5血细胞分析

城 乡 对 口 支 援 临 床 检 验 技 术 标 准 制 定 及 培 训 Program of Urban and Rural Counterpart Support on Clinical Laboratory Technology Standard Development and Training 血 细 胞 分 析 仪 的 应 用 及 形 态 学 复 检 安 徽 医 科 大 学 第 一 附 属 医 院 司 力

内 容 v 血 细 胞 分 析 仪 原 理 常 见 误 差 因 素 性 能 验 证 v 形 态 学 复 检 复 检 规 则 结 合 病 例 分 析 外 周 血 细 胞 形 态 学 改 变

1 库 尔 特 原 理 电 阻 抗 法 三 分 群 血 细 胞 分 析 仪 的 主 要 检 测 原 理 五 分 类 血 细 胞 分 析 仪 的 基 础 检 测 原 理 华 莱 士. 库 尔 特 约 瑟 夫. 库 尔 特 3 3

库 尔 特 原 理 电 阻 抗 法 v 电 阻 抗 法 即 库 尔 特 原 理 ( 图 1) 电 阻 抗 法 是 三 分 群 血 液 分 析 仪 的 核 心 技 术, 可 准 确 测 出 细 胞 ( 或 类 似 颗 粒 ) 的 大 小 和 数 量 v 电 阻 抗 法 还 与 其 他 检 测 原 理 组 合 应 用 于 五 分 类 血 液 分 析 仪 中 图 1 电 阻 抗 法 细 胞 计 数 原 理

库 尔 特 原 理 电 阻 抗 法 电 阻 抗 法 红 细 胞 计 数 和 血 小 板 计 数 是 在 相 应 通 道 内 进 行 计 数, 并 根 据 二 者 体 积 不 同, 采 用 浮 动 界 标 法 进 行 区 分 ( 图 2) 图 3 电 阻 抗 法 正 常 血 小 板 计 数 和 拟 合 曲 线 直 方 图 图 2 电 阻 抗 法 正 常 红 细 胞 直 方 图 为 提 高 计 数 准 确 性, 部 分 仪 器 还 采 用 3 次 计 数 扫 流 和 拟 合 曲 线 等 技 术 进 行 血 小 板 计 数 ( 图 3) 电 阻 抗 法 还 可 用 于 白 细 胞 计 数 及 白 细 胞 三 分 群 分 析

白 细 胞 计 数 和 分 群 的 注 意 事 项 淋 巴 细 胞 群 单 个 核 细 胞 群 粒 细 胞 群 稀 释 液 和 溶 血 剂 成 分 与 细 胞 体 积 的 变 化 直 接 相 关 测 定 的 白 细 胞 体 积 与 自 然 体 积 无 关 与 细 胞 核 的 大 小 和 胞 浆 颗 粒 的 多 少 有 关 6 6

红 细 胞 计 数 的 注 意 事 项 MCV 含 有 白 细 胞 因 素, 但 可 以 忽 略 红 细 胞 : 白 细 胞 约 为 750:1 病 理 情 况 下 易 产 生 误 差 白 细 胞 增 加 明 显 贫 血 严 重 7

血 小 板 检 测 v 血 小 板 和 红 细 胞 在 同 一 个 系 统 中 检 测 v 血 小 板 通 常 在 2~30fl( 与 仪 器 有 关 ) v 大 于 右 侧 阈 值 者 考 虑 为 红 细 胞

血 红 蛋 白 测 定 的 原 理 分 光 光 度 比 色 v 检 测 物 质 为 血 红 蛋 白 衍 生 物 氰 化 血 红 蛋 白 含 有 氰 化 物 月 桂 酰 硫 酸 钠 (SLS) 血 红 蛋 白 不 含 氰 化 物 波 长 555nm v 校 正 仪 器 时 以 氰 化 高 铁 法 为 准 最 大 吸 收 波 长 为 540nm 国 际 血 液 标 准 委 员 会 (ICSH) 推 荐 方 法 8

中 性 粒 细 胞 增 多 WBC LYM% MXD% NEUT% 23.8 x 10 9 /L 8.1% 7.9% 84.0% Stab Seg Lym Mono Eo Baso 8 % 77% 7 % 7 % 1 % 0 % (x 400) 中 性 粒 细 胞 峰 高 面 宽

淋 巴 细 胞 增 多 WBC LYM% MXD% NEUT% 7.9 x 10 9 /L + 64.7% 15.8% 19.5% Stab Seg Lymph Mono Eo Baso Aty-Lym 4 % 20 % 64 % 4 % 5 % 0 % 3 % (x 1000)

单 核 细 胞 增 多 WBC 7.7 x 10 9 /L LYM% F1 * 13.2% MXD% F2 * 37.7% NEUT% 49.1% Stab Seg Lymph Mono Eo Baso Aty-Lym 8 % 37 % 17 % 36 % 1 % 0 % 1 % (x 1000) 中 部 突 起

