中草药 Chineseqraditionalandeerbalarugs 第 QS 卷 第 OQ 期 OMNR 年 NO 月 PTOP 管内皮细胞不仅是血管壁上的一层机械屏障而且具有很重要的内分泌作用 内皮功能紊乱时其分泌的血管紧张素 ff xnz xoz 内皮素等血管活性物质增多, 可 xpz 以

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1 PTOO 中草药 Chineseqraditionalandeerbalarugs 第 QS 卷 第 OQ 期 OMNR 年 NO 月 黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚大鼠内皮功能的影响 韩镕徽, 王洪新 G, 唐富天, 鲁美丽, 许崇华 辽宁医学院 心脑血管药物研究重点实验室, 辽宁 锦州 NONMMN 摘 要 : 目的 观察黄芪多糖 (Amp) 对异丙肾上腺素 (fpl) 诱导的心肌肥厚大鼠内皮功能的保护作用及其机制 方法 áénmmglkg fpl 制备大鼠心肌肥厚模型,SM 只 pa 大鼠随机分为 S 组 : 对照组, 模型组,AmpOMM QMM UMMmgLkg 组, 阳性药 ( 普萘洛尔 QM mglkg) 组, 每组 NM 只 各给药组连续 ág 给药 O 周, 并于给药 Nd 后 áéfplo 周, 对照组给予等体积的生理盐水 末次给药后禁食 NOh, 取血, 分离循环内皮细胞 (CbC) 并计数 检测全心质量指数 (ejf) 左室质量指数 (isjf); 取主动脉组织进行氢化乙啡 啶 (aeb) 超氧阴离子染色 ;testernblottáng 法检测血管组织 ésr CuLwnJpla 蛋白表达 结果 与对照组比较, 模型组 ejf isjf 分别增加了 PUKQNB QQKVNB(m<MKMN), CbC 数目增多 (m<mkmn), 血管超氧阴离子生成量增加,éSR 蛋白表达增加,CuLwnJpla 蛋白表达下降 (m<mkmn) 与模型组比较,AmpQMM UMMmgLkg 剂量组 ejf isjf 降低 (m<mkmr), CbC 数目减少 (m<mkmn), 血管壁超氧阴离子生成减少,éSR 表达下降,CuLwnJpla 蛋白表达升高 (m<mkmr MKMN) 结论 Amp 可能通过降低血管壁超氧阴 离子生成, 升高 CuLwnJpla 表达, 降低 ésr 表达, 改善血管炎症和氧化应激状态, 保护心肌肥厚大鼠血管内皮功能 关键词 : 黄芪多糖 ; 异丙肾上腺素 ; 心肌肥厚 ; 氧化应激 ; 血管内皮 ;kcjκb 中图分类号 :oourkr 文献标志码 :A 文章编号 :MORPJOSTMEOMNRFOQJPTOOJMR alfwnmktrmnljkássnkmorpjostmkomnrkoqkmnv bffectsofastragaluspolysaccharidesonendothelialfunctioninratswith myocardialhypertrophyinducedbyisoproterenol eakoongjhuáitakdeongjxániqakdcujtáaniirjeájláiurchongjhua heyiaboratoryofcardáovascularandcerebrovasculararugoesearchofiáaonángmrovánceiarugoesearchfnstátuteiiáaonáng jedácalcollegeigánzhounonmmnichána AbstractWlbjectiveqoánvestágatetheérotectáveeffectofAstragaluséolysaccharádeEAmpFonendotheláalfunctáonánratswáth cardáachyéertroéhyánducedbyásoéroterenolefplfkjethodsfpl ENM mglkgf wasgávenbyáé ánjectáontosetamyocardáal hyéertroéhymodelkpáxtyparatswererandomlydávádedántosáxgrouésenznmfwcontrolifplmodelifplhampommmglkgifplh AmpQMMmgLkgIfplHAmpUMMmgLkgIandfplHéroéranololQMmgLkggrouésKqheratsáneachgrouéwereágadmánásteredfortwo