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浙 江 农 林 大 学 学 报!"#!"##$# 桂 花 组 织 基 因 表 达 中 荧 光 定 量 内 参 基 因 的 筛 选 付 建 新 张 超 王 艺 光 赵 宏 波 %$ 浙 江 农 林 大 学 风 景 园 林 与 建 筑 学 院 浙 江 临 安 $ 浙 江 农 林 大 学 亚 热 带 森 林 培 育 国 家 重 点 实 验 室 培 育 基 地 浙 江 临 安 摘 要 为 了 筛 选 桂 花 $!%"!! 不 同 组 织 基 因 表 达 分 析 中 适 合 的 内 参 基 因 以 桂 花 堰 虹 桂 $&! &'!! 花 蕾 盛 开 花 序 嫩 叶 成 熟 叶 和 年 生 茎 等 # 个 不 同 组 织 为 材 料 利 用 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 式 反 应 ()* 检 测 个 候 选 内 参 基 因 的 表 达 水 平 并 利 用 +,-.,-./!+- 和 0+ 1+++- 软 件 对 各 候 选 内 参 基 因 的 表 达 稳 定 性 进 行 评 价 最 后 利 用 桂 花 不 同 组 织 中 '$ 基 因 相 对 表 达 水 平 验 证 筛 选 的 内 参 基 因 的 可 靠 性 结 果 表 明 综 合 个 软 件 的 评 价 排 序 确 定 不 同 组 织 中 最 佳 内 参 基 因 为 $() 和 $* 而 $+ 是 最 差 内 参 基 因 $+$ 基 因 相 对 表 达 水 平 分 析 证 实 不 同 组 织 中 ()* 分 析 使 用 $) 和 $* 等 个 表 达 最 稳 定 的 基 因 组 合 即 可 获 得 更 为 精 确 的 基 因 表 达 结 果 旨 在 为 桂 花 组 织 间 重 要 基 因 的 定 量 表 达 分 析 提 供 科 学 依 据 图 表 参 关 键 词 植 物 学 桂 花 内 参 基 因 +,-.,-./!+- 0+ 1+++- 中 图 分 类 号 文 献 标 志 码 文 章 编 号 $"##$#$ ++-+!2+ +!+ +3+21! - '!11'14+ -+'31.+ 35.+-' + 2'! -+'21! ()*!-.'36'1!! 1+ +!+ +7-+! 8++1.'!1 1 + /9 :'!7! % ;, *' %, &'! % ;! % 23 '! 2'+ -21+21-+% ;+'! / 9!4+- 15%!'! % ;+'!% *!'< (+,-1-! 1'1! - 1'1+ +5 '-'1-5 1-2'3 34231-+% ;+'! / 9!4+- 15%!'! % ;+'!% *!' ( +3+21 1+ 1'3+ -++-+!2+ +!+ - +!+ +7-+! '!'35! +-+!1 1 + $!% "!!% 4+ 1 + % 335+!+!3-+ 2+!2+ % 5! 3+'4+ % '31 3+'4+ % '!!+5+'-3 1+. % -. $&! &'!! 8+-+ + '.'1+-'3 1 +1+21 1+ +7-+! 3+4+3 +4+! 2'!'1+ -+ +-+!2+ +!+ 5 '!11'14+ -+'31.+ 35.+-' + 2'! -+'21! ()* (+!% '! '-+'1+ '!'35 +!+ +7-+! 1'315-1+ + 2'!'1+ 8' 2!21+! 1-++ 18'-+ --'. +,-.%,-./!+-% '! 0+ 1+++- /!'335% 1+ -+3'14+ +7-+! 3+4+3 $+$! +-+!1 1 + 8' '!' 356+ 1 4+-5 1+ -++-+!2+ +!