国 际 口 腔 医 学 杂 志 第 40 卷 5 期 2013 年 9 月 573 发 生 发 展 密 切 相 关, 其 中 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 是 目 前 公 认 的 主 要 牙 周 可 疑 致 病 菌 之 一, 其 显 著 的 毒 力 或 致 病 性 可 通 过 多 种 机 制 引 发

572 国际口腔医学杂志 第 40 卷 5 期 2013 年 9 月 大鼠慢性牙周炎模型中牙龈卟啉单胞菌的检测 林牧 任秀云 常乐 岳姿洁 石学雪 孙丽莉 山西医科大学口腔医院牙周科 太原 030001 [摘要] 目的 检测慢性牙周炎模型大鼠颈总动脉血管组织中牙龈卟啉单胞菌的含量 探讨其与慢性牙周炎相关的 可能机制 方法 将42只SD大鼠平分为6组 每组7只 A组 正常对照组 不施加任何干预措施 B1~B5组为实验 组 按照同一建模形式建成牙周炎的动物模型 再按照不同的牙周干预措施具体分组 B1组 不施加干预措施 B2组 施加机械治疗干预 B3组 行全身药物治疗 B4组 对患牙施加拔除措施 B5组 拔除患牙后应用抗生素 3 d 实验结束后处死动物 分别截取各组大鼠右侧颈总动脉分叉处的血管组织 采用16S rrna聚合酶链反应法半 定量检测牙龈卟啉单胞菌的含量 结果 在所有大鼠中 均检出牙龈卟啉单胞菌 B1~B5组牙龈卟啉单胞菌的相 对含量较A组显著升高 差异有统计学意义 P<0.01 B1组的牙龈卟啉单胞菌相对含量最高 显著高于B4 B5 组 差异有统计学意义 P<0.05 与B5组的统计学差异更为明显 P<0.01 结论 牙龈卟啉单胞菌作为牙周 常驻菌可能会入侵并定植于血管内皮细胞 导致相关功能障碍 尽早拔除重度松动的患牙可以更彻底地清除牙龈 卟啉单胞菌 同时于拔牙后加用抗生素能够较为明显地降低牙龈卟啉单胞菌在血管内皮细胞的定植 [关键词] 慢性牙周炎 大鼠 牙龈卟啉单胞菌 血管内皮细胞 [中图分类号] R 781.4 [文献标志码] A [doi] 10.7518/gjkq.2013.05.004 Detection of Porphyromonas gingivalis in SD rats with chronic periodontitis Lin Mu, Ren Xiuyun, Chang Le, Yue Zijie, Shi Xuexue, Sun Lili. (Dept. of Periodontics, Hospital of Stomatology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China) [Abstract] Objective To detect Porphyromonas gingivalis(p.gingivalis) in the carotid artery of rats with chronic periodontitis and to explore the possible relationship between P.gingivalis and chronic periodontitis. Methods Fortytwo SD rats were randomly divided into six groups: Group A(control group), group B1(non-intervention group), group B2(scaling and root planning group), group B3(systemic antibiotics group), group B4(tooth extraction group), and group B5(tooth extraction with antibiotics for 3 d). Each group accepted the corresponding measures and periodontal interventions to establish the animal model. After the death of experimental animals, P.gingivalis was semi-quantitatively detected in the right carotid artery tissue by 16S rrna polymerase chain reaction. Results P.gingivalis was detected in all groups. The relative quantity of P.gingivalis significantly increased in groups B1 to B5 compared with that in group A(P<0.01). The relative quantity of P.gingivalis was the highest in group B1, showing a significant difference with B4 and B5(P<0.05). A