嗜 酸 性 粒 细 胞 增 多 WBC LYM% MXD% NEUT% 4.3 x 10 9 /L 18.3% + 62.2% 19.5% Stab Seg Lymph Mono Eo Baso My Aty-Lym 1 % 19 % 20 % 9 % 48 % 1 % 1 % 1 % (x 1000) 中 部 突 起

红 细 胞 大 小 不 均 性 贫 血 曲 线 跨 度 大,RDW 明 显 增 高 出 现 大 血 小 板 和 分 布 宽 度 增 加 相 关 的 报 警 提 示 ( 存 在 小 红 细 胞 干 扰 )

均 一 性 大 细 胞 性 贫 血 单 个 核 细 胞 和 中 性 粒 细 胞 波 谷 消 失 ( 有 核 红 细 胞 增 多 所 致 ) 红 细 胞 直 方 图 右 移 提 示 大 细 胞

慢 性 淋 巴 细 胞 性 白 血 病 酷 似 正 常 淋 巴 细 胞 增 多 在 60fL 处 出 现 明 显 尖 峰, 单 个 核 和 中 性 波 谷 消 失 骨 髓 免 疫 分 型 确 诊 为 B 淋 巴 细 胞 白 血 病

慢 性 粒 细 胞 性 白 血 病 白 细 胞 三 分 群 消 失, 出 现 单 一 曲 线, 主 峰 位 于 175fL, 提 示 出 现 大 量 中 性 和 中 性 幼 稚 细 胞, 分 类 没 有 结 果

常 见 报 警 信 息 A L A M A G R1 R2 R4 R3 报 警 提 示 直 方 图 异 常 区 域 原 因 R0 或 R1 淋 巴 细 胞 左 侧 区 域 血 小 板 聚 集 / 巨 大 血 小 板 / 疟 原 虫 / 有 核 红 细 胞 / 不 溶 解 红 细 胞 / 异 常 淋 巴 细 胞 R2 淋 巴 和 单 个 核 细 胞 之 间 异 常 淋 巴 细 胞 / 原 幼 细 胞 / 浆 细 胞 / 嗜 酸 性 粒 细 胞 / 嗜 碱 性 粒 细 胞 R3 单 个 核 和 粒 细 胞 间 未 成 熟 粒 细 胞 / 嗜 酸 性 粒 细 胞 / 异 常 细 胞 R4 粒 细 胞 右 侧 区 域 粒 细 胞 增 多 症 RM 多 区 异 常 以 上 多 种 原 因 引 起

报 警 信 息 的 功 能 v 提 高 血 细 胞 分 类 结 果 的 准 确 性 用 于 筛 选 血 常 规 的 异 常 白 细 胞 分 类 结 果 v 对 于 疑 似 血 液 病 患 者, 无 论 仪 器 是 否 有 报 警 信 号, 均 应 作 涂 片 复 检

2 激 光 散 射 流 式 细 胞 术 检 测 原 理 将 稀 释 染 色 ( 化 学 染 色 或 核 酸 荧 光 染 色 ) 球 形 化 的 细 胞 悬 液 注 入 鞘 液 流 中 央, 单 个 细 胞 沿 着 悬 液 和 鞘 液 流 两 股 液 流 整 齐 排 列, 以 恒 定 流 速 定 向 通 过 石 英 毛 细 管, 即 流 体 动 力 学 聚 焦 技 术 ( 图 4) 主 要 用 于 五 分 类 血 液 分 析 仪 白 细 胞 计 数 和 分 类 计 数 图 4 双 鞘 流 技 术

激 光 散 射 流 式 细 胞 术 检 测 原 理 当 细 胞 ( 或 颗 粒 ) 通 过 激 光 束 被 照 射 时, 因 其 本 身 的 特 性 ( 如 体 积 染 色 程 度 细 胞 内 容 物 大 小 及 含 量 细 胞 核 密 度 等 ), 可 阻 挡 或 改 变 激 光 束 的 方 向, 产 生 与 其 特 征 相 应 的 各 种 角 度 的 散 射 光 放 置 在 石 英 毛 细 管 周 围 不 同 角 度 的 信 号 检 测 器 ( 光 电 倍 增 管 ) 可 接 收 特 征 各 异 的 散 射 光 ( 图 5) 图 5 流 式 细 胞 术 检 测 通 道 和 光 路 系 统

五 分 类 血 细 胞 分 析 仪 检 测 原 理 vvcs 技 术 v 电 阻 抗 射 频 流 式 细 胞 术 和 核 酸 荧 光 染 色 方 法 v 钨 光 源 散 射 与 细 胞 化 学 方 法 v 多 角 度 偏 振 光 散 射 方 法 v 双 鞘 流 技 术 和 细 胞 化 学 染 色 方 法

1.VCS 技 术 在 白 细 胞 检 测 通 道, 红 细 胞 被 溶 解, 白 细 胞 接 近 自 然 状 态 应 用 VCS 技 术 检 测 白 细 胞 大 小 结 构 特 点 等 ( 表 1 表 2), 并 形 成 三 维 散 点 图 ( 图 6, 图 7) VCS 技 术 检 测 病 理 性 异 常 细 胞 的 散 点 图 位 置 见 图 8 表 1 VCS 技 术 及 其 检 测 内 容

