59 浙江理工大学学报 011 年第 8 卷位点, 磷酸化的 SIK1 又可以通过调节 PME-1(phosphatasemethylesterase-1)/PPA(proteinphosphataseA) 蛋白复合体, 进而影响到钠钾泵的功能, 参与细胞渗透压平衡 [7] ;(4) 在 TGE

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泗砚弓
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1 浙江理工大学学报, 第 8 卷, 第 4 期,011 年 7 月 JournalofZhejiangSci-TechUniversity Vol.8,No.4,Jul.011 文章编号 : (011) SIk1 在巨噬细胞中调控 IL-6 及 IL-1 表达的研究娄军 1 欧阳川郑明珠姚韵靓王珞仇庆 1 周秀梅 1 (1. 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所, 杭帅 ;. 浙江大学医学院免疫研究所, 杭帅 ) 摘要 : 通过 LPS(lipopolysaccharide) 刺激巨噬细胞, 发现盐诱导激酶 (SaltInducibleKinase1,SIK1) 基因的表达随着刺激时间呈现一定的变化趋势提示 SIK1 在免疫系统中可能具有潜在的功能实验构建了 Sik1 基因过表达的腺病毒载体 Ad-Sik1, 通过感染 RAW64.7 细胞过表达 Sik1 基因, 采序荧光定量 PCR ELISA 及 WesternBlot 等方法, 分别从 mrna 及蛋白质水平探讨 SIK1 与免疫炎症因子 IL-6(Interleukin-6) 及 IL-1(Interleukin-1) 之间的关系实验结果表唢 :SIK1 能够上调免疫炎症因子 IL-6 IL-1 的表达这将为免疫调节的研究及一些免疫相关疾病的临床诊断与治疗提供一定的理论依据关键词 :SIK1;LPS 刺激 ;IL-6;IL-1 中图分类号 :R39 文献标识码 :A 0 引言盐诱导激酶于 1999 年因其被克隆于高盐饮食大鼠的肾上腺而得名 [1] 盐诱导激酶蛋白家族包括三个成员 :SIK1 SIK SIK3, 分别由 3 个不同的基因编码表达盐诱导激酶是一种丝氨酸 / 苏氨酸激酶, 因其氨基酸序列与腺苷酸活化激酶 (AMP-activatedproteinkinase,AMPK) 异源三聚体的 α 亚基相似, 而被归属于 AMPK 家族但 3 种 SIK 蛋白均不能与 AMPK 的 β, γ 亚基形成异源三聚体, 故 SIK 蛋白激酶不能直接被 [] AMP 所活化 SIK 蛋白家族的二级结构具有共同特征 :N 端的激酶结构域 SNH 结构域 (SNE1homolog,SNE1 同源 ) 和 C 端的蛋白激酶 A(proteinkinaseA,PKA) 结构域盐诱导激酶家族成员之一 SIK1 [3] 的氨基酸序列上含有三个可以被磷酸化的氨基酸位点, 分别是位的苏氨酸以及 577 位的丝氨酸当细胞处于静息状态时,SIK1 既存在于细胞核也存在于细胞质 577 位的丝氨酸对 SIK1 从细胞核转移到细胞质是非常重要的当该位点被突变之后,SIK1 只能存在于细胞核 [4] 577 位的丝氨酸被磷酸化将导致两个重要结果 : 一是使 SIK1 催化活性降低, 二是使其从细胞核转移到细胞质目前有关 SIK1 的研究主要包括以下匹个方面 :(1)SIK1 能够调控 TORC(CREBactivitycoactivators) 家族成员, 如 SIK1 可以使 TORC 的 171 位苏氨酸磷酸化, 导致其从细胞核转移到细胞质, 不能与 CREB (camp-responsiveelementbindingprotein) 共同作用于 DNA 启动子上的 CRE 位点, 从而抑制依赖于 CREB 转录因子的靶基因的转录, 同时 SIK1 也是 CREB 下游的一个靶基因, 形成了对 CREB 的一种负反馈,SIK1 可以通过调控 CREB 来抑制相关基因的表达, 在能量代谢途径中发挥重要作用 [5] ;()SIK1 是一种可以磷酸 Ⅱ 型 HDACs(Histonedeactylases) 家族的蛋白激酶, 在骨骼肌细胞中,SIK1 通过磷酸化 HDAC5, 使其出核与 MEE(MyocyteEnhancerEactor) 分离, 正向调控依赖 MEE 的靶基因表达, 提高骨骼肌细胞的存活 [6] ;(3) 胞内钙离子的变化引发 CaMKⅠ(CalmodulinkinasesⅠ) 磷酸化 SIK1 蛋白 SNH 结构域中的苏氨酸收稿日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金 ( ) 作者简介 : 娄军 (1984-), 男, 湖北荆州人, 硕士研究生, 主要从事肿瘤的靶向基因治疗研究通讯作者 : 周秀梅, 电子邮箱 :zhouxiumei84@163.com

2 59 浙江理工大学学报 011 年第 8 卷位点, 磷酸化的 SIK1 又可以通过调节 PME-1(phosphatasemethylesterase-1)/PPA(proteinphosphataseA) 蛋白复合体, 进而影响到钠钾泵的功能, 参与细胞渗透压平衡 [7] ;(4) 在 TGE-β ( TransforminggroWthfactor-β ) 信号通路中,SIK1 可以与 Smad7 形成复合体共同下调 TGE-β 的 Ⅰ 型受体 ALK5(Activinreceptor-likeKinase5) 的活性 SIK1 是 TGE-β 的信号通路中的一个负向调控因子 [8] 此外,SIK1 在细胞周期 G/M 期的转化过程中也具有重要作用, 还能参与细胞的迁移分化以及凋亡过程等 [9-10] 目前还没有关于 SIK1 在免疫系统中的研究报道探索 SIK1 与免疫炎症因子 IL-6 IL-1 之间的关系, 可以进一步了解 SIK1 蛋白的功能, 同时也为临床免疫诊断及研究提供更多有价值的信息 1 材料与方法 1.1 材料腺病毒包装质粒 padtrack,padeasy 以及对照组病毒为本实验室所有 RAW64.7 HEK93 细胞为本实验室所有 ReverseTranscriptaseM-MLV SYBRPremixExTaqⅡ(PerfectRealTime) 以及相关限制性内切酶购自 Takara 公司 MAPK (Erk1/) Phospho-MAPK(Erk1/)(Thr0/Tyr04) Phospho- Jnk1/(Thr183/Tyr185) Phospho-p38 MAPK(Thr180/Tyr18) 等抗体购自 CelSignalingTechnology SIK1 β -actin 抗体购自 SantaCruzBiotechnology 公司 LPS 购自 Sigma 公司, 硫羟乙酸盐肉汤购自 BD 公司 MouseIL-6ELISA Ready-Set-GoKit MouseIL-1p70ELISA Ready-Set-GoKit 购自 ebioscience 蛋白定量试剂盒 PierceBCAProteinAssayKit 购自 Thermo 4~6 周 C57 小鼠购自浙江大学动物中心所有细胞都在 5% CO,37 培养条件下培养, 培养液为 10% EBS(EoetalBovineSerum) 的 DMEM (Dulhecco smodifiedeagle smedium) 1. 方法 1..1 巨噬细胞中 Sik1 基因表达水平的检测小鼠腹腔巨噬细胞 Mψ ( macrophage) 的培养实验前 3 夭, 向每只小鼠腹腔内注入硫羟乙酸盐肉汤 1mL 动物处死后收集腹腔巨噬细胞并计数, 以个 /ml 的细胞密度接种于 4 孔培养板培养 1h 后, 去除旧的培养液, 用 DMEM 培养基冲洗 1 ~ 次, 再加入新鲜的培养液, 置于 5% CO,37 条件培养继续培养 4h 后, 用 μg/ml 的 LPS 分别刺激细胞 h 收集刺激后的细胞, 按照 Takara 公司的 Trizol 使用说明书 ReverseTranscriptaseM-MLV SYBRPremixExTaqⅡ(PerfectRealTime) 说明书提取 RNA, 反转录成 