statistically significant difference in the relative quantity of P.gingivalis was also found between B1 and B5(P<0.01). Conclusion P.gingivalis is a periodontal resident pathogen that can invade endothelial cells, leading to associative function disorders. In addition, extraction of loose teeth without delay eliminates P.gingivalis. The intake of antibiotics after tooth extraction decreases the adhesion of P.gingivalis to endothelial cells. [Key words] chronic periodontitis rat Porphyromonas gingivalis endothelial cell [收稿日期] 2013-03-15 [修回日期] 2013-05-24 [基金项目] 国家自然科学基金资助项目 31050002 81271144 山西省 自然科学基金资助项目 2010011050-1 山西医科大学科技创新基金资 助项目 01200904 大量流行病学资料 实验研究和临床观察证 明 牙周病是菌斑微生物引起的感染性疾病 菌 斑细菌及其毒性产物是引发牙周病的始动因子 [作者简介] 林牧 1986 女 山西人 硕士 牙菌斑中绝大多数细菌为口腔正常菌群 对宿主 [通讯作者] 任秀云 Tel 0351-4690450 无不良影响 仅少数细菌 25~30种 与牙周病的

国 际 口 腔 医 学 杂 志 第 40 卷 5 期 2013 年 9 月 573 发 生 发 展 密 切 相 关, 其 中 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 是 目 前 公 认 的 主 要 牙 周 可 疑 致 病 菌 之 一, 其 显 著 的 毒 力 或 致 病 性 可 通 过 多 种 机 制 引 发 牙 周 组 织 的 破 坏, 从 而 危 害 人 类 口 腔 健 康, 是 引 起 口 腔 失 牙 的 主 要 原 因 有 统 计 表 明, 因 牙 周 炎 拔 牙 的 患 者 占 [1-3] 33%~44% 近 年 来 大 量 研 究 表 明, 牙 周 病 可 能 是 心 脑 血 管 疾 病 糖 尿 病 呼 吸 系 统 疾 病 和 早 产 低 出 生 体 重 儿 等 的 危 险 因 素 因 此, 研 究 牙 周 炎 的 病 因 及 治 疗 方 法 是 国 内 外 学 者 共 同 关 注 的 热 点 问 题 目 前, 在 牙 周 病 的 微 生 物 检 测 中, 通 常 是 检 测 牙 周 致 病 菌 在 牙 周 袋 内 的 检 出 率, 这 种 方 法 无 法 反 映 牙 周 致 病 菌 数 量 在 不 同 牙 周 状 态 下 的 差 异 所 以, 明 确 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 数 量 与 牙 周 病 发 生 发 展 的 关 系, 并 经 牙 周 治 疗 后, 监 测 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 数 量 的 改 变, 更 有 利 于 牙 周 病 的 诊 断 治 疗 和 预 后 本 研 究 通 过 结 扎 丝 + 涂 菌 的 方 法 构 建 大 鼠 慢 性 牙 周 炎 动 物 模 型, 应 用 16S rrna 聚 合 酶 链 反 应 (polymerase chain reaction,pcr) 法 监 测 模 型 大 鼠 颈 总 动 脉 血 管 组 织 中 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 的 DNA, 并 用 凝 胶 成 像 分 析 系 统 根 据 电 泳 条 带 灰 度 值 半 定 量 检 测 造 模 组 不 同 干 预 治 疗 前 后 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 含 量 的 变 化, 分 析 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 水 平 对 疗 效 的 影 响, 进 一 步 探 讨 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 与 慢 性 牙 周 炎 的 关 系 1 材 料 和 方 法 1.1 主 要 材 料 及 试 剂 清 洁 级 SD 大 鼠 42 只, 雄 性, 体 质 量 200~250 g, 由 北 京 华 阜 康 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 提 供 阿 莫 西 林 