+ +3+21+! 1 15 + 31 1+ '-+'1+ '!'35 8+ 1'1 $) '! $* 8+-+ 1+ + 1 -++-+!2+ +!+ -. 1+ +-+!1 1 + % '! $+ 8' 1+ 8-1 -++- +!2+ +!+ =! '1!% '!'35 1+ -+3'14+ +7-+! 3+4+3 - $+$ 2!-.+ 1'1 $) '! $ * 8+-+ 1+ 18. 1 1'3+ -++-+!2+ +!+! 1+ ()* '!'35 1+ 1 + % '! 1+ '32'1! $) '! $* 8' +! 1 '2+4+.-+ '22-'1+ '! -+3'3+ -+ 31! 1+ + 1 + ( % 1+ -+ 收 稿 日 期 #" 修 回 日 期 " 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 #" # 浙 江 省 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 >#* 浙 江 农 林 大 学 科 研 发 展 基 金 人 才 启 动 项 目 / 作 者 简 介 付 建 新 讲 师 博 士 从 事 园 林 植 物 遗 传 育 种 和 分 子 生 物 学 研 究?.'3 '!7!@ 2. 通 信 作 者 赵 宏 波 教 授 博 士 从 事 观 赏 植 物 遗 传 育 种 和 植 物 繁 殖 生 态 研 究?.'3 6' @6'+2!

3 浙 江 农 林 大 学 学 报 年 月 日!!" #$ # %&!'! # '!!##! # #!' ( ) # (* * #$ '* '+"* +",!* -. 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 式 反 应 /!! %!" #%$$ %" $! $! /01 0 因 具 有 灵 敏 度 高 特 异 性 强 精 准 性 高 检 测 范 围 广 等 优 点 已 被 广 泛 应 用 于 植 物 基 因 表 达 的 相 关 研 究 中 利 用 /010 分 析 基 因 相 对 定 量 表 达 时 为 了 消 除 不 同 组 织 细 胞 间 初 始 模 板 量 核 糖 核 酸 ) 0+ 制 备 和 反 转 录 过 程 中 的 偏 差 需 要 引 入 内 参 基 因 #$ ' 对 表 达 结 果 进 行 校 正 实 际 研 究 中 常 选 择 的 内 参 基 因 只 能 在 一 定 的 试 验 范 围 内 相 对 稳 定 表 达 不 能 保 证 在 所 有 试 验 条 件 下 均 能 稳 定 表 达 如 果 盲 目 以 一 种 看 家 基 因 作 为 任 何 试 验 条 件 下 的 内 参 基 因 容 易 得 到 精 确 度 低 甚 至 错 误 的 结 果 因 此 在 利 用 /010 进 行 基 因 表 达 分 析 时 根 据 试 验 处 理 及 不 同 实 验 材 料 的 特 点 优 化 和 选 择 合 适 的 内 参 基 因 就 显 得 极 其 重 要 桂 花 是 中 国 十 大 名 花 之 一 随 着 桂 花 分 子 生 物 学 研 究 的 不 断 深 入 和 发 展 基 因 表 达 分 析 已 经 广 泛 应 用 于 揭 示 其 观 赏 性 状 形 成 机 制 的 研 究 中 因 此 筛 选 稳 定 的 内 参 基 因 在 桂 花 重 要 基 因 表 达 分 析 中 起 着 关 键 的 作 用 已 有 研 究 筛 选 出 桂 花 不 同 品 种 不 同 ) 发 育 状 态 花 序 和 不 同 温 度 处 理 条 件 中 合 适 的 内 参 基 因 却 未 对 不 同 组 织 中 适 合 的 内 参 基 因 进 行 筛 选 本 研 究 将 以 桂 花 堰 虹 桂 ' 2! 