cdna, 进行荧光定量 PCR 分析 Sik1 基因的 mrna 表达情况相关引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成荧光定量 PCR 引物如下 :Sik1: 上游 :5'-ACAGGTGCTAGGGATCATGC-3'; 下游 :5'-TGAGGAACCTC- CAGACTGCT-3';IL-6: 上游 :5'-AGTTGCCTTCTTGGGACTGA-3'; 下游 :5'-TCCACGATTTCCCAGAGAAC- 3';IL-1: 上游 :5'-AGGTGCGTTCCTCGTAGAGA-3'; 下游 :5'-AAAGCCAACCAAGCAGAAGAG-3'; β -actin: 上游 :5'-GTATGGAATCCTGTGGCATC-3'; 下游 :5'-AAGCACTTGCGGTGCACGAT-3' 小鼠巨噬细胞系 RAW64.7 的培养 RAW64.7 细胞以个 / 孔铺于 4 孔培养板, 待细胞生长至 60%, 用 μg/ml 的 LPS 分别刺激细胞 h, 收集不同刺激时间的细胞, 提取 RNA, 反转录成 cdna, 通过荧光定量 PCR 分析 Sik1 基因的 mrna 表达情况 1.. Sik1 过表达病毒载体的构建及病毒的包装纯化建构 Sik1 过表达病毒载体取小鼠淋巴结, 提取 RNA 反转录成 cdna, 进行 PCR 获取 Sik1 基因 Sik1 基因 PCR 引物如下 : 上游 : 5'-ATTGGTACCACCATGGTGATCATGTCGGAGTTCAG-3'; 下游 :5'-ATAGCGGCCGCTCACTG- TACCAGGACGAATGTCCCCCG-3' Sik1 基因 PCR 回收产物及载体 padtrack 采用 KpnⅠ NotⅠ 双酶切, 构建 padtrack-sik1 质粒将构建好的 padtrack-sik1 用 PmeⅠ 酶切过夜, 乙醇沉淀回收后转化到含有 padeasy 质粒的 BJ5183 感受态中, 同源重组构建病毒包装质粒 padeasy-sik1 将 padeasy-sik1 用 Pac Ⅰ 酶切回收后转染到 HEK93 中包装成含有 Sik1 基因的腺病毒 Ad-Sik1 所构建的质粒均经过上海生工生物工程技术服务有限公司测序验证

3 第 4 期娄军等 :SIK1 在巨噬细胞中调控 IL-6 及 IL-1 表达的研究病毒扩增纯化以及滴度测定 HEK93 细胞接种于 10cm 培养皿, 待细胞生长至 80%, 分别加入 Ad-Sik1 病毒及对照病毒,3~4d 细胞全部病变后收集细胞 CsCl 密度梯度离心纯化病毒之后, 接种 HEK93 细胞于 96 孔培养板待细胞生长至 60%~70%, 感染经梯度稀释的纯化病毒, 本实验病毒稀释范围为 10 7 ~10 1 倍 5% CO,37 培养 5d 开始观察记录空斑, 至第 10d 止, 采用 TCID50(tissuecultureinfectivedose) 法计算病毒滴度 [11] 1..3 流式细胞术检测 Ad-Sik1 病毒感染细胞的效率 RAW64.7 细胞个 / 孔铺于 6 孔培养板, 待细胞生长至 60%, 换成含 5% EBS 的 DMEM 培养基, 加入 00MOI(multiplicityofinfection) 的对照组及 Ad-Sik1 病毒 5% CO,37 培养 4h 后, 去除培养基, 用 PBS 洗 1~ 次, 换成含 10% EBS 的 DMEM 培养基继续培养 1h 后, 加入胰酶消化细胞, 3000r/min 离心 5min 收集细胞, 用 PBS 重悬, 各取部分用于流式细胞术检测病毒感染细胞的效率剩余细胞再次离心, 加入 DMEM 培养基重悬, 细胞计数后用于以下实验 1..4 定量 PCR 及 ELISA 分析 Sik1 过表达后 IL-6 及 IL-1 的变化将上述对照组及 Ad-Sik1 病毒感染后的细胞铺于 1 孔培养板待细胞生长至 80%, 移去旧的培养基, 每孔加入 1mL 的新鲜 DMEM 培养基, 分别用 μg/ml 的 LPS 刺激细胞 h, 收集不同刺激时间的细胞培养液及细胞收集的细胞培养液, 