VCS 技 术 表 2 VCS 技 术 下 各 类 白 细 胞 群 的 特 征

VCS 技 术 图 6 体 积 (V) 电 导 (C) 和 光 散 射 (S) 法 图 7 VCS 细 胞 检 测 立 体 散 点 图 图 8 VCS 异 常 细 胞 检 测 平 面 散 点 图 位 置

VCS 技 术 目 前, 该 技 术 也 可 用 于 网 织 红 细 胞 计 数 ( 图 9) 和 有 核 红 细 胞 的 计 数 如 网 织 红 细 胞 计 数 时, 采 用 透 明 剂 使 红 细 胞 内 血 红 蛋 白 溢 出 形 成 影 细 胞, 再 用 新 亚 甲 蓝 对 网 织 红 细 胞 RNA 进 行 染 色, 采 用 VCS 技 术 测 定 和 分 析 网 织 红 细 胞 图 9 VCS 原 理 新 亚 甲 蓝 染 色 网 织 红 细 胞 散 点 图

2.. 电 阻 抗 射 频 流 式 细 胞 术 和 核 酸 荧 光 染 色 方 法 (1)4DIFF 通 道 : 利 用 半 导 体 激 光 流 式 细 胞 术 核 酸 荧 光 染 色 技 术, 采 用 溶 血 剂 完 全 溶 解 红 细 胞 和 血 小 板, 白 细 胞 膜 仅 部 分 溶 解 聚 亚 甲 基 蓝 核 酸 荧 光 染 料 进 入 白 细 胞 内, 使 DNA RNA 和 细 胞 器 着 色 因 为 荧 光 强 度 与 细 胞 内 核 酸 含 量 成 比 例, 所 以 未 成 熟 粒 细 胞 异 常 细 胞 荧 光 染 色 深, 成 熟 白 细 胞 荧 光 染 色 浅, 从 而 得 到 4DIFF 白 细 胞 散 点 图 ( 图 10) 图 10 白 细 胞 分 类 4DIFF 散 点 图

电 阻 抗 射 频 流 式 细 胞 术 和 核 酸 荧 光 染 色 方 法 (2)WBC/BASO 通 道 : 在 碱 性 溶 血 剂 作 用 下, 除 嗜 碱 性 粒 细 胞 外 的 其 他 所 有 细 胞 均 被 溶 解 或 萎 缩, 经 流 式 细 胞 术 计 数, 可 得 到 WBC/ 嗜 碱 性 粒 细 胞 百 分 率 和 绝 对 值 及 WBC/BASO 散 点 图 ( 图 11) 图 11 白 细 胞 分 类 WBC/BASO 散 点 图

电 阻 抗 射 频 流 式 细 胞 术 和 核 酸 荧 光 染 色 方 法 (3) 未 成 熟 髓 细 胞 信 息 通 道 : 采 用 射 频 电 阻 抗 和 特 殊 试 剂 结 合 法 在 细 胞 悬 液 中 加 硫 化 氨 基 酸, 幼 稚 细 胞 膜 脂 质 含 量 高, 结 合 硫 化 氨 基 酸 的 量 多 于 较 成 熟 的 细 胞, 对 溶 血 剂 有 抵 抗 作 用 加 入 溶 血 剂 后, 成 熟 细 胞 被 溶 解, 只 留 下 幼 稚 细 胞 和 异 型 / 异 常 淋 巴 细 胞 ( 图 12), 报 告 百 分 率 和 绝 对 值, 并 提 示 核 左 移 图 12 未 成 熟 粒 细 胞 信 息 通 道 散 点 图

3. 钨 光 源 散 射 与 细 胞 化 学 方 法 (1)) 过 氧 化 物 酶 染 色 通 道 : 在 白 细 胞 通 道 加 入 溶 血 剂 和 POX 染 色 剂, 可 计 算 MPXI,, 得 到 嗜 酸 性 粒 细 胞 中 性 粒 细 胞 或 单 核 细 胞 的 相 对 POX 活 性 形 成 以 POX 分 布 强 度 为 X 轴 以 细 胞 体 积 为 Y 轴 的 散 点 图 ( 图 13), 进 行 白 细 胞 计 数 与 分 类 图 13 白 细 胞 (N L M E)POX 染 色 散 点 图

钨 光 源 散 射 与 细 胞 化 学 方 法 (2) 嗜 碱 性 粒 细 胞 / 核 分 叶 性 通 道 : 苯 二 酸 完 全 破 坏 红 细 胞 和 血 小 板 ; 除 嗜 碱 性 粒 细 胞 外, 其 他 白 细 胞 膜 溶 解, 胞 质 溢 出, 仅 剩 裸 核 完 整 的 嗜 碱 性 粒 细 胞 呈 高 角 度 散 射, 位 于 散 点 图 上 部 ; 裸 核 则 位 于 下 部, 可 进 行 白 细 胞 计 数 和 嗜 碱 性 粒 细 胞 计 数 根 据 不 同 细 胞 的 裸 核 结 构 进 行 白 细 胞 分 类 计 数 ( 图 14) 图 14 嗜 碱 性 粒 细 胞 核 分 叶 性 散 点 图