weeksánarowiandgávenfplfortwoweeksbyáéánjectáonfromdayoktheratsáncontrolgrouéreceávedanequalvolumeofnormal salánekafterthelastadmánástratáonandfastángfornohibloodandheartweretakenunderanesthesáakqhecárculatángendotheláalcells ECbCFwereásolatedandcountedKqheheartmassándexEejfFandleftventrácularmassándexEisjfFwerealsoobservedXqhelevelof suéeroxádeanáonánaortatássuewasdetectedbyaebstaánángxésrandculwnjplaéroteánexéressáonofvasculartássuewasdetected bytesternblottángkoesultscoméaredwáththecontrolgrouéiejfandisjfánfplmodelgrouéáncreasedbypukqnbandqqkvnb Em YMKMNFIand anáncreaseánthenumberofcárculatángendotheláalcellsandsuéeroxádeanáongeneratáonwerealsofoundkqhe exéressáonofésréroteánwasáncreasedkqheexéressáonofculwnjplawasdecreasedkcoméaredwáththemodelgrouéiejfiisjfi numberofcárculatángendotheláalcellsi andexéressáonofésr ánampeqmm and UMM mglkgftreatedgrouéweredecreasedkqhe éroductáonofsuéeroxádeanáonánvesselwallwasalsoreducedk eoweveritheexéressáonofculwnjplaéroteánwaselevatedk ConclusionAmpámérovesthevascularendotheláalfunctáonáncardáachyéertroéhyratséossáblythrougháncreasángCuLwnJpla éroteánexéressáonandreducángthesuéeroxádeanáongeneratáonandésrexéressáonk heywordswastragaluséolysaccharádexásoéroterenolxcardáachyéertroéhyxoxádatávestressxvascularendotheláalxkcjκ_ 心肌肥厚是心肌细胞对慢性压力或血流动力肥厚过程中存在严重的炎症反应, 而炎症反应在内 学过负荷产生的适应性增生反应 研究表明在心肌皮功能障碍的发生 发展过程中起着重要作用 血 收稿日期 :OMNRJMQJNP 基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (UNPTQMMU) 作者简介 : 韩镕徽 (NVVM ), 男, 硕士, 主要从事心血管药理学研究 qelwnunmqvsqmru bjmaálwnromqrpvvun]nspkcom * 通信作者 王洪新 (NVSQ ), 男, 教授, 博士, 主要从事心血管药理学及天然药物研究 qelwnusqnsptpppbjmaálwjyhxwang]nspkcom

2 中草药 Chineseqraditionalandeerbalarugs 第 QS 卷 第 OQ 期 OMNR 年 NO 月 PTOP 管内皮细胞不仅是血管壁上的一层机械屏障而且具有很重要的内分泌作用 内皮功能紊乱时其分泌的血管紧张素 ff xnz xoz 内皮素等血管活性物质增多, 可 xpz 以加重心肌肥厚 veboah 等研究发现血管内皮功 xqz 能与左室质量呈明显的负相关 aavel 等研究表明异丙肾上腺素 (ásoéroterenol,fpl) 诱导的心肌肥厚大鼠存在内皮功能障碍 黄芪多糖 (Astragaluséolysaccharáde,Amp) 是从黄芪中提取的一种活性成分, 具有抗炎 xrz 抗氧化 xsz xtz 提高机体免疫力等作用 已有研究证实 Amp 对 fpl 诱导的乳鼠心肌细胞肥厚有保护作用 xuz, 并且 Amp 能有效减少 fpl 及血管紧张素 ff 诱导的心肌肥大发生过程中炎症因子的表达 然而 