按照 MouseIL-6ELISAReady-Set-GoKit MouseIL-1ELISA Ready-Set-GoKit 说明书分析其中 IL-6 及 IL-1 的蛋白含量收集的细胞按每孔 1mL 加入 Trizol, 提取 RNA, 反转录成 cdna, 进行半定量及荧光定量 PCR 检测 Sik1 IL-6 及 IL-1 的 mrna 表达水平 1..5 WesternBlot 检测相关信号通路蛋白的变化将上述对照组及 Ad-Sik1 病毒感染后的细胞铺于 1 孔培养板待细胞生长至 80%, 移去旧的培养基, 加入 1mL 的无血清 DMEM 培养基继续培养 1h 后, 分别用 μg/ml 的 LPS 刺激细胞 min, 收集不同刺激时间的细胞, 加入蛋白裂解液冰上裂解 30min 通过 BCA 法进行蛋白定量, 以每管 50μg 蛋白样品分装于 1.5mL 的 EP 管中, 加入 5 SDS 蛋白上样缓冲液, 煮沸 10min,-80 保存备用配制 10% 的 SDS- PAGE 凝胶电泳板, 每孔加入 50μg 蛋白样品进行电泳, 硝酸纤维膜 (PVDE) 转移封闭后, 再分别用抗 SIK1 β - actin p-erk1/ Erk1/ p-jnk1/ p-p38 的抗体作为一抗, 用相应的荧光二抗进行杂交, 最后用红外线成像系统 (Odysey) 检测 PVDE 膜上二抗的荧光信号 1..6 统计学处理统计学软件采用 Exce1007, 所有定量实验均重复 3 次, 各组数据以均值 ± 标准差表示组间比较用 t 检测,P<0.05 代表差异显著,P<0.01 代表差异极显著结果.1 LPS 刺激 Mψ 及 RAW64.7 细胞不同时间时 Sik1mRNA 表达情况通过荧光定量 PCR, 以 LPS 刺激对照组 0h 时目的基因 mrna 相对 β-actin 的光密度比值为 1, 其他时间段样品均与 0h 样品相比结果表明在巨噬细胞系 RAW64.7( 见图 1a) 及腹腔巨噬细胞 ( 见图 1b) 中, Sik1 的 mrna 变化趋势基本一致, 在 LPS 刺激 0~4h 无明显变化, 在 4~48h 有显著的升高其中, 在小鼠腹腔巨噬细胞中,Sik1 的 mrna 在 48h 较 0h 升高了 50 倍左右 ( 见图 1b) 图 1 Sik1 在巨噬细胞中 mrna 的表达情况

4 594 浙江理工大学学报 011 年第 8 卷. 流式细胞术及半定量 PCR 检测 Sik1 过表达效率由于所构建的病毒质粒含有 GEP 基因, 通过流式细胞术检测病毒感染细胞后的绿色荧光信号结果表明, 以未感染病毒的细胞的荧光信号为参考 ( 见图 (a)), 对照组病毒感染 RAW64.7 细胞的效率达到 9.88%( 见图 (b)),ad-sik1 组病毒感染效率达到 93.46%( 见图 (c)) 半定量 PCR 结果也表明所构建的 Ad-Sik1 病毒能够使 Sik1 基因在 RAW64.7 细胞中高效过表达 ( 见图 (d)) 图流式细胞术及半定量 PCR 检测 Sik1 基因过表达效率.3 Sik1 基因过表达后 IL-6 及 IL-1 的变化通过荧光定量 PCR, 结果表明, 在 Sik1 基因过表达的情况下,IL-6( 见图 3(a)) IL-1( 见图 3(b)) 的 mrna 表达水平在 LPS 刺激 RAW64.7 细胞的不同时间较对照组均有显著升高通过 ELISA 分析 LPS 刺激 RAW64.7 细胞不同时间的细胞上清, 发现在 Sik1 基因过表达的情况下, 细胞上清中 IL-6 的蛋白含量较对照组在 LPS 刺激 1 4h 均有明显的增加 ( 见图 3(c)),IL-1 的蛋白含量较对照组在 LPS 刺激 4h 也有明显的增加 ( 见图 3(d)) 图 3 Sik1 过表达后 IL-6 及 IL-1 的变化情况注 : ** 代表 P<0.01

第 4 期娄军等 :SIK1 在巨噬细胞中调控 IL-6 及 IL-1 表达的研究 595.4 WesternBlot 检测相关信号通路蛋白的变化结果 WesternBlot 实验结果表明 Sik1 基因在 RAW64.