钨 光 源 散 射 与 细 胞 化 学 方 法 根 据 多 分 叶 核 (PMN) 和 单 个 核 (MN) 的 比 例, 可 计 算 出 核 左 移 指 数 (LI) LI 越 高, 说 明 核 左 移 程 度 越 大 目 前 该 技 术 也 可 用 于 有 核 红 细 胞 的 计 数 ( 图 15) 图 15 嗜 碱 性 粒 细 胞 染 色 / 分 叶 核 细 胞 通 道 有 核 红 细 胞 散 点 图

钨 光 源 散 射 与 细 胞 化 学 方 法 (3)) 未 染 色 大 细 胞 计 数 (LUC( LUC) ) 检 测 : 在 POX 通 道, 可 检 测 到 无 POX 活 性 体 积 大 于 正 常 淋 巴 细 胞 体 积 平 均 值 2 个 标 准 差 的 细 胞, 如 异 型 淋 巴 细 胞 浆 细 胞 毛 细 胞 幼 稚 淋 巴 细 胞 和 原 始 细 胞

4. 多 角 度 偏 振 光 散 射 方 法 多 角 度 偏 振 光 散 射 法 (MAPSS) 应 用 ( 氦 氖 ) 激 光 流 式 细 胞 术, 分 4 个 角 度 ( 图 16) 检 测 细 胞 ( 表 3 图 17 图 18 图 19) 嗜 酸 性 粒 细 胞 颗 粒 丰 富, 可 消 除 偏 振 光, 以 此 与 中 性 粒 细 胞 相 鉴 别 表 3 多 角 度 偏 振 光 散 射 方 法 的 检 测 内 容

多 角 度 偏 振 光 散 射 方 法 图 16 多 角 度 偏 振 光 散 射 法 模 式 图 图 17 0 前 向 散 射 光,7 侧 向 散 射 光

多 角 度 偏 振 光 散 射 方 法 图 18 90 垂 直 角 度 散 射 光 ( 偏 振 光 ) 图 19 90 垂 直 角 度 消 偏 振 散 射 光 ( 去 偏 振 光 ),90 垂 直 角 度 散 射 光 ( 偏 振 光 )

5.. 双 鞘 流 技 术 和 细 胞 化 学 染 色 方 法 (1) 嗜 碱 性 粒 细 胞 通 道 : 专 用 染 液 染 色, 嗜 碱 性 粒 细 胞 具 有 抗 酸 性, 染 色 后 保 持 原 有 形 态 与 结 构, 而 其 他 细 胞 的 胞 质 溢 出, 成 为 裸 核 采 用 电 阻 抗 法 检 测, 所 得 结 果 与 白 细 胞 / 血 红 蛋 白 通 道 的 白 细 胞 ( 鞘 流 阻 抗 法 ) 结 果 进 行 比 较 ( 图 20) 图 20 嗜 碱 性 粒 细 胞 计 数 直 方 图

双 鞘 流 技 术 和 细 胞 化 学 染 色 方 法 (2) 其 他 白 细 胞 分 类 通 道 : 检 测 除 嗜 碱 性 粒 细 胞 以 外 的 各 类 白 细 胞 结 合 了 钨 光 源 流 式 细 胞 光 吸 收 化 学 染 色 和 电 阻 抗 法 ( 图 21) 图 21 白 细 胞 分 类 计 数 散 点 图 图 22 双 鞘 流 图 DHSS 采 用 2 个 鞘 流 装 置 分 析 细 胞 内 部 结 构 ( 图 22) 双 矩 阵 LIC 散 点 图 可 将 幼 稚 细 胞 分 为 3 个 亚 群 ( 图 23)

双 鞘 流 技 术 和 细 胞 化 学 染 色 方 法 图 23 双 矩 阵 巨 大 未 成 熟 细 胞 (LIC) 散 点 图 (IMG: 未 成 熟 粒 细 胞,IMM: 未 成 熟 单 核 细 胞,IML: 未 成 熟 淋 巴 细 胞 )

如 何 保 证 结 果 的 准 确 性? v 排 除 病 理 性 误 差 干 扰 因 素 v 形 态 学 复 检 v 试 剂 的 合 理 使 用 v 仪 器 的 规 范 使 用 v 质 量 管 理

血 液 分 析 仪 常 见 报 警 信 息 来 源 v 主 要 包 括 : 检 测 结 果 超 出 实 验 室 设 定 的 检 测 项 目 参 考 区 间 处 于 要 求 复 查 的 状 态 临 床 病 理 标 本 标 本 异 常 干 扰 人 群 变 异 v 应 高 度 重 视 标 本 异 常 干 扰 引 起 的 报 警 ( 表 4)

表 4 引 起 报 警 的 异 常 标 本 因 素

常 见 误 差 因 素 分 析 v 假 性 血 小 板 减 少 或 增 多 v 假 性 红 细 胞 减 少 或 增 多 v 假 性 白 细 胞 减 少 或 增 多

