中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛 犖 / 犜 2164 2008 危 险 品 急 性 经 口 毒 性 固 定 剂 量 试 验 方 法 犜 犲 狊 狋 犿 犲 狋 犺 狅 犱 狅 犳 犪 犮 狌 狋 犲 狅 狉 犪 犾 狋 狅 狓 犻 犮 犻 狋 狔 犉 犻 狓 犲 犱 犱 狅 狊 犲 犿 犲 狋 犺 狅 犱 犳 狅 狉 犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犵 狅 狅 犱 狊 2008 09 04 发 布 2009 03 16 实 施 中 华 人 民 共 和 国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布
标 准 分 享 网 www.bzfxw.co 免 费 下 载 犛 犖 / 犜 2164 2008 前 言 本 标 准 修 改 采 用 联 合 国 经 济 合 作 与 发 展 组 织 (OECD) 化 学 品 测 试 方 法 No.420 急 性 经 口 毒 性 : 固 定 剂 量 法 (2001) 本 标 准 与 OECD 化 学 品 测 试 方 法 No.420 相 比, 存 在 以 下 差 异 : 对 OECD 化 学 品 测 试 方 法 No.420 进 行 了 编 辑 性 修 改 ; 增 加 了 前 言 部 分 ; 增 加 了 附 录 部 分 本 标 准 附 录 A 附 录 B 和 附 录 C 为 规 范 性 附 录 本 标 准 由 中 华 人 民 共 和 国 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 提 出 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 归 口 本 标 准 负 责 起 草 单 位 : 中 华 人 民 共 和 国 天 津 出 入 境 检 验 检 疫 局 本 标 准 参 加 起 草 单 位 : 江 南 大 学 中 化 化 工 标 准 化 研 究 所 天 津 市 检 验 检 疫 科 学 技 术 研 究 院 本 标 准 主 要 起 草 人 : 李 宁 涛 张 园 庞 震 李 学 洋 于 智 睿 赵 琢 本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 Ⅰ
犛 犖 / 犜 2164 2008 危 险 品 急 性 经 口 毒 性 固 定 剂 量 试 验 方 法 1 范 围 本 标 准 规 定 了 危 险 化 学 品 急 性 经 口 毒 性 试 验 的 试 验 原 则 与 程 序 试 验 步 骤 数 据 与 报 告 以 及 结 果 解 释 本 标 准 适 用 于 对 危 险 化 学 品 进 行 急 性 经 口 毒 性 的 测 定 2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件, 其 随 后 所 有 的 修 改 单 ( 不 包 括 勘 误 的 内 容 ) 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准, 然 而, 鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件, 其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准 GB14924.1 实 验 动 物 配 合 饲 料 通 用 质 量 标 准 GB14925 实 验 动 物 环 境 及 设 施 3 术 语 和 定 义 3.1 3.2 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 急 性 经 口 毒 性 犪 犮 狋 狌 犲 