胶 囊 ( 哈 药 集 团 制 药 总 厂, 批 号 :A111-200318) 甲 硝 唑 片 ( 亚 宝 药 业 集 团 股 份 有 限 公 司, 批 号 :120105) 细 菌 DNA 提 取 试 剂 盒 (Analytik Jena AG 公 司, 德 国 ) 显 微 外 科 手 术 器 械 ( 上 海 手 术 器 械 厂 生 产 ),CDC 厌 氧 血 琼 脂 板 ( 首 都 医 科 大 学 口 腔 微 生 物 研 究 室 提 供 ),PCR 扩 增 仪 凝 胶 成 像 仪 (Bio-RAD 公 司, 美 国 ),DYY-6C 型 电 泳 仪 ( 北 京 六 一 仪 器 厂 ),PCR 缓 冲 体 系 ( 由 上 海 生 工 生 物 工 程 有 限 公 司 提 供 ) 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 标 准 菌 株 ATCC33277( 首 都 医 科 大 学 口 腔 微 生 物 研 究 室 提 供 ) 及 其 DNA( 上 海 交 通 大 学 医 学 院 附 属 第 九 人 民 医 院 口 腔 微 生 物 研 究 室 提 供 ) 1.2 方 法 1.2.1 细 菌 培 养 及 鉴 定 在 CDC 厌 氧 血 琼 脂 板 上 培 养 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌, 革 兰 染 色 经 85%N 2 10% CO 2 和 5%H 2 培 养 3~5 d, 接 种 于 CDC 培 养 基 2~ 3 d 后 可 达 到 最 佳 密 度, 约 1 10 8 菌 落 形 成 单 位 (colony forming unit,cfu) ml -1 接 种 前 将 培 养 的 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 用 培 养 液 稀 释 至 所 需 密 度 : 约 1 10 6 CFU ml -1 1.2.2 分 组 6 周 龄 SD 大 鼠 适 应 性 喂 养 2 周 后, 随 机 平 分 为 6 组, 分 笼 喂 养, 常 规 饮 食, 每 组 7 只 A 组 : 正 常 对 照 组, 不 施 加 任 何 干 预 措 施 ;B1~B5 组 为 实 验 组, 按 照 同 一 建 模 形 式 建 成 牙 周 炎 的 动 物 模 型, 再 按 照 不 同 的 牙 周 干 预 措 施 具 体 分 组 : B1 组, 不 施 加 干 预 措 施 ;B2 组, 施 加 机 械 治 疗 干 预 ;B3 组, 行 全 身 药 物 治 疗 ;B4 组, 对 患 牙 施 加 拔 除 措 施 ;B5 组, 拔 除 患 牙 后 应 用 抗 生 素 3 d 每 组 均 以 双 侧 上 颌 第 一 二 磨 牙 作 为 实 验 牙 1.2.3 建 立 牙 周 炎 动 物 模 型 腹 腔 注 射 5% 水 合 氯 醛 溶 液 麻 醉, 取 仰 卧 位, 固 定 大 鼠 四 肢 和 头 于 手 术 架 上, 先 用 3-0 丝 线 缠 绕 于 0.20 mm 的 正 畸 结 扎 丝 上, 再 将 结 扎 丝 以 8 字 结 扎 的 形 式 结 扎 于 双 侧 上 颌 第 一 二 磨 牙 牙 颈 部 并 尽 量 置 于 龈 沟 内 然 后 用 接 种 环 在 龈 沟 内 和 结 扎 线 上 涂 布 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 细 菌 悬 液, 浓 度 为 1 10 6 CFU ml -1, 每 3 d 接 种 1 次, 并 检 查 结 扎 情 况, 如 有 断 裂 或 脱 落, 及 时 重 新 结 扎, 连 续 8 周, 普 通 饲 料 喂 养 动 物 造 模 期 间 使 用 Hu-Friedy 牙 周 探 针 每 2 周 检 查 并 记 录 实 验 牙 的 探 诊 深 度 龈 沟 出 血 指 数, 每 次 操 作 由 同 一 人 完 成 实 验 建 模 共 8 周, 建 模 后 大 鼠 口 腔 牙 龈 组 织 出 现 充 血 肿 胀 探 诊 出 血 牙 周 袋 形 成 实 验 牙 松 动 度 逐 渐 增 加, 有 的 甚 至 出 现 牙 龈 糜 烂 溃 疡 等 临 床 牙 周 炎 表 现, 表 明 牙 周 炎 模 型 造 模 成 功, 开 始 牙 周 干 预 1.2.4 牙 周 干 预 B1 组 : 不 施 加 任 何 牙 周 干 预 措 施, 任 其 自 然 发 展 ;B2 组 : 对 4 颗 患 牙 分 2 次 进 行 牙 周 基 础 治 疗 ( 刮 治 + 根 面 平 整 ), 第 一 次 仅 治 疗 位 于 一 个 象 限 的 2 颗 患 牙, 另 一 个 象 限 的 2 颗 患 牙 于 1 周 后 治 疗 ; B 3 组 : 灌 胃 法 给 予 甲 硝 唑 (100 mg kg -1 ), 每 天 1 次, 疗 程 14 d;b4 组 : 第 一 次 拔 除 一 个 象 限 中 的 二 颗 Ⅱ~Ⅲ 度 松 动 的 患 牙, 1 周 后 拔 除 另 一 象 限 的 二 颗 Ⅱ~Ⅲ 度 松 动 的 患 牙, 共 拔 除 4 颗 患 牙, 口 腔 内 剩 余 双 侧 上 颌 2 颗 第 三 磨 牙 B5 组 : 牙 周 干 预 方 法 同 B4 组, 同 时 于 拔 牙 后 采 用 灌 胃 法 给 予 阿 莫 西 林 (200 mg kg -1 )+ 甲 硝 唑