血 小 板 计 数 的 干 扰 因 素 v 假 性 血 小 板 减 少 样 品 采 集 环 节 中 的 血 小 板 聚 集 EDTA 诱 导 的 血 小 板 聚 集 血 小 板 卫 星 现 象 巨 大 血 小 板 v 假 性 血 小 板 增 多 红 白 细 胞 碎 片 小 红 细 胞

EDTA 诱 导 的 血 小 板 聚 集 PLT: 51 10 9 /L

EDTA 诱 导 血 小 板 聚 集 v 发 病 率 0.07%~0.11% v 诱 因 健 康 人 自 身 免 疫 病 慢 性 炎 症 病 毒 或 细 菌 感 染 肿 瘤 v 潜 在 的 误 诊 风 险 高 预 防 性 血 小 板 输 血 的 医 学 决 定 水 平 血 小 板 计 数 为 20 10 9 /L 误 诊 为 ITP 或 TTP

EDTA 诱 导 血 小 板 聚 集 的 发 病 机 制 v 血 小 板 糖 膜 改 变, 血 小 板 膜 内 隐 匿 性 抗 原 暴 露 v 血 浆 中 自 身 抗 体 与 隐 匿 性 抗 原 形 成 复 合 物 v 激 活 细 胞 膜 中 的 磷 酯 酶 v 血 小 板 膜 水 解 并 释 放 血 小 板 活 性 物 质 AA ADP 5-TH 胶 原 凝 血 酶 原 等 v 血 小 板 纤 维 蛋 白 原 受 体 被 活 化 v 血 小 板 与 纤 维 蛋 白 原 受 体 结 合 后 聚 集 成 团 v 出 现 血 小 板 假 性 减 少

EDTA 诱 导 血 小 板 聚 集 的 处 理 方 法 v 光 学 显 微 镜 直 接 镜 检 采 用 血 小 板 稀 释 液 进 行 预 稀 释 瑞 氏 染 色 v 更 换 抗 凝 剂 重 新 抽 血 检 测 枸 橼 酸 钠

巨 大 血 小 板 PLT-I 32 [10^9/L] PLT-O 54 [10^9/L]

巨 大 血 小 板 的 处 理 办 法 v 五 分 类 血 细 胞 分 析 仪 光 学 法 血 小 板 计 数 v 人 工 计 数 形 态 学 确 认 同 血 小 板 聚 集

红 白 细 胞 碎 片 对 血 小 板 干 扰 PLT-O 6 [10^9/L] PLT-I 16 [10^9/L]

红 白 细 胞 碎 片 产 生 的 原 因 v 红 细 胞 碎 片 弥 散 性 血 管 内 凝 血 微 血 管 病 性 溶 血 性 贫 血 心 源 性 溶 血 性 贫 血 其 它 化 学 中 毒 肾 功 能 衰 竭 血 栓 性 血 小 板 减 少 性 紫 癜 和 化 疗 v 白 细 胞 碎 片 AML 淋 巴 瘤 严 重 感 染 化 疗

红 细 胞 计 数 的 干 扰 因 素 v 红 细 胞 冷 凝 集 所 致 假 性 红 细 胞 减 少 v 巨 大 血 小 板 所 致 假 性 红 细 胞 增 多

红 细 胞 凝 集 RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW 2.23 144 0.249 111.7 64.6 578 0.254 10 12 /L g/l fl pg g/l 处 理 方 法 : 1. 加 温 至 37 O C 2. 离 心 洗 涤 红 细 胞 ( 用 等 量 稀 释 液 置 换 血 浆 或 上 清 液 )

红 细 胞 冷 凝 集 所 致 假 性 红 细 胞 减 少 v 冷 凝 集 素 综 合 症 在 31 以 下 自 身 红 细 胞 抗 原 发 生 可 逆 性 凝 集 v 病 因 白 血 病 恶 性 淋 巴 瘤 或 全 身 性 红 斑 狼 疮 肺 炎 支 原 体 属 感 染 传 染 性 单 核 细 胞 增 多 症 血 吸 虫 病 丝 虫 病 疟 疾 肝 硬 化 非 典 型 性 肺 炎

白 细 胞 计 数 的 干 扰 因 素 v 白 细 胞 聚 集 所 致 假 性 白 细 胞 减 少 v 红 细 胞 溶 血 不 良 所 致 假 性 白 细 胞 增 多 v 有 核 红 细 胞 所 致 假 性 白 细 胞 增 多

红 细 胞 溶 血 不 良 处 理 方 法 : 形 态 学 镜 检

红 细 胞 溶 血 不 良 的 病 因 和 发 病 机 制 v 发 病 机 制 脂 类 代 谢 异 常 红 细 胞 膜 表 面 与 外 周 血 脂 类 结 合 形 成 脂 质 颗 粒 保 护 膜 红 细 胞 膜 表 面 结 构 异 常 v 病 因 正 常 浓 度 的 溶 血 素 无 法 破 坏 红 细 胞 膜 表 面 肝 功 能 低 下 ( 肝 硬 化 肝 癌 晚 期 胆 道 堵 塞 ) 高 脂 血 症 高 胆 固 醇 制 剂 输 液 治 疗 过 程 中 异 常 血 红 蛋 白 症 (Hgb-S 症 Hgb Hgb-C 症 )