狅 狉 犪 犾 狋 狅 狓 犻 犮 犻 狋 狔 将 受 试 物 在 24h 内 给 试 验 动 物 进 行 一 次 经 口 或 多 次 经 口 染 毒 时 所 产 生 的 有 害 效 应 剂 量 犱 狅 狊 犲 动 物 给 以 受 试 物 染 毒 的 量, 亦 称 ( 一 次 ) 剂 量, 常 以 动 物 每 千 克 体 重 的 受 试 物 质 量 ( 即 mg/kg 体 重 ) 表 示 其 染 毒 量 ; 如 将 受 试 物 掺 入 饲 料 中 进 行 喂 养 染 毒 时, 常 以 受 试 物 浓 度 的 比 例 (mg/kg 或 mg/l) 表 示 包 括 染 毒 的 物 质 量 每 天 染 毒 频 数 及 染 毒 持 续 时 间 的 总 称 3.3 明 显 毒 性 犲 狏 犻 犱 犲 狀 狋 狅 狓 犻 犮 狋 狔 动 物 给 以 受 试 物 染 毒 后 出 现 清 楚 的 毒 性 反 应 这 些 毒 性 反 应 足 以 进 行 危 害 评 价, 并 能 预 测 产 生 严 重 的 毒 性 反 应 和 可 能 发 生 的 死 亡 4 试 验 原 则 与 程 序 4.1 试 验 原 则 在 正 式 试 验 中 只 选 用 中 等 毒 性 剂 量, 不 选 用 致 死 剂 量, 也 不 选 择 由 腐 蚀 或 严 重 刺 激 作 用 引 起 的 或 已 知 会 产 生 明 显 疼 痛 或 痛 苦 的 染 毒 剂 量 在 测 试 毒 性 时, 如 果 发 现 动 物 出 现 明 显 的 疼 痛 或 严 重 痛 苦 的 症 状 时, 从 人 道 原 则 出 发 将 其 处 死 4.2 试 验 程 序 试 验 中 各 组 选 用 同 性 别 ( 一 般 用 雌 性 ) 动 物, 以 固 定 的 剂 量 间 距 (5mg/kg 50mg/kg 300mg/kg 和 2000mg/kg, 如 有 特 殊 需 要 再 考 虑 5000mg/kg) 顺 次 进 行 经 口 染 毒 所 选 剂 量 范 围 应 由 预 试 验 得 知, 而 且 应 恰 好 低 于 预 期 发 生 死 亡 的 剂 量 如 果 在 所 选 剂 量 中 未 观 察 到 确 认 的 毒 性 反 应, 应 选 择 下 一 个 较 高 的 剂 量 进 行 急 性 毒 性 试 验 如 果 在 起 始 剂 量 时 已 见 到 动 物 死 亡 或 严 重 的 毒 性 反 应 时, 从 动 物 福 利 考 1
标 准 分 享 网 www.bzfxw.co 免 费 下 载 犛 犖 / 犜 2164 2008 虑, 应 选 择 下 一 个 较 低 的 剂 量 进 行 试 验 5 试 验 步 骤 5.1 试 验 动 物 5.1.1 动 物 的 选 择 大 鼠 为 首 选 试 验 动 物 体 重 变 异 不 应 超 过 平 均 体 重 的 20% 常 用 体 重 范 围 : 大 鼠 为 180g~240g, 小 鼠 为 18g~25g 在 缺 乏 构 效 关 系 或 无 提 示 雄 性 为 更 敏 感 性 别 动 物 的 前 提 下, 一 般 选 用 雌 性 动 物 进 行 试 验 5.1.2 动 物 饲 养 条 件 试 验 动 物 的 饲 养 和 环 境 设 施 应 符 合 GB14924.1 和 GB14925 有 关 规 定 5.1.3 动 物 的 准 备 试 验 前 要 对 动 物 进 行 标 记, 用 于 随 机 分 组 ; 至 少 需 要 5d 时 间 适 应 环 境 ; 染 毒 前, 大 鼠 要 禁 食 ( 不 禁 水 ) 过 夜, 小 鼠 要 禁 食 ( 不 禁 水 )3h~4h; 染 毒 后 大 鼠 要 禁 食 3h~4h, 小 鼠 需 禁 食 1h~2h 5.2 受 试 物 5.2.1 受 试 物 准 备 应 将 受 试 物 溶 解 或 做 成 悬 浮 液 等, 做 成 适 合 于 灌 胃 的 物 质 样 品 