不 同 组 织 花 蕾 盛 开 花 序 嫩 叶 成 熟 叶 年 生 茎 为 材 料 利 用 /010 检 测 3 个 候 选 内 参 基 因 的 表 达 水 平 并 利 用 软 件 '+" ) +",! 和 -. 对 各 候 选 内 参 基 因 的 表 达 稳 定 性 进 行 评 价 筛 选 出 最 稳 定 表 达 的 内 参 基 因 并 研 究 桂 花 类 胡 萝 卜 素 异 构 酶 在 不 同 组 织 中 的 表 达 模 式 验 证 筛 选 得 到 的 内 参 基 因 的 可 靠 性 希 冀 为 后 续 研 究 不 同 组 织 重 要 基 因 的 定 量 表 达 提 供 依 据 材 料 与 方 法 材 料 浙 江 农 林 大 学 桂 花 资 源 圃 树 龄 地 栽 桂 花 堰 虹 桂 为 试 验 材 料 对 其 花 蕾 盛 开 花 序 嫩 叶 成 熟 叶 年 生 茎 进 行 取 样 液 氮 速 冻 后 于 储 藏 备 用 方 法 不 同 组 织 材 料 总 0+ 提 取 与 $4+ 的 第 链 的 合 成 采 用 0+ %.! 天 根 北 京 按 照 说 明 书 步 骤 提 取 各 样 品 的 总 0+ 紫 外 分 光 光 度 计 和 '5 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 总 0+ 浓 度 和 质 量 采 用 0 1$! 66571 大 连 按 照 说 明 书 合 成 $4+ 的 第 链 后 于 储 存 备 用 内 参 基 因 的 选 择 及 特 异 性 引 物 设 计 本 研 究 从 前 期 构 建 的 桂 花 转 录 组 数 据 库 中 取 肌 动 蛋 白 基 因 延 伸 因 子 蛋 白 基 因!" #$%& 异 柠 檬 酸 脱 氢 酶 基 因 %' 21 结 合 蛋 白 0+ 基 因 $# 微 管 蛋 白 基 因 泛 素 结 合 酶 8 基 因 和 9 核 糖 体 0+ 基 因 等 3 种 看 家 基 因 作 为 候 选 的 内 参 基 因 根 据 /010 引 物 设 计 原 则 利 用!" "! : 等 软 件 设 计 各 候 选 内 参 基 因 的 /010 引 物 引 物 序 列 见 表 其 中 引 物 引 自 文 献 : 表 检 测 中! 个 候 选 内 参 基 因 的 引 物 序 列 1(%!" /$ # $! #$ '! /010 %! 基 因 名 上 游 引 物 序 列 :) 下 游 引 物 序 列 :) $ 22221 1212!" 2111211221211 21221112212111 %' 1122212122221 111211122221 $# 22221222 12222122221 2222122122122 2111112112221 12112212222 212221212222122212 2122221 12111222122

第 卷 第 期 付 建 新 等 桂 花 组 织 基 因 表 达 中 荧 光 定 量 内 参 基 因 的 筛 选 内 参 基 因 的 分 析 利 用 两 步 法 来 进 行 分 析 在 实 时 仪!"#$#%&# 运 行 基 于 '! 染 料 的 来 检 测 内 参 基 因 的 循 环 阈 值 % 值 所 用 反 应 体 系 和 程 序 参 考 公 司 的 '! &( )( * +#, -# 试 剂 盒 的 说 明 书 反 应 体 系 为. 其 中 '! &( )( +#, -#. 上 下 游 定 量 引 物 &". 各 /. 模 板 01+. 0 1$. 用 灭 菌 双 蒸 水 补 齐 至. 