Amp 对 fpl 诱导的心肌肥厚大鼠内皮功能是否有保护作用, 及其具体机制目前尚不明确 本实验采用 áéfpl 的方法制备大鼠心肌肥厚模型, 探讨 Amp 对心肌肥厚大鼠内皮功能的保护作用及其可能机制 N 材料 NKN 动物 健康 pa 大鼠, 雄性,Q~S 周龄, 体质量 NUM~ OMMg, 由辽宁医学院实验动物中心提供, 动物合格证号 pcuh( 辽 )OMMVJMMMQ NKO 药品和试剂 Amp( 质量分数为 VUB, 南京景竹生物科技有限公司, 批号 enmvmpno); fpl 普萘洛尔 腺苷二磷酸 (Aam, 美国 págma 公司 );eydroethádáne( 上海浩然生物技术有限公司 ); 兔抗人 ufffjo:ag 抗血清 CuLwnJpla 一抗 ( 北京博奥森生物技术有限公司 ); 羊抗兔 cfqcjfgd 荧光抗体 ésr 一抗 ( 美国 mroteántechdroué 公司 ), 其他试剂均为国产分析纯 NKP 仪器 电子天平, 北京赛多利斯天平有限公司 ;págma PhNR 低温离心机, 德国 págma 公司 ;akjjvsmod 酶标分析仪, 北京普朗新技术有限公司 ;ieácaajf PMMM_ 倒置荧光显微镜, 德国 ieáca 公司 ; 凝胶成像仪 电泳仪 电泳槽, 美国 _áojoad 公司 O 方法 OKN 分组给药及大鼠心肌肥厚模型的制备 SM 只 pa 大鼠, 随机分为 S 组 : 对照组, 模型组,Amp 低 中 高剂量 (OMM QMM UMMmgLkg) 组 阳性药 ( 普萘洛尔 QMmgLkg) 组, 每组 NM 只 给药组连续 ág 给药 O 周, 模型组和给药组于 ág 给 药 Nd 后连续 áénmmglkgfplo 周, 对照组给予等 体积的生理盐水 OKO 心脏质量参数测定 末次给药后禁食 NOh, 称体质量 (_t),áé R milkg 的 OMB 乌拉坦麻醉 开胸, 取心脏剪去周围组织和血管, 称全心质量 (et) 和左心室质量 (ist) 计算心重指数 (ejfetl_t) 和左室质量指数 (isjfistl_t) 分离大鼠主动脉血管, 剪取部分血管 UM 保存, 用于 testernblottáng 检测 ; 剩余部分放在 lcq 组织冻存液中, UM 保存, 用于超氧负离子检测 OKP 循环内皮细胞 (CbC) 计数 xvjnmz 参照文献方法进行 CbC 分离 计数 大鼠麻醉后, 腹主动脉插管取动脉血, 肝素抗凝,Q PVR g 离心 OMmán, 取上清液按 R N 的比例加入 Aam(NmgLmi) 涡旋震荡 NMmán,Q PVR g 离心 OMmán 去除血小板 ; 取上清,Q ONMM g 离心 OMmán 即可得 CbC, 加入 MKNmi 生理盐水制成细胞悬液 取悬液显微镜下计数 OKQCbC 鉴定与观察 取 CbC 悬液涂片, 干燥后加甲醇固定 Rmán, 磷酸缓冲液 (m_p) 漂洗 P 次, 干燥后滴加兔抗人 ufffjo:ag 抗血清,PT 温孵 PMmán,m_p 再洗 P 次, 干燥后滴加羊抗兔 cfqcjfgd 荧光抗体, 温孵 PMmán 后 m_p 冲洗, 干燥后滴加缓冲甘油, 倒置荧光显微镜下观察, 免疫荧光细胞即为 CbC OKR 血管超氧阴离子测定 xtz 采用氢化乙啡啶 (aeb) 染色的方法检测血管壁中的超氧阴离子水平 从冻存的主动脉中取出一段由冰冻切片机切片 ( 厚 14 μm), 冷浴条件下放到载玻片上, 在 hrebsjeenseleát 缓冲液中 PT 平衡 PMmán 将含有 OmmolLiaeb 的新鲜缓冲液添加到每一个组织切片并封片 PT 避光孵育 PM mán 采用倒置荧光显微镜采集图片 OKStestern blotting 测定血管组织 psr 和 CuLwnJpla 蛋白表达 取 NMMmg 冻存血管组织放于无菌 bm 管中, 加入 Nmi 含 NBmjpc 的 ofma 裂解液, 提取总蛋白 _CA 法进行蛋白浓度测定, 每孔上样量 30 μg, 进行 NOB papjmadb 电泳 半干法转膜, 将得到的 msac 膜浸入封闭液, 置于摇床上缓慢震摇 Nh 以上, 洗膜, 按照对应相对分子质量将膜切割后置于 ésr(n RMM) CuLwnJpla(N QMM) 一抗溶液中, Q 杂交过夜, 用洗膜液漂洗后加入稀释的二抗,