5.2.2 溶 剂 选 择 一 般 选 择 水, 其 次 为 植 物 油, 然 后 是 其 他 无 毒 不 与 受 试 物 发 生 化 学 反 应 和 不 影 响 受 试 物 吸 收 的 溶 剂 或 助 溶 剂 5.3 染 毒 步 骤 首 先 进 行 预 试 验, 用 一 只 动 物, 确 定 正 式 试 验 的 染 毒 剂 量, 然 后 按 要 求 将 动 物 随 机 分 组, 给 各 试 验 动 物 组 进 行 经 口 染 毒 对 于 啮 齿 类 动 物, 固 体 物 质 灌 胃 的 剂 量 最 好 小 于 1 ml/100g, 液 体 物 质 最 好 小 于 2mL/100g 5.4 预 试 验 5.4.1 起 始 剂 量 根 据 相 关 的 毒 理 学 资 料 从 5mg/kg 50mg/kg 300mg/kg 和 2000mg/kg 中 选 择 一 个 作 为 起 始 剂 量 如 果 无 相 关 的 毒 理 学 资 料, 一 般 以 300mg/kg 作 为 起 始 剂 量 如 果 无 明 确 的 资 料 可 以 证 明 急 性 毒 性 试 验 对 人 类 动 物 健 康 和 环 境 保 护 有 重 大 意 义, 出 于 动 物 福 利 的 考 虑, 应 不 做 5000 mg/kg, 见 附 录 A 5.4.2 染 毒 步 骤 每 次 取 一 只 动 物, 按 照 附 录 B 进 行 预 试 验, 仔 细 观 察 并 记 录 染 毒 后 动 物 的 毒 性 表 现, 间 隔 24h 后, 再 给 另 一 只 动 物 染 毒 所 有 试 验 动 物 至 少 观 察 14d 5.4.3 结 果 解 释 5.4.3.1 一 般 结 果 预 试 验 结 果 为 正 式 试 验 提 供 起 始 剂 量 5.4.3.2 附 加 程 序 预 试 验 中, 如 果 在 最 低 剂 量 (5mg/kg) 试 验 动 物 发 生 死 亡, 根 据 试 验 程 序, 应 停 止 试 验, 将 该 物 质 划 为 全 球 化 学 品 分 类 与 标 签 协 调 体 系 (GHS) 急 性 毒 性, 危 险 类 别 为 1 类 ( 见 附 录 B) 但 为 了 获 取 更 为 确 证 的 试 验 结 果, 应 选 取 第 二 只 试 验 动 物 按 照 5mg/kg 染 毒, 如 果 第 二 只 动 物 死 亡, 结 束 试 验, 该 物 质 划 为 GHS 急 性 毒 性, 危 险 类 别 为 1 类 ; 如 果 该 动 物 无 死 亡, 最 多 再 选 三 只 顺 序 按 5 mg/kg 染 毒 出 于 动 物 福 利 的 考 虑, 应 一 只 一 只 动 物 顺 序 试 验, 观 察 间 隔 为 确 定 上 一 只 动 物 已 经 存 活 只 要 有 第 二 只 动 物 死 2
犛 犖 / 犜 2164 2008 亡 则 试 验 结 束 ( 此 时 已 经 可 以 按 照 附 录 C 进 行 分 级 ) 5.5 正 式 试 验 5.5.1 剂 量 选 择 从 预 试 验 中 选 取 只 产 生 明 显 毒 性 而 不 引 起 死 亡 的 剂 量 作 为 正 式 试 验 起 始 剂 量 如 果 在 正 式 试 验 时 选 择 的 起 始 剂 量 未 见 明 显 毒 性, 应 接 着 进 行 下 一 个 较 高 剂 量 的 染 毒 如 果 在 正 式 试 验 时 选 择 的 起 始 剂 量 中 试 验 动 物 死 亡 或 严 重 毒 性 反 应 时, 应 从 保 护 动 物 免 受 痛 苦 出 发, 选 择 下 一 个 较 低 剂 量 进 行 试 验 5.5.2 数 量 每 个 剂 量 组 5 只,5 只 动 物 应 包 含 预 试 验 中 该 剂 量 组 使 用 的 1 只 动 物 5.5.3 染 毒 步 骤 5.5.3.1 一 般 程 序 在 预 试 验 所 得 结 果 的 基 础 