扩 增 采 用 两 步 法 即 在 预 变 性 # 之 后 先 运 行 个 循 环 的 # # 再 运 行 溶 解 曲 线 阶 段 的 # & # # 通 过 观 察!2 实 时 仪 在 反 应 后 生 成 的 溶 解 曲 线 为 单 一 峰 判 定 所 用 引 物 无 非 特 异 扩 增 实 验 得 到 定 量 % 值 用 于 后 期 内 参 基 因 稳 定 性 分 析 数 据 处 理 与 分 析 本 研 究 采 用 3+"& +"&4 和!#%5 软 件 对 种 候 选 内 参 基 因 在 桂 花 不 同 组 织 中 的 表 达 稳 定 性 进 行 统 计 学 分 析 从 而 筛 选 桂 花 组 织 基 因 表 达 中 最 合 适 的 内 参 基 因 桂 花 基 因 验 证 内 参 基 因 稳 定 性 利 用 桂 花 不 同 组 织 中 基 因 表 达 模 式 验 证 筛 选 的 内 参 基 因 的 稳 定 性 其 表 达 上 游 引 物 为 下 游 引 物 为 结 果 与 分 析 候 选 内 参 基 因 引 物 评 价 以 桂 花 嫩 叶 的 01+ 为 模 板 利 用 对 引 物 表 个 候 选 内 参 基 因 扩 增 特 性 均 能 扩 增 出 与 各 候 选 内 参 基 因 预 期 大 小 一 致 的 单 : &0" 0;0%#%0# " # 0 % 0 3# 一 条 带 结 果 未 显 示 说 明 这 对 引 物 均 能 特 异 性 地 扩 增 相 应 片 段 可 以 用 于 分 析 溶 解 曲 线 分 析 表 明 这 对 引 物 的 扩 增 产 物 单 一 可 用 于 下 一 步 分 析 将 反 转 录 的 嫩 叶 基 因 名!% 扩 增 长 度 8: / / 扩 增 效 率 86 / 线 性 相 关 系 数 / 01+ 样 品 以 倍 浓 度 梯 度 稀 释 以 此 为 模 板 进 / / 行 扩 增 后 制 作 种 内 参 基 因 的 标 准 曲 / 线 结 果 表 显 示 各 内 参 基 因 的 线 性 相 关 系 / / 数 引 物 的 扩 增 效 率 为 6 7 6 符 合 对 扩 增 效 率 的 要 求 候 选 内 参 基 因 的 表 达 水 平 分 析 个 候 选 内 参 基 因 在 不 同 组 织 中 的 % 值 平 均 为 7 图 其 中 / 在 所 有 样 品 中 的 转 录 水 平 最 高 % 值 最 小 而 基 因 的 表 达 水 平 最 低 % 值 最 大 从 表 达 量 变 异 系 数 看 最 小 然 后 是 而 最 大 候 选 内 参 基 因 的 表 达 稳 定 性 分 析 本 研 究 首 先 采 用 3+"& 软 件 对 个 候 选 内 参 基 因 的 表 达 稳 定 性 进 行 分 析 图 结 果 显 示 在 不 同 组 织 中 和 基 因 的 基 因 表 达 稳 定 值 最 小 / 表 示 这 个 基 因 表 达 最 为 稳 定 其 次 是 / 和!" 和 / 是 稳 定 性 排 序 靠 后 的 个 候 选 内 参 基 因 其 中 / 的 值 最 大 / 是 最 不 稳 定 内 参 基 因 利 用 3+"& 程 序 对 内 参 基 因 的 配 对 差 异 值 # $8$9 进 行 分 析 图 发 现 所 检 测 的 # 8 低 于 程 序 默 认 取 舍 值 说 明 无 需 引 入 第 个 基 因 进 行 校 正 因 此 选 择 表 达 最 为 稳 定 的 个 内 参 基 因 即 % 值 图 不 同 组 织 中 个 候 选 内 参 基 因 的 平 均 % 值 43- * % -# " # 0 % 0 3# % %##-#