5 第 4 期娄军等 :SIK1 在巨噬细胞中调控 IL-6 及 IL-1 表达的研究 WesternBlot 检测相关信号通路蛋白的变化结果 WesternBlot 实验结果表明 Sik1 基因在 RAW64.7 细胞中过表达成功 ( 见图 4) MAPK(mitogenactivatedprotainkinase) 信号通路中的相关蛋白 ERK1/ JNK1/ P38 的磷酸化水平在 LPS 刺激 0~60min 的过程中有明显的变化, 在 LPS 刺激 30min 时其磷酸化水平最高过表达 Sik1 基因之后,MAPK 信号通路中的相关蛋白 ERK1/ JNK1/ P38 的磷酸化水平较对照组在 30min 均有一定程度的上升, 相关内参 β-actin 及 ERK1/ 总蛋白显示各样品中蛋白总量基本一致 ( 见图 4) 3 讨论图 4 WesternBlot 检测相关信号通路蛋白磷酸化变化情况细菌脂多糖 LPS 是革兰氏阴性菌细胞壁的成分, 能够被 TLR4 所识别 LPS 能够与 LBP(LPSbinding protein) 及受体蛋白 CD14 分子形成复合物, 当 TLR4 与该复合物结合时, 能激活下游的多条信号途径, 如 MAPK NE-кB 途径等, 进而将信号传递至核内 [1] MAPK 家族是一组重要的丝 / 苏氨酸蛋白激酶, 通过调节下游底物的磷酸化水平来激活细胞内的多种转录因子部分被激活的转录因子能够作用于多种免疫炎症因子如 IL-6 IL-1 等基因启动子序列上的重要位点, 调节免疫应答 [13] 实验结果表明,Sik1 基因的过表达能够通过增强 LPS-TLR4 诱导的 MAPK 家族的 ERK JNK p38 三条信号途径, 促进免疫炎症因子 IL-6 IL-1 的表达其具体机制可能是 SIK1 通过调控 HDACs 来实现这 [14] 一过程已有研究表明,HDACs 可以与多种转录相关蛋白形成复合体, 共同作用于 DNA 转录调控区 HDACs 在免疫炎症因子及抗炎因子的基因表达调控中发挥重要的作用如 HDAC1 能够调控 IL-4, HDAC5 调控 IL-8,HDAC7 9 调控 IL-,HDAC6 11 调控 IL-10 等 [15-16] HDACs 家族根据其结构特征可以被分为匹大类 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 型, 其中 SIK1 主要能够作用于 Ⅱ 型的 HDACs( 包括 Ⅱa 型的 HDAC 及 Ⅱb 型的 HDAC6 10) 研究表明, 与 Ⅱ 型 HDACs 形成复合物的分子有很多, 如 MAPK/3 Erk1/ IкBa CREB MEE 等 [17], 这些都是 LPS-TLR4 诱导信号通路中的重要分子 Ⅱ 型的 HDACs 与其家族其它成员之间也可以形成复合体共同作用于 MAPK 及 NE-кB 信号通路 [18] SIK1 可能参与 Ⅱ 型 HDACs 与 MAPKs 家族及 HDACs 家族成员之间的作用来实现对转录因子的调控, 进而影响免疫炎症因子的表达 Sik1 基因在免疫系统中的潜在作用及其具体作用机制还有待继续探索研究, 如 Sik1 在 LPS 刺激 48h 时, 其表达量较 LPS 刺激 0~4h 增加了几十倍,Sik1 基因在 LPS-TLR4 诱导的其他信号途径中是否也具有重要的作用等这些结果将为免疫炎症因子表达调控的研究提供一定的参考价值参考文献 : [1]WangZ,TakemoriH,HalderSK,etal.Cloningofanovelkinase(SIK)oftheSNE1/AMPKfamilyfromhighsaltdiettreatedratadrenal[J].EEBSLet,1999,453(1): []OkamotoM,TakemoriH,KatohY,etal.Salt-induciblekinaseinsteroidogenesisandadipogenesis[J].TrendsEndocrinolMetab,004,15(1):1-6. [3]KatohY,TakemoriH,HorikeN,etal.Salt-induciblekinase(SIK)isoforms:theirinvolvementinsteroidogenesisand adipogenesis[j].molecularandcelularendocrinology,004,17(1): [4]KatohY,TakemoriH,MinL,etal.Salt-induciblekinase-1repressescAMPresponseelement-bindingproteinactivity