上, 遵 照 附 录 C 的 程 序 进 行 染 毒 5.5.3.2 染 毒 时 间 间 隔 应 在 确 定 前 一 剂 量 组 的 动 物 存 活 后, 才 可 进 行 下 一 剂 量 的 试 验 一 般 两 个 剂 量 组 试 验 之 间 要 间 隔 3d~4d, 以 有 助 于 更 好 地 观 察 迟 发 的 毒 性 反 应 间 隔 时 间 可 以 根 据 实 际 情 况 进 行 调 整 5.5.4 限 度 试 验 如 果 有 相 关 的 资 料 表 明 受 试 物 可 能 无 毒, 可 以 进 行 限 度 试 验, 按 照 附 录 C 程 序, 染 毒 剂 量 为 2000mg/kg(5000mg/kg, 见 附 录 A), 若 无 毒 性, 应 终 止 试 验 5.6 临 床 观 察 和 检 查 5.6.1 观 察 频 率 和 期 限 在 给 动 物 染 毒 的 当 天 应 该 在 染 毒 后 的 30min 和 4h 各 做 一 次 仔 细 的 临 床 观 察, 以 后 每 天 一 次 除 非 动 物 过 度 痛 苦 需 及 时 处 死 外, 一 般 在 染 毒 后 应 对 动 物 观 察 14d 观 察 期 一 般 取 决 于 毒 性 反 应 发 生 体 征 的 快 慢 和 恢 复 时 间 的 长 短 如 果 中 毒 体 征 有 迟 发 性 倾 向 时, 应 延 长 观 察 期 5.6.2 观 察 内 容 5.6.2.1 体 重 应 在 染 毒 后 称 重 每 只 动 物, 以 后 至 少 每 周 一 次, 并 做 好 体 重 记 录, 计 算 体 重 变 化 5.6.2.2 大 体 观 察 包 括 皮 肤, 被 毛, 眼 睛 和 粘 膜 变 化, 呼 吸 循 环 植 物 神 经 和 中 枢 神 经 系 统 的 体 征, 肢 体 活 动 状 况, 行 为 变 化, 出 现 中 毒 体 征 时 间 和 消 失 时 间 因 人 道 原 因 处 死 动 物 或 发 现 死 亡 时, 应 尽 可 能 准 确 记 录 死 亡 时 间 5.6.2.3 动 物 福 利 在 染 毒 后 的 头 几 天 应 经 常 观 察, 以 便 及 时 发 现 首 选 剂 量 是 否 过 高 如 果 剂 量 过 高 应 终 止 试 验 当 动 物 出 现 明 显 疼 痛 和 严 重 痛 苦 表 现 时 应 处 死 该 动 物 5.7 病 理 组 织 学 检 查 应 对 全 部 染 毒 动 物 ( 包 括 试 验 期 间 死 亡 的 或 因 人 道 原 因 处 死 的 动 物 ) 进 行 大 体 解 剖 ; 记 录 全 部 肉 眼 可 见 的 病 损 染 毒 后 存 活 24h 以 上 的 动 物 中 出 现 明 显 肉 眼 所 见 病 损 的 器 官 应 作 病 理 组 织 学 检 查 6 数 据 与 报 告 6.1 结 果 处 理 在 预 试 验 和 正 式 试 验 中, 按 各 剂 量 水 平 将 染 毒 动 物 的 观 察 结 果 以 表 格 形 式 进 行 总 结 ; 描 述 出 现 中 毒 体 征 的 动 物 数, 试 验 中 引 起 死 亡 的 动 物 数, 处 死 的 动 物 数 及 毒 性 反 应 ; 在 正 式 试 验 中 是 否 观 察 到 明 显 毒 性 反 应, 所 见 任 何 毒 性 反 应 的 时 间 以 及 肉 眼 剖 查 的 结 果, 也 应 一 一 加 以 描 述 6.2 结 果 评 价 按 照 附 录 C 进 行 GHS 分 类 定 级 3