#$ 浙 江 农 林 大 学 学 报 年 月 日 图 % 软 件 分 析 # 个 候 选 内 参 基 因 的 表 达 稳 定 值! % " ( ) *(! + *, +, %,(,( ) % 图 $ % 软 件 分 析 # 个 候 选 内 参 基 因 的 配 对 差 异 值 " -. % $ -/ * " -. + *, +, %,(,( ) % 和 以 两 者 的 几 何 平 均 值 作 为 参 照 可 更 为 准 确 地 校 正 目 的 基 因 的 表 达 此 外 为 保 证 结 果 分 析 的 准 确 性 本 研 究 还 利 用 和!" 分 析 # 个 候 选 内 参 基 因 的 表 达 稳 定 性 表 $ 结 果 显 示 和!" 的 分 析 结 果 与 % 分 析 的 结 果 整 体 上 一 致 通 过 $ 个 软 件 评 价 得 到 的 稳 定 性 排 序 中 和 均 是 表 达 稳 定 性 最 高 的 个 基 因 其 次 是 和 表 明 这 个 基 因 在 不 同 组 织 中 的 表 达 较 为 稳 定 而 根 据 $ 个 软 件 的 分 析 和 & 是 表 达 稳 定 性 最 差 的 $ 个 候 选 内 参 基 因 综 合 $ 个 软 件 对 最 佳 内 参 基 因 和 最 差 内 参 基 因 的 评 价 表 ' 得 到 不 同 组 织 中 最 佳 内 参 基 因 为 和 而 & 是 最 差 内 参 基 因 桂 花 基 因 验 证 内 参 基 因 稳 定 性 为 了 验 证 筛 选 的 最 佳 内 参 基 因 稳 定 性 是 否 准 确 我 们 利 用 不 同 内 参 基 因 或 组 合 校 正 桂 花 不 同 组 织 中 基 因 的 相 对 表 达 图 ' 选 择 和 基 因 组 合 进 行 校 正 的 基 因 表 达 模 式 相 同 均 在 盛 开 花 序 中 表 达 量 显 著 高 于 其 他 组 织 在 花 蕾 嫩 叶 和 成 熟 叶 中 的 表 达 量 相 同 而 在 年 生 茎 中 表 达 量 最 低 以 稳 定 性 较 差 的 其 他 内 参 基 因 进 行 校 正 时 基 因 表 达 模 式 产 生 变 化 上 述 结 果 表 明 $ 个 软 件 对 内 参 基 因 表 达 稳 定 性 的 排 序 结 果 可 靠 证 实 和 为 不 同 组 织 中 最 佳 内 参 基 因 $ 讨 论 表 和! 分 析 " 个 候 选 内 参 基 因 的 表 达 稳 定 性 0( $ " ( ) + *, +, % )!" 基 因 名 分 析!" 分 析 稳 定 值 排 序 稳 定 值 排 序 #& ' ' $ ' # & &' $ & $& & # # 表 最 佳 内 参 基 因 和 最 差 内 参 基 因 综 合 结 果 0( ' 1%%% ( + " ( / +, % 分 析 软 件 最 佳 内 参 基 因 最 差 内 参 基 因 % 和 & 和 &!" 综 合 结 果 和 & 理 想 的 内 参 基 因 应 在 不 同 的 基 因 型 不 同 发 育 阶 段 不 同 组 织 器 官 不 同 胁 迫 条 件 下 均 恒 定 表 达 但 事 实 上 并 没 有 一 个 基 因 在 所 有 试 验 条 件 下 能 稳 定 表 达 因 此 需 要 根 据 不 同 试 验 材 料 和 不 同 试 验 处 理 条 件 下 筛 选 合 适 的 内 参 基 因 本 研 究 通 过 对 # 个 候 选 内 参 基 因 在 个 不 同 组 织 中 的 表 达 稳 定 性 进 行

