茁 尧 IL-6 的 水 平 而 达 到 改 善 神 经 功 能 的 作 用 遥 由 于 脑 梗 死 急 性 期 多 种 炎 症 因 子 及 细 胞 因 子 发 挥 作 用 袁 致 病 机 理 复 杂 袁 因 此 需 要 进 一 步 深 入 研 究 遥 参 考 文 献 咱 1 暂 艾 宗 耀 袁 王 楠 袁 卢 慧 荣 袁 等. 活 血 通 络 解 毒 方 对 急 性 脑 梗 死 的 临 床 研 究 咱 J 暂. 中 国 中 医 急 症.2012 袁 21 渊 5 冤 院 咱 2 暂 Longa EZ 袁 Weinstein PR 袁 Carlson S 袁 et a.l Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats 咱 J 暂. Stroke 袁 1989 袁 20 渊 1 冤 院 咱 3 暂 BotheHW 袁 BosmaHJ 袁 HoferH 袁 etal. Selectivevulnerability of hippocampus and disturbances of memory storage after mild unilateral ischemia of gerbil brain 咱 J 暂.Stroke.1986 袁 17 渊 6 冤 院 咱 4 暂 张 根 明. 对 缺 血 性 中 风 急 性 期 病 机 的 再 认 识 咱 J 暂. 北 京 中 医 药 大 学 学 报 院 中 医 临 床 版 袁 2010 袁 17 渊 3 冤 院 咱 5 暂 杨 利 袁 张 志 强. 毒 瘀 学 说 在 中 风 病 中 的 应 用 探 讨 咱 J 暂. 新 中 医 袁 2010 袁 42 渊 5 冤 院 咱 6 暂 Wang Q 袁 Tang XN 袁 Yenari MA. The inflammatory response in stroke 咱 J 暂.JNeuroimmuno 袁 2007 袁 184 渊 1-2 冤 院 咱 7 暂 PanW 袁 KastinAJ.Tumornecrosisfactorandstroke 院 roleofthe blood-brainbarrier 咱 J 暂.ProgNeurobiol 袁 2007 袁 83 渊 6 冤 院 咱 8 暂 BasuA 袁 LazovicJ 袁 KradyJK 袁 etal.interleukin-1and the inter 鄄 leukin-1type 1receptor are essential for the progressive neu 鄄 rodegeneration that ensues subsequent to amild hypoxicp/is 鄄 chemicinjury 咱 J 暂.JCerebBloodFlowMetab 袁 2005 袁 25 渊 1 冤 院 咱 9 暂 Beridze M 袁 Shakarishvili R 袁 Gogokhia N. Probable role of im 鄄 munologicaltolerancetoischemiainjuryin brain 咱 J 暂.Georgian Med News 袁 2008 袁 33 渊 163 冤 院 咱 10 暂 Suzuki S 袁 Tanaka K 袁 Suzuki N. Ambivalent aspects of inter 鄄 leukin -6 in cerebral ischemia 院 inflammatory versus neu 鄄 rotrophicaspects 咱 J 暂.JCerebBloodFlowMetab 袁 2009 袁 29 渊 3 冤 院 咱 11 暂 吴 常 青 袁 汪 春 彦 袁 邵 旭 袁 等. 补 阳 还 五 汤 有 效 部 位 对 大 鼠 局 灶 性 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 的 保 护 作 用 及 机 制 咱 J 暂. 中 草 药 袁 2011 袁 42 渊 1 冤 院 渊 收 稿 日 期 冤