标 准 分 享 网 www.bzfxw.co 免 费 下 载 犛 犖 / 犜 2164 2008 6.3 试 验 报 告 试 验 报 告 应 包 括 预 试 验 和 正 式 试 验 所 得 的 下 述 资 料 : 受 试 物 的 有 关 理 化 性 质 及 鉴 定 资 料 ; 溶 剂 : 所 用 赋 形 剂 ( 包 括 溶 剂 助 溶 剂 乳 化 剂 等 ); 试 验 条 件 : 所 用 试 验 动 物 的 品 系, 动 物 数, 动 物 年 龄 和 性 别, 动 物 来 源, 饲 养 条 件 和 饲 料 等 以 及 开 始 试 验 时 动 物 的 体 重 ; 按 动 物 性 别 和 剂 量 水 平 ( 例 如, 所 用 动 物 数, 出 现 中 毒 体 征 和 死 亡 的 动 物 数 ), 描 述 体 征 的 性 质, 轻 重 程 度 和 毒 性 效 应 及 持 续 时 间 ; 中 毒 体 征 起 始 和 发 展 的 时 间 过 程 及 恢 复 情 况 ; 肉 眼 剖 查 结 果 和 病 理 组 织 学 检 查 结 果 ; 对 确 定 产 生 明 显 毒 性 剂 量 依 据 的 说 明 7 结 果 解 释 应 对 结 果 进 行 适 当 的 讨 论 和 解 释, 包 括 提 出 估 算 的 最 小 致 死 量 和 不 引 起 动 物 死 亡 的 最 高 剂 量 并 对 其 按 照 GHS 进 行 危 险 类 别 分 类 ( 遵 照 附 录 C) 4
犛 犖 / 犜 2164 2008 附 录 犃 ( 规 范 性 附 录 ) 试 验 剂 量 在 2000 犿 犵 / 犽 犵 的 分 类 说 明 犃.1 对 于 犔 犇 50 大 于 2000 犿 犵 / 犽 犵 无 需 试 验 的 受 试 物 的 分 类 标 准 犃.1.1 GHS 分 类 急 性 毒 性 危 险 类 别 为 5 的 物 质 具 有 相 对 较 低 的 急 性 毒 性, 在 某 些 特 定 的 情 况 下 可 能 对 某 些 比 较 脆 弱 的 人 群 带 来 危 险 这 类 物 质 经 口 或 经 皮 LD50 值 预 计 在 2000mg/kg~5000mg/kg, 或 其 他 染 毒 途 径 获 得 的 类 似 结 果 犃.1.2 在 下 列 情 况 下, 受 试 物 可 以 划 为 2000mg/kg<LD50<5000mg/kg(GHS 具 有 急 性 毒 性, 危 险 类 别 为 5): 犃.1.2.1 通 过 附 录 C 的 试 验 步 骤, 根 据 致 死 率 可 以 直 接 将 受 试 物 划 分 到 第 5 类 物 质 犃.1.2.2 有 确 定 的 证 据 表 明 受 试 物 的 LD50 在 2000mg/kg<LD50<5000mg/kg 范 围 内, 或 者 其 他 动 物 试 验 以 及 人 类 毒 性 反 应 表 明 该 物 质 对 人 类 健 康 具 有 急 性 毒 性 犃.1.2.3 具 有 下 列 任 意 一 种 情 况, 且 通 过 对 数 据 的 外 推 预 测 或 衡 量 不 能 将 该 物 质 划 分 到 更 为 严 重 的 毒 性 物 质 : 在 急 性 毒 性 类 别 4 的 经 口 毒 性 试 验 中 具 有 致 死 性 ; 在 按 照 急 性 毒 性 类 别 4 试 验 时 专 家 判 断 出 现 了 较 为 严 重 的 毒 性 反 应, 除 了 腹 泻, 竖 毛 或 不 太 明 显 的 症 状 ; 通 过 专 家 对 其 他 动 物 试 验 的 判 断 认 为 有 足 够 的 证 据 表 明 该 物 质 有 比 较 明 显 的 潜 在 急 性 毒 性 ; 有 其 他 动 物 试 验 以 及 人 类 毒 性 反 应 表 明 该 物 质 对 人 类 具 有 毒 性 效 应 犃.2 试 验 剂 量 大 于 2000 犿 犵 / 犽 犵 只 有 在 特 殊 情 况 下 才 使 用 5000mg/kg 的 剂 量 如 果 无 明 确 的 资 料 可 以 证 明 做 5000mg/kg 的 试 验 对 人 类 动 物 健 康 和 环 境 保 护 有 重 大 意 义, 出 于 动 物 福 利 的 考 虑, 不 做 5000mg/kg 犃.3 预 试 验 附 录 B 中 的 试 验 准 