3 中草药 Chineseqraditionalandeerbalarugs 第 QS 卷 第 OQ 期 OMNR 年 NO 月 PTOQ 震摇 N h 取出后洗膜液冲洗 bci 显色 上机检 PKO 对心肌肥厚大鼠 CbC 数目的影响 测 采用 fmageiabrkm 进行灰度分析 OKT 统计学方法 数据以 x ± s 表示 应用 pmppntkm 软件进行统 与对照组比较 模型组大鼠 CbC 数目明显增 多 且差异显著 m MKMN 提示在 fpl 诱导的心 肌肥厚大鼠中存在明显的内皮损伤 与模型组比较 Amp QMM UMM mglkg 组 CbC 数目下降 差异显著 m MKMN 提示 Amp 在改善心肌肥厚的同时具有 计分析 组间检验采用单因素方差分析 P 结果 PKN 对心肌肥厚大鼠 ejf isjf 指数的影响 保护血管内皮功能的作用 结果见表 O 和图 N PKP 对血管组织超氧阴离子生成的影响 fpl 造模后 与对照组比较 模型组 ejf 增加 了 PUKQNB isjf 增加了 QQKVNB 差异显著 m 经 aeb 染色 模型组血管壁的荧光强度高于 对照组 提示在心肌肥厚大鼠血管超氧负离子生成 MKMN 提示 fpl 诱导心肌肥厚模型成功 与模型组 比较 AmpQMM UMMmgLkg 组 ejf 和 isjf 降低 差异显著 m MKMR 结果见表 N 增多 与模型组比较 Amp UMM mglkg 组荧光强度 下降 提示 Amp 可以降低心肌肥厚大鼠血管壁超氧 表 N Amp 对 fpl 诱导的心肌肥厚大鼠 ejf 和 isjf 的影 阴离子的产生 结果见图 O 响 E x ±sinznmf 表 O Amp 对 fpl 诱导的心肌肥厚大鼠 CbC 数目的影响 qable N bffects of Amp on ejf and isjf in rats with E x ±sinzuf myocardialhypertrophyinducedbyfple x ±sinznmf 组别 对照 剂量LEmg kgf ejflemg gf isjflemg gf OKST±MKNV NKUS±MKNO PKUO±MKOOGG OKTM±MKOQGG OMM PKSR±MKNQ OKRO±MKNR QMM PKOO±MKON@ UMM OKUP±MKNR@ 模型 Amp 普萘洛尔 qable O bffects of Amp on CbC in rats with myocardial QM hypertrophyinducedbyfple x ±sinzuf 组别 剂量LEmg kgf CbC 数目LE个 μlf 对照 NUKU±NKU OKNU±MKOM@ 模型 QOKP±PKQGG NKVR±MKNN@ Amp OMM PUKR±OKT QMM POKT±OKR@@ UMM OSKP±NKQ@@ QM OPKR±OKR@@ 与对照组比较 GGm MKMN MKMN 下同 sameasbelow 普萘洛尔 对照 模型 普萘洛尔 AmpOMMmg kg AmpQMMmg kg AmpUMMmg kg 图 N Amp 对 fpl 诱导的心肌肥厚大鼠 CbC 数目的影响 cigkn bffectsofamponcbcinratswithmyocardialhypertrophyinducedbyfpl

4 中草药 Chineseqraditionalandeerbalarugs 第 QS 卷 第 OQ 期 OMNR 年 NO 月 PTOR 对照 模型 普萘洛尔 AmpUMMmg kg 图 O Amp 对血管组织超氧阴离子水平的影响 cigkobffectsofamponcontentofsuperoxideanioninvasculartissue PKQ 对血管组织 psr CuLwnJpla 蛋白表达的影响 与对照组比较, 模型组中与炎症信号通路 kcjκb 相关的 ésr 蛋白表达升高 (m<mkmn), 提示在 fpl 诱导的心肌肥厚大鼠血管中存在炎症 模型组 CuLwnJpla 蛋白表达下降 (m<mkmn), 结合血管壁组织超氧阴离子检测结果, 表明模型组大鼠血管壁氧化应激反应增加且抗氧化能力下降 与模型组比较,Amp 给药组,éSR 表达均有不同程度下降, 其中 UMMmgLkg 组表达下降最为明显 (m<mkmn) QMM UMM mglkg 组 CuLwnJpla 蛋白表达较模型组升高 (m< MKMR MKMN) 提示 Amp 可以通过抗炎 抗氧化对心肌肥厚大鼠血管产生保护作用 结果见图 P ésr βjactán CuLwnJpla βjactán SRMMM QOMMM NUMMM QOMMM 对照 模型 普萘洛尔 UMM QMMOMM AmpLEmg kg F 蛋白相对表达水平 NKQ NKO NKM MKU MKS MKQ MKO GG ésr CuLwnJpla M 对照 模型 普萘洛尔 UMM QMMOMM AmpLEmg kg F 图 PAmp 对血管组织 psr