574 国际口腔医学杂志 第 40 卷 5 期 2013 年 9 月 100 mg kg-1 每天1次 疗程共6 d 1.2.5 实验流程 设计引物并运用PCR技术对每份 标本DNA进行扩增 对其扩增产物行琼脂糖凝胶 电泳后 用凝胶成像分析系统根据电泳条带灰度 值半定量检测各组大鼠右侧颈总动脉血管组织中 牙龈卟啉单胞菌含量的变化 1.2.6 样本采集法 所有动物于第二次拔牙后5周 安乐法处死 分离截取长度为1~1.5 cm右侧颈总 动脉及其分叉的一段 放入无菌Eppendorf管中 -80 保存备用 1.2.7 PCR法检测致病菌 本研究所用细菌通用引 物和牙龈卟啉单胞菌标准菌株特异性引物根据细 菌16S rrna基因特异保守区域设计 其特异性引 物序列见表1 上海生工生物工程有限公司合成 表 1 通用引物及牙龈卟啉单胞菌特异性引物序列列表 Tab 1 Primers of general bacteria and Porphyromonas gingivalis for PCR 菌种 通用细菌 牙龈卟啉单胞菌 引物序列 5 3 上游GGTTAAGTCCCGCAACGAGCGC 下游AGGAGGTGATCCAACCGCA 上游TGGGTTTAAAGGGTGCGTAG 下游CAATCGGAGTTCCTCGTGAT 提取细菌DNA 样本在室温下解冻 按照 DNA提取试剂盒说明操作 常规PCR反应体系为 25 μl 具体组成如下 DNA模板5 μl 上下游 引物 10 μmol L-1 各0.5 μl 10 缓冲液 不含 MgCl 2 2.5 μl 2.5 mmol L -1 MgCl 2 2 μl 10 mmol μl -1 脱氧核糖核苷三磷酸0.5 μl Taq DNA聚合酶0.2 μl 5 U μl-1 再用无菌三蒸水 补足总体积至25 μl PCR反应条件 预变性95 5 min 变性94 30 s 退火56 30 s 延伸72 30 s 35个循 环 循环结束后 延伸72 7 min 4 保存 PCR反应产物电泳和结果判定 牙龈卟啉单 胞菌特异性引物扩增后 3 μl PCR产物点样 牙 龈卟啉单胞菌标准菌株做阳性对照 不加任何模 板的反应体系做阴性对照 2%琼脂糖凝胶电泳 电压100 V 电泳30 min 以DNA Marker 2000为 标准对照 紫外检测仪观察扩增条带 将样本出 现的特异性扩增条带与阳性对照条带相对比 以 确定是否存在相应牙周致病菌 PCR质量控制 所有标本的测定均在盲法下 进行 并随机抽取10%的实验标本作重复性实 验 扩增时设置阴性对照和阳性对照 以检测 PCR结果的可靠性 1.2.8 检出量计算 每份标本使用通用引物和牙龈 卟啉单胞菌特异性引物扩增电泳后 发现牙周致 病菌记为阳性 凝胶成像软件计算牙龈卟啉单胞 菌特异性引物与通用引物扩增产物电泳条带灰度 值的比值 据此测定每份标本的相对DNA质量 1.3 统计学方法 用SPSS 13.0统计软件统计分析各组数据 计 扩增片段长度/bp 453 161 量资料以x±s表示 组间比较采用完全随机设计资 料的方差分析 各组间两两比较采用LSD-t检验 以P<0.05为差异有统计学意义 2 结果 2.1 SD大鼠实验牙牙周组织临床表现 建模前各组大鼠上颌实验牙牙周组织正常 未见炎症性改变 建模后发现B1~5组大鼠实验牙 呈典型的慢性牙周炎临床表现 牙颈部结扎处可 见不同程度的食物残渣 软垢 牙石等 牙龈松 软 红肿 探诊深度增加 有明显的牙周袋形 成 探诊易出血 出血指数为3~4 有龈退缩现 象 附着丧失的发生 图1 A 正常对照组 B B1~5组建模后 图 1 大鼠上颌双侧第一 二磨牙牙周组织 Fig 1 Periodontal tissue of rat maxillary bilateral the first and second molar 2.2 PCR扩增的重复性 特异性 牙龈卟啉单胞菌特异性引物扩增后只有牙龈 卟啉单胞菌在161 bp预期片段上出现条带 阴性

国 际 口 腔 医 学 杂 志 第 40 卷 5 期 2013 年 9 月 575 对 照 组 无 可 见 条 带 随 机 抽 取 10% 的 样 本, 同 法 重 复 检 测, 结 果 与 之 前 一 致 2.3 PCR 检 测 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 检 出 率 在 大 鼠 的 42 个 右 侧 颈 总 动 脉 组 织 标 本 中, 所 有 标 本 DNA 均 扩 增 出 预 期 的 条 带, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 的 检 出 率 为 100% 2.4 PCR 半 定 量 结 果 42 个 右 侧 颈 总 动 脉 组 织 标 本 的 电 泳 结 果 表 现 不 同 ( 部 分 电 泳 结 果 见 图 