则 适 用 于 5000mg/kg 如 果 预 试 验 开 始 于 5000mg/kg, 结 果 为 A, 应 用 第 二 只 动 物 在 2000mg/kg 剂 量 开 始 试 验 ; 如 果 出 现 了 结 果 B 或 C( 明 显 毒 性 或 无 毒 性 ) 则 选 取 5000mg/kg 作 为 正 式 试 验 的 起 始 剂 量 对 于 在 2000 mg/kg 剂 量 的 试 验 结 果 出 现 B 或 C, 应 将 试 验 推 进 到 5000mg/kg, 如 果 5000mg/kg 的 试 验 结 果 为 A, 则 正 式 试 验 的 起 始 剂 量 为 2000mg/kg, 如 果 结 果 为 B 或 C, 则 正 式 试 验 的 起 始 剂 量 为 5000mg/kg 犃.4 正 式 试 验 附 录 C 的 试 验 准 则 适 用 于 5000mg/kg 如 果 正 式 试 验 开 始 于 5000mg/kg, 结 果 A( 2 只 死 亡 ) 需 要 选 第 二 组 动 物 在 2000mg/kg 上 进 行 试 验 ; 如 果 出 现 结 果 B[ 明 显 毒 性 和 ( 或 ) 1 只 死 亡 ] 或 C( 无 毒 性 ) 表 明 该 受 试 物 不 能 按 照 GHS 的 标 准 进 行 划 分 类 别 在 2000 mg/kg 剂 量 上 的 试 验 出 现 结 果 B 或 C, 应 将 试 验 推 进 到 5000mg/kg, 如 果 5000mg/kg 的 试 验 结 果 为 A, 则 该 物 质 被 划 分 到 GHS 急 性 毒 性, 类 别 为 5, 如 果 结 果 为 B 或 C, 则 该 受 试 物 不 能 按 照 GHS 的 标 准 进 行 划 分 类 别 5
标 准 分 享 网 www.bzfxw.co 免 费 下 载 犛 犖 / 犜 2164 2008 附 录 犅 ( 规 范 性 附 录 ) 预 试 验 流 程 图 犅.1 预 试 验 流 程 图 6
犛 犖 / 犜 2164 2008 A 死 亡 ; B 明 显 毒 性 ; C 无 毒 性 注 : 如 在 5mg/kg 剂 量 下 出 现 结 果 A, 应 按 照 5.4.3.2 附 加 程 序 方 法 划 分 该 物 质 的 GHS 急 性 毒 性 危 险 类 别 图 犅.1( 续 ) 7
标 准 分 享 网 www.bzfxw.co 免 费 下 载 犛 犖 / 犜 2164 2008 附 录 犆 ( 规 范 性 附 录 ) 正 式 试 验 流 程 图 犆.1 正 式 试 验 流 程 图 8
犛 犖 / 犜 2164 2008 A 死 亡 数 2 只 ; B 观 察 到 明 显 毒 性 1 只 和 ( 或 )1 只 死 亡 ; C 无 毒 性 注 : 正 式 试 验 中 的 五 只 动 物 应 包 含 预 试 验 中 该 剂 量 组 使 用 的 一 只 动 物 图 犆.1 ( 续 ) 9
标 准 分 享 网 www.bzfxw.co 免 费 下 载 2008 犛 犖 / 犜 2164 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 危 险 品 急 性 经 口 毒 性 固 定 剂 量 试 验 方 法 SN/T2164 2008 中 国 标 准 出 版 社 出 版 北 京 复 兴 门 外 三 里 河 北 街 16 号 邮 政 编 码 :100045 网 址 www.spc.net.cn 电 话 :68523946 68517548 中 国 标 准 出 版 社 秦 皇 岛 印 刷 厂 印 刷 开 本 880 1230 1/16 印 张 1 字 数 20 千 字 2008 年 11 月 第 一 版 2008 年 11 月 第 一 次 印 刷 印 数 1 2000 书 号 :155066 2 19246 定 价 10.00 元