CuLwnJpla 蛋白表达的影响 E x ±sinzsf cigkpbffectsofamponexpressionofpsrandculwnjpla proteininvasculartissuee Q 讨论 由各种病理因素引起的交感神经张力增加而产生的对肾上腺素能受体的持续刺激可引起一系列的心血管疾病 研究表明, 采用 fpl 持续刺激 β 受体可以引起心肌肥厚 xnnz 心室胶原蛋白水平增加产生心肌损害 因此, 本实验采用 áéfpl 制备大鼠心肌 xnoz 肥厚模型, 选用普萘洛尔作为阳性对照 在心血管疾病中左室肥厚和内皮功能障碍对心血管事件都有着独立的预示性作用 xnpz 研究发现, 在心肌肥厚过程中存在严重的炎症反应 xnqz, 炎症表达增加可进一步激活 kaame 氧化酶, 进而引起氧化应激反应增加 炎症 氧化应激是引起内皮功能障碍的两个重要因素 一项关于成年人群中内皮功能障碍和左室质量联系的调查研究表明内皮功能与左室质量呈明显的负相关 xpz 此外, 在对慢性肾病患者的研究中发现, 加重的内皮功能障和增加的左室肥厚之间存在联系 xnrz 因此, 在心肌肥厚发展过程中内皮功能损伤是不能忽视的 已有研究证明,Amp 对 fpl 诱导的心肌肥厚有保护作用 xsz, 但 Amp 对心肌肥厚时内皮功能的作用及其机制尚不完全清楚 CbC 在正常的循环血液中极少出现, 当血管内皮受损时其数目明显增加可作为血管损伤的指标 健康的内皮细胞分泌的 kl 等活性物质不仅可以产生舒张血管 抗炎 抗凝血等作用, 还可以抑制心肌肥厚 kl 生物利用度的降低在内皮功能障碍的发生发展过程中发挥着重要作用 xnsz 血管超氧阴离子生成增多不仅可以灭活 kl, 损伤血管内皮舒张功能还可以通过激活 kcjκb 加重炎症反应而加重血管损伤 ésr 在炎症信号通路 kcjκb 的调节中具有重要作用 本实验研究表明, 采用 fpl 造模 O 周后, 模型组 ejf isjf 明显增加 ;CbC 数目增多 血管壁

5 PTOS 中草药 Chineseqraditionalandeerbalarugs 第 QS 卷 第 OQ 期 OMNR 年 NO 月 超氧阴离子生成增加 testernblottáng 结果显示模 型组 CuLwnJpla 蛋白表达下降, 炎症相关蛋白 ésr 表达升高 Amp 各剂量组可有效对抗这些改变, 在 保护心肌功能的同时, 降低血管壁超氧阴离子生成 以及改善血管炎症相关蛋白的表达 保护血管内皮 功能 提示,Amp 在保护肥厚心肌功能的同时可通 过降低超氧阴离子产生 抑制血管 ésr 的表达 增 加 CuLwnJpla 蛋白表达, 缓解血管壁的炎症和氧化 应激状态, 保护血管内皮 综上所述,Amp 可减轻 fpl 引起的心肌肥厚 保护血管内皮功能, 其作用机制可能与降低血管氧化应激状态 抑制炎症有关, 但 Amp 的抗心肌肥厚机制是否与保护血管内皮功能有关有待进一步研究证实 参考文献 xnz aáwhangaikguyenaánhcataipoukaseumci et alk CrossJtalkbetweenmáneralocortácoádandangáotensánff ságnalángforcardáacremodelángxgzkeypertensioniommui ROESFWNMSMJNMSTK xoz degongeetiaekkersaeieoutsmullera_iet alk aáfferentáalságnalángandhyéertroéhácreséonsesán cyclácallystretchedvsendothelánjnstámulatedneonatal ratcardáomyocytesxgzkcell Biochem BiophysIOMMTI QTENFWONJPOK xpz veboahgicrousegoi_luemkeaaiet alkbndotheláal dysfunctáonásassocáatedwáthleftventrácularmass EassessedusángjofFánanadultéoéulatáonEjbpAFxgzK geumeypertensiomnniorenfworjpnk xqz aavelamihawamotobjipcavonecietalkchangesán vascularreactávátyfollowángadmánástratáonof ásoéroterenolfornweekwaroleforendotheláal modulatáonxgzkbrgmharmacoliommsinquerfwsovjspvk xrz 李胜陶 I 王洪新 I 杨 