2 3) 各 组 间 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 的 相 对 含 量 经 单 因 素 方 差 分 析, 结 果 显 示 :1)B1~5 组 的 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 相 对 含 量 较 A 组 升 高, 差 异 有 统 计 学 意 义 (P<0.01);2) 在 B1~5 组 的 5 个 牙 周 干 预 处 理 组 中,B1 组 的 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 相 对 含 量 最 高, 显 著 高 于 B4 B5 组, 其 差 异 有 统 计 学 意 义 (P< 0.05), 而 且 在 这 两 组 中 间,B5 组 的 差 异 更 为 明 显 (P<0.01) 1:A 组 ;2~6:B1~5 组 ;7: 阴 性 对 照 ;8: 通 用 引 物 阳 性 对 照 ;M:DNA Marker 2000 图 2 通 用 引 物 对 部 分 样 本 PCR 扩 增 产 物 电 泳 图 Fig 2 Agarose gel electrophoresis of PCR results of amplification with 16S rrna primer 1:A 组 ;2~6:B1~5 组 ;7: 阴 性 对 照 ;8: 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 阳 性 对 照 ;M:DNA Marker 2000 图 3 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 特 异 性 引 物 对 部 分 样 本 PCR 扩 增 产 物 电 泳 图 Fig 3 Agarose gel electrophoresis of PCR results of amplification with Porphyromonas gingivalis primer 3 讨 论 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 是 口 腔 中 一 种 常 见 的 牙 周 专 性 厌 氧 菌, 其 在 龈 下 的 定 植 与 牙 周 炎 的 发 生 发 展 密 切 相 关 微 生 物 检 测 技 术 不 断 发 展, 使 得 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 检 测 成 为 临 床 诊 断 和 治 疗 牙 周 病 不 可 或 缺 的 辅 助 性 手 段 目 前, 细 菌 厌 氧 培 养 法 耗 时 耗 力, 缺 乏 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 的 选 择 性 培 养 基, 而 且 培 养 好 的 细 菌 需 经 过 烦 琐 的 生 化 实 验 鉴 定, 现 有 的 培 养 技 术 不 适 合 该 菌 大 量 培 养 本 研 究 采 用 16S rrna PCR 方 法, 操 作 简 单, 反 应 迅 速, 特 异 性 强, 灵 敏 度 高 等 优 点, 具 备 一 定 优 势, 对 于 厌 氧 菌 的 培 养 可 以 避 免 假 阴 性 结 果 近 几 年 来, 该 方 法 更 多 的 用 于 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 等 牙 周 致 病 菌 的 [4-6] 检 测 本 研 究 根 据 以 往 的 经 验 方 法, 成 功 建 立 了 慢 性 牙 周 炎 的 动 物 模 型, 由 于 临 床 上 这 种 病 变 是 多 因 素 影 响 的 慢 性 进 展 性 疾 病, 因 此, 本 研 究 建 立 动 物 实 验 模 型 能 够 更 好 地 排 除 其 他 因 素 的 干 扰 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 在 龈 下 的 感 染 和 定 植 可 导 致 牙 周 局 部 组 织 炎 症, 会 造 成 牙 周 软 组 织 的 肿 胀 出 血 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 甚 至 可 透 过 牙 龈 溃 疡 面 随 [7] 机 体 血 液 循 环 引 起 反 复 的 无 症 状 菌 血 症, 并 定 植 于 血 管 内 皮 细 胞, 引 起 血 管 组 织 慢 性 炎 症, 继 而 对 心 血 管 系 统 产 生 不 良 影 响, 即 使 日 常 的 咀 嚼 刷 牙 也 会 引 起 一 过 性 的 菌 血 症 发 生 不 同 报 道 中 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 检 出 量 不 尽 相 同, 有 报 道 其 检 出 [8] 率 为 78%~100%, 王 者 玲 等 检 测 了 慢 性 牙 周 炎 活 动 位 点 后 发 现, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 的 检 出 率 为 86%; [9] 而 Ford 等 采 用 实 时 PCR 检 测 患 者 颈 动 脉 时 发 现, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 检 出 率 为 100%, 远 高 于 其 他 类 似 研 究 本 研 究 对 颈 总 动 脉 血 管 中 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 检 出 量 的 半 定 量 结 果 显 示, 所 有 血 管 组 织 标 本 中 均 有 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 的 检 出, 提 示 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 为 牙 周 常 驻 菌, 健 康 牙 周 组 织 内 即 可 存 在 且 易 随 血 液 循 环 播 散 定 植 于 血 管 分 叉 处, 但 此 时 菌 量 很 少, 局 部 牙 周 组 织 不 会 出 现 明 显 可 见 的 炎 症 性 改 变 实 验 组 的 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 相 对 含 量 较 正 常 对 照 组 显 著 升 高, 说 明 当 牙 周 组 织 由 于 菌 斑 堆 积 或 外 界 机 械 刺 激 而 发 生 慢 性 炎 症 时, 其 主 要 致 病 因 子 或 毒 性 代 谢 产 物, 如 菌 毛 内 毒 素 脂 多 糖 等, 会 通 过 破 损 的 牙 周 组 织 进 入 血 液 循 环, 形 成 菌 血 症 或 毒 血 症, 侵 袭 血 管 内 皮 细 胞, 破 坏 内 皮

576 国 际 口 腔 医 学 杂 志 第 40 卷 5 期 2013 年 9 月 [10] 结 构 的 完 整 性, 对 血 管 造 成 不 良 影 响 Amar 等 的 研 究 结 果 表 明, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 可 直 接 入 侵 血 [11] 管 内 皮 细 胞 Amano 等 通 过 实 验 同 样 证 实, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 这 种 重 要 的 牙 周 可 疑 致 病 菌 随 血 液 循 环 播 散 后, 在 短 短 的 几 分 钟 内 就 可 直 接 激 活 血 管 内 皮 细 胞 和 血 小 板, 上 调 多 种 细 胞 黏 附 分 子, 使 得 巨 噬 细 胞 移 走 变 性 为 泡 沫 细 胞 的 可 能 性 大 大 增 加 因 此, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 不 仅 与 慢 性 牙 周 炎 的 发 生 发 展 息 息 相 关, 还 可 影 响 全 身 健 康 实 验 组 各 组 经 牙 周 干 预 处 理 后, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 相 对 含 量 在 B4 组 以 及 B5 组 中 显 著 下 降, 与 B1 组 相 比, 差 异 有 统 计 学 意 义, 且 B5 组 的 下 降 更 为 明 显 这 就 提 示 人 们, 拔 除 Ⅲ 度 松 动 慢 性 牙 周 炎 患 牙, 可 能 更 彻 底 地 清 除 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 感 染 病 灶 常 规 牙 周 机 械 治 疗 能 够 有 效 降 低 牙 周 袋 中 牙 周 可 疑 致 病 菌 的 数 量, 但 很 难 彻 底 清 除 所 有 的 牙 [12] 周 致 病 菌 因 此, 临 床 上 拔 除 无 法 保 留 的 Ⅲ 度 松 动 患 牙 反 而 有 利 于 降 低 牙 周 组 织 中 的 牙 周 病 原 菌 数 量, 且 拔 除 患 牙 后 加 用 抗 生 素 可 以 最 大 程 度 地 减 少 细 菌 数 量, 降 低 病 原 菌 在 牙 周 组 织 和 血 管 内 皮 细 胞 的 定 植 虽 然 本 研 究 结 果 显 示,B2 B3 组 与 B1 组 相 比, 差 异 无 统 计 学 意 义, 但 临 床 检 查 结 果 发 现 :B2 B3 组 口 腔 牙 龈 色 粉 质 韧, 牙 周 袋 探 诊 深 度 减 小, 出 血 指 数 仅 为 0~1 度, 松 动 度 减 轻, 即 口 腔 局 部 表 现 与 全 身 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 的 含 量 变 化 并 不 一 定 一 致 这 种 不 一 致 说 明 机 械 药 物 治 疗 虽 然 可 以 使 控 制 口 腔 局 部 细 菌 含 量, 改 善 牙 周 炎 症, 但 有 创 