第!! 卷第 " 期 图# %&'()* + 付建新等' 桂花组织基因表达中荧光定量 KL, 内参基因的筛选 C!$ 不同内参基因或组合校正桂花不同组织中!"#$%&'!$ 基因的相对表达,*-./&0* *12)*33&45 -*0*-3 46!"#$%&'!$ &5 7&66*)*5/ /&33(*3 (3&5' 7&66*)*5/ )*6*)*58* '*5*3 4) )*6*)*58* '*5* 849:&5./&45 64) 54)9.-&;./&45 研究! 筛选得到桂花不同组织中最佳内参基因为!"$()$ 和!"*+#<! 为后续桂花不同组织中目标基因 表达规律的研究奠定了基础" 目前! = 个统计分析软件 '*>4)9! >4)9%&57*) 和?*3/@**2*) 常用于确定不同植物材料或试验条件下 最佳的内参基因#AB $=B $A!$C$" 然而! = 个软件在许多物种中的分析结果存在差异! 如芝麻 ',-./0/ 123140/#A$! 黄花蒿 (56,/1-1..220.#$D$和牛奶子 78.,.920-0/:,88.6.#$E$" 在本研究中! = 个软件的分析结果整体排序一 致%图 < 和表 = &"!"$()$ 和!"*+#< 基因在 '*>4)9 和 >4)9%&57*) 的稳定性排序中并列第一! 而?*3/" @**2*) 软件评价!"$()$ 为表达最为稳定的内参基因!!"*+#< 基因以微弱差距排列第二" 综合 = 个软 件分析结果确定!"$()$ 和!"*+#< 基因为桂花不同组织中最佳内参基因" 有研究证实' 选择 < 个或 < 个以上的内参基因作参照! 可以减弱单一内参变化的影响! 不同内参表达的相似性有助于增加结果的可 靠度及精确度 #=B <F!<$$! 因此确定!"$()$ 和!"*+#< 基因组合为桂花不同组织中表达分析的内参基因可更 为准确地校正桂花不同组织中目的基因的表达结果",G> %).3")*-./*7 5(8-*.) 2)4/*&5 &是小 H 蛋白家族的一类! 在真核生物进化过程中比较保守! 在许多 细胞生理进程过程中发挥着重要的作用 #<<!<+$",G> 同源基因 $()=! 是金鱼草 (26155;120/ /.<0- 中 I,J" KL, 分析常用的内参基因 #<"!<A$" 通过对矮牵牛 =,6021. ;>:513. 开花过程中相关候选内参基因的筛选! 证 实 $()$ 是矮牵牛中稳定表达的内参基因之一 #<C$" 与 (#%! 7?$! 和 %*+ 等其他传统内参基因相比! 将,G> 基因作为内参基因进行研究和应用 的报道较少 " 本研究证实 $()$ 在桂花不同 组织中稳 定表达! 是最佳内参基因之一" 此外! $()$ 被证实是桂花不同品种中表达量最为稳定的内 参基因 #$=$" 与 $() 基因相同!!"*+#< 在桂花不同组织中也稳定表达! 是另一个最佳内参基因" 作为一个传统内参基因! *+# 基因在拟南芥 (5.:13@A-1-6;.81.2. #<D!=M$! 月季 $@-. ;>:513. #!$$! 侧柏 =8.6>48.30- @51,26.81- #!<$ 等物 种的 内参基因筛选中均表现最佳" 本研究发现!"$D' 在桂花不同组织中表达最不稳定! 不适合作为内参基因在桂花中应用" 同样! 在 丹参 '.8B1. /1861@55;1C. #!!$! 牡丹 =.,@21. -0""50614@-. #!+$! 大白菜 +5.--14. 5.A. 332N A,D12,2-1- #D$ 和西瓜 #16! 50880-8.2.60-#$A$中!!"$D' 基因也被证实是表达最不稳定的内参基因" 这可能与 $D' 基因在样品中高丰度

1 浙 江 农 林 大 学 学 报 年 月 日 表 达 有 关 参 考 文 献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周 良 云 莫 歌 王 升 等 基 于 实 时 荧 光 定 量 )*' 对 镉 处 理 下 黄 花 蒿 内 参 基 因 稳 定 性 的 分 析. 中 国 中 药 杂 志 0 8+ 9

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