娟 K 黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中 qioqlkcjk_ 信号通路的影响 xgzk 中成药 IOMNQIPSEQFWSTQJSTVK xsz jánni_aáv qivutiet alkmrotectáveeffectsof Astragalus polysaccharide onculturalmyocardáalcells subjectedtoanoxáalreoxygenatáonánjuryánneonatalrats xgzkchinmharmacolbulliomnmiosenofwnssnjnssqk xtz vangvcicenggniuueviet alkfnfluenceofdáfferent extractáonandéuráfácatáonmethodsonastragalus polysaccharidesandéharmacologácalevaluatáonxgzkchin eerb jediomnmioenfwrqjsnk xuz whaopiitangeuiwhouweietalkmrotectáveeffects of Astragalus polysaccharides onásoéroterenolánduced myocardáalhyéertroéhyánneonatalratsxgzkchin mharmacolbulliomnniotenofwnsuojnsusk xvz qongepitanmiwhangunietalksascularendotheláal cellánjuryéartlyánducedbymesenteráclyméhánheat strokexgzkfnflammationiomnqiptenfwotjpqk xnmz qakahasháeiearkeriakjeasurementofhumanendotheláal cellsánwholebloodxgzkqhrombooesinvupipnenfwnjnok xnnz qaylorm_iqangnkaeveloémentofásoéroterenolj ándueedcardáachyéertroéhyxgzkcanadian g mhysiol mharmacolinvuqisoeqfwpuqjpuvk xnoz whanggitangeuivanggiet alkbffectsofcajhⅡ ságnalángéathwayonastragaluséolysaccharádes ánhábátáonofásoéroterenolánducedcardáomyocyte hyéertroéhyánneonatalratsxgzkchin mharmacol BullI OMNPIOVEUFWNNMVJNNNPK xnpz mertáconeci jaáooimertáconejiet alkbndotheláal dysfunctáonéredáctsregressáonofhyéertensávecardáac massxgzkfntgcardioliomnpinsteqfwnnuujnnvok xnqz perraagipantosjei_ocalánáapiet alkbxercáse traánángánhábátsánflammatorycytokánesandmorethan éreventsmyocardáaldysfunctáonánratswáthsustaáned βjadrenergáchyéeractávátyxgzkg mhysioliomnmi RUUEmtNPFWOQPNJOQQOK xnrz moulákakosaioossiioecáojjayoralaiet alkieft ventrácularhyéertroéhyandendotheláaldysfunctáonán chronáckádneydáseasexgzk bur eeart g Cardiovasc fmagingiomnqinrenfwrsjsnk xnsz Claéé_oIeángoranáAaIhharbandaohIet alk fnflammatáonjánducedendotheláaldysfunctáonánvolves reducednátrácoxádebáoavaálabálátyandáncreasedoxádant stressxgzkcardiovascoesiommqisqenfwntojntuk

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