bothinthenucleusandinthecytoplasm[j].eurjbiochem,004,71(1): [5]LinX,TakemoriH,KatohY,etal.SaltinduciblekinaseisinvolvedintheACTH/cAMPdependentproteinkinasesignalinginY1mouseadrenocorticaltumorcels[J].MolEndocrinol,001,15(8): [6]BerdeauxR,GoebelN,BanaszynskiL,etal.SIK1isaclassⅡHDACkinasethatpromotessurvivalofskeletalmyocytes [J].NatMed,007,13(5): [7]Sjstrm M,KarinS,KristinaE,etal.SIK1ispartofacelsodium-sensingnetWorkthatregulatesactivesodiumtrans-

6 596 浙江理工大学学报 011 年第 8 卷 portthroughacalciumdependentprocess[j].procnatlacadsciusa,007,104(43): [8]MarcinK,PeterL,MichaelV,etal.TGE-βinducesSIKtonegativelyregulatetypeⅠreceptorkinasesignaling[J].JCel Biol,008,18(4): [9]StephensonA,HuangGY,NguyenNT,etal.Snf1lkencodesaproteinkinasethatmayfunctionincelcycleregulation [J].Genomics,004,83(6): [10]ChengH,LiuP,WangZC,etal.SIK1couplesLKB1top53-dependentanoikisandsuppressesmetastasis[J].SciSignal,009,(80):ra35. [11]LinH T,TsaiH Y,LiuCP,etal.ComparabilityofbovinevirustitersobtainedbyTCID50/mLandEAID50/mL[J]. JournalofVirologicalMethods,010,165(1): [1]WangD,LouJ,OuY,etal.Ras-relatedproteinRab10facilitatesTLR4signalingbypromotingreplenishmentofTLR4 ontotheplasmamembrane[j].procnatlacadsciusa,010,107(31): [13]NdlovuN,VanLintC,VanWesemaelK,etal.HyperactivatedNE-кBandAP-1transcriptionfactors promotehighly accessiblechromatinandconstitutivetranscriptionacrosstheinterleukin-6genepromoterinmetastaticbreastcancercels [J].MolecularandCelularBiology,009,9(0): [14]KhanA,TomasiT.Histonedeacetylaseregulationofimmunegeneexpressionintumorcels[J].ImmunolRes,008,40 (): [15]VilagraA,SotomayorEM,SetoE.HistonedeacetylasesandtheimmunologicalnetWork:implicationsincancerandinflammation[J].Oncogene,010,9(): [16]VilagraA,ChengE,WangH W,etal.ThehistonedeacetylaseHDAC11regulatestheexpressionofinterleukin10and immunetolerance[j].natimmunol,009,10(1): [17]MartinM,KetmannR,DequiedtE.ClassⅡahistonedeacetylases:regulatingtheregulators[J].Oncogene,007,6 (37): [18]SlevogtH,SchmeckB,JonatatC,etal.Moraxelacatarhalisinducesinflammatoryresponseofbronchialepithelialcels viamapkandne-кbactivationandhistonedeacetylaseactivityreduction[j].amjphysiollungcelmolphysiol, 006,90(5): ReguIationofIL-6andIL-1ExpressionbySIk1ProteininMacrophages LOUJun 1,OUYang-chuan,ZHENGMing-zhu,YAOYun-liang,WANGLuo,QIUQing 1,ZHOUXiu-mei 1 (1.XinyuanInstituteofMedicineandBiotechnology,SchoolofLifeSciences, ZhejiangSci-TechUniversity,Hangzhou310018,China;.InstituteofImmunology,SchoolofMedicine,ZhejiangUniversity,Hangzhou310058,China) Abstract:Sik1isupregulatedbyLPS (lipopolysaccharide)stimulationwithdiferenttimeinmacrophages.itsuggeststhatsik1playsapotentialroleinimmunesystem.theexperimentoverexpressessik1 inraw64.7usingvirusvectors,andcheckesitsefectoninflammatorycytokineexpressionbyreal TimeQuantityPCR ELISAand WesternBlotassayinmRNAandproteinlevel.ResultsshoWthatthe overexpressionofsik1canenhancetheexpressionofimmuneinflammatorycytokinesincludingil-6and IL-1.Tosomeextent,ItWilprovidecertaintheoreticalbasisforthestudyofimmuneregulationandrelateddiseaseinclinicaldiagnosisandtreatment. keywords:sik1;lpsstimulation;il-6;il-1 ( 责任编辑 : 许惠儿 )

浙江理工大学学报年第卷 4 证实以三聚体的形式发挥功能目前的功能研究已证实 8 参与细胞凋亡的事件主要包括以下两个方面 8 可以与 $ 染色体连锁凋亡抑制蛋白之间的相互作用直接利用其自身具有的蛋白酶活性引起细胞凋亡 8 可以与.$ 相互作用引发细胞自噬性凋亡目前

浙江理工大学学报年第卷 4 证实以三聚体的形式发挥功能目前的功能研究已证实 8 参与细胞凋亡的事件主要包括以下两个方面 8 可以与 $ 染色体连锁凋亡抑制蛋白之间的相互作用直接利用其自身具有的蛋白酶活性引起细胞凋亡 8 可以与.$ 相互作用引发细胞自噬性凋亡目前浙江理工大学学报!第!卷!第!期! $!年月 -. 4 8 1!! = >!!?> $! 文章编号!!$ $!!$$ $$ [I 与巨噬细胞中 $ 的表达及相关性研究韩文正$$武!虎$$李晓艳$$李红艳$$姚韵靓$郭科妮$$周秀梅$ $>浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所!杭州!$$B>浙江大学医学院免疫研究所!杭州!$B 分别刺激树突状细胞和巨噬细胞!发现巨噬细胞中 O J 丝氨酸蛋白酶!!摘!要!通过

59 浙江理工大学学报 011 年第 8 卷 位点, 磷酸化的 SIK1 又可以通过调节 PME-1(phosphatasemethylesterase-1)/PPA(proteinphosphataseA) 蛋 白复合体, 进而影响到钠钾泵的功能, 参与细胞渗透压平衡 [7] ;(4) 在 TGE

59 浙江理工大学学报 011 年第 8 卷位点, 磷酸化的 SIK1 又可以通过调节 PME-1(phosphatasemethylesterase-1)/PPA(proteinphosphataseA) 蛋白复合体, 进而影响到钠钾泵的功能, 参与细胞渗透压平衡 [7] ;(4) 在 TGE