有 核 红 细 胞 对 白 细 胞 检 测 的 干 扰 WBC: 56.1X10 9 /L

有 核 红 细 胞 增 多 的 原 因 v 血 液 学 疾 病 : 急 性 髓 细 胞 白 血 病 急 性 红 白 血 病 急 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 慢 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 多 发 性 骨 髓 瘤 骨 髓 增 生 异 常 综 合 征 恶 性 淋 巴 瘤 骨 髓 转 移 癌 骨 髓 纤 维 化 原 发 性 血 小 板 增 多 症 血 液 非 肿 瘤 性 疾 病 u 缺 铁 性 贫 血 u 巨 幼 细 胞 贫 血 u 溶 血 性 贫 血 u 增 生 性 贫 血 u 再 生 障 碍 性 贫 血 u 原 发 性 血 小 板 减 少 性 紫 癜 感 染 性 疾 病 原 发 性 脾 亢

排 除 NRBC 对 白 细 胞 检 测 的 干 扰 v 形 态 学 镜 检 v 高 端 仪 器

如 何 保 证 结 果 的 准 确 性? v 排 除 病 理 性 误 差 干 扰 因 素 v 形 态 学 复 检 v 试 剂 的 合 理 使 用 ( 直 接 影 响 脉 冲 大 小 ) v 仪 器 的 规 范 使 用 v 质 量 管 理

如 何 制 定 形 态 学 复 检 规 则 ( 一 ) v 以 国 际 实 验 血 液 学 发 表 的 41 条 规 则 为 依 据 Lab Hematol 2005,11:83 中 华 检 验 医 学 杂 志 2008, 31: 752 v 复 检 的 绝 对 条 件 报 警 提 示 未 成 熟 细 胞 原 始 细 胞 有 核 红 细 胞 仪 器 分 群 结 果 异 常 确 诊 为 或 疑 似 血 液 恶 性 肿 瘤 者 v 复 检 的 可 调 节 条 件 血 细 胞 计 数 超 出 参 考 范 围

表 5 血 液 分 析 仪 检 测 结 果 的 显 微 镜 复 查 规 则 ( 全 血 细 胞 计 数 )

表 6 血 液 分 析 仪 检 测 结 果 的 显 微 镜 复 查 规 则 ( 白 细 胞 分 类 和 网 织 红 细 胞 )

24~41 条 为 可 疑 报 警

如 何 制 定 形 态 学 复 检 规 则 ( 二 ) v 涂 片 镜 检 阳 性 判 断 标 准 国 际 血 液 学 复 检 专 家 组 Lab Hematol 2005,11:83 中 国 血 液 学 复 检 专 家 组 中 华 检 验 医 学 杂 志 2008, 31: 752 v 涂 片 镜 检 要 求 由 2 名 人 员 进 行 双 盲 检 测 计 数 结 果 均 值 形 态 结 果 任 何 1 名 人 员 发 现 阳 性 即 判 断 为 镜 检 阳 性 v 统 计 学 分 析

如 何 制 定 形 态 学 复 检 规 则 ( 三 ) 阳 性 率 假 阳 性 率 阴 性 率 假 阴 性 率 符 合 率 复 检 率 14.23% 23.71% 59.61% 2.45% 73.83% 37.94% 1 首 先 参 考 41 条 规 则 2 降 低 复 检 率 从 降 低 假 阳 性 率 入 手 不 能 单 纯 追 求 复 检 率 降 低 3 控 制 漏 诊 率 在 临 床 可 接 受 水 平 (<5%) 防 止 降 低 假 阳 性 率 导 致 的 假 阴 性 率 即 漏 诊 率 升 高 4 不 能 改 变 复 检 的 绝 对 条 件

病 例 1 v 女,11 岁 / 以 急 性 支 气 管 哮 喘 就 诊 v 血 常 规 :WBC:12.5 10 9 /L; Hgb:12.4 g/dl; PLT: 211 10 9 /L

病 例 1 v 女,11 岁 / 以 急 性 支 气 管 哮 喘 就 诊 v 血 常 规 :WBC:12.5 10 9 /L; Hgb:12.4 g/dl; PLT: 211 10 9 /L

病 例 1

病 例 1

病 例 2 v 男,74 v 骨 髓 异 常 增 生 综 合 征 10 余 年 v 血 常 规 : WBC :5.2 x 10 9 /L; RBC:2.63 x 10 12 /L; Hgb :8.8 g/dl; Hct:27%; MCV :101.8 fl; MCH:33.5 pg; MCHC:32.9 g/dl; PLT:39 x 10 9 /L.