操 作 可 能 会 造 成 细 菌 的 播 散 定 植, 这 就 提 示 在 临 床 操 作 中, 应 尽 量 减 少 组 织 创 伤, 控 制 由 于 操 作 而 导 致 的 细 菌 对 血 管 的 黏 附 目 前, 尚 不 清 楚 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 与 内 皮 细 胞 功 能 障 碍 之 间 的 真 正 机 制, 但 可 明 确 的 是, 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 可 入 侵 并 黏 附 在 血 管 内 皮 细 胞 上 引 起 血 管 病 变 因 此, 重 视 口 腔 牙 周 健 康, 及 时 治 疗, 减 少 局 部 环 境 牙 周 致 病 菌 数 量, 早 期 检 测 内 皮 功 能 损 害 显 得 十 分 重 要, 同 时 还 需 进 一 步 研 究 重 度 慢 性 牙 周 炎 的 干 预 治 疗 是 否 可 以 改 善 血 管 内 皮 细 胞 的 功 能, 以 防 心 血 管 事 件 的 发 生 4 参 考 文 献 [1] Gibson FC 3rd, Yumoto H, Takahashi Y, et al. Innate immune signaling and Porphyromonas gingivalis accelerated atherosclerosis[j]. J Dent Res, 2006, 85 (2):106-121. [2] Paquette DW. The periodontal-cardiovascular link [J]. Compend Contin Educ Dent, 2004, 25(9):681-682, 685-692, 694. [3] Seymour GJ, Ford PJ, Cullinan MP, et al. Relationship between periodontal infections and systemic disease[j]. Clin Microbiol Infect, 2007, 13(Suppl 4):3-10. [4] 杜 强, 王 勤 涛, 朱 浩, 等. 牙 周 炎 和 高 脂 血 症 动 物 模 型 的 建 立 及 其 相 关 性 初 步 分 析 [J]. 牙 体 牙 髓 牙 周 病 学 杂 志, 2006, 16(5):246-249. [5] 丁 鳌, 王 晓 燕, 唐 昊 喆, 等. 小 型 猪 牙 周 感 染 与 动 脉 粥 样 硬 化 复 合 模 型 的 建 立 [J]. 牙 体 牙 髓 牙 周 病 学 杂 志, 2008, 18(4):190-194. [6] 焦 宏, 陈 彦 静. 大 鼠 动 脉 粥 样 硬 化 模 型 的 建 立 [J]. 河 北 北 方 学 院 学 报 : 医 学 版, 2009, 26(6):66-68. [7] Li L, Messas E, Batista EL Jr, et al. Porphyromonas gingivalis infection accelerates the progression of atherosclerosis in a heterozygous apolipoprotein E- deficient murine model[j]. Circulation, 2002, 105 (7):861-867. [8] 王 者 玲, 岗 本 公 彰, 杨 圣 辉, 等. PCR 直 接 检 测 龈 下 菌 斑 主 要 可 疑 牙 周 致 病 菌 [J]. 中 国 微 生 态 学 杂 志, 2003, 15(2):115-116. [9] Ford PJ, Gemmell E, Hamlet SM, et al. Crossreactivity of GroEL antibodies with human heat shock protein 60 and quantification of pathogens in atherosclerosis[j]. Oral Microbiol Immunol, 2005, 20(5):296-302. [10] Amar S, Wu SC, Madan M. Is Porphyromonas gingivalis cell invasion required for atherogenesis? Pharmacotherapeutic implications[j]. J Immunol, 2009, 182(3):1584-1592. [11] Amano A, Inaba H. Cardiovascular diseases and periodontal diseases[j]. Clin Calcium, 2012, 22(1):43-48. [12] 张 荃, 杨 秋 波, 杨 圣 辉. 牙 龈 卟 啉 单 胞 菌 与 牙 周 病 相 关 性 的 聚 合 酶 链 反 应 研 究 [J]. 北 京 口 腔 医 学, 2005, 13(4):217-220. ( 本 文 编 辑 张 玉 楠 )