病 例 2

病 例 2

病 例 2

病 例 2

病 例 2

病 例 3 v 男, 39 v 以 发 热 寒 战 咳 嗽 头 痛 食 欲 不 振 就 诊 v 近 一 个 月 非 洲 旅 游 归 来 v 血 常 规 : WBC:5.0 x 10 9 /L; Hgb:12.6 g/dl; HCT:37.8 %; MCV:76.2 fl.

病 例 3

病 例 3

病 例 3

病 例 4 v 女 17 v 以 鼻 衄 不 止 就 诊 v 血 常 规 WBC: 58.2 x 10 9 /L; Hgb: 6.6 g/dl; PLT:6.6 x 10 9 /L; Fbg: 63 mg/l; PT 延 长 D-dimer 明 显 增 高

病 例 4

病 例 4

病 例 4

如 何 保 证 结 果 的 准 确 性? v 排 除 病 理 性 误 差 干 扰 因 素 v 形 态 学 复 检 v 试 剂 的 合 理 使 用 ( 直 接 影 响 脉 冲 大 小 ) 尽 可 能 使 用 配 套 试 剂 v 仪 器 的 规 范 使 用 避 免 堵 孔 v 质 量 管 理

仪 器 的 规 范 使 用 堵 孔 原 因 预 防 方 法 避 免 堵 孔 v 采 血 时 混 入 纤 维 丝 v 采 血 不 畅 有 小 凝 块 v 蛋 白 沉 淀 未 及 时 清 洗 v 标 本 未 加 盖 落 入 灰 尘 不 用 棉 花 球 擦 拭 确 保 采 血 顺 利 及 时 清 洗 仪 器 注 意 工 作 环 境 / 样 本 加 盖 v 水 分 蒸 发 形 成 结 晶 去 除 结 晶 88

堵 孔 的 处 理 办 法 v 仪 器 自 带 方 法 v 专 用 清 洗 液 清 洗 或 浸 泡 v 用 特 制 软 毛 刷 刷 孔

如 何 保 证 结 果 的 准 确 性? v 排 除 病 理 性 误 差 干 扰 因 素 v 形 态 学 复 检 v 试 剂 的 合 理 使 用 v 仪 器 的 规 范 使 用 v 质 量 管 理 室 内 质 控 室 间 质 评 校 准 仪 器 性 能 验 证 比 对

性 能 验 证 内 容 v 精 密 度 v 携 带 污 染 率 v 线 性 范 围 v 可 比 性 v 白 细 胞 分 类 的 鉴 定

精 密 度 v 实 验 方 案 根 据 NCCLS EP15-A 文 件 取 低 中 高 三 个 水 平 的 新 鲜 血, 连 续 重 复 测 定 11 次, 弃 掉 第 1 次 结 果 采 用 后 面 10 个 结 果 计 算 CV,SD v 要 求 CV 符 合 卫 生 部 临 检 中 心 规 定 参 数 WBC RBC HGB HCT MCV PLT 判 定 标 准 CV 3.00% 1.50% 1.50% 1.50% 1.50% 4.00%

精 密 度 实 例 分 析 参 数 WBC RBC HGB HCT MCV PLT 单 位 ⅹ10 9 /L 10 12 /L g/l L/L fl ⅹ10 9 /L 1 3.80 3.11 86 31.2 67.8 135 2 3.82 3.08 86 31.3 67.3 127 3 3.77 3.11 86 30.8 67.2 129 4 3.87 3.08 87 31.1 66.9 129 5 3.94 3.07 86 30.9 66.7 130 6 3.84 3.10 87 31.0 66.7 130 7 3.69 3.13 87 31.0 66.5 133 8 3.94 3.13 88 30.9 66.5 129 9 3.91 3.15 88 31.0 66.2 130 10 3.85 3.16 88 31.2 66.1 135 MEAN 3.84 3.11 86.9 31.0 66.8 130.7 SD 0.078 0.030 0.876 0.158 0.524 2.710 CV 2.04% 0.98% 1.01% 0.51% 0.78% 2.07% 标 准 CV 3.0% 1.5% 1.5% 1.5% 1.5% 4.0% 结 论 合 格 合 格 合 格 合 格 合 格 合 格 不 合 格 考 虑 血 量 是 否 充 足 混 匀 标 本 是 否 新 鲜 合 格 试 剂 和 仪 器 是 否 稳 定

携 带 污 染 率 v 实 验 方 案 取 高 浓 度 血 液 样 本, 混 合 均 匀 后 连 续 测 定 三 次, 测 定 值 分 别 为 H1 H2 H3 再 取 低 浓 度 血 液 样 本, 连 续 测 定 3 次, 测 定 值 分 别 为 L1 L2 L3 按 公 式 计 算 携 带 污 染 率 携 带 污 染 率 = (L1-L3)/(H3-L3) 100% v 要 求 CV 符 合 卫 生 部 临 检 中 心 规 定 参 数 WBC RBC HGB HCT PLT 要 求 1.0% 1.0% 1.0% 1.0% 1.0%

携 带 污 染 率 实 例 分 析 试 验 材 料 新 鲜 血 参 数 WBC RBC HGB HCT PLT 单 位 ⅹ10 9 /L ⅹ10 12 /L g/l L/L ⅹ10 9 /L H1 16.26 5.35 174 49.6 499 H2 16.57 5.31 174 49.3 506 H3 15.97 5.36 174 49.7 503 L1 2.83 2.29 57 17.5 58 L2 2.96 2.31 57 17.7 62 L3 2.92 2.29 57 17.5 62 携 带 污 染 率 -0.67% 0.00% 0.00% 0.00% -0.91% 要 求 1.0% 1.0% 1.0% 1.0% 1.0% 结 论 合 格 合 格 合 格 合 格 合 格 不 合 格 在 排 除 上 述 影 响 因 素 后, 考 虑 仪 器 本 身 问 题 可 能 性 大

线 性 范 围 v 实 验 方 案 选 取 一 份 接 近 预 期 上 限 的 高 值 全 血 样 本 (H)( 分 别 按 100% 80% 80% 60% 60% 40% 40% 20% 的 比 例 进 行 稀 释, 每 个 稀 释 度 重 复 测 定 3 次, 计 算 均 值 将 实 测 值 与 理 论 值 作 比 较 ( 偏 离 应 小 于 10%), 计 算 y=ax+b ax+b,, 验 证 线 性 范 围 v 要 求 a 值 在 值 在 1±0.05 范 围 内 相 关 系 数 r 0.975

线 性 范 围 实 例 分 析 稀 释 度 第 一 次 第 二 次 第 三 次 均 值 理 论 值 20% 7.47 7.35 7.21 7.34 7.51 40% 14.64 14.66 14.43 14.58 15.03 60% 21.93 21.58 21.95 21.82 22.54 80% 29.29 29.64 29.41 29.45 30.05 100% 37.97 37.66 37.07 37.57 37.57 a 1.0024 r 0.9997

线 性 范 围 实 例 分 析 参 数 单 位 线 性 范 围 a r WBC 10 9 /L 37.57 1.0024 0.9997 RBC 10 12 /L 7.38 1.0014 0.9999 HGB g/l 239 1.0168 0.9997 HCT % 66.80 0.9925 0.9998 PLT 10 9 /L 671.00 0.9868 0.9997 如 不 合 格 首 先 考 虑 稀 释 因 素 : 加 样 器 是 否 准 确 ; 人 为 因 素 : 采 用 仪 器 自 带 稀 释 液, 不 用 生 理 盐 水 ; 标 本 因 素 : 是 否 混 匀 稀 释 后 需 立 即 检 测, 不 宜 放 置 过 久

可 比 性 v 实 验 方 案 选 取 20 份 标 本 标 本 量 要 足 够 涵 盖 WBC RBC RBC HGB HCT MCV PLT 低, 中, 高 水 平 值 每 份 标 本 在 每 台 仪 器 上 测 定 2 次, 取 均 值 分 别 在 参 考 仪 器 和 比 对 仪 器 上 按 照 常 规 方 法 进 行 测 试, 其 结 果 进 行 比 对

可 比 性 v 比 对 标 准 同 项 目 的 1/2CLIA 88 水 平 测 定 仪 器 参 数 的 测 定 值 与 参 考 仪 器 参 数 的 测 定 值 相 差 的 百 分 数 ( 不 计 正 负 号 ) 即 偏 差 计 算 公 式 ( 测 定 值 - 参 考 仪 器 测 定 值 )/ 参 考 仪 器 测 定 值 *100% v 判 定 标 准 参 数 WBC RBC HGB HCT PLT 判 定 标 准 CV 7.50% 3.00% 3.50% 3.00% 25.00%

白 细 胞 分 类 的 鉴 定 v 实 验 方 案 选 取 20 份 标 本 标 本 量 要 足 够 仪 器 检 测 每 份 标 本 测 定 2 次, 取 均 值 涵 盖 中 性 粒 细 胞 淋 巴 细 胞 单 核 细 胞 嗜 酸 性 粒 细 胞 嗜 碱 性 粒 细 胞 绝 对 值 的 低, 中, 高 水 平 值 记 录 相 应 报 警 信 息 人 工 镜 检 每 份 标 本 涂 2 张 血 片, 计 数 200 个 白 细 胞 / 张 计 数 结 果 取 均 值 形 态 异 常 者 注 明 不 成 熟 或 原 始 细 胞 异 常 形 态 细 胞 寄 生 虫

白 细 胞 分 类 的 鉴 定 比 对 标 准 - 同 前 判 定 标 准 - 根 据 NCCLS-H20 文 件

性 能 验 证 和 校 准 的 频 率 v 常 规 检 测 性 能 验 证 至 少 一 年 一 次 校 准 至 少 半 年 一 次 可 比 性 3 个 月 一 次 v 血 液 分 析 仪 在 投 入 使 用 前 v 更 换 重 要 部 件 进 行 维 修 后 v 查 找 室 内 质 控 或 室 间 质 评 失 控 的 原 因

合 格 血 常 规 检 测 标 本 的 要 求

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